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ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型构建梁璐;洪瑞云;周敏;张毅;邹海林;钟一鸣;王烈峰【摘要】目的:采用载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)雄鼠,给予高脂饲料喂养,构建动脉粥样硬化模型,观察血脂变化及主动脉全长动脉粥样硬化斑块形成.方法:选取饲养于SPF屏障环境内8周龄的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)雄鼠18只,随机分成对照组(9只)和实验组(9只).实验前对两组雄鼠进行鼠尾基因型鉴定,并随机抽取6只,测得8周龄对照组小鼠血脂.实验组给予高脂饲料(脂肪15%、胆固醇1.25%、0.5%胆酸盐);对照组予普通饲料,饮水不限.分别在喂养0周、8周时眼眶采血,测血脂.两组小鼠均在饲养8周处死,处死前12 h禁食不禁水,取主动脉全长,油红O染色,观察主动脉病理变化.成功建立AS模型后,将小鼠分为AS+生理盐水(NS)组及AS+辛伐他汀(ST)组(各9只),分别在给药4周及8周时眼眶取血,测血清中血脂浓度变化.结果:对小鼠鼠尾基因型鉴定确定ApoE基因敲除雄鼠均为阳性纯合子小鼠,且Neo cassette已被去除.通过对ApoE基因敲除雄鼠实验组及对照组血脂比较,表现为TG、TC和LDL-C显著升高(P<0.05),HDI-C(P<0.05)显著降低;实验组高脂饲料喂养8周后,ApoE基因敲除雄鼠主动脉形成明显的AS斑块,对照组则未见明显AS斑块.AS小鼠给予NS和ST后,检测表明ST给药时间增长,TC、TG、LDL-C均有降低趋势.其中,TC及LDL-C给药ST 8周后有显著性差异(P<0.05),小鼠主动脉油红O染色显示斑块脂质沉积较NS组有所减少,面积减小,凸向管腔程度也明显降低(即狭窄程度降低).结论:ApoE基因敲除雄鼠高脂饲料喂养8周后,血脂明显异常,且形成明显的AS斑块,AS模型成功构建;AS小鼠给予ST(8周)则血脂浓度明显降低,且主动脉油红染色显示斑块明显少于对照组,表明该模型可用于抗动脉粥样硬化药物药效检测.【期刊名称】《赣南医学院学报》【年(卷),期】2017(037)003【总页数】7页(P337-342,364)【关键词】动脉粥样硬化;载脂蛋白E基因敲除小鼠;疾病模型;动物【作者】梁璐;洪瑞云;周敏;张毅;邹海林;钟一鸣;王烈峰【作者单位】赣南医学院,江西赣州 341000;赣南医学院,江西赣州 341000;赣南医学院,江西赣州 341000;赣南医学院,江西赣州 341000;赣南医学院,江西赣州341000;赣南医学院第一附属医院,江西赣州 341000;赣南医学院基础医学院生物技术教研室,江西赣州 341000【正文语种】中文【中图分类】R-332动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是一组称为动脉硬化的血管病中常见且最重要的一种，AS主要累及体循环系统的大动脉和中动脉。
ApoE—／—小鼠动脉粥样硬化模型的建立摘要：ApoE-/-基因敲除小鼠（ApoE-/-）经含有21%脂肪和0.15%胆固醇的高脂饲料喂食12周后进行各项血脂胆固醇水平检测，以及整体主动脉油红0染色与主动脉根部病理切片油红0染色等动脉粥样硬化病理分析。
结果显示经过高脂诱导的ApoE-/-小鼠的血浆总胆固醇和甘油三酯水平均比未经饮食诱导的ApoE-/-小鼠、经同样饮食处理的野生型小鼠以及未经处理的野生型小鼠均显著升高（P＜0.05）；低密度脂蛋白-胆固醇水平与野生型（正常饮食组和高脂组）相比升高了近3倍多；高脂诱导ApoE-/-小鼠的主动脉斑块面积占整体主动脉面积的65%，显著高于ApoE-/-小鼠的正常饮食组（21%）（P＜0.05），同时主动脉根部的血管壁明显增厚，管腔变窄。
实验结果表明通过高脂饲料饮食诱导，成功建立了动脉粥样硬化模型小鼠，可为下游的药物筛选、基因治疗以及动脉粥样硬化机理的体内研究提供理想的实验材料。
关键词：ApoE-/- 小鼠；动脉粥样硬化；胆固醇；血脂；主动脉中图分类号：R394 文献标识码：A 文章编号：1007-7847（2015）02-0141-04The Establishment of Atherosclerosis Model in ApoE-/- MiceOU Hai-long，ZHANG Li-lin，HE Xiao-lan，LI Hong-mei，LEI Ting-wen （Department of Biochemistry and Molecular Biology，Guiyang Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China）Abstract ：The ApoE gene knockout mice （ApoE-/-）were fed with a high-fat （HF）diet containing 21% fat and 0.15% cholesterol for 12 weeks to establish atherosclerosis model. After diet induction，the ApoE-/- mice were sacrificed and plasma total cholesterol （TC），triglyceride （TG），low -density lipoprotein -cholesterol （LDI-C）and high-density lipoprotein-cholesterol （HDL-C）levels were measured. The whole aortas and sequential sections of the aortic root were stained with oil red 0. Results showed that the plasma levels of TC and TG from HF diet induced ApoE-/- mice were both dramatically higher than normal diet（ND）-fed ApoE-/- mice as well as wild-type mice fed with normal diet or HF diet （P <0.05）. The contents of LDL-cholesterol in plasma were elevated by three-fold compared with wild-type （ND and HFD）. Atherosclerotic lesion sizes were significantly increased in whole aorta （65%）as compared with normal diet ApoE-/-mice （21%）. Similar result was obtained from cross -sections of the aortic root analysis. The results demonstrated that HF diet treatment greatly enhanced atherosclerosis development in ApoE-/-mice. The establishment of atherosclerosis model mice provides a valuable tool for drug screen，gene therapy and even in vivo mechanism analysis in atherosclerosis disease.Key words ：ApoE-/-mice；atherosclerosis；cholesterol；lipoprotein；aorta（Life Science Research，2015，19（2）：141 ?144）体内的脂类物质代谢异常时，多余的脂质沉积在血管壁上，并逐渐形成斑块，使血管内皮增厚、变硬，是引起动脉粥样硬化（atherosclerosis AS）的重要原因之一。
词创葢ID剂2021*No-3鮭餐驚紀出＜5 doi：10.7633/j.issn.1003-6202.2021.03.009重组油酸对高脂小鼠血脂代谢的影响王子豪，赵丽莹，孟鑫(锦州医科大学食品科学与工程学院，辽宁锦州121000)摘要：研究重组油酸对高脂血症小鼠血脂代谢的影响。
选购25只雄性昆明(SPF级)小鼠，创建高脂血症模型，然后分5组(空白对照组、高脂模型组、油酸低、中、高剂量组)，对重组菌CYJ1进行摇瓶培养后，添加诱导剂诱导去饱和酶表达，从而提取重组菌产生的油酸，以此来灌胃小鼠进行饮食干预，35d后称取小鼠体重，分别采集小鼠的血清、肝脏，测定胆固醇和甘油三酯、血糖值、肝脏体积比等指标。
结果表明，与高脂模型组相比，油酸组小鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量均显著降低，高密度脂蛋白(HDL-C)含量明显增加；血糖和肝脏体积比也明显降低。
重组菌提取的油酸能够有效降低小鼠血脂水平，对高脂血症和动脉硬化具有较好的预防作用。
关键词：单不饱和脂肪酸；高脂血症；油酸中图分类号：S816.32；S816.71文献标志码：A文章编号1003-6202(2021)03-0034-04Effect of recombinant oleic acid on lipid metabolism inhyperlipidemia miceWANG Zi-hao,ZHAO Li-ying,MENG Xin(School of Food Science and Engineering,Jinzhou Medical University,Jinzhou121000,China)ABSTRACT:To study the effect of oleic acid on lipid metabolism in hyperlipidemia mice.Twenty-five male Kunming SPF mice were selected to establish hyperlipidemia model.Then they were divided into five groups(blank control group,high-fat model group,oleic acid low-dose group,oleic acid medium-dose group and oleic acid high-dose group).After the recombinant strain cyjl was cultured in shake flask,the induction agent was added to induce the expression of desaturase,and the oleic acid produced by recombinant bacteria was extracted,which was used to gavage mice for dietary intervention.After35days,the mice were weighed and the serum and liver were collected respectively,and cholesterol,triglyceride,blood glucose value and liver volume ratio were pared with the high-fat model group,the contents of total cholesterol(TC),triglyceride(TG) and low-density lipoprotein(LDL-C)of oleic acid group decreased significantly,and the content of high-density lipoprotein (HDL-C)increased significantly.The ratio of blood glucose to liver volume also decreased significantly.Oleic acid extracted by recombinant bacteria can reduce hyperlipidemia by changing serum indexes of mice.KEYWORDS:monounsaturated fatty acid；hyperlipidemia；oleic acid随着日常饮食水平的提高，人类患高脂血症的概率也愈发增高⑴。
网络出版时间：２０２４－０３－０９１６：５８：５８ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２４０３０７．０８４４．００２基于肠道菌群探讨粗壮女贞总苷对高脂血症金黄仓鼠的降脂作用机制徐晨曦，潘瑞乐，董梦晨，杨志宏，李晓亚，金 文，杨润梅［中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所中药（天然药物）创新药物研发平台北京市重点实验室，北京 １００１９３］收稿日期：２０２３－１１－２８，修回日期：２０２４－０１－２０基金项目：北京市科技重大专项（ＮｏＺ１９１１００００７６１９０６０）；国家自然科学基金青年基金资助项目（Ｎｏ８１７０３７４６）作者简介：徐晨曦（１９９８－），女，硕士生，研究方向：心血管药理学，Ｅ ｍａｉｌ：１６６１６１５３３６＠ｑｑ．ｃｏｍ；杨润梅（１９８１－），女，硕士，副研究员，研究方向：心血管药理学，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｒｍｙａｎｇ＠ｉｍｐｌａｄ．ａｃ．ｃｎｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２３０９１０９文献标识码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２４）０３－０４７６－０８中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ２８４ １；Ｒ３２２ ４５；Ｒ５８９ ２；Ｒ９７２ ６摘要：目的 评价粗壮女贞总苷（ｔｏｔａｌｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｄｇｌｙｃｏ ｓｉｄｅｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍＬｉｇｕｓｔｒｕｍｒｏｂｕｓｔｕｍ（Ｒｏｘｂ．）Ｂｌｕｍｅ，ＬＲＴ ＰＧ）对高脂血症金黄仓鼠的降脂作用并探讨其对肠道菌群的调节作用。
方法 ６０只仓鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组、ＬＲＴＰＧ Ｌ组、ＬＲＴＰＧ Ｍ组、ＬＲＴＰＧ Ｈ组。
高脂饲料诱导造模成功后连续给药４周，进行血脂和肝脂含量检测，并采集对照组、模型组和ＬＲＴＰＧ Ｈ组仓鼠结直肠部位成形粪便进行１６ＳｒＤＮＡ测序。
结果 ＬＲＴＰＧ对高脂血症仓鼠具有降低血清ＴＧ、ＴＣ、ＬＤＬ Ｃ水平和肝脏ＴＧ、ＴＣ含量的作用。
姜黄提取物联合阿托伐他汀钙对高脂血症小鼠降血脂作用的研究姜海;姜国志;陈钟;李振江【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2017(22)1【摘要】目的:研究姜黄提取物联合阿托伐他汀钙对高脂血症小鼠的降血脂作用。
方法:昆明种小鼠喂高脂饲料,建立高脂血症小鼠模型。
将建模成功的小鼠分为4组,即高脂血症模型组、阿托伐他汀钙组、姜黄提取物组、阿托伐他汀钙和姜黄提取物联合组。
对小鼠喂高脂饲料的同时连续灌胃5周不同剂量的姜黄提取物、阿托伐他汀钙。
实验结束后测定各组小鼠的体质量,以及血清中的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。
结果:与高脂血症小鼠模型组相比,姜黄提取物和阿托伐他汀钙联合组TG、TC、LDL-C显著降低(P<0.01),分别下降44.10%、38.30%、37.24%,HDL-C显著升高(P<0.05)。
结论:姜黄提取物和阿托伐他汀钙联合使用具有降低血脂作用,而且比两者单独使用时效果更好。
【总页数】4页(P48-51)【关键词】高脂血症;小鼠;姜黄提取物;阿托伐他汀钙【作者】姜海;姜国志;陈钟;李振江【作者单位】神威药业集团有限公司;河北省中药注射液工程技术研究中心【正文语种】中文【中图分类】R589.2【相关文献】1.紫苏水提取物对高脂血症小鼠的降血脂及抗氧化作用 [J], 王婧瑜;王涵;谷岩2.植物甾醇酯和葛根素联合使用对高脂血症小鼠降血脂作用研究 [J], 程远渡;易有金;易传祝;周金伟;隆丽林3.菊米提取物对高脂血症模型小鼠降血脂作用研究 [J], 李玲;金李峰4.大黄与姜黄配伍对实验性高脂血症小鼠降血脂作用研究 [J], 杨耀光5.大蒜素和植物甾醇酯联合使用对高脂血症小鼠降血脂作用研究 [J], 王欣笛; 何正飞; 张欣悦; 孙燕; 张晴; 黄巍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
补阳还五汤药理作用实验研究进展摘要:补阳还五汤（BYHWD）是中药中治疗气虚血瘀的代表方剂。
对中风、脑梗死后遗症、脑出血、心肌梗死、脑梗死等均有有显著的疗效，且补阳还五汤加减方剂颗粒剂等对于外伤性周围神经损伤脉络瘀阻证、糖尿病肾病、血瘀型腰间盘突出、痰瘀痹阻型类风湿关节炎有一定的治疗作用。
经现代药理实验研究表明，补阳还五汤对大鼠的免疫功能及抗炎作用、脑梗死、寒凝血瘀证、心脑血管证及对类风湿性关节炎的小鼠有一定的治疗作用。
本文通过总结近年来补阳还五汤的药理实验研究，以期对补阳还五汤的进一步实验研究和扩展提供参考。
补阳还五汤出自清代王清任《医林改错》一书，由黄芪、当归、赤芍、地龙、红花、川芎和桃仁等七味药组成，用于气虚血瘀证。
方中黄芪为君，有补气活血、祛瘀通络的作用。
方中的红花中的羟基红花黄色素 A、当归和川芎中的阿魏酸、赤芍中的芍药苷、以及黄芪中的毛蕊异黄酮、芒柄花素是补阳还五汤里中药的代表活性成分。
这些成分都具有保护心脑血管，提高免疫力，抗氧化、神经保护等药理作用。
现补阳还五汤的应用越来越广泛，目前主要临床应用于用于治疗缺血性脑卒中，但对神经系统也有一定的保护作用，不仅如此补阳还五汤对于各种血管性疾病、神经损伤、肾病等临床应用与作用机制也逐渐受到关注。
通过查阅文献，本文就近年来有关补阳还五汤药理实验研究的六个方面进行总结综述如下: 1对抗炎及免疫调节的作用的影响实验研究表明免疫功能低下的小鼠，补阳还五汤能增加其免疫器官的重量，增强单核吞噬细胞系统的吞噬功能，提高特异性体液免疫。
补阳还五汤具有治疗EAE的潜在功能，为此不少研究工作者采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）多肽诱导建立EAE模型进行探讨，研究发现BYHWD能够抑制ROCKⅡ/ TLR4/ NF-κB 炎性通路和调节外周T细胞亚群比例[1]。
2对寒凝血瘀证的影响补阳还五汤对寒凝血瘀证有一定的治疗作用。
研究发现补阳还五汤中的当归能够选择性抑制血栓素合成酶的活性，并且能够抑制血小板花生四烯酸的代谢，具有阻止血栓形成的作用。
苦丁茶皂苷降血脂作用的成分研究苦丁茶(Ilex kudincha C.J.Tseng)是冬青科冬青属乔木植物的嫩叶,为药食同源的常用中药。
为阐明苦丁茶皂苷降血脂的药效物质基础,本论文以高脂血症小鼠模型对其降血脂活性进行了确证,同时利用实时定量PCR技术初步阐明了苦丁茶皂苷降血脂的作用机理,并运用超高效液相飞行时间串联质谱技术对苦丁皂苷部位的化学成分进行了全面的表征,为苦丁茶的开发和利用提供了新的科学依据。
方法:采用硅胶柱色谱层析、反相C18半制备等传统的植物化学分离模式,对苦丁茶皂苷成分进行分离并进行结构鉴定。
结合QTOF-MS/MS对苦丁茶皂苷提取物中的所有皂苷成分进行结构表征。
通过高脂饲料建立高脂血症小鼠模型,随机4组,即苦丁茶皂苷TSL组(50 mg/kg)、苦丁茶皂苷TSH组(100 mg/kg)、P group(simvastain tablets 20 mg/kg)、H group组,另取同步饲养的正常小鼠作为C group组,每组8只,连续灌胃给药4周后,眼眶后静脉丛取血,分离血清,检测所有小鼠血清中一系列生化血脂指标变化;油红O染色观察肝脏组织病理形态学。
然后从基因表达方面采用实时定量PCR 的方法研究实验小鼠肝脏中与脂代谢相关的五种基因的表达情况,初步阐述苦丁茶皂苷降血脂的作用机理。
结论:共分离出6个化合物分别是:kudinoside A、kudinoside D、kudinoside F、ilekudinoside R、ilekudinoside D、ilekudinoside M,并表征出52个皂苷累化合物,为苦丁茶皂苷降脂药效物质基础和质量控制奠定了基础。
药效结果发现与模型组比较,苦丁茶皂苷治疗组小鼠血清中TC、LDL-C、AI均显著减低,证明苦丁茶皂苷提取物对高脂血症有显著的预防作用;肝脏组织染色结果显示苦丁茶皂苷提取物能改善高脂饲料引起的肝脏脂肪变性;实时定量PCR实验结果表明与高脂模型组比较,苦丁茶皂苷提取物能够显著上调高脂血症小鼠肝脏中的Hmgcr、LDL-R、SR-BI、SR-A和CD36水平,从基因表达方面初步阐明了苦丁茶皂苷的降血脂药效作用靶标和作用机理。
2021年2月第29卷㊀第1期中国实验动物学报ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICAFebruary 2021Vol.29㊀No.1李淑珍,杨巍巍,康爱娟,等.柑橘多甲氧基黄酮饼干对高血脂症小鼠的降脂效应[J].中国实验动物学报,2021,29(1):63-70.Li SZ,Yang WW,Kang AJ,et al.Lipid-lowering effect of citrus polymethoxyflavonoid cookies on hyperlipidemia mice [J].Acta Lab Anim Sci Sin,2021,29(1):63-70.Doi:10.3969/j.issn.1005-4847.2021.01.009[基金项目]辽宁省科学技术厅项目(2018010874-301),辽宁省科学技术厅社发攻关及产业化重点研发项目(2017225065),国家级大学生创新创业训练计划项目 蔓越莓燕麦功能饼干的开发研究 (201810164004),辽宁省沈阳医学院科技基金项目(20182033,20191038),沈阳医学院校级大学生课题 山楂叶黄酮功能果酱的研究及免疫机制研究 (20198002)㊂Funded by Project of Science and Technology Department of Liaoning Province(2018010874-301),Liaoning Provincial Science and Technology Department s Key Research and Development Project for Industrialization and Industrialization(2017225065),National College Student Innovation and Entrepreneurship Training Program Development and Research of Cranberry Oatmeal Functional Biscuits (201810164004),Science and Technology Fund Project of Shenyang Medical College in Liaoning Province (20182033,20191038),Shenyang Medical University-LevelUndergraduate Project Research on the Functional Jam of Flavonoids in Hawthorn Leaves and Research on the Immune Mechanism (20198002).[作者简介]李淑珍(1981 ),女,博士,研究方向:免疫学㊂Email:335949822@[通信作者]杨巍巍(1982 ),男,副教授,博士,研究方向:食品中活性成分的研发与利用研究㊂Email:yw198269@柑橘多甲氧基黄酮饼干对高血脂症小鼠的降脂效应李淑珍1,杨巍巍2∗,康爱娟2,张建2,岳祺圣2,张鑫2,郭锐2,唐玲2,邹春兰2,姚思彤1(1.沈阳医学院基础医学院,沈阳㊀110034;2.沈阳医学院公共卫生学院,沈阳㊀110034)㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀本研究为首次在高脂血症小鼠模型中,通过脂代谢实验指标的测量,评价将柑橘多甲氧基黄酮粉末加入饼干后的降脂作用,旨在为开发一种新型功能食品提供依据㊂方法㊀将60只雄性KM 小鼠随机分为6组,连续喂养6周,建立高脂小鼠模型,而后饲喂相应饼干,继续喂养6周后,检测小鼠体重㊁Leeᶄs 指数㊁脏器变化㊁肝组织生化指标和血清中血脂含量的变化㊂结果㊀6周后,小鼠体重㊁Leeᶄs 指数㊁脏器变化㊁肝组织生化指标和血清中血脂含量均表明多甲氧基黄酮饼干能抑制高血脂小鼠体重的增长,降低高血脂小鼠的Leeᶄs 指数,改善高血脂模型小鼠血清中常见生化指标的脂质代谢异常㊂结论㊀多甲氧基黄酮饼干能明显改善高血脂模型小鼠血清中常见生化指标的脂代谢异常㊂降脂饼干对小鼠血脂影响方面:降脂饼干对甘油三酯(TG)的影响明显,对高密度脂蛋白(HDL-C)没有明显影响,对低密度脂蛋白(LDL-C)影响也较为明显㊂揭示了其或可发挥对血脂异常及由血脂异常造成的脂肪肝等相关疾病的治疗或保健作用㊂ʌ关键词ɔ㊀柑橘多甲氧基黄酮;高脂血症;降脂效应;降脂饼干;功能性食品;Leeᶄs 指数;血清血脂;组织生化ʌ中图分类号ɔQ95-33㊀㊀ʌ文献标识码ɔA㊀㊀ʌ文章编号ɔ1005-4847(2021)01-0063-08Lipid-lowering effect of citrus polymethoxyflavonoid cookies onhyperlipidemia miceLI Shuzhen 1,YANG Weiwei 2∗,KANG Aijuan 2,ZHANG Jian 2,YUE Qisheng 2,ZHANG Xin 2,GUO Rui 2,TANG Ling 2,ZOU Chunlan 2,YAO Sitong 1(1.Basic Medical College of Shenyang Medical College,Shenyang 110034,China.2.School of Public Health,Shenyang Medical College,Shenyang 110034)Corresponding author:YANG Weiwei.E-mail:yw198269@16ʌAbstractɔ㊀Objective㊀This study evaluated the lipid-lowering effect of adding citrus polymethoxyflavonoid powder to biscuits through measurement of lipid metabolism indicators in a hyperlipidemia mouse model to develop a new type functional food.Methods㊀Sixty male KM mice were randomly divided into six groups and fed for6weeks to establish a high fat mouse model.Then,they were fed with the corresponding biscuits.After6weeks of feeding,the weight,Lee s index,serum lipid levels,and indexes of the liver,spleen,heart,and kidney were assessed.Results㊀After6weeks, polymethoxyflavonoid biscuits inhibited the weight increase of hyperlipidemia mice and reduced hyperlipidemia. Polymethoxyflavonoid biscuits significantly improved abnormal lipid metabolism of common biochemical indicators in the serum of hyperlipidemia model mice.In terms of the effect of lipid-lowering biscuits on blood lipids in mice,the lipid-lowering biscuits had a significant effect on triglyceride(TG)and low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C),but had no obvious effect on high-density lipoprotein cholesterol(HDL-C).Conclusions㊀Citrus polymethoxyflavonoid powder may be a therapeutic agent for dyslipidemia,fatty liver,and other related diseases.ʌKeywordsɔ㊀citrus polymethoxyflavone;hyperlipidemia;lipid-lowering effect;lipid-lowering biscuit;functional food;lee s index;serum lipid;tissue biochemistryConflicts of Interest:The authors declare no conflict of interest.㊀㊀高脂血症是指血清中的总胆固醇(TC)㊁总三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)高出合适范围或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)低于合适范围[1],是各种心脑血管疾病的危险因子[2]㊂高脂血症是临床上老年常见病,且发病率在老年人群中逐年递增[3],也是促进高血压㊁糖耐量异常和糖尿病发生的一个重要危险因素[4]㊂在现代医药领域, HLP又称为脂质代谢紊乱,是血液中任何或所有血脂与脂蛋白水平同时异常升高,或单一一种异常升高,是一种最常见的血脂异常形式[5]㊂高脂血症的预防和治疗已成为亟待解决的难题之一,高脂模型对于脂代谢性疾病以及HLP继发的心脑血管性疾病的研究具有重大意义[6]功能性食品是具有特定营养功能特性的食品,主要用于特定人群食用,其原料主要有谷物㊁豆类㊁干果和益生菌等,具有调节人体某种生理功能,且不以治疗为目的食品[7-10]㊂临床研究表明对人群进行生活方式和饮食的干预会对肥胖的发生起到一定的预防作用[11]㊂饼干是以小麦粉为主要原料,适量加入糖㊁奶油㊁黄油㊁香精㊁鸡蛋等辅料,在特定工艺下烘烤而成的口感松脆的食品㊂随着食品工业的发展和人民生活水平的提高,食品的消费观也在不断地变化,如何吃得健康是当今人们推崇的饮食理念㊂多甲氧基黄酮(polymethoxy flavones,PMFs)是一类以2-苯基色原酮为母核具有两个或两个以上甲氧基的天然黄酮类化合物,存在于柑橘属植物中,特别是甜橙和柑橘的果皮[12]㊂PMFs自21世纪以来受到广泛研究和关注,已有研究证实柑橘黄酮提取物和柑橘PMFs具有调控脂质代谢㊁降血脂和预防肥胖的作用[13-16]㊂然而,将多甲氧基黄酮直接加入食物中,观察对高血脂小鼠的血脂变化情况则鲜有报道㊂本研究采用高脂饲料建立高血脂小鼠为模型,通过在饼干中添加不同剂量的多甲氧基黄酮粉末,检测小鼠体重㊁Leeᶄs指数㊁脏器变化㊁肝组织生化指标和血清中血脂含量的变化来评价多甲氧基黄酮饼干的降脂减肥作用㊂旨在为高血脂人群寻找健康而有效的降脂食物,开发一种新型功能性食品,并为柑橘产品的开发提供依据㊂1㊀材料与方法1.1㊀材料1.1.1㊀实验动物60只2~3周龄KM系SPF级雄性小鼠,体重20~24g,购于辽宁长生生物技术股份有限公司ʌSCXK-2015-0001ɔ㊂饲养于沈阳医学院动物实验中心SPF级动物房ʌSYXK-2015-0021ɔ,饲养环境温度为20~24ħ㊁湿度为50%~60%,12h光照/黑暗周期;自由采食基础饲料,自由饮水㊂所有操作均符合沈阳医学院动物科学实验伦理学要求(批准号:SYYXY2019090301)㊂1.1.2㊀主要试剂与仪器多甲氧基黄酮粉末(成都曼斯特生物科技有限公司);检测试剂盒HDL-C(High density lipoprotein cholesterol,高密度脂蛋白胆固醇,批号:20190522)㊁LDL-C(Low density lipoprotein cholesterol,低密度脂蛋白胆固醇,批号:20190521)㊁TG(甘油三酯,批号: 20190522),上述试剂盒均购自南京建成生物工程研究所;非诺贝特片(上海信谊万象药业股份有限公司,批号:130928)㊂普通饲料购自沈阳医学院实验动物中心,高脂饲料配方为:猪油(28%)㊁胆固醇(1%)㊁胆酸钠(0.2%)㊁蔗糖(16%)㊁基础饲料(54.8%)㊂制作饼干所用材料:金沙河家用小麦粉(SC10113052700055,邢台金沙河面业有限责任公司);怡宝纯净水(SC10631011401276,上海麒麟食品有限公司)㊂酶标仪(M200,Tecan,瑞士);中药粉碎机(HR-20B,永康市哈瑞工贸有限公司);轧面机(FKM-200,永康市富康电器有限公司);远红外电热食品烤炉(DKL-FB,广东多丽食品机械有限公司)㊂1.2㊀方法1.2.1㊀动物分组及饲养条件选择健康成年的60只KM小鼠在沈阳医学院动物实验中心适应性喂养1周后,随机分出14只继续饲喂基础饲料作为正常对照组(A组),其余小鼠为造模组,均饲喂自制高脂饲料用来建造食源性肥胖小鼠模型㊂据造模小鼠体重超出空白对照组体重10%以上为造模成功标准[17]㊂6周后挑选成功高脂模型小鼠随机分为5组包括:高脂模型组(B 组),普通饼干组(C组),阳性药饼干组(D组),低剂量饼干组(E组),高剂量饼干组(F组)㊂每组8只小鼠,试验持续6周,期间A组继续饲喂基础饲料,B组饲喂基础饲料,C组饲喂无任何添加的饼干,阳性药组饲喂加入阳性药非诺贝特(0.07%)的饼干,E组和F组分别饲喂加入多甲氧基黄酮粉末(0.08%㊁0.16%)的饼干[18]㊂1.2.2㊀饼干制作(1)溶解辅料:将非诺贝特粉末或多甲氧基黄酮粉末加水溶解㊂(2)调粉:将面粉㊁水倒入和面机中,和至面团手握柔软适中,表面光滑油润,有一定可塑性不粘手即可㊂(3)辊轧:将和好后的面团放入辊轧机,多次折叠反复并旋转90ʎ辊轧,至面带表面光泽形态完整㊂(4)成型:用饼干模将面带成型㊂(5)烘烤:将饼干放入刷好烤盘中,入烤箱200ħ烘烤,烘烤时间为12min㊂(6)冷却:将烤熟的饼干从烤箱中取出静置,冷却至40ħ以下包装㊂各饼干组饲料配比为:面粉㊁油㊁糖和奶粉含量分别为100㊁10㊁15㊁5g,E组和F组分别添加多甲氧基黄酮粉末0.08g和0.16g,D组添加非诺贝特粉末0.07g㊂饼干饲料总能量为17.01KJ/g,营养素参考值为20%㊂营养成分配给为:蛋白质㊁脂肪和碳水化合物含量分别0.072㊁0.088㊁0.733g/g,营养素参考值分别为12%㊁15%和25%;钠含量为0.68mg/g,营养素参考值为3%㊂1.2.3㊀给药前后对模型小鼠体重的影响以实验前体重为初始体重,并在第6周高血脂模型测试时称取体重,后连续给药6周,并在第9㊁12周末记录各组小鼠体重㊂1.2.4㊀Leeᶄs指数测定试验期间,分别于6㊁9㊁12周末正常饮水,空腹12h过夜测定各组小鼠体重和体长(体长定义为鼻尖到肛门的距离),按照如下公式计算出小鼠Leeᶄs 指数(LI):LI=[体重(g)1/3ˑ103/体长(cm)] 1.2.5㊀脏器系数测定解剖小鼠时,小心取出各脏器组织,生理盐水清洗后称重,-80ħ储存,小鼠体重以g为单位,主要脏器质量以mg为单位,脏器系数(脏器质量/体质量)以百分数表示㊂1.2.6㊀血清血脂水平的测定试验期间,分别于6㊁9㊁12周末对小鼠进行腹腔麻醉,并眼眶取血采集血液样本,25ħ放置2h后, 3000r/min离心10min,离心取上层血清,用试剂盒测定小鼠TG㊁HDL-C㊁LDL-C浓度㊂1.2.7㊀肝组织生化指标测定取第9周肝组织,室温解冻肝组织,以1ʒ10的比例制备肝/异丙醇匀浆液,6000r/min离心取上清,按试剂盒说明测定TG㊁LDL-C㊁HDL-C水平㊂1.3㊀统计学分析本试验得到数据均以平均值ʃ标准误差( xʃs x)表示,并使用SPSS19.0软件进行统计分析,两组间差异采用t检验分析,多组间差异采用单因素方差分析,方差齐性采用LSD检验,方差不齐采用Dunnet T3检验,P<0.05为差异具有统计学意义㊂2㊀结果2.1㊀动物模型成功性考察连续喂养6周,第6周末称取小鼠体重,禁食不禁水12h,眼眶采血检测TG㊁LDL-C㊁HDL-C含量,统计结果显示实验组小鼠体重均超过空白组小鼠体重的10%,血清TG㊁LDL-C较正常组含量升高,HDL-C含量相对降低,表明高血脂模型建造成功㊂2.2㊀多甲氧基黄酮饼干对小鼠体重的影响整个实验周期内,各组小鼠生长状态良好,无死亡现象㊂综合比较实验前㊁6周后㊁9周后及12周后各组小鼠的体重平均值,由图1可以看出,实验前各组小鼠按体重随机分组,使各组体重无明显差异,可以减小分析误差;第6周(造模后)各组小鼠体重均显著升高,各实验组高于A组(P<0.01),表明高血脂模型已经建成㊂第9周(给药后3周)各实验组仍显著高于A组(P<0.01)㊂C㊁E组与B组无统计学差异㊂D㊁F组与B组有统计学差异(P<0.05)㊂第12周(给药后6周)B㊁C㊁E组极显著高于A组(P<0.01)㊂D㊁F组与B组具有统计学差异(P<0.05)㊂喂养6周后体重增加明显,给与降脂饼干后,第9周D组㊁F体重下降明显,其余各组体重无明显变化㊂第12周D组和F组体重下降明显,F组在降低体重方面比E组明显㊂C组与B组体重无统计学差异㊂注:与A组相比,∗P<0.05,∗∗P<0.01;与B组相比,#P<0.05,##P<0.01㊂(下图同)图1㊀各组小鼠体重比较(n=8)pared with group A,∗∗P<pared with group B,#P<0.05,##P<0.01.(The same in the following figures)Figure1㊀Comparison of body weight of mice in each group(n=8)2.3㊀多甲氧基黄酮饼干对小鼠Leeᶄs指数的影响Leeᶄs指数是评价小鼠肥胖程度方面的有效指数㊂由图2可以看出:第6周,B组和其余各组比A组明显升高(P<0.01)㊂第9周,各实验组高于A组(P<0.01)㊂D㊁F组与B组具有统计学差异(P<0.01)㊂第12周,B㊁C㊁E组显著高于A组(P<0.01)㊂D㊁E㊁F组均显著低于B组(P<0.01)㊂说明高脂膳食导致小鼠肥胖从而使Leeᶄs指数升高,长期饲喂多甲氧基黄酮饼干可以降低肥胖小鼠的Leeᶄs指数,高剂量比低剂量效果更加明显㊂普通饼干对小鼠无明显影响㊂2.4㊀多甲氧基黄酮饼干对小鼠各脏器指数的影响脏器指数能反映实验动物的营养状态和各脏器的病变情况,由图3A可知,本实验所制作的多甲氧基黄酮饼干对心指数并无明显影响㊂由图3B可知,对于肝方面,第12周,B组和C㊁D组高于A组(P<0.05),其他各试验组均低于B组(P<0.05)㊂说明持续饲喂多甲氧基黄酮饼干可有效控制肥胖小鼠肝指数㊂D组肝指数与B组无统计学差异㊂图3A所示在脾方面,第12周,B组与A组具有统计学差异(P<0.05)㊂D组与A组具有统计学差异(P<0.05)㊂其他各剂量组与A组无统计学差异(P>0.05)㊂D㊁F组与B型组差异具有统计学差异(P<0.05)㊂各剂量组脾指数均高于B组㊂以上说明,高脂饲料对脾指数有一定的影响,阳性药和多甲氧基黄酮饼干可提高脾指数㊂普通饼干对小鼠无明显影响㊂图3B所示在肾方面,第12周,各试验组均显著高于空白组(P<0.05)㊂说明高脂饲料可一定程度的使肾指数增加,而阳性药和多甲氧基黄酮饼干对其没有显著作用㊂2.5㊀多甲氧基黄酮饼干对小鼠血清血脂水平的影响由图4可以看出:TG方面,第12周,各实验组与A组均具有统计学差异(P<0.01),TG值高于A图2㊀各组小鼠Leeᶄs 指数比较Figure 2㊀Comparison of Leeᶄs index of mice in eachgroup图3㊀各组小鼠第12周脏器指数比较Figure 3㊀Comparison of organ indexes of mice in each group at the 12th week组㊂D㊁E㊁F 组与B 组具有统计学差异(P <0.01),其中F 组效果较好㊂对血清中LDL-C 影响方面,由图4可以看出,第12周,D㊁E㊁F 组与B 组具有统计学差异(P <0.01),LDL-C 值均高于A 组,但与A 组已没有显著差异㊂长期饲喂高脂饲料可以升高小鼠血清中的LDL-C 的水平,喂养降脂饼干对其有一定的影响,可以降低LDL-C 的水平,高剂量组比低剂量组效果好㊂HDL-C 方面,第12周,各实验组与A 组均具有统计学差异(P <0.01),HDL-C 值均低于A 组㊂D㊁E㊁F 组与B 组均具有统计学差异(P <0.01)㊂可以看出,长期以高脂饲料喂养小鼠可以降低小鼠HDL-C 值㊂实验进行到第12周,降脂饼干可以缓解这种趋势,但还是低于A 组,说明阳性药和降脂饼干对高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的图4㊀各组小鼠第12周血脂水平比较Figure 4㊀Comparison of blood lipid levels ofmice in each group at the 12th week影响较小㊂2.6㊀多甲氧基黄酮饼干对小鼠肝组织生化指标的影响肝是体内脂肪代谢的主要器官,一旦肝被损伤,机体的脂肪代谢将会发生异常[19]㊂由图5可以看出实验进行到第12周时,各组小鼠的TG值方面,B㊁C㊁E㊁F组与A组具有统计学差异(P< 0.01)㊂D组与A组无显著差异㊂D㊁E㊁F组与B组具有统计学差异(P<0.01)㊂各组小鼠的LDL-C值方面,B㊁C㊁E㊁组与A组具有统计学差异(P<0.01)㊂D㊁F组与B组具有统计学差异(P<0.01)㊂HDL-C值方面,B㊁C㊁E组与A组具有统计学差异(P<0.01)㊂各组与B组均具有统计学差异(P< 0.01)㊂可以看出,饲喂小鼠多甲氧基黄酮降脂饼干对改善高血脂症小鼠肝组织中的指标有一定效果,而且高剂量效果比低剂量效果好㊂图5㊀各组小鼠第12周肝组织生化指标比较Figure5㊀Comparison of liver tissue biochemical indexes of mice in each group at12weeks3㊀讨论多甲氧基黄酮饼干能明显改善高血脂模型小鼠血清中常见生化指标的脂代谢异常㊂血脂含量测定显示,饲喂高脂饲料可以提高TG和LDL-C水平,降低HDL-C,多甲氧基黄酮饼干能够降低高脂小鼠的TG和LDL-C水平,缓解HDL-C的升高趋势㊂降低高血脂小鼠的Leeᶄs指数,抑制体质量的增长,能够改善高脂膳食引起的肥胖,同时对肝具有保护作用,也适用于预防血脂异常和脂肪肝等相关疾病㊂目前有关柑橘黄酮调节脂质代谢研究甚多,柑橘黄酮可以减少巨噬细胞对氧化低密度脂蛋白的摄取和巨噬细胞内胆固醇酯的积累,抑制肝脂质积累和脂蛋白的过量生产,从而降低动脉粥样硬化发生和发展的风险,然而降脂机制尚未完全明确[20]㊂本研究以柑橘多甲氧基黄酮及其制作的饼干为研究对象,通过喂食高脂饲料建立高血脂模型小鼠,经过喂养降脂饼干干预后对相关生化指标进行检测㊂降脂饼干在体重方面,高剂量组降低体重效果较好,对Leeᶄs指数也有影响㊂对脏器指数的影响:对心㊁肾指数没有明显影响,略提高高血脂小鼠的脾指数㊂对肝指数方面高剂量组影响明显,存在一定的剂量关系,非诺贝特降脂饼干显示增加小鼠的肝指数,可能为非诺贝特一方面提高LPL活性,促进CM㊁VLDL中TG的脂解,使血㊁肝组织内游离脂肪酸增多,另一方面减少VLDL在肝的合成和分泌,从而导致肝细胞内脂肪合成和分泌失衡,引起肝细胞内脂肪沉积加剧[21]㊂降脂饼干对小鼠血脂影响方面:降脂饼干对TG的影响明显,对HDL-C没有明显影响,对LDL-C影响较为明显㊂本实验是以小鼠来建立高血脂模型的,根据目前国内外已有的研究结果,用来建立高血脂模型的动物还有长爪沙鼠[22]㊁金黄地鼠[23]㊁食蟹猴[24]㊁悬猴㊁鹌鹑㊁鸡㊁家鸭㊁beagle犬㊁五指山小型猪和鸽子等,具体选用用于建立高脂模型的动物种类应当根据研究需要进行合理的选择㊂随着近年人们对食品营养素需求量的提高和对粗粮食品的重视,在其中添加一些对人体有益的元素更容易受到大众的青睐[25]㊂由于市场对新奇食品的需求逐渐旺盛,开发一些具有药用性饼干也具有重要的现实意义㊂从药用㊁保健食疗㊁食品色素角度开发多甲氧基黄酮,制成功能性食品,具有广阔的市场应用前景,并能产生较大的社会和经济效益㊂而功能性食品是人们对传统食品的深层次需求,是21世纪食品工业发展的主流方向,世界各国都非常重视功能性食品的研究与开发[26]㊂随着国家公众营养计划的稳步推进,未来人们对功能性食品的认可程度和接受程度只会越来越高[27]㊂参㊀考㊀文㊀献(References)[1]㊀于翠芸,袁琳.化浊行血方剂和血脂康治疗老年人高脂血症的疗效和安全性比较[J].实用医药杂志,2019,36(7):617-619.Yu 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一、实验目的本研究旨在探究某天然植物提取物对高脂血症小鼠的降血脂作用，为该植物提取物的临床应用提供科学依据。
二、实验材料1. 实验动物：SPF级雄性C57BL/6小鼠，体重18-22g，购自某实验动物中心。
2. 药物：某天然植物提取物，由某生物科技有限公司提供。
3. 试剂：胆固醇、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）试剂盒，购自某生物试剂公司。
4. 仪器：全自动生化分析仪、电子天平、离心机等。
三、实验方法1. 实验分组：将实验小鼠随机分为5组，每组10只，分别为正常对照组、高脂模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。
2. 模型制备：高脂模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠给予高脂饲料（高脂饲料：基础饲料+10%猪油+2%胆固醇）喂养，正常对照组给予基础饲料喂养，连续喂养8周。
3. 给药：从第4周开始，低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠分别给予某天然植物提取物低、中、高剂量（分别相当于生药量的0.1g/kg、0.2g/kg和0.4g/kg）灌胃，每天1次，连续4周。
4. 样本采集：实验结束后，禁食12小时，眼球取血，分离血清，置于-80℃冰箱保存。
5. 指标检测：采用全自动生化分析仪检测血清中的胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量。
四、实验结果1. 血清血脂水平比较：与正常对照组相比，高脂模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平显著升高，HDL-C水平显著降低（P<0.01）；与高脂模型组相比，低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平显著降低，HDL-C水平显著升高（P<0.01）。
2. 降血脂作用比较：与高脂模型组相比，低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平分别降低了23.5%、31.8%和40.2%，HDL-C水平分别升高了10.3%、18.2%和27.6%（P<0.01）。
