高考生物总复习 基础知识 112 组成细胞的元素及无机化合物 实验 检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质
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1 实验 检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质(5年20考)
(2013课标Ⅰ、广东理综、江苏、上海单科,2012安徽、广东、江苏,2011全国)
[要点突破]
1.实验原理
检测物质 鉴定试剂 颜色反应
还原糖 斐林试剂――→50~65℃温水浴 砖红色
脂肪 苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)染液 橘黄色(或红色)
蛋白质 双缩脲试剂 紫色
2.操作流程
(1)还原糖的检测
(2)脂肪的检测
方法一:花生种子匀浆+3滴苏丹Ⅲ染液―→橘黄色
方法二:
取材花生种子(浸泡)将子叶切成薄片
↓ 2 制片 ①取最理想的薄片②滴2~3滴苏丹Ⅲ染液染色3 min③去浮色1~2滴体积分数为50%的酒精溶液④制成临时装片1滴蒸馏水,加盖玻片
↓
观察:先在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒,再用高倍镜观察,花生子叶切片中有橘黄色颗粒
↓
结论:花生种子的子叶中有脂肪存在
(3)蛋白质的检测
3.斐林试剂和双缩脲试剂的比较
比较项目 斐林试剂 双缩脲试剂
不同点 使用方法 甲液和乙液等量混合均匀后即可使用,且现配现用 使用时先加A液再加B液
实质 新配制的Cu(OH)2反应 碱性条件下的Cu2+反应
呈色反应条件 需水浴加热 不需加热即可反应
颜色 砖红色 紫色
浓度 乙液CuSO4的质量浓度为0.05
g/mL B液CuSO4的质量浓度为0.01 g/mL
相同点 都含有NaOH、CuSO4两种成分,且所用NaOH溶液的质量浓度都是0.1_g/mL
4.实验注意事项
(1)在物质鉴定实验中应注意选择无色或颜色浅的材料,这样可以避免材料本身的颜色掩盖反应结果,如鉴定还原糖一般不用有色的叶片,鉴定蛋白质一般不用血红蛋白等。
(2)物质鉴定实验一般不设立对照实验,若需设立对照实验,对照组应加入成分已知的物质,如验证唾液淀粉酶是蛋白质,对照组可加入稀释的鸡蛋清。
(3)在还原糖、蛋白质的鉴定实验中,在加相应试剂鉴定之前,要留出一部分组织样液作为 3 对照,以便与鉴定后的样液颜色作对比,增强实验的说服力。
(4)在蛋白质的鉴定实验中,如果用蛋清稀释液作为实验材料,一定要稀释到一定程度,否则,与双缩脲试剂发生反应后会粘在试管的内壁上,使反应不彻底,试管也不易洗刷干净。
(5)在脂肪的鉴定中,洗去浮色时不能用清水,因为染液易溶于有机溶剂、不溶于水。
思维激活
连一连
巧记 苏丹Ⅲ遇脂肪,颜色变化为橘黄;砖红色沉淀何时显?斐林试剂把糖验;蛋白质类双缩脲,紫色络合无处藏。
[典例透析]
【典例1】(2013·江苏卷改编)在1、3、5号试管中分别加入2 mL蒸馏水,2、4、6号试管中分别加入2 mL发芽的小麦种子匀浆样液,然后在1~4号试管中滴加适量斐林试剂,5、6号试管中合理滴加双缩脲试剂,摇匀。预期观察到的实验现象是( )。
①1、3、5号试管内都呈蓝色 ②3组实验中甲组和乙组的实验结果相同 ③4号试管内呈砖红色,其余试管内都呈蓝色 ④4号试管内呈砖红色,6号试管内呈紫色
A.①② B.①④
C.②③ D.③④
解析 1、3、5号试管加入的是蒸馏水,分别作为对照组,1、3号试管呈现斐林试剂的颜色——蓝色,5号试管呈现双缩脲试剂的颜色,也为蓝色,①正确;发芽的小麦种子匀浆液含有还原糖,加入斐林试剂后,水浴加热,4号试管内呈现砖红色,2号试管没加热,试管内不发生反应呈现蓝色,匀浆液中还含有蛋白质,加入双缩脲试剂,室温下6号试管内呈现紫色,④正确。
答案 B
【典例2】
[2011·重庆理综,30Ⅱ(1)]某兴趣小组将豆腐块灭菌,接种微生物后培养2 d,加入适量食盐, 4 经密封放置10 d后制得豆腐乳。
在保质期内,豆腐乳放置时间越长,蛋白质含量越低,短肽和氨基酸含量越高。为探究其原因,该小组取适量豆腐乳制成样液,等量加入各试管,进行了以下实验。
处理编号 处理方法 显色结果
① 37 ℃放置0 min
加入等
量双缩
脲试剂 紫色
② 37 ℃放置10 min ?
③ 37 ℃放置120 min ?
④ 100 ℃加热5 min后,37 ℃放置120
min 紫色
实验中,加入双缩脲试剂A后,样液的颜色将________。处理④中,100 ℃加热的目的是________________。如果处理③与处理④相比,显色较________,且处理③与处理②相比,显色较________,则表明豆腐乳中蛋白质被微生物产生的________ 分解,最终使短肽和氨基酸等含量增加,因此保质期内豆腐乳放置越久风味越佳。
解析 蛋白质和多肽可用双缩脲试剂进行检验,先加A液(质量浓度为0.1 g/mL的NaOH溶液)后加B液(质量浓度为0.01 g/mL的CuSO4溶液)颜色呈紫色,但实验中若只加入A液,则此颜色不变;100 ℃能使酶变性失去活性,作为对照实验;保质期内放置越久,口味越佳,说明豆腐乳中的蛋白质被微生物产生的蛋白酶分解得越彻底,所以得到的短肽和氨基酸含量越高,因此第③组相对于时间较短的第②组以及作为对照组的第④组双缩脲显色反应颜色要浅。
答案 不变 使酶失活 浅 浅 蛋白酶(肽酶)
题后归纳
物质鉴定实验中的重要操作归纳
1.加热
只有鉴定还原糖时,需要在50~65 ℃温水浴中加热才能出现砖红色沉淀,其余两个实验不需加热。
2.用量
鉴定蛋白质时,如待测组织样液为2 mL,则A液为1 mL,B液为4滴。注意B液用量不能过量,否则会与A液产生蓝色Cu(OH)2沉淀,干扰实验的紫色现象。
3.显微镜
脂肪鉴定时可用显微镜,如要观察橘黄色脂肪颗粒,则需要在显微镜下观察。
4.物质鉴定中常见试剂使用方法及现象整合 5 待测物质 常用试剂 使用方法 实验现象
脂肪 苏丹 Ⅲ染液 在待测液体中直接加入试剂后观察;或对待测组织装片滴加试剂染色后,在显微镜下观察 橘黄色反应
苏丹Ⅳ染液 红色反应
还原糖 斐林试剂 在待测物质的溶液中,加入相应试剂后,在50~65 ℃条件下水浴加热 砖红色反应
蛋白质 双缩脲试剂 在待测样液中加入试剂,摇匀观察 紫色反应
淀粉 碘液 在淀粉溶液中滴加碘液 蓝色反应