非发酵菌群的分类鉴定

非发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. 非发酵菌是一群需氧、无芽孢、不利用糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。

（1）通常所讲的非发酵菌指在KIA中24小时内表面能够生长，在底部不生长的需氧G-杆菌。

（2）非发酵菌与其它苛养或非糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。

（3）多为条件致病菌，近年来日益增多，尤其是医院感染。

2. 分类与命名：主要的非发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属；④rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄食单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. 非发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。

（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-杆菌都是非发酵菌。

（3）麦康凯上生长很差或不生长。

（4）动力：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜用直接动力观察或染色法。

4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利用（O/F试验）：O/F培养基:蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。

（2）氧化酶试验：（3）动力：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时后首次观察结果,24和48小时后再次观察结果。

更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。

（4）色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。

（5）硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮的生化过程。

（6）吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等+。

非发酵菌的鉴定程序1 概述非发酵菌是是指一群不能利用葡萄糖或仅能以氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性杆菌。

大多为机会致病菌。

其中假单胞菌属的铜绿假单胞菌在肺部感染中十分重要。

近年来此类细菌从住院病人的痰、尿、血液、体液标本中的分离率日渐增高，已成为引起院内感染的重要致病菌。

2 分类：主要包括假单胞菌属、从毛单胞菌属、伯克霍尔德菌属、窄食单胞菌属、产碱杆菌属、不动杆菌属、金黄杆菌属、莫拉菌属、土壤杆菌属、无色杆菌属和食酸菌属。

非发酵菌初步分属，见表2-1.表2-1非发酵菌初步分属生化反应O-F葡萄糖氧化酶触酶尿素鞭毛动力其他特性假单胞菌属O/- +/- + +/- 极生+不动杆菌属O/- - + - 无-无色杆菌属O + + +/- 周生+ 不产生3-酮基乳糖盐酸土壤杆菌属O + + + 周生+ 产生3-酮基乳糖盐酸产碱杆菌属- + + - 周生+黄杆菌属(F) + + +/- 无- 产黄色素莫拉杆菌属- + + - 无- 对营养要求高金黄杆菌属(F) + - - 无-艾肯菌属- + - - 无- 菌落小、陷入琼脂注：+，90%以上菌株阳性；-，90%以上菌株阴性；O，为氧化反应；F，为弱发酵反应3 临床常见致病菌3.1铜绿假单胞菌3.1.1培养及形态特征：镜下菌体细长，且长短不一，优势呈球杆状或丝状，成对或短链状排列。

该菌为专性需氧菌，培养菌落特征上为多样化：在血琼脂平板上形成扁平、湿润、有金属光泽、蓝绿色、浅绿色、灰白色、β溶血（少数不溶血）的菌落，多数菌落边缘呈毛玻璃状，有生姜味；可长生绿脓素和荧光素两种色素，可形成5种不同的菌落特征：经典型、大肠杆菌型、粗糙型、黏液型、侏儒型。

在伊红-美蓝平板上呈粉红色菌落。

3.1.2生化特征：氧化酶阳性，TSI为K/A，分解葡萄糖、不分解乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖；动力、枸橼酸盐、精氨酸双水解酶和硝酸盐还原试验阳性；S、ESC试验阴性。

LYS、IND、ORN、URE、H23.1.3鉴定步骤培养菌落涂片→分纯→氧化酶试验→选择非发酵板用TDR-200B仪器进行鉴定和药敏试验→菌种鉴定率＞85%可报告。

非发酵菌的鉴定定义：非发酵菌（nonfermenters）指一群需氧或兼性厌氧、不发酵糖类，能在普通培养基上生长的革兰阴性杆菌。

主要存在外界环境中，种类繁多，多为条件致病菌或医院内感染菌。

关于临床标本中NFB的意义，在混合培养物中见到时，必须考虑到患者的情况和标本来源。

一般来说，以纯培养方式分离自正常无菌部位的NFB，一定要鉴定到种并进行抗生素敏感性试验。

目前CLSI中，K-B法除了假单胞菌属、不动杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌有抗生素敏感性实验的判断标准外，其他非发酵菌没有K-B法的标准。

一、鉴定原则：1．血、无菌部位（脑脊液、胸水等），特殊病人，少见菌可用API-20NE或VIKET TWO-GN 卡鉴定。

2．其它部位如呼吸道标本、临床常见的非发酵，根据菌落形态、生化反应、抗生素耐药谱等综合分析手工法鉴定即可。

二、非发酵性菌基本分类：假单胞菌属Pseudomonas spp.（20多个临床上重要菌种中，铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌等最常见。

）不动杆菌属Acinetoacter spp.（最常分离的种鲍曼不动杆菌、鲁氏不动杆菌、溶血不动杆菌等）窄食单胞菌Stenotrophomonas spp.（嗜麦芽窄食单胞菌、非洲嗜麦芽窄食单胞菌）伯克霍尔德菌Burkholderia spp.（洋葱伯克霍尔德菌、唐菖蒲伯克霍尔德菌、类鼻疽伯克霍尔德菌等）鞘氨醇单胞菌属Sphingomonas spp.（少动鞘氨醇杆菌）无色杆菌属Achromobacter spp.（木糖氧化无色杆菌）希瓦氏菌属Shewanella spp. （腐败希瓦氏菌海藻希瓦氏菌）产硷菌属Alcaligenes spp.黄杆菌属Flavoacterium spp.莫拉菌属Moraxella spp.罗尔斯通菌属 Ralstonia spp.食酸菌属Acidovorax spp.丛毛单胞菌属Comamonas spp.甲基杆菌属Methylobacterium spp.等还有一些未定名的菌群三、辨认非发酵菌的基本要点1. 分离培养基上的菌落有以下情况初步考虑非发酵菌的存在a.培养基上生长较差或中国蓝上不生长的阴性菌。

每日一菌之非发酵菌及检验一、概述非发酵菌主要是指一群①不发酵或不分解糖类的②革兰阴性③无芽胞④需氧杆菌。

目前，非发酵菌包括13个属。

主要有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。

这些细菌大多为条件致病菌。

对于非发酵菌的鉴定，必须首先进行种属间的鉴别，然后进行种间的鉴定。

一般实验室只需用几项试验，如氧化酶、O-F试验、动力及鞭毛、菌落色素、硝酸盐还原试验以及在麦康凯琼脂上的生长情况等即可对90%～95%分离的菌株作出初步鉴定。

1.培养温度：多数非发酵菌适宜生存于自然界，培养温度以30℃为宜。

有的更适宜生长于室温（18℃～22℃）。

故常规标本应先培养于35℃～37℃，再培养于30℃或室温。

2.动力与鞭毛：在非发酵菌的鉴定中，细菌是否具有鞭毛及鞭毛的特点有重要的诊断意义。

由于非发酵菌大部分为专性需氧菌，在半固体培养基上观察动力不明显，因细菌在琼脂表面生长，底层穿刺生长不良或不生长，故观察非发酵菌的动力以30℃或室温12～24h培养物悬滴法为准。

有时需借助鞭毛染色予以鉴定。

3.氧化酶试验：该试验是鉴定非发酵菌的重要试验，非发酵菌中除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。

4.氧化-发酵（O-F）试验：本试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。

非发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型产生微量酸。

在氧化-发酵（O-F）试验中，应为开管产酸，闭管不变。

5.在麦康凯琼脂上生长情况：如假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。

非发酵菌几种主要菌属的基本特征见表5-25-1。

表5-25-1 非发醇菌主要菌属的基本特征二、假单胞菌属假单胞菌属为一大组革兰阴性杆菌，大量存在于水、土壤和空气中。

在人类感染的非发酵菌中，假单胞菌属约占70%～80%，主要为铜绿假单胞菌（约55%～65%）。

其次为嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。

⾮发酵菌微⽣物学检验⾮发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. ⾮发酵菌是⼀群需氧、⽆芽孢、不利⽤糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。

（1）通常所讲的⾮发酵菌指在KIA中24⼩时内表⾯能够⽣长，在底部不⽣长的需氧G-杆菌。

（2）⾮发酵菌与其它苛养或⾮糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。

（3）多为条件致病菌，近年来⽇益增多，尤其是医院感染。

2. 分类与命名：主要的⾮发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛⽑单胞菌属、⾷酸菌属；④rRNAⅣ群/短波⽑单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄⾷单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希⽡菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. ⾮发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中⽆酸产⽣，斜⾯和底部均呈红⾊。

（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄⾷单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并⾮所有氧化酶+的G-杆菌都是⾮发酵菌。

（3）麦康凯上⽣长很差或不⽣长。

（4）动⼒：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜⽤直接动⼒观察或染⾊法。

4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利⽤（O/F试验）：O/F培养基:蛋⽩胨和糖类的⽐例为1:5⽽不同于发酵菌的1:2。

（2）氧化酶试验：（3）动⼒：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6⼩时后⾸次观察结果,24和48⼩时后再次观察结果。

更准确的⽅法是湿⽚法和鞭⽑染⾊。

（4）⾊素形成：⾮发酵菌可形成多种⾊素，有助于菌种的鉴定。

（5）硝酸盐还原/产⽓：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进⽽释放氮的⽣化过程。