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小鼠2型金属硫蛋白基因的克隆

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１１ 引 物设计 ．
参 考 Ｎ Ｂ ｒｔｎ网站提供 的 鼠型 ＣＩ ｏ ｉ Ｐ ｅ
Ｍ２ Ｔ 的氨基酸序列 ， 将其序列转换成核酸序列 ， 并按 小 鼠的优 化 密 码 子 将核 酸 序 列 优 化 。在 该 序 列 的
（ｈ ａ脚 Ｃｉ ＪＬｂ ｎ
，Ｏ ７１ ：０ １ ２０ ，１ １９ ）
金 属硫 蛋 白（ ｅ Ｕｔｉ ｅ ， ） ｍ ｔ ｏ ｏ ｉ Ⅲ 是一 种 低 分 子 ａ ｈｎｎ 量、 半胱 氨酸含 量丰富 的蛋 白质 ， 有 ６ 个 氨 基 酸 ， 含 １ 其 中 ２ 个 氨 基 酸为 半 胱氨 酸。在 哺 乳 动 物体 内迄 １ 今 已发 现 ４种 Ｍ ， Ｍ １Ｍ ４ Ｔ 即 Ｔ 一 Ｔ 。ＭＴ 和 ＭＴ 普 遍 存 １ ２ 在 于各种 组织 和细胞 中 ＿』 Ｔ 主 要存 在于 脑 组 ３。Ｍ ３ 织 中 ， Ｔ 存 在 于鳞 状 上皮 中 －， Ｔ 及 ＭＴ 构 Ｍ４ ５Ｍ１ ］ ２结 和功 能相 似 。Ｍ Ｔ具 有 结 合 金 属 、 除 自由基 的 功 清 能 ［７。Ｍ ］ Ｔ抗 氧 化 能 力 显 著 优 于 超 氧 化 物 岐 化 酶 ， （Ｏ 和 谷胱甘 肽 过 氧化 物 酶 （ Ｓ ｌ９。Ｍ Ｓ Ｄ） Ｇ Ｈ） ， ８Ｊ Ｔ还 可
ｊ ｎ ，ｔ １（ ｅａｔｅｔｆＴｘ ｏ ｇ ，ｃｏｌ Ｐ ｂ ｃ ｅｌ ， ｎＵｉ ｓｙ Ｃ ａｇｈｎ １０２ ， ｈ ａ ｉ ｅａ． Ｄｐｒ ｎ ｏ ｏｉ ｌ ｙ Ｓｈｏ ｕＥ ａ ｈ 朋ｉ ｎ ｉ ， ｈｎｃｕ ３０ １ Ｃ ｉ ） ａ ｍ ｃｏ ｆ ｏ Ｈ ｔ ￣－ ｔ ｎ
（． １吉林大学公共卫生学院 毒理学教研室 ， 吉林 长春 １ ０１ ２吉林大 学中 日 ３ ２； ． ０ 联谊 医院 眼科 ， 吉林 长春 １ ０３ ３ ３） ０
摘要 ： 目的 构建含有小 鼠 Ⅱ型金属硫蛋 白（ Ｔ 基因 的真核表达载体 ， Ｍ） 为进行 Ｍ Ｔ抗氧化作用 的体 内功能实验奠 定基 础。方法 采用重叠延 伸 Ｐ Ｒ技术设计两对引物 ， Ｃ 利用 引物间 的互 补序列作 为模 板合成小 鼠Ⅱ型 Ｍ Ｔ基 因。结
Ａ ｓ ａｔＯ ｊｃ ｖ Ｔ ｏｓｕｔｈ ｃｍ ｉ ｎ ｐ ｓ ｉｈｒｏｒ ｇ ｅ ｎｏｉｇｇｎ ｆ ｕ ｕｃｌ ｅ ｌｔｏｅ １ ｂｔ ｃ： ｂｅ ｅ ｏｃｎｔ ｃ ｔｅ ｅｏ ｂ ａｔ ｌ ｍｄ ａ ｕ ｎ ｃｄｎ ｅ ｓ ｓｕ ｓ ｔｌ ｈ ｎｉ １ ． ｒ ｉ ｔ ｒ ｒ ｎ ａ ｂ ｉ ｔ ｅ ｈ ｅ ｏＭ ｍ ｕ ｍ ａｏ ｉ ｎ
本实验通过重叠 Ｐ Ｒ技术成功构建 Ｃ
果 将 ＰＲ产物经连 接反应 ， Ｃ 连接产物转化 Ｊ １ ， Ｍ ０ 摇菌后提取质粒 ， 的酶切鉴定 及最后 的测序结果均表 明本实 ９ 质粒
验所获得的小 鼠 Ⅱ型 Ｍ Ｔ基 因与 Ｇ Ｎ Ａ Ｋ中的 目标基 因序列完全～致。结论 Ｅ ＥＢ Ｎ 了小 鼠 Ⅱ型 Ｍ Ｔ编码基 因， 叠 Ｐ Ｒ技术是合成 目的基 因片段的有效的手段 。 重 Ｃ
关键词 ： 金属硫 蛋白 ； 因； 基 重叠延伸聚合酶链反应
中图分类号： ７ １ Ｑ ８ 文献标识码 ： Ａ
Ｏ ｏ ｌｇｏ ｎｎ ｆＭ ｕ ｓｍ【ｃ ｌｓ ｔｌ ｔ ｏ ｅｎ２ａ ｄ Ｃｏ ｓｒ ｃｉｎｏ ｉ ｅｏ ｉａ ｔ ｌ￣ｎｄ ｌ ｕｔ ｍｅａｌ ｈｌｎ ｌ ｎ ｓ ｌ ｏ ｎｔｕ ｔ ｏ ｆ ｔ ｒｃ ｍｂｎ ｎ ｐａ ｉｓ 飙 ， ｉ－ｉ， ＩＹ ｎ ， Ｈ ＮＧ Ｙ ｎ ｓ Ｊ ｑ Ｌ ｕ Ｚ Ａ ａ ｕ－
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中国实Hale Waihona Puke 诊断学２Ｏ 年 ８月 ０７
第 ｌ卷 １
第８ 期
～
１ ０９ｌ 一
文 章 编 号 ：０７ ２７２ ０）８ ０ １ ４ １０ —４８ （０ ７０ —１９ —０
小 鼠 ２型金 属 硫 蛋 白基 因的克 隆
修佳 祺 李 ， 云 张云建 陈强 李鹏 凌 翎 任 淑萍 ， ， ， ， ，
Ｍ ｅｈ ｄ Ｔ ｏ ｐｉ ｒ ｅ ｅ ｄ ｓ ｎ ｄ ｔ ｙ ｔ ｅ ｉ ｓ ｍｕ ｃ ｌｓ ｍｅａ ｏｈｏ ｅｎ ２ ｅ ｃ ｄｎ ｅ ｅ ｔ ｒｕ ｈ ｏ ｅｌｐ ｉｇ Ｐ Ｒ ｔｃ ・ ｔｏ ｓ ｗ ｒ ｍｅｓｗ ｒ ｅ ｉ ｅ ｏ ｓｎ ｓｚ Ｍｕ ｓ ｕｕ ｔｌ ｔｉ ｎ ｉ ｎ ｏ ｉ ｇ ｎ ｈ ｏ ｇ ｖ ｒ ｐｎ Ｃ ｅ ｈ ｇ ｈ ｅ ｌ ｇ ａ ｎｑ ｅ ． ｓ ｌ Ｔ ｅ ｅ ｃ ｄ ｎ ｅ ｅ ｏ ｓｍｕ ｃ ｌｓ ｍｅａ ｏｈｏ ｅｎ ２ ａ ｑ ｉ ｄ ｔｒ ｕ ｈ ｏ ｅｌｐ ｉｇ Ｐ ｎ Ｏ Ｉ ｅ ｐ ｒ ｎ ａ ・ ｉ ｕ ｓ Ｒｅ ｕｔ ｓ ｈ ｎ ｏ ｉ ｇ ｎ ｆＭｕ ｓ ｕｕ ｔｌ ｔｉｎ ｉ ｃ ｕｒ ｏ ｇ ｖ ｒ ｐｎ ＣＲ ｉ Ｕ＂ ｘ ｅ ｉ ｔｗ ｓ ｉ ｇ ｌ ｅ ｈ ａ ｍｅ ｄ ｎ ｉ ｌ ｉ ｔａ ｉ ｈ ｅＧＥ Ｅ ｂ ｎ 、 ｏ ｃｕ ｉ ｎ Ｍｕ ｅ ｔ ａ ｗ ｔ ｈ ｔ ｎｔ ｃ ｈ Ｎ ａ ｋ Ｃ ｎ ｌｓｏ ｓｍｕ ｃ ｌ ｓ ｕｕ ｓｍｅ ａ ｏｈ ｏ ｅ ２ｗ ｓｃｏ ｅ ｕ ｃ ｓ ｕ ｙ ａ ｄ ｏ ｅ ｌｐ ｉｇＰ Ｒ ｉ ａ ｔｌ ｔｉｎ ｉ ｌ ｎ ａ ｌｎ ｄ ｓ ｃ ｅｆ ］ ｎ ｖ ｒ ｐｎ Ｃ ｓ ｌ ａ ｖ ｒ ｆ ｃ ｖ ａ ｙ ｔｅ ｉ Ａ ａ ｅ ｔ ｅｙ ｅ ｅ ｔ ｅ ｗ ｙｔ ｓ ｈ ｓ ｅ ＤＮ ｆ ￣ ｎ ． ｉ ｏ ｎ ｚ ｒ Ｋｅ ｒ ｓ ｍｅａ ｏｈｏ ｅｎ ｇ ｎ ； ｏｙ ｅ ａ ｅ ｃ ａｎ ｒａ ｔ ｎ； ｖ ｒ ｐ ｉ Ｃ ｙ ｗｏ ｄ ： ｔ ｌ ｔｉｎ ｉ ； ｅ ｅ ｐ ｌｍ ｒｓ ｈ ｉ ｃ ｏ ｏ ｅ ｌ ｐｎ Ｐ Ｒ ｌ ｅ ｉ ａ ｇ

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金属硫蛋白调控及重金属解毒功能研究进展

金属硫蛋白调控及重金属解毒功能研究进展

金属硫蛋白调控及重金属解毒功能研究进展金属硫蛋白是一类富含硫氨基酸的蛋白质，广泛存在于各种生物体中，起到重要的调控和解毒功能。

金属硫蛋白可以稳定金属离子，调节其参与的生物过程，同时还能与重金属形成络合物，减少其毒性。

金属硫蛋白主要包括金属硫蛋白MT和金属硫囊蛋白MCA。

金属硫蛋白MT广泛存在于植物、动物和微生物中，能够紧密结合金属离子，起到贮存和调控金属离子的作用。

研究发现，金属硫蛋白MT与一些重金属，如汞、铅等形成络合物，能够减少这些重金属对生物体的毒性。

金属硫囊蛋白MCA主要存在于细菌中，具有类似于MT的功能。

近年来，研究人员对金属硫蛋白调控及重金属解毒功能进行了深入的研究。

一方面，研究人员通过对金属硫蛋白基因的克隆和表达，进一步了解了金属硫蛋白在调控金属离子和抗氧化应激等方面的机制。

研究人员还通过体外和体内实验，验证了金属硫蛋白与重金属形成络合物后，能够降低重金属的毒性。

研究发现，金属硫蛋白对重金属的解毒作用主要通过两种方式实现。

一方面，金属硫蛋白能够与重金属形成络合物，使得重金属的生物可利用性降低，从而减少其对生物体的毒性。

金属硫蛋白还能够通过与重金属的氧化还原反应，将重金属从高价态还原为低价态，减少其毒性。

除了对重金属的解毒作用外，金属硫蛋白还参与了许多其他生物过程的调控。

金属硫蛋白能够调节细胞内金属离子的平衡，并参与DNA的合成和修复等过程。

金属硫蛋白还能够与抗氧化酶和其他抗氧化分子相互作用，协同发挥抗氧化作用。

金属硫蛋白在生物体中起着重要的调控和解毒功能。

进一步深入研究金属硫蛋白的调控机制和解毒作用，将有助于揭示其在生物体内的重要功能，并为开发新型的重金属解毒剂提供理论基础。

硫酸锌诱导金属硫蛋白2表达对脓毒症小鼠脏器损伤的保护作用

硫酸锌诱导金属硫蛋白2表达对脓毒症小鼠脏器损伤的保护作用

硫酸锌诱导金属硫蛋白2表达对脓毒症小鼠脏器损伤的保护作用李家丽;杨汀;刘海荣;樊元春;王晓燕;刘月明【期刊名称】《成都医学院学报》【年(卷),期】2017(012)002【摘要】Objective To investigate the inductive effect of zinc sulfate on the metallothionein-2 (MT2) expression and the protective effect of the MT2 expression on the multiple organ damage in mice with sepsis.Methods Thirty-six healthy male C57/6 mice with the age of 6 to 8 weeks were randomly divided into three groups including the sham surgery group, sepsis group and intervention group, and each group consisted of 12 mice.The basic situations of the mice in the three groups were observed after they were given different treatments.ELISA was used to detect the levels of MT2, TNF-α, IL-6, IL-10, MDA, SOD and MDA in serum.Western blotting was employed to observe the levels of MT2 in liver.HE staining was adopted to examine the morphologic changes of multiple organs.The lesions in lung, liver and intestine were detected and their apoptosis indexes were calculated by TUNEL.Results The mortality rate of the mice in the intervention group was lower than that of the sepsis group, while the expression levels of MT2 and SOD in the intervention group were significantly higher than the those in the sepsis and sham operation groups respectively (P<0.05).The levels of inflammatory cytokines andMDA in the sepsis group were significantly higher than those in the other two groups (P<0.05).Meanwhile, The levels of cell degeneration, necrosis and apoptosis in the intervention group were lower than those in the sepsis group in the microscope.Conclusion Zinc ions could induce the expression of MT2, reduce release of the inflammatory factors and the content of MDA in serum, increase the SOD activity, reduce the pathological damage of organs in mice, and increase the survival rate of mice with sepsis.%目的研究硫酸锌对金属硫蛋白2(MT2)表达的诱导效应及其对脓毒症小鼠脏器损伤的保护作用.方法选取健康的6~8周龄雄性C57/6小鼠36只,随机分成假手术组、脓毒症组及硫酸锌干预组,每组12只,观察3组小鼠经不同方法处理后的基本情况.使用ELISA法检测每组小鼠血清中MT2、TNF-α、白介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)浓度,肝组织蛋白质印迹法观察MT2表达量,显微镜下观察肺、肝、小肠组织的病变情况,TUNEL法计算各器官细胞凋亡指数.结果硫酸锌干预组小鼠死亡率低于脓毒症组;MT2表达量及SOD浓度明显高于脓毒症组及假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);脓毒症组小鼠血清炎症因子及MDA水平明显高于其他两组,差异有统计学意义(P<0.05);显微镜下观察显示:硫酸锌干预组各脏器细胞变性坏死及凋亡程度均轻于脓毒症组.结论锌离子可以诱导C57/6小鼠MT2的表达,降低血清炎症因子的水平,降低血清MDA含量、提高SOD活性,减轻各脏器组织病理性损伤,降低脓毒症小鼠死亡率.【总页数】6页(P133-138)【作者】李家丽;杨汀;刘海荣;樊元春;王晓燕;刘月明【作者单位】成都医学院基础医学院成都 610500;益阳市中心医院益阳 413000;成都医学院第一附属医院成都 610500;成都医学院第一附属医院成都 610500;成都医学院第一附属医院成都 610500;成都医学院基础医学院成都 610500【正文语种】中文【中图分类】R459.7【相关文献】1.右美托咪定可能通过抑制 TLR4通路对 LPS 诱导的脓毒症小鼠急性肺损伤起保护作用 [J], 刘海萍;郭红;王东伟;高骞皓;晋学飞2.N-乙酰半胱氨酸上调细胞FLICE抑制蛋白表达对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用及其机制研究 [J], 樊恒;乐健伟;孙敏;陈国栋;朱永定;叶继辉;朱建华3.褪黑素对miRNA-223表达的影响及对脓毒症小鼠心肌损伤保护作用的机制 [J], 刘铭传;李林成;曹梦远;张家宁;刘洋;何亭4.褪黑素对miRNA-223表达的影响及对脓毒症小鼠心肌损伤保护作用的机制 [J], 刘铭传; 李林成; 曹梦远; 张家宁; 刘洋; 何亭5.金属硫蛋白对NMDA诱导小鼠大脑皮层神经细胞损伤的保护作用 [J], 于小倩;彭双清;方厚华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

二色补血草中2个金属硫蛋白基因的克隆及分析

二色补血草中2个金属硫蛋白基因的克隆及分析


ｐ ｇ ＷａｇＹ ｃｅｇ ＷａｇＢｎｆ ｇ Ｓ ｈｏ ｏ ｏｅｔ ，Ｎ ｒ ｅｓ Ｆ ｒｓ ｎｖｒｔ，Ｈａ ｉ １０４ ，Ｐ ． Ｃ ｉ ｉ ， ｎ ｕ ｈｎ ， ｎ ｉ ｅ （ ｃｏｌ ｆＦｒｓ ｙ ｏｔ ａｔ ｏ ｔ Ｕ ｉ ｓ ｙ ｎ ｇｎ ｒ ｈ ｅｒ ｙ ｅｉ ｒ ｎ ０ ０ ．Ｒ ｂ ５ ｈ—
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第 ３ ５卷 第 ８期 ２０
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Ｖｏ ． Ｎｏ． １３５ ８
Ａｕ ｇ． ２ ０７ ０
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Ｉ Ｔ１ ｇ ｎ ｓ５ ９ ｂ ｎ ｌｎｇｈ．ｉ ｌ ｄｉｇ ２ ｐ ｏ ｕ ｒ ｎ ｌｔｄ ｒｇ ｏ ｄ ３ ０ ｆ３ ｕ ｔａ ｌｔ ｄ ｒ ｇｏ ｅ ｅ ｉ ６ ｐ ｉ ｅ ｔ ｎｃｕ ｎ ３ ｂ ｆ５ ｎｔａ ｓａｅ ｅ ｉｎ ａ ０ ｂｐ ｏ ｎ ｒｎｓａｅ ｅ ｉｎ． Ｉ ａ ｎ ｎ ｔｈ ａ ｓ
二 色补 血 草 中 ２个 金属 硫 蛋 白基 因 的克 隆及 分 析 ’
李 红 艳 杨 传 平 王 玉 成 王 丙锋
（ 林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室 （ 东北林业大学）， 尔滨 ，５０ ０ 哈 １０ ４ ）
摘 要 从二 色补血草 中分 离出２个金属硫 蛋 白基 因的 ｃ Ｎ 全序 列， ＤＡ 分别命 名为 Ｌ ｎ 和 Ｌ ＭＴ 。Ｌ ｎ ｂ ｂ ２ ｂ 全 长 为 ５９ｂ ， 中 ５非 编码 区 ２ ｐ３非 编 码 区 ３０ｂ ， 放读 码框 （ Ｒ ） ２６ｂ ， 码 含 ８ 个 氨 基 酸 的蛋 白 ， ６ ｐ 其 ３ｂ ， ０ ｐ 开 Ｏ Ｆ 长 ４ ｐ 编 １ 相 对 分子 质 量 为 ８７ ， 电点 为 ４ ７ Ｌ Ｍ／ 全 长 为 ５ ３ ｐ 其 中 ５非 编码 区 ６ ｐ３非 编 码 区 ２６ ｐ 开放 读 码 框 长 ２ ００ 等 、 ；ｂ ２ ２ ， ｂ ｌ ， ｂ １ ， ｂ ６ ４ ｂ， ｐ 编码 ８ 个氨基 酸， １ 编码蛋 白的相对分子质量为 ８０ ， 电点为 ５ ０ ００ 等 ． 。这 ２个基 因编码的氨基 酸都含有 ｌ ４个半胱 氨 酸 Ｃ ｓ 分布 在 蛋 白质 的 Ｎ 端和 ｃ端 ， Ｃ Ｃ Ｃ和 Ｃ Ｘ ｙ， 呈 Ｃ、Ｘ Ｘ Ｃ形 式排 列 。疏 水性 分析 表 明 ： ２个蛋 白都 存在 ３ ４ 这 ５— ８ 个氨 基 酸之 间较 强 的疏 水 区。 通过 对 多种 植 物 的 ＭＴ蛋 白序 列 比 对 分析 表 明 ， 属 硫 蛋 白家 族 在 氨 基 酸 数 目上 保 守 金 性 差 ， 半胱 氨 酸 残基 （ ｙ） 但 Ｃ ｓ 的位 置 和数 目保 守性 达 到 １０ ， 示 了 Ｃ ｓ 金 属 硫 蛋 白 的功 能 十 分 重要 。 这 ２个基 ０％ 揭 ｙ对 因 已经在 Ｇ ｎ ａｋ上 注 册 ，ｂ ｅ ｂｎ Ｌ ｎ 基 因的 登 录 号 为 Ｅ １３ ７ ，ｂ ２ 基 因 的 Ｇ ｎ ａｋ登 录号 为 Ｅ １３７ 。 Ｆ０ ５４ Ｌ Ｍ／ ｅ ｂｎ Ｆ０ ５５ 关 键 词 二 色补 血 草 ； 因克 隆 ； 属 硫 蛋 白 基 金 分 类 号 Ｑ ８ ７５
灵芝金属硫蛋白基因的克隆及序列分析

灵芝金属硫蛋白基因的克隆及序列分析

灵芝金属硫蛋白基因的克隆及序列分析
谢东扬;祝雯;吴祖建;林奇英;谢联辉
【期刊名称】《中国农学通报》
【年(卷),期】2007(23)5
【摘要】采用RT-PCR和3′-RACE相结合的方法获得了灵芝(Ganoderma lucidum)金属硫蛋白的cDNA序列。

该序列全长为315bp,5′-端非翻译区为
47bp,3′-端非翻译区具有166bp,开放阅读框长度为102bp(包括一个终止密码子),可编码33个氨基酸。

在其编码的氨基酸序列中半胱氨酸(Cys)含量最高,占21.2%,其次是丝氨基酸(Ser)和丙氨基酸(Ala),均占12.1%。

对其编码的氨基酸序列进行分析发现该序列具有金属硫蛋白的保守序列模式,是金属硫蛋白家族的成员。

【总页数】4页(P87-90)
【关键词】灵芝;金属硫蛋白;cDNA
【作者】谢东扬;祝雯;吴祖建;林奇英;谢联辉
【作者单位】教育部生物农药重点实验室,福建农林大学植物病毒研究所
【正文语种】中文
【中图分类】Q936
【相关文献】
1.一个油茶金属硫蛋白基因的克隆与序列分析 [J], 蒋瑶;谭晓风;张党权;陈鸿鹏
2.天祝白牦牛金属硫蛋白基因(MT-1)全序列分子克隆及生物信息学分析 [J], 王雪莹;姬菩忠;马琦
3.山羊金属硫蛋白-Ⅲ基因克隆及序列分析 [J], 王磊;杨联;吴建平;汪晓娟
4.柽柳金属硫蛋白基因的克隆及序列分析 [J], 张艳;杨传平;王玉成
5.三角帆蚌金属硫蛋白基因的克隆及序列分析 [J], 袁一鸣;汪桂玲;李家乐
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