第三章药物的杂质检查

一、氯化物检查法药物的生产过程中，常常要用到盐酸，或原料、中间体呈盐酸盐等，氯化物因此极易被引入到药物中。

Cl-对人体虽然无害，但它的量可以反映出药物的纯净程度及生产过程是否正常。

因此作为信号杂质，氯化物在很多药物中需要检查。

原理中国药典对氯化物的检查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。

方法除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml(溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性)，再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。

另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml 纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，摇匀，即得对照溶液。

于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较。

中国药典对无水葡萄糖中氯化物的检查记叙为：取本品0.60g，依法检查(附录ⅤⅢA)，与标准氯化钠溶液6.0ml制成的对照液比较，不得更浓(0.010%)。

讨论以上检查方法中使用的标准氯化钠溶液每1ml相当于10μg的Cl-。

在测定条件下，氯化物浓度以50ml中含50μg～80μg的Cl-（相当于标准氯化钠溶液5.0ml～8.0ml）所显浑浊梯度明显，便于比较。

因此设计氯化物的检查方法时，应根据其限量，取用适宜的供试品量，使氯化物的浓度处在适宜比浊的范围内。

氯化物检查宜在硝酸酸性溶液中进行，因加入硝酸可避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成而干扰检查，同时还可加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。

为了避免光线使单质银析出，在观察前应在暗处放置5min。

由于氯化银为白色沉淀，比较时应将比色管置黑色背景上，从上向下观察，比较。

供试品处理有的药物在上述试验条件下对检查有干扰，应排除干扰后再检查。

供试品溶液如不澄清，可用含硝酸的水洗净滤纸中的氯化物后滤过。

供试品溶液如带颜色，可按中国药典附录所规定的方法处理。

即取两份供试品溶液，于其中一份中先加入硝酸银试液1.0m1，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复滤过，至滤液澄清，即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再在其中加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，作为对照溶液；另一份中加入硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，作为供试品溶液，将两液在暗处放置5 min后比较，即可消除颜色的干扰。

某些有颜色的药物也可根据其化学性质，设计其他的排除干扰的方法。

如高锰酸钾中的氯化物检查，可先加乙醇适量使高锰酸钾还原褪色后，再依法检查。

检查碘化物（如碘化钠），I-也能与硝酸银形成沉淀，干扰检查。

可在供试品中加入一定量的酸和过氧化氢溶液，加热煮沸，使氧化产物碘挥去、溶液澄明无色后，再依法检查。

也可以利用碘化银沉淀稳定，在氨溶液中不溶解，而氯化银、溴化银沉淀在氨溶液中溶解的性质，除去碘化物的干扰。

如检查碘中氯化物和溴化物，是将供试品加水研磨、滤过，于滤液中加锌粉使碘还原为无色的碘化物，再在氨碱性条件下滴加硝酸银试液使生成碘化银沉淀而滤除。

向滤液中加入硝酸，破坏络离子后，AgBr和AgCl沉淀复析出，与一定量标准氯化钠溶液生成的沉淀比较，即可确定氯化物和溴化物是否符合要求。

溶于水的有机药物，可按中国药典附录规定的方法直接检查氯化物。

不溶于水的有机药物，多数采用加水振摇，使所含氯化物溶解，滤除不溶物；或加热溶解供试品，放冷后析出沉淀，滤过，取滤液依法检查。

如药物在稀乙醇或丙酮中有一定溶解度，也可加稀乙醇或丙酮溶解后依法检查。

三氯叔丁醇、氯法齐明中氯化物的检查即如此。

检查有机氯杂质，可根据杂质结构，将有机氯转变为离子状态，再依法检查。

若有机氯为氯代脂烃或氯在环的侧链上，可在碱性溶液中加热使水解生成Cl-。

若杂质中氯原子连接于环上，则需先对其进行有机破坏，使分解后再检查。

有关讨论详见本书第四章第一节“定量分析样品的前处理方法”。

二、硫酸盐检查法原理药物中存在的微量硫酸盐与氯化钡在盐酸酸性介质中生成硫酸钡白色浑浊，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下生成的浑浊比较，浊度不得更大。

方法除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成约40ml(溶液如显碱性可滴加盐酸使成中性)；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2m1，摇匀，制得供试溶液。

另取各药品项下规定量的标准硫酸钾溶液，置50 ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml，摇匀，制得对照溶液。

于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5ml，用水稀释至50ml，充分摇匀，放置10min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较。

讨论所用标准硫酸钾溶液每1ml相当于0.1mg的SO。

本法适宜比浊的浓度范围为每50ml 溶液中含0.1mg～0.5mg的SO，相当于标准硫酸钾溶液1.0ml～5.0ml。

若SO的浓度小于0.05mg/50ml，产生的硫酸钡浑浊不明显，若大于1mg/50ml，则产生的浑浊度较大，无法区别其浓度差异，且重现性也不好。

供试品溶液加盐酸成酸性，可防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀的生成。

溶液的酸度也能影响硫酸钡的溶解度，以50ml中含稀盐酸2ml，溶液的pH值约为1为宜。

酸度增加，灵敏度下降，应注意控制。

氯化钡溶液的浓度在10%～25%范围内所呈硫酸钡的浑浊度差异不大。

中国药典采用25%氯化钡溶液，呈现的浑浊度较稳定，使用时不必新配。

经试验，放置1个月后，反应的效果仍无显著改变。

加入氯化钡试液后，应立即充分摇匀，防止因局部过浓而影响产生浑浊的程度。

供试品处理供试品溶液如需滤过，应先用加盐酸使成酸性的水洗净滤纸中硫酸盐，再滤过。

有色供试品如富马酸亚铁处理的方法与氯化物检查法相同。

其他国家药典如JP(14)、USP(24)、BP(2000)检查硫酸盐的方法基本相同，都是在酸性条件下使SO与氯化钡反应后进行比较。

但USP(24)和JP(14)是用0.010mol/L的硫酸作为标准溶液。

三、铁盐检查法(一)硫氰酸盐法检查药品中的铁盐杂质，中国药典和USP均采用硫氰酸盐法。

原理铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较，颜色不得更深。

Fe3++6SCN- [Fe(SCN)6]3-方法除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml, 移置于50ml纳氏比色管，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，加水稀释至约35ml后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量使成50ml，如显色，立即与标准铁溶液一定量按相同方法制成的对照溶液比较。

讨论本法用硫酸铁铵[FeNH4(S04)2·12H2O]配制标准铁溶液，并加入硫酸防止铁盐水解，使易于保存。

标准铁溶液每1ml相当于10μg的Fe3+。

当50ml溶液中含Fe3+为5μg～90μg时，溶液的吸收度与浓度呈良好线性关系。

目视比色时以50ml溶液中含10μg～50μg Fe3+为宜。

在此范围内，溶液的色泽梯度明显，易于区别。

在盐酸酸性条件下反应，可防止Fe3+的水解。

经试验，以50ml溶液中含稀盐酸4ml为宜。

加入氧化剂过硫酸铵既可氧化供试品中Fe2+成Fe3+，同时可防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。

2Fe2+ +（NH4）2S2O8 2Fe3++（NH4）2SO4+ SO某些药物（如葡萄糖、糊精和硫酸镁等）在检查过程中需加硝酸处理，则不再加过硫酸铵，但必须加热煮沸除去氧化氮，因硝酸中可能含亚硝酸，它能与硫氰酸根离子作用，生成红色亚硝酰硫氰化物，影响比色。

HNO2+SCN-+H+ NO•SCN+H2O铁盐与硫氰酸根离子的反应为可逆反应，因此，加入过量的硫氰酸铵，不仅可以增加生成的配位离子的稳定性，提高反应灵敏度，还能消除因氯化物等与铁盐形成配位化合物而引起的干扰。

供试品处理若供试液管与对照液管色调不一致，或所呈硫氰酸铁的颜色较浅不便比较时，可分别移入分液漏斗中，各加正丁醇或异戊醇提取，分取醇层比色。

因硫氰酸铁配位离子在正丁醇等有机溶剂中的溶解度大，上述处理能增加颜色深度，同时也排除某些干扰物质的影响。

某些酸根阴离子，如Cl-、PO、SO、枸橼酸根离子等，能与Fe3+形成有色配位化合物而干扰检查。

排除干扰的方法有适当增加酸度，增加硫氰酸铵试液的加入量，用正丁醇提取后比色等。

如枸橼酸钠中铁盐的检查，系采用正丁醇提取硫氰酸铁后比色，枸橼酸钠留在水层，不影响检查。

又如检查硫酸钙中的铁盐，是取供试品0.20g，加过硫酸铵50mg后，加稀盐酸10ml与硫氰酸铵试液5.0m1，再依法检查。

一些金属离子可与SCN-反应而干扰检查。

如Hg2+与SCN-能生成离解度很低的Hg(SCN)2或[Hg(SCN)4]2-，银、铜、钴、铋等离子能与硫氰酸根离子生成有色沉淀，在设计方法时应予以注意。

某些有机药物特别是具环状结构的有机药物，在实验条件下不溶解或对检查有干扰，需经炽灼破坏，使铁盐转变成三氧化二铁留于残渣中，处理后再依法检查。

盐酸普鲁卡因、泛影酸、羟丙纤维素等药物中铁盐检查。

（二）巯基醋酸法BP采用巯基醋酸(mercaptoacetic acid) 法检查药物中铁盐。

原理巯基醋酸还原Fe3+为Fe2+，在氨碱性溶液中进一步与Fe2+作用生成红色配位离子，与一定量标准铁溶液经同法处理后产生的颜色进行比较，以限制铁的量。

Fe2++2HSCH2COOH→Fe(SCH2COOH)2+H+Fe(SCH2COOH)2[Fe(SCH2COO)2]2-+2H2O红色讨论在加巯基醋酸试液前，应先加入20%枸橼酸溶液2ml，使枸橼酸与铁离子形成配位离子，以免在氨碱性溶液中产生氢氧化铁沉淀。

本法检查铁盐灵敏度较高，但试剂较贵。

四、重金属检查法重金属系指在实验条件下能与S2-作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等。

在药品生产过程中遇到铅的机会较多，铅在体内又易积蓄中毒，故检查时以铅为代表。

中国药典对重金属的检查一共收载有四种方法。

第一法硫代乙酰胺法，用于在实验条件下供试液澄清、无色，对检查无干扰或经处理后对检查无干扰的药物。

原理硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓冲液）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，颜色不得更深。

CH3CSNH2+H2O→CH3CONH2+H2SH2S+Pb2+PbS↓+2H+方法除另有规定外，取25ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml后，加水或各药品项下规定的溶剂稀释使成25ml，乙管加入按各药品项下规定方法制成的供试液25ml；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2min，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。