大肠菌群的测定方法

大肠菌群测定原始记录

时间： 检验地点：本厂化验室

检测样品名称： 来源：

生理盐水的配制：8.5g氯化钠加1000ml蒸馏水溶解待用。

1. 取225ml生理盐水于标签为1:10的300ml锥形瓶中，

取9ml生理盐水于标签为1:100的50ml锥形瓶中。

2. LST溶液的配制：取LST7.1g加水100ml（双料），溶解至透明，

倒入10ml于3只标有1g的并放有聚气管的试管中; 剩余溶液加一倍水配成单料倒入标有0.01g，0.001ml的6只试管中，每只10ml,并放有聚气管(试管要求180×18mm)。

放入灭菌锅灭菌15min.

以上1；2；同时一起灭菌，灭菌起始时间(喷气开始计时)：

压力表指针回零后打开放气阀，开盖取出，冷至常温。

3.样品稀释：于225ml灭菌的生理盐水中加入样品25g，混匀，配成1:10的稀释样；

从1:10的稀释样中取1ml到入标有1:100的9ml灭菌的生理盐水中混匀，配成1:100稀释样;

4.初发酵试验：取1:10的稀释样10ml于标有1g的3只试管中，

取1:10的稀释样1ml于标有0.1g的3只试管中，

取1:100的稀释样1ml于标有0.01g的3只试管中，

5．培养：放入36℃的培养箱中培养48h。时间起始：

24h产气管数：

48h产气管数：

6． BGLB溶液复发酵试验：配制BGLB溶液，称取BGLB4g溶液100ml水中，均分倒入对应产气标号的标有标示并放有聚气管的试管中，放入灭菌锅灭菌15min。用接种针粘一环产气管液于标有对应的以灭菌的BGLB溶液的试管中，于36℃的培养箱中培养48h。

培养起始时间：

48h产气管数：

7.检索MPN表结论：

备注：

粪大肠菌群的测定

1 卫生学意义

粪大肠菌群测定的卫生学意义：一、与大肠菌群相比，粪大肠菌群在人和动物粪便中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。因此，粪大肠菌群的存在表明食品近期内可能直接或间接的受到了粪便的污染；二、作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性；三、常用做贝类和贝类养殖用水的卫生指标 。

2 检验方法

2.1 术语与定义

一群在44.5℃培养24h-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

卫生学概念，又称为耐热大肠菌群，主要是大肠杆菌，但也包括克雷伯氏菌属等。

2.2 设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

（1）恒温培养箱：36℃±1℃。

（2）冰箱：2℃～5℃。

（3）恒温水浴箱：46℃±1℃。

（4）天平：感量0.1g。

（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。

（6）无菌锥形瓶：容量500mL。

（7）无菌培养皿：直径90mm。

（8）pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。

2.3 培养基和试剂

（1）月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：

1）成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0g；氯化钠：5.0g；乳糖：5.0g；磷酸氢二钾（K2HPO4）：2.75g；磷酸二氢钾（KH2PO4）：2.75g；月桂基硫酸钠：0.1g；蒸馏水：1000mL；pH：6.8±0.2

2）制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121 ℃高压灭菌15 min。

（2）EC肉汤（E.coli，BGLB）：

1）成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0 g；3号胆盐或混合胆盐：1.5 g；乳糖：5.0g；磷酸氢二钾（K2HPO4）：4.0g；磷酸二氢钾（KH2PO4）：1.5g；氯化钠：5.0g；蒸馏水：1000mL；pH：6.9±0.1。

实验十 大肠菌群的测定

一、目的要求

学习并掌握食品中大肠菌群测定的基本方法和基本原理。

二、实验说明

大肠菌群系指一群在37℃，24h能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标，来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。

食品中大肠菌群数系以每100ml（g）检样内大肠菌群最近似数（MPN）来表示，其含义是指100ml(g)食品内含有大肠菌群数的实际数值（表10-1）。

三、实验器材

1、设备和材料 温箱：36±1℃，水浴：44±0.5℃，天平、显微镜、均质器或研钵，温度计，平皿、试管、吸管、载玻片。

2、培养基及试剂 乳糖胆盐发酵管（GB），伊红美蓝琼脂平板（GB），乳糖发酵管（GB）、蛋白胨水（GB）、靛基质试剂（GB），革兰氏染液（GB）。

四、方法步骤（10-1）

（一）检样稀释

1、以无菌操作将检样25ml（或25g）放于含有225ml番茄生理盐水或其它稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨作成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000-10000rpm的速度处理1分钟，做成1：10的

均匀稀释液。

用1ml灭菌吸管，吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其它稀释的试管内，振摇试管混匀作成1：100的稀释液。

另取1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml灭菌吸管。

2、根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。

（二）乳糖发酵试验

将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如有乳糖胆盐发酵管都不产气，则报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。

水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定 光度法

水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定是一项重要的环境监测工作，对于保障水质安全具有重要意义。光度法是一种常用的测定方法，通过测定样品中细菌的光学密度来间接反映其浓度，具有操作简便、结果准确等优点。本文将介绍水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的光度法测定方法。

一、实验仪器与试剂

1. 实验仪器：分光光度计

2. 试剂：含有氯化铁的培养基、无菌水

二、样品处理

1. 取水样：从待测水体中取得一定体积的水样，使用无菌容器收集。

2. 过滤处理：将水样通过0.45μm的微孔滤膜过滤，以去除大颗粒悬浮物和杂质。

3. 稀释处理：取适量过滤后的水样，用含有氯化铁的培养基进行适当稀释，以提高细菌在培养基中的生长适应性。

三、菌落计数 1. 培养条件：将处理后的水样接种在含有氯化铁的培养基上，进行37℃培养24小时。

2. 计数方法：取适量培养好的菌落涂布在琼脂平板上，进行菌落计数。

四、光度法测定

1. 光学密度测定：取适量经过稀释处理的水样，用分光光度计在特定波长下进行吸光度测定。

2. 细菌浓度计算：根据吸光度值和标准曲线，计算出水样中细菌的浓度。

五、结果分析

根据测定得到的数据，可以对水样中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群进行浓度分析，为水质安全评价提供参考依据。

通过光度法测定水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的浓度，可以及时了解水质情况，为环境保护和公共卫生安全提供重要数据支持。希望本文介绍的光度法测定方法对相关工作人员有所帮助。