黄腐酸处理对苹果树腐烂病菌的抑制作用及对苹果树防御酶活性的影响_陈臻
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苹果腐烂病的发生及防治作者:董九岭来源:《农民致富之友(上半月)》 2020年第22期董九岭苹果腐烂病是能够造成苹果树整株死亡和全园毁灭的一种严重病害。
苹果树腐烂病于1903年在日本首次发现,1916年开始传入我国,现已成为世界苹果生产中危害最为严重的枝干病害。
我国苹果腐烂病的首发地为辽宁省盖县熊岳城(现辽宁省营口市鲅鱼圈区熊岳镇),目前我国各苹果栽培区均有发生,其中北方地区发生尤为严重。
苹果腐烂病主要发生在苹果成树的基部主枝、主干、以及侧枝和较大的辅养枝上,发生严重时结果枝组、果台及果台副稍、干桩枝、剪口等处也发病;有些地块,苗木及未结果的幼树也会染病;果实发病较为少见。
一、发病症状苹果腐烂病有溃疡型、枝枯型和果实发病3种类型。
溃疡型:皮层发病的部位初期呈红褐色,稍有隆起,表面会出现水渍状,病部组织松软,用手一摁会有凹陷;发病后期腐烂的皮层为鲜红褐色,由于腐烂而变为潮湿状,闻起来有酒糟的味道,病斑与健康皮层间边缘不清晰,有的病斑部位出现现深浅相同的同心圆轮纹,病斑常会流趟出黄褐色的稍粘稠液体,病皮极易与枝干分离。
枝枯型:主要发生在冬春季节,一般在小枝条上出现,病斑无水渍状现象,有的病斑下凹,染病枝生长势迅速转弱;开花数量多,但落花落果现象严重,花后出现叶片窄小、发黄等现象;随着发病加重,当枝条病斑环绕一周后,病枝在花会枯死。
果实发病:果实的发病病斑为红褐色,呈圆形或不规则状,有轮状斑纹,病部边缘较清晰;病组织腐烂,略带酒糟气味。
病斑在扩展时,中部常较快地形成黑色小粒点,散生或集生,有时略呈轮纹状排列。
潮湿时亦可涌出黄色细小卷丝状物。
病部表皮剥离。
二、病原菌及发病规律苹果腐烂病为真菌病害,病原菌为子囊菌亚门苹果黑腐皮壳菌。
侵染后病菌形成圆球形状的分生孢子器和子囊壳,再生成分生孢子和子囊孢子。
病菌菌体主要存留在苹果树残枝内,存活期可长达4年以上,雨季等时期空气湿度较大时分生孢子器能够分生大量的分生孢子,还可形成孢子角。
苹果树腐烂病发生原因及防治措施
苹果树腐烂病是一种常见的病害,主要发生于苹果树的果实和枝干上。
以下是造成苹果树腐烂病发生的一些常见原因:
1. 天气因素:高温潮湿的气候条件容易导致苹果树腐烂病的发生。
雨水强烈冲刷果实表面和枝干上的创伤,使微生物易于感染苹果树。
2. 创伤:果实或枝干上的创伤,如划伤、割伤、蚤虫咬伤等,会导致果实和枝干受到感染。
3. 病原菌:苹果腐烂病的主要病原菌有青霉菌、腐霉菌和炭疽菌等。
这些病原菌会侵入果实或枝干内部,并使其腐烂。
针对苹果树腐烂病,可以采取以下防治措施:
1. 清除果园周围的杂草和落叶,保持果园的通风和光照,减少病菌的生存环境。
2. 手工采摘果实时,注意不要损伤果实,避免给病菌提供侵入的途径。
3. 使用植物保护剂进行防治,如石硫合剂、多菌灵等。
根据病情严重程度和药剂的使用规范,定期进行喷洒。
4. 在果实和枝干上发现病斑时,及时采摘并销毁,避免它们成为病菌的繁殖源。
5. 加强苹果树的肥料和水分管理,增强苹果树的抗病能力,以减少病害的发生。
总之,苹果树腐烂病的防治需要注意果园的卫生管理和病害的早期发现与处理,采取综合措施进行防治,以减少病害的发生。
苹果腐烂病综合防治措施苹果腐烂病是一种常见的果树病害,其主要病因为真菌感染。
苹果腐烂病在果树生长期内引起黄叶、花、果实腐烂和萎缩等症状,并严重影响苹果果实的品质和产量。
因此,苹果腐烂病的综合防治措施非常重要。
1. 种植抗病品种选择抗病品种是防治苹果腐烂病的首要措施。
一些品种比其他品种更抗病,例如富士、桂冠、红富士、国光等。
这些品种抗病性强,果实较大、品质好,因此是值得推广的苹果品种。
2. 精细管理管理是预防、治疗和控制苹果腐烂病的重要手段。
管理包括以下几个方面:(1)留意树冠清理:清理枝干、叶子和其他废物有助于避免苹果腐烂病和其他病害。
同时,这也有助于提高空气流通和光照,促进果实的发育。
(2)进行适当的修剪:剪除感染区域有助于降低病害反应的风险,剪枝可以增加日照强度和树内空气流通。
(3)杀虫防治:一些害虫会传播疾病。
因此,使用杀虫剂可以防止害虫的传播,减少果实的损失。
(4)合理施肥:合理施肥不仅可以提高树木的抗病性,还可以增加果实质量和数量。
3. 生物农药防治生物农药防治是比较环保和安全的防治方法。
目前,市面上有许多生物农药产品可供选择,例如枯草杆菌、乳酸菌、木霉等。
这些生物农药可以控制苹果腐烂病的进一步传播,而且对人体和环境无害。
化学农药防治是控制苹果腐烂病的一种有效方法。
主要应用有乙蒜环唑、多菌灵等农药。
但化学农药的使用应慎重,避免过度使用、误用和滥用。
同时,使用化学农药前应了解农药的作用机理、适用范围以及药量等信息。
5. 综合防治综合防治是预防和控制苹果腐烂病的最佳方法。
这意味着使用多种不同的防治方式,例如生物农药、化学农药和清除影响苹果树生长的因素。
通过组合使用不同的防治方式,可以降低苹果腐烂病发生的风险,保障苹果的品质和产量。
8种药剂对苹果树腐烂病的田间防效评价焦浩;范艳云;高小宁;黄丽丽;王小波;王丽【摘要】为了有效防治苹果树腐烂病,通过夏季药剂涂干和春季病斑刮治试验,评价了8种药剂对苹果树腐烂病的田间防治效果.连续3 a(2012-2014年)的预防试验结果显示:采用戊唑醇、噻霉酮、链霉菌Hhs.015、苯醚甲环唑和农抗120五种药剂在7月份连续2次喷涂苹果树枝干,能够有效地抑制腐烂病新病斑的形成,第2年新生病斑减少百分率的均值介于75.8%~84.1%,表现出稳定的防治效果;其中以43%的戊唑醇200倍液和1.6%的噻霉酮30倍液的效果相对较好,新生病斑减少百分率均值分别达到了84.1%和81.6%.连续2 a(2012-2013年)的病斑治疗试验结果显示:戊唑醇表现出优良的病斑治疗效果,处理的40个病疤中只有1个复发,复发率为2.5%;噻霉酮、苯醚甲环唑、拂蓝克和腐植酸·铜的治疗效果次之,病疤复发率为5%;进一步测量了药剂对伤口愈合的促进作用,发现拂蓝克和戊唑醇促进愈伤组织形成的能力较强,其愈伤组织宽度均值分别达到了16.7 mm和15.3 mm,显著高于其他药剂处理.以上结果说明,夏季在树干上喷涂适宜的化学药剂可以显著降低新生病疤的发生数量,从而起到对苹果树腐烂病的预防作用.在苹果树腐烂病的化学防治上要树立预防为主、刮治为辅的理念,即在夏季选择适宜的药剂喷涂树干2次(间隔7~10 d),以降低新病疤的发生数量,然后再结合病疤刮治措施进行防治.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2015(044)010【总页数】5页(P95-99)【关键词】苹果树腐烂病;药剂涂干;病斑刮治;新病斑形成;防治效果【作者】焦浩;范艳云;高小宁;黄丽丽;王小波;王丽【作者单位】宝鸡职业技术学院,陕西宝鸡721013;西北农林科技大学植物保护学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学植物保护学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学植物保护学院,陕西杨凌712100;宝鸡职业技术学院,陕西宝鸡721013;宝鸡市农产品质量安全监督检测中心,陕西宝鸡721004【正文语种】中文【中图分类】S436.611.1苹果是世界四大水果之一,也是我国种植面积最大、产量最高的水果, 2010年我国苹果产量已达到3 300余万t,约占世界总量的47.8%,成为世界苹果第一生产大国[1]。
生物制剂在苹果树腐烂病防治中的应用作者:张娟来源:《农民致富之友(上半月)》 2019年第15期苹果树腐烂病是一种分布较广,对苹果树的生长有着较大危害的常见病害,苹果树腐烂病的发生,会严重降低苹果的产量,损害苹果的品质,影响种植效益。
该病害会感染果树主杆、枝杈,感染部位会根据感染程度的不同出现不同程度的腐烂,其病害的发生高峰通常在春季和冬季。
为了提高对苹果树腐烂病的防治水平,近年来,我镇对生物制剂在苹果树腐烂病防治效果进行了应用研究。
1、生物制剂对苹果树腐烂病防治效果的研究成果及分析①多粘类芽孢杆菌对腐烂病菌丝生长的抑制效果多粘类芽孢杆菌对腐烂病菌的菌丝生长有着较好的抑制效果,在研究中表明,使用190-220mg/L的多粘类芽孢杆菌可以有效的抑制苹果树腐烂病菌的菌丝生长,利用多粘类芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌搭配使用,可以起到更加明显的义军效果,调配200mg/L多粘类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的混合生物制剂,可以达到100%的抑菌率。
在多粘类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的对比试验中发现,在同样剂量的基础条件下,多粘类芽孢杆菌比枯草芽孢杆菌抑菌效果更好,因此,可以得出:抑制苹果树腐烂病菌丝生长,多粘类芽孢杆菌更加适合。
②多抗霉素及苦参碱对腐烂病菌丝生长的抑制效果在对多抗霉素及苦参碱的抑菌试验中发现,使用浓度过低时,这两种生物制剂对菌丝生长的抑制效果较低,选取浓度为45ml/L浓度的多抗霉素,对苹果树腐烂病菌丝进行抑制时,菌落直径保持在7mm-8.5mm之间,抑菌率为90.23%,而当浓度提升到220ml/L时,其抑菌率达到100%,菌落直径为0mm,在不同浓度的试验中发现,使用多抗霉素作为抑菌剂,需要浓度保持在220ml/L以上才能达到让菌丝死亡的目的。
而在苦参碱试验中也发现了相同的规律,当苦参碱浓度为0.25ml/L时,其菌落直径为54.8mm-63.5mm,抑菌率为35.4%左右,当浓度提高到2.5ml/L后,其抑菌率得到了显著提升,具体抑菌率为92.3%,再次提高苦参碱浓度,使浓度达到5ml/L后,此时菌落直径为0mm,抑菌率达到100%,进而致病菌丝全部死亡。
苹果腐烂病综合防治技术及成功实践2011-04-01 14:11:46| 分类:果业——病⾍害 | 标签: |字号⼤中⼩订阅⽬录第⼀部分苹果腐烂病综合防治技术 4第⼀篇束怀瑞院⼠对我国苹果腐烂病防控的指导意见 4第⼆篇陈策研究员苹果树腐烂病防治策略 7第三篇国家苹果产业技术体系病⾍害防控研究室苹果树腐烂病综合防治技术 12第四篇陕西省近年腐烂病发⽣新特点及控制蔓延的应急对策 16第五篇曹克强论苹果树腐烂病的发⽣特点 18第六篇史继东:春防侵染、夏防扩展、 20秋防蔓延积极应对苹果腐烂病秋冬发病⾼峰 20第七篇好思路造就好⽅法,普德劲助推我国进⼊—— 苹果树腐烂病防治元年 22第⼋篇苹果树腐烂病疤药剂涂防效果调查 25第九篇综合各种措施防控腐烂病 26第⼗篇 6⽉管果头⼀件 药肥涂⼲防腐烂腐烂病不能重治轻防 27第⼗⼀篇腐烂病对果农的⾃⽩ 27第⼗⼆篇科学防治腐烂病抓关键 28第⼗三篇腐烂病要进⾏综合防治 29第⼗四篇冬防腐烂应全树进⾏ 31第⼗五篇冬季果园腐烂病防治⽅案 32附录1:苹果⽣产60年腐烂病5次⼤流⾏ 32附录2:⼏种腐烂病防治药剂介绍 34第⼆部分苹果腐烂病防治成功实践 37⼀、果友⽪腐康的镜⾯防⽔效果令⼈叹服 37⼆、泥⼟抹腐烂越抹越烂 38三、临渭丁百林:普德劲涂⼲效果好 38四、腐烂病不能重治轻防,六七⽉涂⼲新选择:腐烂病诱抗康复剂——普德劲 39五、李建国副教授:预防腐烂病⾸选普德劲 41六、余红旗⽼师:普德劲预防腐烂病真得劲 42七、果树冒油莫要慌普德劲帮你忙 43⼋、普德劲使⽤时应注意的问题 45九、普德劲的⼗⼤功效 45⼗、防治腐烂病快涂普德劲 48⼗⼀、⽩⽔郭冯斌:普德劲安全放⼼⽤ 49⼗⼆、临潼周云飞:普德劲来了! 50⼗三、防腐烂新⽅案 51⼗四、王刚⽼师:普德劲消灭树杆油点真馋⽕ 51⼗五、宁县栗笃瑞:盛夏防腐烂快⽤普德劲 52⼗六、临渭党改果:苹果树腐烂病就⽤普德劲 53⼗七、合阳党恒福:普德劲长"劲"克腐烂 54⼗⼋、防治腐烂病涂⼲莫放松 55⼗九、旬⾢吹响了腐烂病围剿战的号⾓ 58⼆⼗、旬⾢潘有民:果友齐夸普德劲 58⼆⼗⼀、⼀棵腐烂病果树的表⽩ 59⼆⼗⼆、合阳王永绪:防控腐烂病药剂涂杆最有效 60⼆⼗三、秋季去⼤枝就⽤⽪腐康,初冬刮腐烂还⽤⽪腐康 61⼆⼗四、三原果农:⽪腐康治腐烂治⼀个好⼀个 63⼆⼗五、礼泉果农:⽪腐康疗效很满意 64⼆⼗六、歼灭腐烂病的杀⼿——⽪腐康 65⼆⼗七、乾县果农:⽪腐康疗效很好 65⼆⼗⼋、果友⽪腐康苹果树的保护神 66⼆⼗九、潘有民:⽪腐康就是好 66三⼗、武功果农:⽪腐康疗效很好 68三⼗⼀、夜话果树腐烂病 68三⼗⼆、兴平果农:⽪腐康疗效很好 70三⼗三、同株伤、病紧相连治疗效果两重天,愈合剂还是果友⽪腐康好 70三⼗四、轻视腐烂病毁你摇钱树 71三⼗五、秦安县刘新院:都是协会救了我的树 72三⼗六、秦安县冯彦军:防腐烂离不开普德劲 72三⼗七、秦安县李贵祥:普德劲真个好 73三⼗⼋、果农致富谢协会 74三⼗九、丁百林:⽪腐康、普德劲防治腐烂病效果就是好,这是我亲⾃试验的 74四⼗、铜川果农:果友⽪腐康是果农⼼中的保护神 76四⼗⼀、普德劲、⽪腐康治疗腐烂嫽着呢 77四⼗⼆、普德劲⼗⼤功效显神通 79四⼗三、两把刷⼦ 80四⼗四、普德劲是果树保护神 82四⼗五、防治腐烂病快⽤⽪腐康 82四⼗六、冯彦军:防腐烂离不开普德劲 83四⼗七、防控苹果腐烂病⾸选普德劲 83四⼗⼋、耀州 85四⼗九、宁县栗瑞红:⽤了普德劲,我900多棵树没有⼀个腐烂 86五⼗、宁县栗笃瑞:防控腐烂冬前涂⼲与否两重天 87五⼗⼀、苹果树腐烂病可防、可控、可治 89五⼗⼆、⽪腐康药效果显 90第⼀部分苹果腐烂病综合防治技术第⼀篇束怀瑞院⼠对我国苹果腐烂病防控的指导意见束怀瑞教授,中国⼯程院院⼠,⼭东农业⼤学教授,博⼠⽣导师。
苹果树腐烂病的原因及防治方法苹果树腐烂病是我国苹果产区危害较严重的病害之一,俗称臭皮病、烂皮病、串皮病等,在我国北方苹果产区腐烂病发病非常严重,下面一起来看看苹果树腐烂病的原因及防治方法吧!苹果树腐烂病为害症状病树枝干受害,病斑有溃疡和枝枯两种类型。
溃疡型病部呈红褐色,水渍状,略隆起,病组织松软腐烂,常流出黄褐色汁液,有酒糟味,后期干缩,下陷,病部有明显的小黑点(即分生孢子器),潮湿时从小黑点中涌出一条橘黄色卷须状物。
枝枯型多发生在小枝、果台、干桩等部位,病部不呈水渍状,迅速失水干枯造成全枝枯死,上生黑色小粒点。
果实受害,病斑暗红褐色,圆形或不规则形,有轮纹,呈软腐状,略带酒糟味,病斑中部常有明显的小黑点。
苹果树腐烂病传播途径苹果树腐烂病主要以菌丝体、分生孢子器和子囊壳在病树组织及残体内越冬,病菌可在病部存活4年左右。
次年分生孢子器内排出分生孢子,靠雨水飞溅传播,从伤口侵入。
病菌具有潜伏浸染特性,当树体或其局部组织衰弱时,便会扩展蔓延。
一般3~5月浸染,7~8月开始发病,早春为发病高峰期,晚春后抗病力增强,发病锐减。
苹果树腐烂病的发生与树势、伤口数目、愈伤能力等密切相关,管理粗放和周期性冻害是主要流行因素。
苹果树腐烂病发病条件腐烂病菌分生孢子和子囊孢子的萌发适温25~30℃,在5℃条件下经较长时间也能萌发。
栽培管理粗放和冻害是腐烂病流行的主要诱因。
土壤有机质少、土壤板结或保水保肥力差,根系生长不良,复合肥不足,偏施氮肥,结果过多,大小年严重,早期落叶等造成树势衰弱的果园,发病均较重,反之则轻。
地势低洼后期果园积水时间过长及贪青徒长、休眠期延迟而易受冻害果园,发病也重。
北方周期性冻害,造成树体大面积树皮冻伤是腐烂病大范围流行的重要原因。
苹果树腐烂病防治技术1、加强栽培管理:壮树抗病,合理修剪,调整树势,调节树体负载量,克服大小年现象,增施有机肥,合理搭配氮、磷、钾肥和中微量元素,搞好果树防寒,减少冻伤口,结果树进行涂白,常用涂白剂,石灰:食盐:水:动物油(10:1:30~35:0.2),一般在果树落叶后进行,涂干高度2米。
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Plant Protection
收稿日期: 2015-05-14 修订日期:
2015-09-06
基金项目:
国家星火计划(
2013GA860001);公益性行业(农业)科研专项(201203034)
*通信作者E-mail:xubl@gsau.edu.cn
#为并列第一作者
黄腐酸处理对苹果树腐烂病菌的抑制作用及对苹果树防御酶活性的影响
陈 臻#, 侯宝宏#, 王卫雄,
徐秉良
*
(甘肃农业大学草业学院,兰州
730070
)
摘要
黄腐酸作为一种广谱性植物生长调节剂,具有稳定可靠的抗逆增产效果。本试验以黄腐酸为生长调节剂,研
究其对苹果树腐烂病菌(Valsa mali)
的抑制作用及对苹果树皮抗腐烂病的影响。试验结果表明,黄腐酸能抑制苹
果树腐烂病菌菌丝的生长,浓度越大抑制效果越明显。经黄腐酸处理后,苹果树腐烂病组织中SOD
、POD、PAL和
CAT均呈现先升高后降低的趋势。其中黄腐酸处理后SOD活性于14d达到峰值,而其他酶活性均在21d达到最大值。说明黄腐酸能显著提高苹果树体内相关防御酶系的活性,很大程度上提高了植物的免疫力,即增强了苹果树的抗病性。关键词 黄腐酸; 苹果树腐烂病菌; 抑制作用; 防御酶
中图分类号: S 436.611.11 文献标识码: A DOI: 10.3969/j.issn.0529-1542.2016.03.013
Inhibition of fulvic acid to Valsa mali and its effect on the
activity of defense enzyme in apple tree
Chen Zhen, Hou Baohong, Wang Weixiong, Xu Binglian
g
(College of Prataculture,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China)
Abstract As one of the broad-spectrum plant growth regulators,fulvic acid can improve crop resistance and in-
crease the yield stably and reliably.The inhibition of fulvic acid against Valsa mali and its effect on the activity of
defense enzymes,including SOD,POD,PPO,PAL and CAT,were determined.The results showed that fulvicacid could inhibit the growth of V.mali hyphae,and the inhibition effect increased with the increase of concen-
tration.The activities of SOD,POD,PPO,PAL and CAT increased at first and then decreased smoothly aftertreatment by fulvic acid.The SOD activity reached the peak14 days after treatment,and the activity of other de-
fense enzymes reached the maximum21 days after treatment.These results revealed that fulvic acid could signifi-
cantly increase the activity of the tested defense enzymes in apple trees,and improve the immunity and disease re
-
sistance of the apple tree.Key words fulvic acid; Valsa mali; inhibition; defense enzyme
近20年来,我国苹果产业发展迅速。自1993年起,无论种植面积还是总产量,均名列世界第一。2008年,据农业部统计,我国苹果栽培面积和产量为199.22万hm2和984.66万t,分别占世界苹果栽培总面积和总产量的41.09%和42.88%,属世界第一大苹果生产国。但随着苹果树大面积种植,苹果树腐烂病已经成为限制苹果产业发展的一个重要因素[1]。2013年,研究者对我国13个重点苹果园调查发现,轻者发病率25%~35%,重者达70%~80%,平均发病率株60%以上[2]。目前,
生产上对
苹果树腐烂病的防治主要采用化学防治,如福美胂,但福美胂由于毒性大、残留多而被禁用,因此,寻求一种诱导苹果树产生抗性,并对环境友好的高效肥或防治药剂已成为热点问题。黄腐酸(fulvic acid,FA)
是一种既溶于酸性溶
液,又溶于碱性溶液的腐植酸,也是一种兼有植物2016
生长调节剂功能的新型肥料。有关研究表明,在果树叶面喷施黄腐酸既可提高产量,又能增强多种果树的抗性[3]。马焕普等[3]在葡萄叶面喷施黄腐酸,降低了白腐病发病率,表明其可能影响了葡萄生理作用。有关研究也表明,黄腐酸还能增加酶活性和酚酸类抗性物质的含量,改善植物的新陈代谢过程[4]。此外,黄腐酸作为一种富含高活性物质的腐植酸,其不仅具有腐植酸的一般特征,又具有分子量小易被生物吸收、功能团生理活性大、易溶于水等特征,并且能够抑制病菌DNA的复制,减少植株发病几率,诱导作物免疫力提高,增强植株抗病能力[5],因此黄腐酸在农业中的用途很广泛[6]。本试验通过测定黄腐酸对苹果腐烂病菌的抑制作用和施用黄腐酸后苹果树腐烂病组织中各种防御酶系SOD、POD、PPO、PAL和CAT含量变化,研究了黄腐酸对苹果树皮抗腐烂病的影响,以期为今后苹果树腐烂病的绿色防治提供理论依据。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 供试果树品种苹果树品种为‘新红星’,树龄为18~21年,种植于兰州市七里河区彭家坪苹果基地。1.1.2 供试菌株苹果树腐烂病菌(Valsa mali)LZ29菌株由甘肃农业大学草业学院病原学实验室提供。1.1.3 供试药剂黄腐酸(有效成分为50g/L,永业科学研究院)600倍稀释液、0.05mol/L pH 7.8磷酸缓冲液、130mol/L甲硫氨酸、750μmol/L氮蓝四唑(NBT)、100μmol/L核黄素、100μmol/LEDTA-Na2、PVP溶液、0.05mol/L pH 6.5磷酸缓冲液、0.3%的愈创木酚、0.6%H2O2、0.05mol/L硼酸盐缓冲溶液(pH 8.8)、0.02mol/L苯丙氨酸、0.05mol/L邻苯三酚、pH 6.8磷酸缓冲溶液、0.067mol/L H2O2。1.1.4 试验仪器TU-1810紫外分光光度计、石英比色皿、恒温水浴锅、高速冷冻离心机。1.2 试验方法1.2.1 黄腐酸抑菌活性测定采用菌丝生长速率法:将黄腐酸制成不同浓度的溶液,然后按照一定比例加入到熔融的PDA培养
基中摇匀制成平板,配制成终浓度为100
、50、33、
25、20μg/mL的含药平板。用打孔器(d=5mm)在
活化5d的苹果树腐烂病菌菌落边缘打取菌饼,接种于含药PDA平板中央,每个浓度梯度为1个处理,每个处理设5个重复,以无菌水代替黄腐酸作为对照。接种后将平板置于25℃培养箱中恒温黑暗培养3d
,采用十字交叉法测量苹果树腐烂病菌菌落
直径,并计算各处理的抑菌率[7-9]和致死中浓度EC
50
[10]。
1.2.2
黄腐酸对苹果树防御酶活性的影响
试验地位于兰州市七里河区彭家坪苹果基地。选取树龄相同且患有苹果树腐烂病的苹果树,用刮刀刮取病斑部位及其周围2cm处健康部位树干表皮带回实验室于4℃保存。将带回的树干表皮用75%乙醇消毒后无菌水冲洗3次晾干备用。选黄腐酸600倍稀释溶液喷施于备用的患病组织。从施药时开始,每7d取样一次,共取样7次。分别以无菌水喷施患病组织和健康植株树干表皮作为对照,处理和对照均重复3次。1.2.2.1
黄腐酸处理后SOD活性测定
SOD活性测定参照高俊凤等[11]的方法,略作修改。粗酶液提取:称取0.2g材料放入预冷的研钵中,加入少许石英砂和2mL 0.05mol/L pH 7.8磷酸缓冲液(含1%聚乙烯吡咯烷酮,5mmol/L EDTA),
研
磨至匀浆,并用该浓度的磷酸缓冲液定容至10mL后倒入离心管中,于4℃、10 000r/min离心20min
,上
清液即酶粗提取液,处理和对照均为3次重复。SOD活性测定:向5mL离心管中分别加入0.2mL酶提取液,然后按顺序加入1.5mL pH 7.8磷酸缓冲液、0.3mL 130mol/L甲硫氨酸、0.3mL
750μmol/L NBT、0.3mL 100μmol/L EDTA-Na2
、
0.2mL蒸馏水,最后加入0.3mL 100μmol/L
核黄
素,然后光照10min,最后于560nm下测定吸光度值,空白管分别加0.2mL蒸馏水、1.5mL pH 7.8
磷酸缓冲液、0.3mL 130mol/L甲硫氨酸、0.3mL
750μmol/L NBT、0.3mL 100μmol/L EDTA-Na2
、
0.2mL蒸馏水和0.3mL 100μmol/L核黄素,各处理和对照均重复3次。
SOD活性(U·g-1)=(A光照-A560)×V
1
0.5×A光照×V2×W
式中A光照为光照管的吸光度值;A560为560nm
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