流式细胞仪1-BD FACSCanto临床软件进行仪器日常质控

BD FACSCalibur流式细胞仪简明操作规程一．开机程序1.把稳压器电源开关设到ON。

2.打开储液箱，把黑色开关开到TANK CHANGE位置，鞘液桶加满鞘液，倒空废液桶，把黑色开关开到Pressurize位置。

3.将FACSCalibur右侧下面的绿色按钮按开。

4.打开电脑。

二．仪器条件设定1.点击“苹果”菜单项下的CELLQuest，建立一个新视窗。

2.点击“Acquire”菜单下的“Parameter description”建立自己的文件夹，保留在屏幕上。

3.点击“Acquire”菜单下的“Connect to Cytometer”联机，这时出现“Acquisiton Control”对话框，保留在屏幕上。

4.点击“Cytometer”菜单下的“Detectors/Amps”、“Threshold”、“Compensation”三个对话框，保留在屏幕上。

5.点击“Cytometer”菜单下的“Instrument settings”，出现对话框，点击对话框中“open”，选择自己的实验条件后，点击“set”，然后点击“Done”6.加上对照样本，样品支撑架置于中位，用LO 流速RUN，点击AcqusiotionControl 对话框的Acquire，观察样品的散射光和荧光参数是否合适，调节“Detectors/Amps”对话框的相关参数，直到各个参数都合适为止。

7.点击”Acqusiotion Control”对话框的“Setup”，开始测试样品。

当所有样品分析完毕，即换上双蒸水，并将流式细胞仪置于“STANDBY”状态，以保护激光管。

三．关机程序1.测试完毕样品后，从File中选择Quit, 退出软件，点击“Special”菜单项下的“Shutdown”关机。

2.试管中加入3 ml Clean液，将样品支撑架置于旁位清洗外管，以外管吸入1ml Clean液，将样品支撑架置于中位，用HI流速RUN5分钟清洗内管，。

BDFACSCa1ibUr流式细胞仪操作规范
1、目的
规范操作，正确使用仪器，保证检验结果准确无误。

2、适用范围
CD4+T淋巴细胞计数
3、职责
1.1科室负责人：负责监督仪器的使用和维护。

1.2操作人员：按规范操作，搞好日常维护，做好使用记录。

3.3保管人员：负责仪器定期维护，保养。

4、操作程序
4.1检查鞘液桶，确认鞘液充满状态，盖紧黑盖，管路畅通，无扭曲
4.2检查废液桶，确认废液桶充满40OnII漂白剂，管路畅通，无扭曲
4.3打开流式细胞仪
4.4打开电脑
4.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡
4.6做prime4.7等待机器预热5-10分钟后可开始实验。

F A C S C精编i b u r流式细胞仪操作维护规程 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UTFACSCalibur流式细胞仪操作维护规程1.目的规范流式细胞仪FACSCalibur操作维护规程，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行和设备安全。

2.适用范围适用流式细胞仪FACSCalibur的使用操作。

3.职责操作人员按照本规程操作仪器，对仪器进行正常维护，并作使用记录。

保管人负责监督仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护和保养。

仪器管理人以及科室负责人负责仪器综合管理。

4.操作程序安全操作注意事项和特别提示：4.1.1该仪器必须有专人保管，使用前需通读仪器说明书。

4.1.2严格遵守操作规程，如仪器出现故障，应马上停止使用，并立即向保管人、仪器管理人以及科室负责人报告，严格按照单位有关制度实施，不得擅自“修理”，查明原因，处理后仪器保管人应及时做好故障情况及维修记录。

设备每日开机程序：设备质控程序：4.3.1.1取试剂盒中的Unlabeled试剂，充分混匀，加一滴到装有1ml鞘液的试管中，混匀，标记为unlabeled。

4.3.1.2取FITC、PE、PerCP、Unlabeled试剂，充分混匀，各加一滴到第二支装有3ml鞘液的试管中，混匀，标记为mixed。

上机操作：4.3.2.1按电脑桌面的FacsComp进入质控程序。

4.3.2.2在出现的“Signin”窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息；单击“Accept”。

4.3.2.3在试验选项中，选择Lyse/No-Wash(LNW)：免洗程序。

4.3.2.4在CalibriteBeadsLotIDs中,根据每种颜色的beads所对应的LotIds，输入编号，此编号在Calibritebeads试剂盒内，打开新买的试剂盒，里面有一张橙色胶纸，取出贴在试剂盒的背面，标题是Calibritebeads3BatchNO,选择FACSFlowSheath下的编号(右侧的编号)。

目 录第一章流式细胞仪简介 (1)1.1 流式细胞术发展史 (1)1.2 流式细胞仪构造和工作原理 (2)1.2.1 概述 (2)1.2.2 流式细胞仪构造 (2)1.3 流式细胞仪的主要技术指标 (10)第二章 FACSCalibur 的日常操作 (12)2.1 FACSCalibur系统 (12)2.2 FACSCalibur开机程序 (15)2.3 FACSCalibur关机程序 (16)2.4 FACSCalibur的维护与保养 (17)2.4.1 FACSCalibur的每月维护 (17)2.4.2 FACSCalibur的定期维护 (18)2.5 常见故障排除 (20)第三章 FACSComp软件 (22)3.1 FACSComp简介 (22)3.1.1 FACSComp运行条件 (22)3.1.2 FACSComp的文件类型 (23)3.2 FACSComp的功能 (24)3.2.1 光电倍增管（PMT）电压的调节 (24)3.2.2 荧光补偿的调节 (24)3.2.3 灵敏度的测试 (24)3.2.4 时间延迟的校准（对于双激光，配有FL4 PMT） (25)3.2.5 HLA-B27的校准 (25)3.2.6 LeucoCOUNT (25)3.2.7 优化 (25)3.3 FACSComp的运行 (25)3.3.1 CaliBRITE Beads的准备 (25)3.3.2 软件环境的设置 (26)3.3.3 Beads的检测 (26)3.3.4 Optimization (28)第四章 FACStation 数据管理系统 (30)4.1 FACStation 数据管理系统组成 (30)4.2 FACStation文件组成 (31)4.2.1 如何建立文件夹 (31)4.2.2 FACStation文件的类型 (31)4.2.3 如何管理文件 (32)4.3 实用的Macintosh OS X功能 (34)4.3.1 菜单栏 (35)4.3.2 Dock (37)4.3.3 查找窗口 (37)4.3.4 键盘快捷键 (38)4.4 如何设置模版 (39)4.5 实验练习：如何将ModFit LT的别名添加到Dock菜单下 (40)4.6 可选性存储装置 (40)4.6.1 可选性存储装置的基本工作原则 (40)4.6.2 光驱的维护 (41)4.6.3 光盘的维护 (41)第五章 CellQuest Pro软件 (42)5.1 概述 (42)5.1.1 获取(Acquisition） (42)5.1.2 分析(Analysis) (42)5.1.3 从获取到分析(Acquisition Analysis) (42)5.2 工具栏 (42)5.3 CellQuest Pro 的文件 (43)5.3.1 FCS数据文件 (43)5.3.2 实验文件 (44)5.3.3 仪器条件文件 (44)5.3.4 统计文件 (44)5.4 CellQuest Pro 的仪器控制 (44)5.4.1 探测器 (45)5.4.2 放大器 (45)5.4.3 阈值 (46)5.4.4 补偿 (46)5.6.1 质控－运行FACSComp (48)5.6.2 优化 (50)5.6.3 调出储存的由FACSComp 生成的仪器条件 (52)5.6.4 调节FSC/SSC探测器（电压）及FSC阈值 (53)5.6.5 设置淋巴细胞Region (53)5.6.6 调节FL1、FL2、FL3的探测器（电压） (53)5.6.7 调节荧光补偿 (55)5.7 实验练习：3色/4色预获取 (55)5.7.1 设置Acquisition & Storage 窗口 (56)5.7.2 设置Parameter Description (57)5.7.3 编辑Reagent Panel (58)5.8 实验练习：数据获取 (59)5.9 储存、恢复仪器设置 (60)5.9.1 储存仪器设置 (60)5.9.2 恢复仪器设置 (60)5.10 储存实验模板文件 (60)5.11 练习：数据分析 (60)5.11.1 画Region (61)5.11.2 限定象限marker (61)5.11.3 分析四色 (63)5.11.4 批分析其余数据 (63)5.11.5 分析数据 (64)5.11.6 将分析文件以模板形式保存 (64)5.11.7 创建文具簿（stationery pad） (64)5.11.8 将统计改为电子表格 (65)5.12 Regions 和Gating（画门） (65)5.12.1 设置Region (65)5.12.2 改变Region (65)5.12.3 用Region 统计来分析数据 (66)5.12.4 门 (66)5.12.5 多色门 (66)5.12.6 组合门 (67)5.12.7 在直方图上使用组合门分析 (68)收集系统6.1.2 分选模式 (70)6.2 分选窗口 (71)6.2.1 Sort Setup (71)6.2.2 Sort Counters (72)6.3 准备收集管 (72)6.4 分选 (73)6.4.1 清洗分选管线 (73)6.4.2 准备 (73)6.4.3 收集分选前数据 (74)6.4.4 分选条件设置 (74)6.4.5 分选目的细胞 (74)6.4.6 清洗分选管路 (75)6.4.7 浓缩样本 (76)6.5 检验分选纯度 (76)6.6 分选问题讨论 (77)6.7 FACSCalibur无菌分选 (79)6.8 分选细胞浓缩系统 (80)6.8.1 系统简介 (80)6.8.2 细胞培养基嵌入物和滤膜的制备 (81)6.8.3 确定气压参数 (82)6.8.4 如何用细胞浓缩系统进行分选 (82)6.8.5 分选浓缩细胞 (84)6.8.6 从分选管路中回收细胞 (84)6.8.7 回收细胞做进一步分析 (85)6.8.8 清洗分选管路 (85)6.8.9 清洗浓缩器 (85)第七章 DNA分析 (87)7.1 概述 (87)7.2 细胞周期 (87)7.3 DNA检测的常用术语 (87)7.3.1 Coefficient of Variation（CV）：变异系数 (87)7.4.1 分辨率（CV） (88)7.4.2 线性度 (88)7.4.3 碎片 (88)7.4.4 细胞双粘体 (89)7.5 DNA质量控制（DNA QC Particles） (89)7.5.1 样本制备 (89)7.5.2 上机检测 (89)7.5.3 常见错误排除 (90)7.6 用CellQuest Pro软件获取DNA 数据 (91)7.6.1 样本制备 (91)7.6.2 用CellQuest Pro软件上机获取数据 (92)7.6.3 质量控制 (95)7.7 用ModFit 软件分析DNA数据 (95)7.7.1 运用ModFit 进行自动分析 (96)7.7.2 运用ModFit 进行手动分析 (96)7.7.3 运用ModFIT进行同步化分析 (98)7.7.4 运用ModFIT 进行增殖分析 (98)第八章 HLA-B27分析 (99)8.1 检测HLA-B27的意义 (99)8.2 HLA-B27的检测方法 (99)8.2.1 传统方法 (99)8.2.2 流式细胞术 (100)8.2.3 试剂盒介绍 (100)8.2.4 实验原理 (100)8.2.5 样本的收集和准备 (101)8.2.6 流式检测 (102)8.3 质量控制 (110)附录1：组织相容性抗原和疾病的关系 (111)附录2：强直性脊柱炎——一个常见但易被忽略的疾病 (112)第九章 MultiSET软件 (113)9.1 简介 (113)软件内容9.4.1 MultiSET界面功能分区 (116)9.4.2 MultiSET命令菜单 (116)9.4.3 MultiSET实验报告 (117)9.4.4 MultiSET运行程序 (117)9.5 利用Multiset软件的Tools和Preferences (126)9.6 Control Panels (绝对计数质控) (128)9.7 MultiSET画门及Attractor方案 (128)9.8 注意事项及常见问题处理 (129)第十章练习题 (135)10.1 补偿 (135)10.2 流式简介 (135)10.3 CellQuest 获取与分析 (136)10.4 分选 (139)第一章流式细胞仪简介1.1 流式细胞术发展史纵观历史，几乎没有哪一门科学技术象流式细胞术这样凝结了众多不同学术背景、不同科研领域的科学家的心血。

BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目的：规范BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。

适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。

责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。

保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。

科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。

内容：1. 每日开机程序1.1 在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2. 检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。

1.4打开电脑。

1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

1.6做Prime。

1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。

2. 每日关机程序2.1 用3mlFACSClean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。

2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。

2.3 将样品管换成蒸馏水重复1-2步。

2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

2.5 选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。

2.6 退出所有应用软件，关闭电脑。

2.7 将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。

3. 每月维护程序3.1 将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。

3.2 旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINE FILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER端口），以防伤害。

3.3 将盛有3ml FACSClean洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30分钟。

3.4 将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以 HI RUN 60分钟。

BD FACSCalibur流式细胞仪FACS101 Handbook本课程介绍「表面抗原流式分析」有关之基础工作原理。

如希望进一步了解流式细胞技术应用,请至本公司网站订阅FACSinformation电子报www.bdtwn。

com。

tw/bdb/index.html。

如需要本课程手册，欢迎至本公司网站下载。

tw/bdb/10—5-3—1。

html . 如需要免疫荧光染色方法,请至本公司网站下载www。

bdtwn。

com.tw/bdb/10-5—4—1.html .一、BD FACSCalibur基本结构1.1仪器本体：1。

电源开关：在BD FACSCalibur仪器右侧下方，先启动仪器本体，再打开计算机。

2。

光学系统：BD FACSCalibur 基本配有一支波长488 nm 的氩离子雷射以BD FACSCalibur 基本型为例➢FSC Diode 只收488 nm波长散射光➢SSC PMT 只收488 nm波长散射光➢FL1 PMT 荧光光谱峰值落在绿色范围(波长515-545 nm）➢FL2 PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围(波长564—606 nm）➢FL3 PMT 荧光光谱峰值落在深红色范围（波长 >650 nm）3。

仪器面板：仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键.流速控制：LO：样品流速:12 μl /minMED：样品流速:35 μl /minHI: 样品流速：60 μl /min功能控制:•RUN：此时上样管加压，使细胞悬液从进样针进入流动室.(正常显示绿色；黄色时表示仪器不正常,请检查是否失压。

）•STANDBY：无样品或暖机时之正常位置，此时鞘液停止流动，雷射功率自动降低。

•PRIME:去除流动室中的气泡,流动室施以反向压力，将液流从流动室冲入样品管，持续一定时间后，以鞘液回注满流动室。

PRIME 结束，仪器恢复STANDBY状态.4。

储液箱抽屉：在主机左下方之储液箱抽屉。

BD FACSCalibur流式细胞仪简易操作步骤一、开机1）先打开净化交流稳压电源，其次打开110V稳压输出电源，再次打开流式细胞仪，最后打开计算机。

2）向前拉开储液箱抽屉，检查鞘液筒、废液筒水量，如需充填鞘液，先将减压阀（红色箭头所示）方向调在VENT位置（箭头方向），再加入超纯水，保持水位在鞘液桶的3/4左右，加好后拧紧桶盖并将减压阀方向调在RUN位置。

二、开启CellQuest 软件、编辑实验文件1）在屏幕下方点击CELLQuest（第四个图标）启动软件。

桌面会出现一’Untitled’ 实验文件，可点击实验文件的左上角的放大钮（绿色），将实验文件窗口放大。

电子版本:\\NOVOPUBLIC\NovoBio\流式细胞仪\BD FACSCalibur流式细胞仪简易操作步骤_corr_ZYH_20140520- 1 -2）从工具板中点击散点图图示。

在实验文件的空白区点击，拖曳对角线至适当大小，然后放开鼠标。

出现散点图对话方框（当所要编辑的图窗口被选中时，会在其四角出现四个小黑块）。

3）在出现的散点图对话方框中点击Plot Source，选择Acquisition and Analysis (收取、分析) ，确认X和Y轴参数预设为FSC-H 1024、SSC-H 1024。

4）从屏幕上方Plots菜单中选择Dot Plot功能，可复制一个同样大小的散点图，在出现的对话方框内选择X轴：FL1-H 1024；如果是双标，Y轴选择：FL2-H 1024(根据实验检测样品确定所选通道，本步骤选FL1/FL2来说明)，如果是单标，Y轴选择：SSC-H。

点击OK，FL1/FL2的散点图出现。

完成后可将重制图移至原图右方。

说明：散点图（Dotplot），又称二维散点图是流式分析最常用图谱，它可以显示两个独立参数的相互关系。

在图中，横坐标X轴和纵坐标Y轴参数分别设为FSC-H 1024、SSC-H 1024；双荧光标记时，第二图X和Y轴参数分别设为FL1-H 1024、FL2-H 1024，X轴为为荧光1强度的相对值，单位是道数， Y轴则通常表示荧光2或光散射强度的相对值。

流式细胞仪使用程序1.目的规范流式细胞仪的相关使用操作、以及维护操作。

2.适用范围适用于本实验室使用流式细胞仪。

3.职责操作人员应熟练掌握并自觉遵守本标准操作程序。

如需获得更多信息，请参阅该仪器用户手册。

4.支持性文件流式细胞仪使用说明书。

5.操作规程5.1仪器开/关机程序5.1.1开机程序5.1.1.1 检查仪器鞘液桶和废液桶。

5.1.1.2 打开流式细胞仪。

5.1.1.3 气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

5.1.1.4 打开电脑。

5.1.1.5 等待机器预热5—10分钟后可开始实验。

5.1.2关机程序5.1.2.1 用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。

5.1.2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。

5.1.2.3 将样品换成蒸馏水重复1-2步。

5.1.2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

5.1.2.5 选择Standby模式10分钟。

5.1.2.6 关闭电脑，再关掉仪器。

5.2仪器校验和分析参数设置程序（FACSComp操作程序）5.2.1CaliBRITE Beads 的准备5.2.1.1 在装有1ml鞘液的FALCON管加一滴充分混匀CaliBRITE Beads，并标上unlabeled；若配有双激光做四色，则须在unlabeled管中再加一滴APC-beads；5.2.1.2 在另一装有3ml鞘液的FALCON管加入unlabeled-、FITC-、PE-、PerCP-、和APC-beads（若做四色）各一滴，混匀，在管壁上标上mixed（PerCP不很稳定，最好在上机前加入）；5.2.1.3 避光放置，准备上机。

5.2.2软件环境的设置5.2.2.1 从苹果菜单进入，选择FACSComp软件；5.2.2.2 在Sign In视窗中填入下列信息：操作者、机构、实验室主任（操作者是必须填入的，计算机将保存这些信息），点击Accept；5.2.2.3 进入Set Up视窗，在Assay Selection中，选择你需要的Assay：Lyse/Wash、Lyse/No Wash或HLA-B27 Calib；在CaliBRITE Beads Lot Ids中，根据每一种beads所对应的编码输入Lot ID；在Automatic Saving Options中，你可以选择自动保存或不保存Summary Report，你可以通过单击Location来更改文件名以及保存的位置；最后在Set Up视窗的右下角点击Run。

BD FACSVerse流式细胞仪实验流程开机→质控(PQC)→实验→数据处理→清洗→关机使用者在操作BD FACSVerse流式细胞仪实验时，务必按照以上流程进行，方可保证实验数据的准确性和仪器状态良好，除数据处理外不可随意缺失任一步骤。

实验者所需准备的用品：1、流式上样管若干；2、1000μL加样枪一支、枪头若干；3、40μm细胞筛网。

仪器平台提供以下用品：1、鞘液；2、Clean洗液；3、去离子水；5、CS&T微球。

开机步骤1.开机前先将上样管取下2.清空废液桶Waste，鞘液筒Sheath内装FACSFlow鞘液至三分之二体积3.打开流式细胞仪右后侧的白色电源开关，仪器进行自检并预热，约需20min，完成后仪器状态灯显示绿色4.打开电脑，双击桌面FACSuite软件图标，输入用户名和密码，密码为bdadministrator，点击OK后进入5.软件主窗口左下角的联机状态显示为Connected（绿色），显示电脑已与仪器联机仪器质控Performance QC流程，每天一次1.配制微球：取一只流式管加入500ul FACSFlow鞘液，加2滴CS&T微球。

注意：滴加微球时不要滴在壁上，微球使用前要摇匀2.点击软件界面左边的快捷启动键“Setup & QC”图标；3.在Tube里选择Performance QC4.选择正确的CS&T Bead Lot ID；5.点击Start按钮，进样管处放置准备好的CS&T微球，点击continue；6.取下CS&T微球，放置装DI水的流式管；点击Yes，查看质控报告。

清洗步骤1.所有实验结束后，选择Cytometry > Daily Clean命令，进样管加入2mL FACSClean洗液，点击Continue；2.冲洗后，按照仪器提示，另一进样管加入3mL去离子水，点击Continue，等待仪器清洗完毕；备注：（一）清洗时所用清洗液和去离子水务必置于两支不同的干净上样管中，且清洗液的体积不得多于去离子水的体积。

一、开机程序：1.检查鞘液桶和废液桶。

确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶体积的3/4位置，可以连续工作3个小时左右）、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足够空间容纳本批标本排弃的废液。

如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中气压。

2.依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关，打印机。

3.气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY状态，做Prime，以排除管路中气泡。

二、运行FACSComp软件、检查仪器状况1.制备三色标准微球样本。

一般情况向1ml鞘液（或过滤PBS）中加入1滴质控小微球，也可以根据实际情况调节浓度。

2.机器预热5 min，打开FACSComp软件，选择保持路径。

选择所需校正内容，如果使用的微球是新一批产品要输入微球的批号。

3.在软件界面左侧Assay Selection选项中选择质控类型，即实验过程中是否需要清洗样品。

4.上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。

功能键设置在“RUN”。

5.仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。

6.FACSComp软件运行完毕，显示结果通过测试。

7.做Set up。

8.打印校正结果，退出FACSComp程序。

备注：在质控过程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度，但是在调节灵敏度（Sens）时，一定要用“Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。

在使用仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby”状态。

三、样品分析软件：CellQuest Pro软件，选择“联机”。

1.（2）对实验样本进行命名；（3）对实验通道进行预设（FSC,SSC,FL1-FL4）。

备注：如果界面被关闭，重新调出步骤：2.调出质控模板。

3.画图选择画图工具（一般选择散点图），Inspect界面会自动弹出，对几选中图形），将更改横纵坐备注：第一个散点图横坐标为FSC，纵坐标为SSC。

（1一般获取10000个细胞。

（2（3）将所有补偿调为0（4）将非52（5）FSC和SSC（64.上阴性对照将阴性对照管混匀，上机，功能键设置在“RUN”,散点图出现细胞信号，第一个图：让细胞信号出现在自己看上去舒服的区域；其他三个散点图，要将细胞信号调整到阴性区域，即左下角区域。