一、实验目的1. 掌握非发酵菌的基本概念及分类；2. 熟悉非发酵菌的鉴定方法；3. 提高实验室操作技能，培养科学思维和严谨的工作态度。
二、实验原理非发酵菌是一类不发酵或不分解糖类的革兰氏阴性杆菌，主要包括假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。
非发酵菌的鉴定主要通过观察菌落特征、进行生化试验、动力与鞭毛观察等手段。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）非发酵菌菌种：假单胞菌、不动杆菌、产碱杆菌、莫拉菌、黄杆菌等；（2）培养基：普通琼脂平板、血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、动力半固体培养基、氧化酶试验培养基等；（3）试剂：葡萄糖、乳糖、酵母提取物、酚红指示剂、氧化酶试剂等；（4）实验仪器：恒温培养箱、显微镜、酒精灯、无菌操作台等。
2. 实验仪器：（1）显微镜：用于观察菌落特征；（2）恒温培养箱：用于培养菌种；（3）酒精灯：用于无菌操作；（4）无菌操作台：用于无菌操作。
四、实验方法与步骤1. 菌落观察（1）将菌种接种于普通琼脂平板、血琼脂平板、麦康凯琼脂平板，分别于30℃、37℃培养24小时；（2）观察菌落特征，如菌落大小、形状、颜色、边缘、表面、透明度等；（3）记录观察结果。
2. 动力与鞭毛观察（1）将菌种接种于动力半固体培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种在半固体培养基中的生长情况，如是否有鞭毛、菌落是否呈指状、螺旋状等；（3）记录观察结果。
3. 氧化酶试验（1）将菌种接种于氧化酶试验培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种是否产生氧化酶，即菌落周围是否出现绿色；（3）记录观察结果。
4. 氧化-发酵（O/F）试验（1）将菌种接种于氧化-发酵试验培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种是否产生酸，即菌落周围是否出现红色；（3）记录观察结果。
5. 麦康凯琼脂平板生长情况（1）将菌种接种于麦康凯琼脂平板，30℃培养24小时；（2）观察菌种在麦康凯琼脂平板上的生长情况，如是否生长、生长速度等；（3）记录观察结果。
教师签名：2012年10 月10 日实验四非发酵革兰阴性杆菌的检验【实验目的】1.掌握不发酵革兰阴性杆菌的菌落形态特性、镜下革兰染色特点及生化特点【仪器和材料】菌种：铜绿假单胞菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌（普通琼脂板）试剂：革兰染液、非发酵菌生化编码鉴定管【方法与结果】一、观察菌菌落形态与染色性观察菌落形态铜绿假单胞菌不动杆菌嗜麦芽窄食单胞菌二、革兰染色镜检铜绿假单胞菌不动杆菌嗜麦芽窄食单胞菌革兰阴性杆菌，长短不一，多数短杆状，也有球杆状或线状革兰阴性菌，球状或球杆状，成堆聚集排列革兰阴性杆菌，菌体稍小，多数呈杆状或线状菌落圆形，绿色大小不一，边缘不整齐，扁平，光滑，湿润呈融合状菌落圆形，白色，偏大，凸起，光滑，湿润，边缘整齐菌落圆形，灰白色，中等大小，光滑，湿润，边缘不整齐教师签名： 2012年 10 月 10 日三、生化实验1.氧化酶实验（滤纸法）铜绿假单胞菌（阳性） 不动杆菌（阴性） 嗜麦芽窄食单胞菌（阴性）2.OF 实验接种OF 半固体2支（其中闭管一支加无菌液体石蜡，开管则不加）＋石蜡未＋石蜡 三种菌都是未加石蜡的变黄，加石蜡的不变黄，说明三种菌都在氧气参与时分解葡萄糖。
铜绿假单胞菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌都为：氧化型3.接种微量生化管【讨论】1. 本次实验的三种非发酵菌革兰染色均为阴性，不易区分，主要靠生化实验来鉴别。
2. 氧化酶实验中，应特别注意挑完绿脓杆菌的接种环应绝对严格烧灼灭菌，否则会造成不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌的假阳性出现。
或先检验不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌，最后检验绿脓杆菌，也可避免绿脓杆菌对另外两种菌的影响。
3. OF 实验中，由于嗜麦芽窄食单胞菌对葡萄糖氧化不明显，过夜培养可成中性或弱碱性，黄色很不明显，可继续培养至48小时后呈酸性，见明显黄色出现。
4. 铜绿假单胞菌普通培养可见菌落和培养基都呈绿色，说明该菌课产生绿色色素，并分泌至胞外，色素为水溶性色素，区别于金黄色葡萄球菌的脂溶性色素，金葡菌的脂溶性色素之表现为菌落黄色，培养基不变色。
