下载文档原格式
作者单位：453000 河南新乡，新乡市疾病预防控制中心性病艾滋病防治科（徐璐、程栋、于贺军），公共卫生科（吕晓静）通信作者：程栋，Email ：****************DOI ：10.3969/j.issn.1674-7151.2020.02.014新乡市人类免疫缺陷病毒抗体有反应者胶体硒法与蛋白质免疫印迹试验结果分析徐璐 吕晓静 程栋 于贺军【摘要】 目的 探讨胶体硒法人类免疫缺陷病毒（HIV ）抗体筛查与蛋白质免疫印迹试验（Western Blot ）结果的相关性。
方法 采用胶体硒法对2018 —2019年新乡市获得性免疫缺陷综合征（AIDS ）筛查实验室送检的610例HIV 感染待确定样本进行胶体硒法复检，并对所有样本进行确证实验（Western Blot ），采用SPSS 21.0软件进行统计学分析，收集受检者的基本信息，比较两种方法的阳性率。
结果 610例患者样本中经胶体硒法检测有反应样本共427例；经Western Blot 检测阳性样本377例，阴性样本155例，不确定样本 78例。
采用胶体硒法所得有反应样本比例明显高于Western Blot 法〔70.0%（427/610）比61.8%（377/610）〕，差异有统计学意义（P ＜0.05）。
结论 使用胶体硒法进行HIV 抗体筛查阳性率高于Western Blot，胶体硒作为一种快速检测试剂，其检测结果可以及早对母婴阻断、职业暴露处置等特殊情况是否进行抗病毒药物干预提供一定参考。
【关键词】 人类免疫缺陷病毒； 胶体硒； 蛋白质免疫印迹试验基金项目：河南省医学科技攻关计划项目（201602311）Analysis on colloidal selenium method and Western Blot results of human immunodeficiency virus antibody responders in Xinxiang CityXu Lu, Lyu Xiaojing, Cheng Dong, Yu Hejun. Department of Accuired Immune Deficiency Syndrome Prevention and Control, Xinxiang Center for Disease Control and Prevention, Xinxiang 453000, Henan, China (Xu L, Cheng D, Yu HJ); Department of Public Health, Xinxiang Center for Disease Control and Prevention, Xinxiang 453000, Henan, China (Lyu XJ) Correspondingauthor:ChengDong,Email:****************【Abstract 】 Objective To explore the correlation between colloidal selenium method for human immunodeficiency virus (HIV) antibody screening and Western Blot results. Methods The 610 to-be-confirmed samples of HIV infection from different accuired immune deficiency syndrome (AIDS) screening laboratories in Xinxiang City during 2018 to 2019 were retested by colloidal selenium method, and all samples were confirmed by confirmatory experiment (Western Blot). SPSS 21.0 software was used for statistical analysis. The basic information was collected, and the positive rates by two methods were compared. Results Among 610 samples, 427 cases were reactive by colloidal selenium method; 377 cases were positive by Western Blot, 155 cases were negative, 78 cases were uncertain. The reactive rate by colloidal selenium method was significantly higher than that by Western Blot [70.0% (427/610) vs. 61.8% (377/610)], with significant difference (P < 0.05). Conclusions The positive rate of HIV antibody screening by colloidal selenium method was higher than that by Western Blot. Colloidal selenium, as a rapid detection reagent, can be used as a reference for antiviral drugs intervention in special cases such as mother infant block and occupational exposure.【Key words 】 Human immunodeficiency virus; Colloidal selenium; Western Blot Fund program: Henan Provincial Medical Science and Technology Project (201602311)目前，获得性免疫缺陷综合征（acquired immunedeficiency syndrome，AIDS ）的流行趋势日益严峻［1］。
人免疫缺陷病毒阳性者免疫印迹试验带型分析摘要：目的通过用免疫印迹实验对人免疫缺陷病毒（HIV）特异蛋白抗体的检测，探讨WB带型在HIV感染者和艾滋病患者中的临床关系。
方法：对省、市疾控中心确诊的HIV者118例作带型分析。
结果：HIV感染者和艾滋病患者WB带型分析基本上都能测出gp160、gp120、p66、p55、p51、gp41、p31、p24、p17共9个区带。
其中HIV感染者39例检出P17条带31例（79.49%），p55条带17例(43.59%);艾滋病患者79例检出P17抗体46例（58.23%），p55条带17例(21.52%). HIV感染者的WB带型主要有5种类型，艾滋病患者WB带型主要有13种类型；两组病例中HIV感染者WB带型9个区带较为齐全，而艾滋病患者WB带型有P17、P55带缺失，P17和P55均缺失以及严重的p24缺失。
结论：艾滋病患者的P17和P55条带的检出率显著低于HIV感染者（P<0.01）；HIV感染者的WB带型主要有5种类型，而艾滋病患者的WB带型则有13种不同的类型，是HIV感染者的2.6倍。
艾滋病患者9个区带齐全的检出率显著低于HIV感染者，而除P55带缺失、P17缺失及P17和P55均缺失两组间无显著差异外，艾滋病患者出现其他各种区带的发生率显著高于HIV感染组（P<0.01）。
关键词：HIV感染者；艾滋病患者；免疫印迹法WB带型随着艾滋病毒感染的不断上升，虽然HIV检测的实验也较多，但免疫印迹实验（western blot, WB，）仍然是首选的确诊HIV感染的重要实验，HIV感染后的免疫反应可使抗体在不同时期出现不同的血清学反应，这对病原检测和诊断具有非常重要的意义。
为此我们通过用免疫印迹实验（western blot, WB）对HIV（+）特异蛋白抗体的检测，探讨WB带型在HIV感染者和艾滋病患者中的临床关系。
1 资料与方法1.1 一般资料1.1.1 病人：达州市中心医院因症住院的HIV(+)患者，通川区妇幼保健院的疑似送检患者然后确诊HIV(+)患者，以及门诊检查被确诊为HIV(+)患者。
人类免疫缺陷病毒抗原抗体检测试剂性能评价研究注册指导原则（征求意见稿）本指导原则旨在指导注册申请人对人类免疫缺陷病毒抗原抗体检测试剂性能评价研究注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本指导原则是对人类免疫缺陷病毒抗原抗体检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围艾滋病，即获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，其病原体为人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV），亦称艾滋病病毒，属于逆转录病毒科慢病毒属。
根据遗传差异，艾滋病病毒可分别HIV-1和HIV-2两种基因型。
根据结构基因env（编码包膜蛋白）和gag（编码壳蛋白）序列的差异，HIV-1还可分为三组，包括M组、O 组和N组, 及P组。
M组还可以细分出不同的亚型，如A，B，C，D，F，G，H，J，K，L型。
此外病毒还在不断进化，相同亚型病毒或不同亚型病毒之间均可通过基因重组方式形成新病毒，即“流行重组型”（circulating recombinant form, CRF）病毒。
从全球流行情况来看，HIV-1流行率最高，尤其是HIV-1的M组是全球艾滋病的主要致病原。
HIV-2型的感染人群主要分布在非洲西部国家，其他国家地区也偶有报道。
目录1．实验方法2. 检测原理3．标本要求4．检测试剂5．储存条件及有效期6 检验仪器7. 检验方法8. 质控9.结果计算10.参考值11. 产品性能指标12. 处理及报告13.临床意义14.验方法的局限性15.考前须知1实验方法采用双抗原夹心法.化学发光免疫测定〔CLIA)技术定性检测人血清或血浆中人类免疫缺陷病毒1型和2型抗体的含量2检测原理以HIV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HIV抗原制备酶结合物，通过免疫反响形成抗原－抗体－酶标记抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HIV抗体的含量成正比。
3 标本要求1). 应用正确医用技术收集血清或血浆样本。
血浆样本推荐使用EDTA、枸橼酸钠或肝素的抗凝血浆。
2). 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去。
3〕.严重溶血、脂血或浑浊的样本不能用于测定。
4). 样本收集、处理后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；假设需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，防止反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
4 检测试剂5储存条件及有效期:1). 试剂盒应保存于2～8℃，防止冷冻，防止强光照射，有效期为12个月。
2). 试剂机载稳定性•试剂包〔磁微粒混悬液、酶结合物、样品稀释液〕竖直向上存放，在2～10℃环境下冷藏保存2小时后，才可上机使用。
首次使用后，机载或在2～10℃环境下稳定期为28天。
•阴阳性对照开瓶后保存于2～8℃，稳定期为1个月；假设需使用更长时间，应分装冻存。
6检验仪器AutoLumo A2000化学发光分析仪。
7 检验方法7.1、消耗品检查：•根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。
•参考相应的仪器系统操作说明。
7.2、试剂包装载：•试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包屡次以混合新试剂包的成分，防止产生气泡。
不要倒转已经翻开的试剂包。
•仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。
HIV抗体初筛试验假阳性原因探究及处理措施摘要：目的：探讨检测艾滋病病毒抗体HIV 抗体初筛试验的准确率及HIV 抗体初筛实验。
方法：用ELISA方法对体检、哨点及VCT血清标本进行HIV抗体初筛检测，并使用两种或两种以上不同试剂或方法对初筛阳性样本进行复检，得到反馈结果后与假阳性率对比。
结果：对该初筛实验室HIV抗体初筛试验假阳性率（0.2727%）明显高于（0.07%）。
结论：影响HIV抗体初筛实验结果的因素较多，但是客观因素能通过严格规范、校准仪器等方法得以解决，而提高实验室技术人员自身的素质、理论和技术操作水平才是降低假阳性结果出现的关键。
关键词：HIV初筛实验；假阳性；原因分析艾滋病（AIDS）是一种严重威胁人类健康的传染病，目前检测艾滋病病毒（HIV）的实验室方法有很多：P24抗原检测、核酸分析、病毒培养、蛋白免疫印迹、HIV 抗体等，其中ELISA HIV 抗体检测法操作简便、成本低廉，适合大批量样本的检测[1]，是目前HIV 初筛试验室最常用的方法。
按规定抗-HIV 初筛阳性样本须送确认实验室确认，确认阳性才能诊断为HIV 阳性或AIDS 。
由于国内各厂家试剂之间的差异，人体内可能存在干扰试验的某些因素，致使部分抗-HIV 初筛结果与确认实验不符，不仅造成人力物力浪费，亦给可疑患者带来极大的心理压力。
对3380例临床样本的初筛、初筛复检与确认结果进行了比较，，现报告如下。
一、对象与方法1、检测对象。
所有标本均为血清标本，由体检科及艾滋病控制科采样后专人送检。
2、仪器。
安图2010型酶标仪；安图FLUIDO洗板机及安图IWO-960型洗板机；BSC-1500IIB2-X生物安全柜。
3、检测方法。
酶联免疫吸附试验（ELISA），严格按照试剂盒说明书和《全国艾滋病检测技术规范》。
二、结果按照HIV抗体筛查检测流程的要求，对初筛试验阳性标本均加做了2次重复检测试验，在3380份血清样品中，初筛试验阳性9例，将重复检测仍然为阳性结果的标本送上级疾病预防控制中心艾滋病检测中心进行确认试验（WB），反馈结果9例标本均为阴性（无特异性HIV抗原带），假阳性率为0. 27%，见表。
人类免疫缺陷病毒（HIV）概述人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus或HIV）又叫艾滋病毒，是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。
1983年，人类免疫缺陷病毒在美国首次发现。
它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒（Lentivirus），主要侵犯CD4 T细胞、CD4单核细胞和B淋巴细胞。
属逆转录病毒。
该病毒破坏人体的免疫能力，导致免疫系统失去抵抗力，从而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存，发展到最后导致艾滋病。
艾滋病病毒已知有4种病株，均来自喀麦隆的黑猩猩及大猩猩。
HIV主要型别为HIV-1和HIV-2，艾滋病大多由HIV-1引起的。
HIV形态结构病毒呈球形，直径100～120nm，电镜下可见一致密的圆锥状核心，内含病毒RNA分子和酶（逆转录酶、整合酶、蛋白酶），病毒外层囊膜系双层脂质蛋白膜，其中嵌有gp120和gp41，分别组成刺突和跨膜蛋白。
囊膜内面为P17蛋白构成的衣壳，其内有核心蛋白（P24）包裹RNA。
HIV基因组长约9.2～9.7kb，含gag、Pol、env、3个结构基因，及至少6个调控基因（TaT Rev、Nef、Vif、VPU、Vpr）并在基因组的5′端和3′端各含长末端序列。
HIV LTR含顺式调控序列，它们控制前病毒基因的表达。
已证明在LTR有启动子和增强子并含负调控区。
1．gag基因能编码约500个氨基酸组成的聚合前体蛋白（P55），经蛋白酶水解形成P17，P24核蛋白，使RNA不受外界核酸酶破坏。
2．Pol基因编码聚合酶前体蛋白（P34），经切割形成蛋白酶、整合酶、逆转录酶、核糖核酸酶H，均为病毒增殖所必需。
3．env基因编码约863个氨基酸的前体蛋白并糖基化成gp160，gp120和gp41。
gp120含有中和抗原决定簇，已证明HIV中和抗原表位，在gp120 V3环上，V3环区是囊膜蛋白的重要功能区，在病毒与细胞融合中起重要作用。
gp120与跨膜蛋白gp41以非共价键相连。
人类免疫缺陷病毒（胶体金法）标准操作程序1.检验目的用于体外定性检测人全血、血清或血浆样本中人类免疫缺陷病毒(HIV) 1/2型艾滋病。
2.检验程序的原理和方法采用胶体金免疫技术和层析原理，定性检测人全血、血清或血浆样本中的人类免疫缺陷病毒(HIV) 1/2型抗体。
检测阳性样本时，样本中HIV抗体与胶体金标记抗原(大肠杆菌中表达)结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的重组HIV-Ag(大肠杆菌表达) 结合形成“Au-HIV(1+2) -Ag-HIV-Ab-HI(1+2) -Ag”夹心物而凝聚显色，游离的胶体金标记重组Au-HIV(1+2) -Ag则在对照线处与鼠抗HIV单克隆抗体结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色，30分钟内观察结果即可。
3.性能特征3.1用国家参考品或经国家参考品标化的企业参考品进行检定。
3.1.1阴性参考品符合率：用HV抗体阴性参考品(N1~N20)测定，要求阳性反应不得多于2份，阴性符合率(-l-)应≥18/20。
3.1.2阳性参考品符合率：HV-1型阳性参考品符合率：用HIV-1型阳性参考品(P 1~P 18) 测定，要求应全部为阳性反应， HIV-1型阳性符合率(+/+) 应为18/18；且P 18显色强度应不低于P 17； HIV-2型阳性参考品符合率：用HV-2型阳性参考品(P 19~P 20) 测定，要求应全部为阳性反应， HIV-2型阳性符合率(+/+) 应为2/2。
3.1.3最低检出限：用最低检出限参考品(S1~S3)测定，要求阳性反应不得少于1份(≥1/3)且基质血清(S1)为阴性反应。
3.1.4重复性：用重复性参考品平行检测10次，应均为阳性反应且显色度均一。
3.1.5稳定性：37℃放置20天后，其阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、重复性应符合要求。
3.2本试利盒测定类风湿因子阳性血清、乙型肝炎病毒(HBV) 、甲型肝炎病毒(A) 、梅毒螺旋体(TP)感染者血清不会引起干扰。
筛查实验检测HIV抗体阳性结果分析王凤莲;黄春梅【摘要】@@ 人类免疫缺陷病毒(HIV)是获得性免疫缺陷综合征(AIDS,艾滋病)的病原体.该病是一种性传播疾病,人类感染HIV后,经过2-8周或更长时间可产生HIV抗体.HIV抗体检测分筛查试验(初筛和复检)和确证试验.待检血清先经筛查试验,阳性结果再经确证试验检测,确证试验阳性的才能确定为HIV感染.【期刊名称】《河北医学》【年(卷),期】2012(018)004【总页数】3页(P562-564)【关键词】HIV抗体;初筛实验;阳性标本【作者】王凤莲;黄春梅【作者单位】海南省三亚市人民医院检验科,海南,三亚,572000;海南省三亚市人民医院检验科,海南,三亚,572000【正文语种】中文人类免疫缺陷病毒(HIV)是获得性免疫缺陷综合征(AIDS，艾滋病)的病原体。
该病是一种性传播疾病，人类感染HIV后，经过2－8周或更长时间可产生HIV抗体。
HIV抗体检测分筛查试验(初筛和复检)和确证试验。
待检血清先经筛查试验，阳性结果再经确证试验检测，确证试验阳性的才能确定为HIV感染。
HIV抗体筛查试验以酶联免疫(ELISA)检测为主，ELISA法灵敏性和特异性较高，但由于各种原因，有少许假阳性结果出现，会短时给临床和病人带来困扰和担忧。
我们将近几年HIV 抗体筛查实验阳性结果标本，与当地确证实验室检测反馈结果进行了对比分析，结果如下:1 对象和方法1.1 对象:2009年10月至2011年8月我院住院病人(术前检测)及门诊病人(临床检测和自愿咨询检测)筛查出的HIV抗体阳性血清标本21份，其中男 15例，女6例，年龄在24－75岁之间。
1.2 筛查试剂:ELISA实验使用试剂为英科新创试剂、上海科华试剂、珠海丽珠试剂，均在有效期内使用，批批检合格，按说明书操作。
1.3 试验方法:ELISA试验在室内质控在控条件下，用英科新创试剂初筛查出HIV抗体阳性的病人，重新抽取第二份样本，再用原来英科新创试剂和上海科华试剂或或珠海丽珠试剂重复检测。
