临床分离志贺菌中质粒介导磷霉素耐药基因的检测
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间的重 复序列 Ｐ Ｃ Ｒ（ Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ － Ｐ Ｃ Ｒ） 法对 阳性 菌株进行同源性分
析 。结果 ２ ６ ３株志贺菌 中磷 霉素 耐药 ２ ５株 、 中介 ７株 ， 耐 药率 为 ９ ． ５ ％。Ｐ Ｃ Ｒ结果 显示 ｌ ８株磷 霉素耐药志贺菌 ｒ ｏ ｓ Ａ ３ 阳性 （ 基 因登 录号 为 Ｋ Ｊ ７ １ ６ ８ ５ ２ ） ， 阳性率 为 ６ ． ８ ％， 未检出 ｆ ０ －
程 一 跃
，
梅 清 ， 刘 艳 艳 ， 程 君 ， 匮 回 ， 李 家 斌 ’
互 转移 ］ ， 因此 ， 同 为 肠 杆 菌 科 细 菌 的 志 贺 菌 可 能 从 其他 类 型肠 杆 菌 科 细 菌 中 （ 如大肠埃希菌 、 肺 炎 克 雷伯 菌等 ） 获 得 质粒 介 导 的磷 霉 素 耐 药基 因 。该 研 究对 临床 分 离 的 ２ ６ ３株 志贺 菌 进行 耐 药 性 分析 ， 在 磷霉 素耐 药 的志 贺菌 中检测 质粒 介导 的磷 霉素 耐 药基因， 明确耐 药基 因 的种类 以及 分析其 传播 方式 。
１ 材 料与 方法
１ ． １ 材料
摘 要 目的
在磷霉素 耐药 志贺菌 中检测 质粒介 导 的磷霉
素耐药基 因 ｆ ｏ ｓ Ａ、 ｆ ｏ ｓ Ａ ３和 ｆ ｏ ｓ Ｃ ２ ， 并 分 析其传 播 方式 。方法 琼脂倍 比稀释法测定 志贺 菌对抗 菌药物 的最低 抑菌 浓度 （ Ｍ Ｉ Ｃ） 。在磷霉 素耐药菌 株 中利 用 聚合 酶链 式反 应 （ Ｐ Ｃ Ｒ） 检测其质粒 介导的磷霉素耐药基 因 ｆ ｏ ｓ Ａ、 ｆ ｏ ｓ Ａ ３和 ｆ ｏ ｓ Ｃ ２ 。对 阳性扩增产 物进行测序分析并对 阳性 菌株 进行接合试验 ， 采 用琼脂倍 比稀释法测定接合 子对 １ ２种 抗菌 药物 的 ＭＩ Ｃ值 ， Ｐ Ｃ Ｒ法检测接合子质粒介 导磷霉素耐药基 因， 肠杆菌科基 因
ｓ Ａ和 ｆ ｏ ｓ Ｃ ２ 。１ ８株 ｆ ０ ｓ Ａ ３阳性株 中， １ ３株结 合成 功 ， 与 受体
１ ． １ ． １ 菌株 来 源 收 集 安 徽 省 细菌 耐 药 监 测 中心 ２ ０ １ １年 ９月 ～ ２ ０ １ ２年 １ ０月 临床 标本 中分 离 的非 重 复志贺 菌 ２ ６ ３株 。所有 菌株 由全 自动微生 物分 析 仪 （ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ Ｓ ｃ ａ ｎ Ｗａ ｌ ｋ Ａ Ｗａ ｙ － ４ ０ ） 和血清 玻 片凝 集 试验 鉴 定 。质 控菌 株大 肠 埃 希 菌 Ａ Ｔ Ｃ Ｃ ２ ５ ９ ２ ２ ， 转 移 接 合试 验 受体 菌大肠 埃 希菌 Ｊ ５ ３ Ａ Ｚ “以 及 ｆ ｏ ｓ Ａ、 ｆ ｏ ｓ Ａ ３和 ｆ ｏ ｓ Ｃ ２基 因 阳性 标 准 株 均 为 安徽 省 细 菌 耐 药 监 控 中 心 保存 菌株 。 １ ． １ ． ２ 仪器 Ｐ Ｃ Ｒ仪 （ 德国 Ｂ ｉ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ａ公 司 ） ； 细 菌
有 限公 司 ） ； 头 孢 哌 酮／ 舒 巴坦 （ 辉 瑞 制药 有 限公 司） ； 头 孢 噻肟 、 头孢 他 啶 （ 华 北 制 药 河 北 华 民 药业 有 限公 司 ） ； 头孢 曲松 （ 上 海罗 氏制药 有 限公 司 ） ； 庆 大霉素 、 阿米 卡 星 （ 上 海 中西 制 药 有 限公 司 ） ； 环 丙 沙星（ 广州南 新 制 药 有 限公 司 ） ； 左氧氟沙星 （ 扬 子 江药业 集 团有 限公 司 ） ； 磷霉素钠 （ 哈 药集 团三 精 制
的扩散 ， 需要加强监测 。
关键 词
志贺菌 ； 磷霉 素 ； 质粒 ； 基因
Ｒ ３ ７ ８ ． ２＋５
中图分 类号
文 献标 志码 Ａ 文章编 号 １ ０ ０ ０—１ ４ ９ ２ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ４— ０ ４ ４ １ — ０ ５
比浊仪 （ 英国Ｏ ｘ ｉ ｏ ｄ 公 司） ； 多点接种仪 （ 英国Ａ Ｑ Ｓ — Ｍａ ｎ ｕ ｆ ａ ｃ ｔ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ公 司 ） ； 小型离 心机 （ 美国 Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍ ｏ公 司） ； 凝胶成像系统（ 上海天能科技有 限公司） ； 电泳 仪 和 电泳槽 （ 北京 市六 一仪 器 厂 ） 。 １ ． １ ． ３ 实验 药物 哌 拉 西 他 唑 巴坦 （ 惠 氏制 药
安 徽 医科 大 学 学报
Ａ ｃ ｔ ａ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｓ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ ｉ ｓ Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ ２ ０ １ ５ Ａ ｐ ｒ ； ５ ０ （ ４ ）
・４ ４ １・
临床分离 志贺 菌中质粒介导磷 霉素耐药基 因的检测
菌相 比， 结合 子对 磷霉 素 的 ＭＩ Ｃ值 明显 提高 ， Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ － Ｐ Ｃ Ｒ法 证实部 分 ｆ ｏ ｓ Ａ ３阳性 志 贺 菌具有 同源性 。结论 首次 在 临 床分离 的 志 贺 菌 中 检 测 到 质 粒 介 导 的 磷 霉 素 耐 药 基 因 ｆ ０ ｓ Ａ ３ ， 虽然 目前检 出率不高 ， 但其 传播可 造成磷 霉素 耐药性
磷 霉 素是 一种 广 谱 杀 菌 药 ， 通 过 抑 制 细 菌 细 胞 壁 合成 的第 一 步而 起到 杀 菌作用 。 国外磷 霉 素 主要 用 于 治疗非 复 杂性 下 尿 路 感 染 ， 而 在 我 国磷 霉 素 还
被用于治疗肠道感染Ｌ １ Ｊ 。目 前志贺菌对磷霉素保 持着极高的敏感率 ， 但 已有少量对磷霉素耐药 的志 贺菌在多地 区出现 Ｉ ４ Ｊ ， 阐明这些 细菌对磷霉素的 耐 药 机制并 及 时采 取有 效措 施对 保 护磷 霉素 的敏 感 性和预防耐药菌传播都具有重要意义。 目 前 国内外 均 未见 关 于志 贺 菌对 磷 霉 素 耐 药 机 制 的 研 究 报 道 ， 志贺菌中由染色体介 导的磷霉素耐 药机制 尚不明 确， 但 由于质粒 介 导 的 耐药 基 因可 在 不 同细 菌 间 相
析 。结果 ２ ６ ３株志贺菌 中磷 霉素 耐药 ２ ５株 、 中介 ７株 ， 耐 药率 为 ９ ． ５ ％。Ｐ Ｃ Ｒ结果 显示 ｌ ８株磷 霉素耐药志贺菌 ｒ ｏ ｓ Ａ ３ 阳性 （ 基 因登 录号 为 Ｋ Ｊ ７ １ ６ ８ ５ ２ ） ， 阳性率 为 ６ ． ８ ％， 未检出 ｆ ０ －
程 一 跃
，
梅 清 ， 刘 艳 艳 ， 程 君 ， 匮 回 ， 李 家 斌 ’
互 转移 ］ ， 因此 ， 同 为 肠 杆 菌 科 细 菌 的 志 贺 菌 可 能 从 其他 类 型肠 杆 菌 科 细 菌 中 （ 如大肠埃希菌 、 肺 炎 克 雷伯 菌等 ） 获 得 质粒 介 导 的磷 霉 素 耐 药基 因 。该 研 究对 临床 分 离 的 ２ ６ ３株 志贺 菌 进行 耐 药 性 分析 ， 在 磷霉 素耐 药 的志 贺菌 中检测 质粒 介导 的磷 霉素 耐 药基因， 明确耐 药基 因 的种类 以及 分析其 传播 方式 。
１ 材 料与 方法
１ ． １ 材料
摘 要 目的
在磷霉素 耐药 志贺菌 中检测 质粒介 导 的磷霉
素耐药基 因 ｆ ｏ ｓ Ａ、 ｆ ｏ ｓ Ａ ３和 ｆ ｏ ｓ Ｃ ２ ， 并 分 析其传 播 方式 。方法 琼脂倍 比稀释法测定 志贺 菌对抗 菌药物 的最低 抑菌 浓度 （ Ｍ Ｉ Ｃ） 。在磷霉 素耐药菌 株 中利 用 聚合 酶链 式反 应 （ Ｐ Ｃ Ｒ） 检测其质粒 介导的磷霉素耐药基 因 ｆ ｏ ｓ Ａ、 ｆ ｏ ｓ Ａ ３和 ｆ ｏ ｓ Ｃ ２ 。对 阳性扩增产 物进行测序分析并对 阳性 菌株 进行接合试验 ， 采 用琼脂倍 比稀释法测定接合 子对 １ ２种 抗菌 药物 的 ＭＩ Ｃ值 ， Ｐ Ｃ Ｒ法检测接合子质粒介 导磷霉素耐药基 因， 肠杆菌科基 因
ｓ Ａ和 ｆ ｏ ｓ Ｃ ２ 。１ ８株 ｆ ０ ｓ Ａ ３阳性株 中， １ ３株结 合成 功 ， 与 受体
１ ． １ ． １ 菌株 来 源 收 集 安 徽 省 细菌 耐 药 监 测 中心 ２ ０ １ １年 ９月 ～ ２ ０ １ ２年 １ ０月 临床 标本 中分 离 的非 重 复志贺 菌 ２ ６ ３株 。所有 菌株 由全 自动微生 物分 析 仪 （ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ Ｓ ｃ ａ ｎ Ｗａ ｌ ｋ Ａ Ｗａ ｙ － ４ ０ ） 和血清 玻 片凝 集 试验 鉴 定 。质 控菌 株大 肠 埃 希 菌 Ａ Ｔ Ｃ Ｃ ２ ５ ９ ２ ２ ， 转 移 接 合试 验 受体 菌大肠 埃 希菌 Ｊ ５ ３ Ａ Ｚ “以 及 ｆ ｏ ｓ Ａ、 ｆ ｏ ｓ Ａ ３和 ｆ ｏ ｓ Ｃ ２基 因 阳性 标 准 株 均 为 安徽 省 细 菌 耐 药 监 控 中 心 保存 菌株 。 １ ． １ ． ２ 仪器 Ｐ Ｃ Ｒ仪 （ 德国 Ｂ ｉ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ａ公 司 ） ； 细 菌
有 限公 司 ） ； 头 孢 哌 酮／ 舒 巴坦 （ 辉 瑞 制药 有 限公 司） ； 头 孢 噻肟 、 头孢 他 啶 （ 华 北 制 药 河 北 华 民 药业 有 限公 司 ） ； 头孢 曲松 （ 上 海罗 氏制药 有 限公 司 ） ； 庆 大霉素 、 阿米 卡 星 （ 上 海 中西 制 药 有 限公 司 ） ； 环 丙 沙星（ 广州南 新 制 药 有 限公 司 ） ； 左氧氟沙星 （ 扬 子 江药业 集 团有 限公 司 ） ； 磷霉素钠 （ 哈 药集 团三 精 制
的扩散 ， 需要加强监测 。
关键 词
志贺菌 ； 磷霉 素 ； 质粒 ； 基因
Ｒ ３ ７ ８ ． ２＋５
中图分 类号
文 献标 志码 Ａ 文章编 号 １ ０ ０ ０—１ ４ ９ ２ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ４— ０ ４ ４ １ — ０ ５
比浊仪 （ 英国Ｏ ｘ ｉ ｏ ｄ 公 司） ； 多点接种仪 （ 英国Ａ Ｑ Ｓ — Ｍａ ｎ ｕ ｆ ａ ｃ ｔ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ公 司 ） ； 小型离 心机 （ 美国 Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍ ｏ公 司） ； 凝胶成像系统（ 上海天能科技有 限公司） ； 电泳 仪 和 电泳槽 （ 北京 市六 一仪 器 厂 ） 。 １ ． １ ． ３ 实验 药物 哌 拉 西 他 唑 巴坦 （ 惠 氏制 药
安 徽 医科 大 学 学报
Ａ ｃ ｔ ａ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｓ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ ｉ ｓ Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ ２ ０ １ ５ Ａ ｐ ｒ ； ５ ０ （ ４ ）
・４ ４ １・
临床分离 志贺 菌中质粒介导磷 霉素耐药基 因的检测
菌相 比， 结合 子对 磷霉 素 的 ＭＩ Ｃ值 明显 提高 ， Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ － Ｐ Ｃ Ｒ法 证实部 分 ｆ ｏ ｓ Ａ ３阳性 志 贺 菌具有 同源性 。结论 首次 在 临 床分离 的 志 贺 菌 中 检 测 到 质 粒 介 导 的 磷 霉 素 耐 药 基 因 ｆ ０ ｓ Ａ ３ ， 虽然 目前检 出率不高 ， 但其 传播可 造成磷 霉素 耐药性
磷 霉 素是 一种 广 谱 杀 菌 药 ， 通 过 抑 制 细 菌 细 胞 壁 合成 的第 一 步而 起到 杀 菌作用 。 国外磷 霉 素 主要 用 于 治疗非 复 杂性 下 尿 路 感 染 ， 而 在 我 国磷 霉 素 还
被用于治疗肠道感染Ｌ １ Ｊ 。目 前志贺菌对磷霉素保 持着极高的敏感率 ， 但 已有少量对磷霉素耐药 的志 贺菌在多地 区出现 Ｉ ４ Ｊ ， 阐明这些 细菌对磷霉素的 耐 药 机制并 及 时采 取有 效措 施对 保 护磷 霉素 的敏 感 性和预防耐药菌传播都具有重要意义。 目 前 国内外 均 未见 关 于志 贺 菌对 磷 霉 素 耐 药 机 制 的 研 究 报 道 ， 志贺菌中由染色体介 导的磷霉素耐 药机制 尚不明 确， 但 由于质粒 介 导 的 耐药 基 因可 在 不 同细 菌 间 相
