陆道培医院《流式细胞术进行急性白血病系别判断》专题讲座

慢性淋巴细胞白血病的诊断与鉴别诊断南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院淋巴肿瘤创新团队刘澎吴雨洁李建勇一、CLL的诊断慢性淋巴细胞白血病：定义•CLL requires the presence of at least 5×109 B lymphocytes [monoclonal lymphocytes with a CLL phenotype. WHO 2008]/L in the peripheral blood. The clonality of the circulating B lymphocytes needs to be confirmed by flow cytometry.The leukemia cells found in the blood smear are characteristically small, mature lymphocytes•SLL requires lymphadenopathy, no cytopenias due to BM infiltration by CLL/SLL and <5×109/L PB B-cells.<5×109/L是否可能是CLL？？Hallek M et al Blood2008111:5446CLL诊断标准(IWCLL)•B淋巴细胞≥5000/μl, ≥3月例外？(ALC 5000/μl,1988/1996)–<5000/μl为单克隆B淋巴细胞增多症(MBL)或小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)•形态学：小的成熟淋巴细胞•免疫表型特征–共表达CD19、CD5、CD23–不或弱表达FMC-7、CD22、CD79β–克隆性(单纯κ或λ)表面免疫球蛋白(smIg)(IgM±IgD)，弱表达或不表达Hallek M, et al. Blood, 2008, 111: 5446CLL诊断•临床：肝、脾、淋巴结肿大•血象：全血细胞计数•形态学：外周血涂片、骨髓涂片；骨髓活检•流式细胞术免疫分型、免疫组织化学项目名称结果单位参考范围项目名称结果单位参考范围1 WBC 白细胞计数34.52 10^9/L 4.0-10.02 LY# 淋巴细胞29.65 10^9/L 0.08-4.003 MO# 单核细胞计数0.59 10^9/L 0.08-0.904 NE# 中性粒细胞计数 4.046 10^9/L 2.00-8.005 EO# 嗜酸性细胞计数0.21 10^9/L 0.00-0.506 BA# 嗜碱性细胞计数0.03 10^9/L 0.00-0.207 LY% 淋巴细胞85.90 % 20.00-40.008 MO% 单核细胞 1.70 % 3.00-8.009 NE% 中性粒细胞11.70 % 40.00-75.0010 EO% 嗜酸性细胞0.6 % 0.00-5.0011 BA% 嗜碱性细胞0.1 % 0.00-2.0012 RBC 红细胞计数 4.52 10^12/L 3.50-5.5013 HGB 血红蛋白140 g/L 110-16014 HGB 红细胞压积0.41 0.35-0.5815 MCV 平均红细胞体积88.40 fL 80.00-100.0016 MCH 平均血红蛋白含量30.10 Pg 27.00-35.0017 MCHC平均血红蛋白浓度341 g/L 320-36018 RDW 红细胞分布宽度11.70 10.00-15.7019 PLT 血小板计数165 10^9/L 100-30020 PCT血小板压积0.16 l/l 0.11-0.2721 MPV 平均血小板体积10.0 fL 6.0-14.022 PDW 血小板分布宽度10.9 10.0-17.023 Ret% 网织红细胞 1.49 0.5-2.0姓名：某某某性别：男年龄：75岁样本类型：血液就诊卡号：1234567 样本号：102 科室：综合病区病区：床号：申请日期：2010-09-21血常规慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞形态学B 淋巴细胞计数检测方法Hanson CA. Blood,2009,113,6495B 细胞：CD19流式细胞术免疫分型淋巴细胞增殖性疾病（克隆扩增）确定B细胞的克隆性正常单克隆单克隆CD5CD19FMC-7CD20CD22CD23kappaCD38lambdaZAP-70CD19CD19CD19美罗华FC FC R Hallek M,et al. Lancet,2010,376:1164CD19+淋巴细胞增多的鉴别诊断Dighiero G, Hamblin TJ. Lancet,2008,371,1017FISH:t(11;14)/CCND1B-CLPDRMH积分系统Matutes E, et al. Leukemia,1994,8(10):1640CLL免疫表型（400例）8/400（2%）CD2阳性65%-96%典型CLL免疫表型非典型CLL免疫表型B-chronic lymphoid leukemia积分B-NHL白血病期积分B细胞疾病‘CLL’标志积分与CLL细胞形态a31 CLL/PL 13 mixed cell typeCD79b改善CLL积分系统Non-CLL B-CLPD n=166Moreau EJ, et al. Am J Clin Pathol,1997,108(4):378不典型CLL或CLL/PL：5分30%（20/65）；MCL：3分10%（3/29）CD5CD19CD19FMC-7CD23CD19CD20CD10kappalambdasIg典型CLL 免疫表型MCL ：D-典型；E-不常见CD19CD148Miguet L,et al. J Proteomic Res,2009,8,3346套细胞淋巴瘤慢性淋巴细胞白血病正常对照CD148Palumbo GA,et al. Leuk Res,2009,33:1212CD200慢性淋巴细胞淋巴瘤套细胞淋巴瘤CD19CD5CD200CD200CD148CD200CD148P=0.0002P<0.0001P=0.0051P<0.0001P=0.0013P=0.0002P=0.0364P=0.5756P=0.3856P<0.0001P=0.2979P=0.0682CCND1-MCLCCND1阴性FISH:t(11;14)Sox11Baseggio L,et al. Haematologica,2010,95:604免疫表型特征•表面免疫球蛋白（sIg）–限制性sIg轻链：23/24moderate-strong；κ:λ=69%:31%–IgM+IgD：58%；IgM：34%；IgM+IgG：7%•CD23 dimly positive：33%•CD43 dimly positive：3/24(12%)；其中2例CD23+CD43+•CD22、CD20strongly positive•CD10：均阴性•HCL典型标志：CD11c 8%阳性；CD103/CD25阴性CD5+SMZL CD5-SMZL细胞遗传学异常17p13(p53基因)缺失11q22(ATM基因)缺失间期荧光原位杂交（I-FISH）箭头所示为p53基因第8外显子273位密码子CGT>CATCLL治疗策略1.无del(17p)/del(11q) CLL治疗策略2.del(17p) CLL治疗策略3.del(11q) CLL的治疗策略v.1. 2011NCCN治疗指征1.进行性骨髓衰竭的证据：表现为血红蛋白和/或血小板进行性减少。

异体CART在陆道培医院取得成功截止目前，陆道培医院已经成功完成560多例CART细胞治疗难治复发B急淋临床试验，经过我院多年的探索，CART 疗效显著，毒副作用可控，为许多难治/复发的白血病患者赢得了生机。

但是，有些患者肿瘤负荷过高，无法采集自体T细胞进行培养。

而异体CART治疗，存在疗效差，容易被排斥的问题，国际国内都经验不多。

日前，在普通血液及免疫治疗科12病区，一例采自患者姐姐的CART治疗再次在一位17岁少年身上发生了奇迹般的效果。

刘XX，一个花季少年，一个本应在学校里肆意洒脱，汲取知识的大男孩。

却在1年前因为病痛的折磨而经历艰苦的求医之路，然而幸运却始终没有降临这个甘肃籍精准扶贫的极度贫困家庭。

在外院经历了化疗7疗程后仍未完全缓解。

2019年3月，他的父母毅然决然地卖掉老家的房子，带上所有的积蓄决定北上求医，来到陆道培医院普通血液及免疫治疗科12病区住院。

但是经过我院的MICM等一系列检查，患者骨髓中有96%的恶性幼稚B淋巴细胞。

经过半个月的化疗，“白血病”的恶魔之手仍未放过这个羸弱的男孩。

4月22日，查外周血仍可见78%的恶性幼稚细胞。

看到了他父亲那绝望的身影，他母亲无声的哭泣。

我们决定放手一搏，给他上CART。

因为他肿瘤负荷太高无法采集自体淋巴细胞培养CART，万般无奈之下，虽然非常担心异体CART可能效果较差。

但还好患者有同胞全和的姐姐，经过与CART制备公司的反复协商最终确定了治疗方案。

5月6日输注其姐姐的CART细胞。

回输后，他持续高烧、低血压、肺部感染等，本以为历经万千磨难他可以得到病情缓解，但回输后第15天的评估，骨髓残留却有81.19%恶性幼稚细胞。

难道上天就不能给这个本就雪上加霜的家庭一丝曙光么？奇迹真的出现了！随后，患者出现持续40℃高热、外周血CART 比例上升到了45%，眼底出血、凝血功能紊乱等细胞因子反应出现，回输后第30天，再次骨髓检测显示，患者残留未见恶性幼稚细胞——我们成功了！这个男孩终于获得了异体CART治疗的成功。

118例急性白血病五色流式细胞术免疫分型与FAB分型的结果分析陈建安;周静;朱学海;丁茜;何永明;李晓婷;梁燕【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2015(000)001【摘要】目的：探讨急性白血病五色流式细胞术免疫分型与FAB分型的关系和表达规律。

方法通过CD45/SSC设门的五色流式细胞仪检测118例急性白血病患者骨髓细胞的表面抗原，并进行免疫表型分析。

结果在88例AML患者中髓系相关抗原的表达率依次为CD33(93.2%)>CD13(88.6%)>CD117(86.4%)，部分AML 患者伴表达淋系相关抗原，主要为CD56(25.2%)、CD7(11.3%)、CD19(2.2%)、CD20(2.2%)；M3中高表达CD117(83.7%)、CD13(83.7%)、CD33(83.7%)，但均不表达CD34、HLA-DR，且SSC较大；M4、M5中可见CD64、CD4、CD14明显表达高于AML其他亚型(P<0.01)。

19例B-ALL患者中CD19的表达率最高(100%)，其次为CD34(90.1%)、HLA-DR (90.1%)、CD10(90.1%)；9例T-ALL 患者中CD7的表达率最高(100%)，其次为CD4(77.8%)、CD5(77.8%)、CD2(66.7%)、CD3(66.7%)、CD34(55.6%)。

结论通过五色流式细胞术进行白血病免疫分型是形态学分型诊断重要的补充，能够提供更客观的诊断依据，对提高急性白血病的诊断正确率、预后判断和治疗方案的选择有重要的意义。

%Objective To study the relationship between the immunophenotype by five-color flow cytometry and FAB phenotype in Acute leukemia. Methods Immunophenotyping of 118 cases of bone marrow specimens from patients with acute leukemia were analyzed by five-color FCM withCD45/SSC double parameters and scatter spot picture. Results In 88 cases of acute myeloid leukemia (AML), the myeloid-associated antigens were CD33 (93.2%), CD13 (88.6%), and CD117 (11.3%), respectively, and the lymphoid-associated antigens were CD56 (25.2%), CD7 (11.3%), CD19 (2.2%) and CD20 (2.2%), respectively. The antigens mainly expressed in M3 were CD117 (83.7%), CD13 (83.7%), CD33 (83.7%), and bigger SSC, but not CD34 and HLA-DR. The antigens mainly expressed in M4 and M5 wereCD64, CD4 and CD14 (P<0.01). In 19 cases of patients with B-ALL, the expression rate of CD19 was the highest (100%), followed by CD34 (90.1%), HLA-DR (90.1%) and CD10 (90.1%). In 9 cases of patients with T-ALL, the ex-pression rate of CD7 was the highest (100%), followed by CD4 (77.8%), CD5 (77.8%), CD2 (66.7%), CD3 (66.7%) and CD34 (55.6%). Conclusion Based on a more objective diagnostic basis, five-color flow cytometry is extremely impor-tant in improving the diagnostic accuracy, therapy and prognosis in acute leukemia.【总页数】4页(P56-58,59)【作者】陈建安;周静;朱学海;丁茜;何永明;李晓婷;梁燕【作者单位】中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110【正文语种】中文【中图分类】R733.71【相关文献】1.FAB分型、免疫分型和基因分型联合检测急性白血病 [J], 李玲;王蕊;钟笛;温丙昭;王晓敏;许建华;曲建华;陈贩2.505例白血病应用流式细胞术免疫分型与FAB分型的结果分析 [J], 杨峥;莫武宁;李山;秦雪;兰会华;陈正立3.流式细胞术在急性白血病免疫分型中的应用探讨 [J], 陈敬潮;师江龙;张苏伟4.流式细胞术在急性白血病免疫分型中的临床应用 [J], 汪梅花;赵康5.流式细胞术对急性白血病免疫分型的临床意义 [J], 金莹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

流式细胞术分析阿霉素抑制白血病细胞的效应史立言;陈为;马畅;曹秀琪;刘岩;李妍【摘要】目的观察不同浓度阿霉素对小鼠T淋巴细胞白血病YAC-1细胞增殖及凋亡的影响,探讨给药后阿霉素在白血病细胞中相对含量变化.方法培养YAC-1细胞,加入分别加入不同浓度(0.3125、0.625、1.25、2.5 h和5μmol∕L)的阿霉素,继续培养24 h,显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和阿霉素红色荧光,红色荧光强度可指示细胞内药物含量.不同浓度阿霉素处理细胞72 h,台盼蓝染色法计数细胞并计算细胞增殖抑制率.结果高浓度阿霉素(2.5和5μmol∕L)导致细胞肿胀、胞浆内空泡增加;阿霉素以浓度依赖的方式抑制YAC-1细胞增殖;凋亡及坏死百分率以及细胞内阿霉素含量呈现剂量依赖性增加.结论 YAC-1细胞对阿霉素敏感,采用流式细胞术可实现对细胞内药物含量和抗肿瘤效应的定量分析.【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2017(038)002【总页数】3页(P84-86)【关键词】阿霉素;细胞周期;凋亡【作者】史立言;陈为;马畅;曹秀琪;刘岩;李妍【作者单位】延边大学医学部,吉林延吉 133002;延边大学医学部,吉林延吉133002;吉林医药学院检验学院,吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院,吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院,吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院,吉林吉林 132013【正文语种】中文【中图分类】R595.3阿霉素(Adriamycin，ADR)是一种广谱抗肿瘤药物，临床上用于白血病、淋巴瘤、乳腺癌和肝癌等肿瘤的治疗[1]。

但其对骨髓和胃肠道有毒副作用，长期应用阿霉素还导致剂量依赖的心脏毒性效应[2]。

阿霉素属蒽环类抗肿瘤药，是P糖蛋白(P glycoprotein，P-gp)的底物，P-gp将阿霉素外排从而产生耐药性[3]。

用药前选择敏感药物是控制白血病病情和提高治愈的关键。