015-细胞核蛋白提取

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邮箱：bestbio@ 电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如 果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
产品说明书
植物核蛋白提取试剂盒
（蛋白质组学实验适用）
货号：BB-319906
V1.7.0
试剂盒储存条件： 2-8℃保存。
开盖后组份按要求条件保存。
试剂盒组成：
产品组成
BB-319906-1
BB-319906-2
组份编号
规格
50 assays
100 assays
试剂 A：植物核蛋白提取液 A
100ml

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本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在 1 小时内完成，而且绝少 交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法较低。酶法提取制备的蛋白，回收率稍有提高，蛋白纯 度高，保持天然活性，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的 提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒（相关产品 BB-319910）。 请根据实际需要选择试剂盒。
产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3104 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3126 BB-3105 BB-3702 BB-3181 BB-3183 BB-3187

注：
① 建议用 BCA 法进行蛋白定量。
② 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
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1. 提取液制备：每 500ul 预冷的蛋白提取液 A 中加入 2ul 蛋白酶抑制剂；每 200ul 蛋白提取液 B 和 C 中分别加入 1ul 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的 200mg 植物组织样本剪碎，采用以下一种方 法处理： i. 加入 500ul 提取液 A 后用匀浆机/匀浆器匀浆。 ii. 置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入 500μl 冷的提取液 A。 iii. 加入 500ul 提取液 A 直接置冰上研磨。
注意：
1、 蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
2、 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
储存条件： 蛋白提取液 2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期： 一年。
注意事项： ● 本试剂盒仅供科学研究使用。 ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管 底，避免开盖时试剂损失。 ● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 ● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品特点： 1、 使用方便。 2、 将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。 3、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

核蛋白内参我们知道，内参蛋白是指由管家基因（house keeping gene）编码表达的一类蛋白，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在实验中检测蛋白的表达水平变化时常用它们来做参照物。

这些内参蛋白常应用于 Western Blot 中，Western Blot 不仅能证明样品中是否含有某种蛋白，还能比较不同条件、不同组织和细胞中目的蛋白的相对含量，从而衡量蛋白的表达水平。

内参蛋白作为一种参照物，在其中的作用为确定样本使用量的一致性，以及校正实验过程中可能出现的操作误差，从而进一步保证实验结果的准确性。

那么对于不同的蛋白，内参蛋白该如何选择呢？前两节介绍了几种常见内参蛋白的选择和应用。

本节将系统介绍不同内参蛋白的选择以及云克隆公司现有的内参蛋白抗体。

对于内参蛋白的选择首先是考虑分子量。

一般情况下，内参蛋白和检测的目的蛋白最好相差在 5kDa 以上。

如分子量为45kDa 的检测蛋白，我们可以选择 Tubulin Beta（54kDa），Lamin B1（66kDa）等，而不选择 ACTa2（42kDa）或者 beta-actin（45kDa）。

其次对于不同的组织，应选择不同的内参。

如肌动蛋白是一种细胞骨架蛋白，有六种不同的亚型，包括： alpha-skeletal muscle actin、alpha-cardiac muscle actin、alpha-smooth muscle actin、gamma-smooth muscle actin、beta-actin (β-non-muscle) 和 gamma-non-muscle actin。

其中常用作Western Blot 内参的 beta-actin 在肌肉和脂肪组织中分布较少，那么若样本是心肌或脂肪组织来源的，就可以考虑分别用 alpha-cardiac muscle actin (ACTC1) 和 GAPDH 作为内参蛋白。

最后，提取蛋白的部位不同，选择的内参蛋白也不同。

一、实验目的1. 了解核小体的组成和结构；2. 掌握核小体提取和检测的方法；3. 学习观察和记录实验结果。

二、实验原理核小体是染色质的基本结构单位，由DNA和组蛋白八聚体组成。

在细胞核内，DNA 与组蛋白结合形成核小体，进一步组装成染色质。

本实验通过提取细胞核中的核小体，并对其进行电泳分析，观察核小体的特征。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：细胞核提取物、DNA标记、电泳缓冲液、考马斯亮蓝染液等；2. 实验仪器：电泳仪、凝胶成像系统、离心机、移液器等。

四、实验方法1. 核小体提取（1）取适量细胞核提取物，加入等体积的1%SDS溶液，混匀；（2）加入等体积的5M NaCl溶液，混匀；（3）加入1/10体积的10%SDS溶液，混匀；（4）室温下放置10分钟，离心去沉淀；（5）将上清液加入等体积的1/10体积的1M Tris-HCl（pH 8.0）溶液，混匀；（6）加入等体积的5M NaCl溶液，混匀；（7）加入2/3体积的2M醋酸铵溶液，混匀；（8）加入1/10体积的10%SDS溶液，混匀；（9）室温下放置10分钟，离心去沉淀；（10）将上清液加入等体积的1/10体积的1M Tris-HCl（pH 8.0）溶液，混匀；（11）加入等体积的2M醋酸铵溶液，混匀；（12）加入2/3体积的冷丙酮，混匀；（13）室温下放置30分钟，离心去沉淀；（14）将沉淀用70%乙醇洗涤，离心去沉淀；（15）将沉淀溶于适量的1M Tris-HCl（pH 8.0）溶液，即为核小体提取物。

2. 核小体电泳分析（1）将核小体提取物加入等体积的1%琼脂糖凝胶电泳缓冲液，混匀；（2）将DNA标记加入等体积的1%琼脂糖凝胶电泳缓冲液，混匀；（3）将上述两种溶液分别加入琼脂糖凝胶孔中，电泳；（4）将电泳后的凝胶用考马斯亮蓝染液染色，观察核小体的特征。

五、实验结果与分析1. 核小体提取结果通过实验步骤1，成功提取了细胞核中的核小体。

观察提取的核小体，其颜色呈淡蓝色，说明核小体提取物中含有DNA。