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《从土壤中分离纤维素分解菌》实验设计一、器材250 mL锥形瓶、无菌称量瓶、1 mL和10 mL的移液管、天平、摇床、温度计、纱布、摇床、试管、移液枪、无菌培养皿（15个）、涂布器、1 mL移液管，装有9mL无菌水的20 mL大试管（3个），温箱二、操作步骤1.土样采集及制备土壤悬液土样的采集要选择富含纤维素的环境（铲去表层土距地表约3-8cm的土壤层），这是因为在纤维素含量丰富的环境，通常会聚集较多的分解纤维素的微生物。
如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，过一个月左右也会有能分解纤维素的微生物生长。
称取土样5 g，迅速倒入45 mL无菌水瓶中，振荡20 min，使土样充分打散，即成为土壤悬液2.选择培养选择培养需要的仪器有：250 mL锥形瓶、无菌称量瓶、1 mL和10 mL的移液管、天平、摇床、温度计、纱布、摇床、试管、移液枪等。
选择培养基的制备比例见下：在250 mL锥形瓶中装入50 mL培养基，用8层纱布做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包裹两层包装纸（或报纸），用线绳扎紧，在121 ℃下高压蒸汽灭菌20 min。
选择培养的操作：取10mL土壤悬液放于盛有50mL培养基的锥形瓶中，将锥形瓶置于摇床上，在30 ℃下振荡培养1～2 d，至培养基变混浊。
此时可以吸取mL培养液进行梯度稀释和涂布平板。
梯度稀释：用量程为1000µL的移液管从富集培养土壤液中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的试管中充分混匀。
然后换枪头从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml 无菌水的试管中混合均匀，以此类推制成10-1,10-2,10-3,10-4, 10-5,10-6,10-7不同稀释度的土壤溶液。
3.刚果红染色法分离纤维素分解菌这一步所需要的仪器有：无菌培养皿（15个）、涂布器、1 mL 移液管，装有9mL无菌水的20 mL大试管（3个），温箱等。
鉴别培养基成分如下：在500 mL三角瓶中装入200 mL培养基，在121 ℃下高压蒸汽灭菌20 min。
从⼟壤中筛选出能够分解纤维素的真菌从⼟壤中筛选出能够分解纤维素的真菌1．⼟样采集⼟样采集的⽅法与本专题课题2类似。
⼟样的采集要选择富含纤维素的环境，这是因为在纤维素含量丰富的环境，通常会聚集较多的分解纤维素的微⽣物。
如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在⼟壤中，过⼀个⽉左右也会有能分解纤维素的微⽣物⽣长。
2．选择培养在250 mL 锥形瓶中装⼊30 mL 培养基，⽤8层纱布做成瓶塞，将瓶⼝塞紧，再在瓶塞外包裹两层包装纸（或报纸），⽤线绳扎紧，在121 ℃下⾼压蒸汽灭菌20 min 。
选择培养的操作：称取⼟样20 g ，在⽆菌条件下加⼊装有30 mL 培养基的摇瓶中。
将摇瓶置于摇床上，在30 ℃下振荡培养1～2 d ，⾄培养基变混浊。
此时可以吸取0.1 mL 培养液进⾏梯度稀释和涂布平板，也可以重复选择培养的步骤⼀次，然后再进⾏梯度稀释和涂布平板。
3．梯度稀释将选择培养后的培养基进⾏等⽐稀释，稀释最⼤倍数到106。
4．将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上按照马丁⽒琼脂培养基（分离真菌⽤）制备培养基。
将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml 涂布在培养基上，滴加在平板培养基上，⽤涂布器将菌液涂布均匀，在30 ℃倒置培养，⾄菌落长出。
每个稀释度下需涂布3个平板，并注意设置对照。
刚果红染⾊法：在倒平板时就加⼊刚果红。
或先培养微⽣物，再加⼊刚果红进⾏颜⾊反应。
5．挑选产⽣透明圈的菌落挑取产⽣明显的透明圈的菌落，⼀般即为分解纤维素的菌落。
接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C － 370C 培养，可获得纯培养。
可设置对照实验：⽤⽜⾁膏蛋⽩胨培养基与之对照。
高二生物下册实验：分解纤维素的微生物的别离高二生物下册实验：分解纤维素的微生物的别离(1)实验原理：①土壤中存在着大量纤维素分解酶 ,包括真菌、细菌和放线菌等 ,它们可以产生纤维素酶。
纤维素酶是一种复合酶 ,可以把纤维素分解为纤维二糖 ,进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用 ,故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中 ,纤维素分解菌能够很好地生长 ,其他微生物那么不能生长。
②在培养基中参加刚果红 ,可与培养基中的纤维素形成红色复合物 ,当纤维素被分解后 ,红色复合物不能形成 ,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈 ,从而可筛选纤维素分解菌。
(2)实验过程：土壤取样：采集土样时 ,应选择富含纤维素的环境梯度稀释：用选择培养基培养 ,以增加纤维素分解菌的浓度涂布平板：将样品涂布于含刚果红的鉴别纤维素分解菌的固体培养基上挑选产生中心透明圈的菌落：产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈,考试技巧 ,从产生明显的透明圈的菌落上挑取局部细菌 ,并接种到纤维素分解菌的选择培养基上 ,在30～37℃条件下培养 ,可获得较纯的菌种。
刚果红染色的两种方法的比拟：先培养微生物 ,在参加刚果红在到平板时参加刚果红优点显示出的眼神反映根本上是纤维素分解菌的作用操作简便 ,不存在菌落混杂问题缺点操作繁琐 ,参加刚果红溶液会使菌落之间发生混杂(1)由于琼脂和土豆汁中都含有淀粉类物质 ,可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反响(2)有些微生物具有降解色素的能力 ,长时间培养会降解刚果红 ,从而形成明显的透明圈 ,这些微生物与纤维素分解菌不易区分知识拓展：1.纤维素与纤维素酶(1)纤维素①化学本质：一种多糖。
②分布：棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物 ,此外 ,木材、作物秸秆等也富含纤维素。
(2)纤维素酶①习惯上 ,将纤维素酶分成三类：C1酶、Cx酶和葡糖苷酶。
C1酶是对纤维素最初起作用的酶 ,破坏纤维素链的结晶结构。
Cx酶是作用于经C1酶活化的纤维素、分解-1 ,4-糖苷键的纤维素酶。
