菊花的组织培养PPT课件

使用顺序 实验结果
先使用生长素，后 有利于细胞分裂， 使用细胞分裂素 但细胞不分化 先使用细胞分裂素， 细胞既分裂又分化 后使用生长素
同时使用
分化率提高
②当同时使用这两类激素时，两者用量的比例影 响植物细胞的发育方向。 生长素用量比细胞分裂 植物细胞的发育方向 素用量 有利于根的分化、抑制 比值高时 芽的形成 有利于芽的分化、抑制 比值低时 根的形成 比值适中时 促进愈伤组织的生长
一、基本过程
1、理论基础： 细胞的全能性
2、细胞分化： •概念： •特点
3、植物组织培养的基本过程
离体器官、 组织或细胞
脱分化愈伤组织源自再分化根、芽植物体
二、影响植物组织培养的因素
1、外植体的选取 不同植物的组织培养难度不同，同一种植 物的不同组织培养难度不同 2、营养 大量元素： 微量元素： 有机物： 3、植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉 素等 4、pH、温度、光照
四、实验操作
1、制备MS固体培养基
•制备各种母液 •配制培养基 •灭菌
2、外植体消毒
水洗2次→70%酒精→无菌水→氯化汞→无菌水 冲洗3次
3、接 种
四、实验操作
4、培 养
培养期间定期消毒，18－22℃，每日用日光 灯光照12小时 5、移 栽
6、栽
培
①按照不同的顺序使用这两类激素，会得 到不同的实验结果。

第四十一页，共五十七页。
实验(shíyàn)具体操作过程
〔四〕培养(péiyǎng) 无菌箱中培养(péiyǎng)，定期消毒，保持适宜的温度， 光照
第四十二页，共五十七页。
➢接种后的锥形瓶放在培 养箱或培养(péiyǎng)室中培养
。 (péiyǎng) ➢培养条件：18-22℃，
每日光照12小时。
2、培养基的配制(pèizhì)(MS培养基) ➢大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S ➢微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co ➢有机物：甘氨酸、烟酸(yān suān)、肌醇、维生素、蔗糖等 ➢植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
第十五页，共五十七页。
你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物 培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显(míngxiǎn)
第四十九页，共五十七页。
实验(shíyàn)具体操作过程
〔六〕栽培(zāipéi) 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况， 适时浇水、施肥(shī féi)，直至开花
〔三〕接种(jiēzhòng) 1、接种(jiēzhòng)室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子， 接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾 使空气消毒，酒精擦洗工作台并用紫外线照射 20分钟。
第三十三页，共五十七页。
实验(shíyàn)具体操作过程
2、无菌操作(cāozuò)要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械
使后代(hòudài)细胞形成完整植株个体的能力。
植物细胞表现(biǎoxiàn)出全能性的条件：
①离体状态
②在一定的营养物质、激素和其他外界条件〔光 照、温度〕
第五页，共五十七页。
二、实验原理
3、细胞(xìbāo)分化 ①定义： 在植物的个体发育过程中，细胞(xìbāo)在形

（六）栽培
幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情 况，适时浇水、施肥，直至开花
思考：在整个操作过程中，是如何来 实现无菌环境的？
2、消毒
① 流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻 轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理
用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分 数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即 将外植体取出，在无菌水中清洗
③ 消毒液处理
取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放 入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取 出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
实验结果
先生长素， 后细胞分裂素
有利于细胞分裂,但不分化
先细胞分裂素， 后生长素
细胞既分裂也分化
同时使用
分化频率提高
三、影响植物组织培养的因素：
（4）不同植物激素使用量
生长素/细胞分裂素比值 比值高时
比值低时
比值适中
结果 促根分化，
抑芽形成 促芽分化，
抑根形成
促进愈伤组织生长
三、影响植物组织培养的因素：
菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎 上部新萌生的侧枝
三、影响植物组织培养的因素：
（2）离体的植物组织和细胞对营养、环境等条 件的要求相对特殊，需配置适宜的培养基。
MS培养基主要成分包括：
大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等 微量元素: B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等
（四）培养
接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养， 培养期间应定期消毒
培养温度控制在18-22℃ 每日用日光灯光照12h
（五）移栽 1、打开封口膜 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日

•解析 不同植物组织培养的难易程度不同，同一 种植物材料也会因年龄、保存时间的长短等而导 致实验结果不同；在植物组织培养中常常要添加 植物激素，但不是都必须添加植物激素；各种植 物激素的作用是相互联系的，而不是相互独立的。 •答案 D
菊花茎段培养的实验操作与评价
• 1．制备MS固体培养基 各种母液 培养基 • 可分为配制 、配制 、灭 高压蒸汽灭菌 菌 。 其 中 ， 灭 菌 常 用 的 方 法 是 。 70%的酒精 • 2．外植体消毒 0.1% 的氯化汞溶液 • 将 外 植 体 用 流 水 冲 净 后 ， 先 用 消 毒 ， 再 用 无 菌 水 清 洗 ， 然 后 用 消毒，最后再用无菌水清洗。
•特别提醒 能源和渗透压也是制约植物组织培养 的重要因素。 •通常植物本身能进行光合作用，产生糖类，不需 要从外部供给能源物质，但在植物组织培养进行 异养的状况下，大多不能进行光合作用来合成糖 类，因此需要在培养基中添加糖类 ( 蔗糖 ) ，作为 碳源和能源物质，同时糖对保持培养基的渗透压 (一般需在 1.5×105～ 4.1×105 Pa)也有重要作用。
• 【巩固1】 下列关于影响植物组织培养的因素， 说法正确的是 • ( )。 • A ．不同植物组织培养的难易程度不同，同 一种植物材料培养的难易程度相同 • B ．在植物组织培养的培养基中必须添加植 物激素 • C ．生长素和细胞分裂素的作用是相互独立 的 • D．pH、温度、光照条件等对植物组织培养
• 3．接种 点燃的酒精灯 灭菌 • 接种时要始终在 旁进行，对 倒插 接种工具要 。将外植体插入培养基中时 应注意方向，不要 ，每瓶接种6～8块外 植体。 无菌箱 消毒 • 4．培养 温度 光照 • 培 养过程应该在 中进行，并定期 进行 ，保持适宜的 和 。

菊花的组织培养
一、植物组织培养的概念
指植物的离体部分（包括任何器官、 组织、细胞或原生质体），在人工控制的 培养基及环境条件（温度及光照）下，得 以生长和分化成完整植株的一种无菌培养 技术。
又称：植物离体培养
植物组织培养原理：
植物细胞的全能性
概念：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成 完整个体的潜能。
原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有 的全套遗传物质
二、植物组织培养的基本过程
阅读32页解决下列问题：
基因的选择性表达
1. 什么叫分化？其实质是什么? 2. 什么叫脱（去）分化、再分化？ 3. 愈伤组织的细胞有什么特点？ 4. 如何控制细胞的脱分化与去分化？
·
二、植物组织培养的基本过程
离体器官、 组织或细胞
有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等
植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
3、不同植物激素使用顺序
使用顺序
实验结果
先生长素， 后细胞分裂素
有利于细胞分裂但不分化
先细胞分裂素， 后生长素
同时使用
细胞既分裂也分化 分化频率提高
4、不同植物激素使用量
生长素/细胞分裂素比值 比值高时
比值低时
比值适中
2019/8/27
最新中小学教学课件
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2019/8/27
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结果
促根分化， 抑芽形成
促芽分化， 抑根形成
促进愈伤组织生长
思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？
生长素 / 细胞分裂素
高 利于根和愈伤组织的形成 适中 利于根芽的分化
5、pH、温度、光照（菊花组培）
pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光照12h

（3）普遍性：
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④结果： 形成不同的细胞和组织
⑤原因： 基因在特定的时间和空间条件下的选 择性表达的结果
（2）细胞的全能性
①定义：已经分化的细胞，仍然具有发育成完整 个体的潜能
②原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所 特有的全套遗传物质，都有发育成为完 整个体所必需的全部基因
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③实例 已分化的植物细胞，仍具有全能性 高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能 性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性， 这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的 遗传物质 ④全能性的比较: 受精卵>生殖细胞>体细胞
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（3）植物组织培养 细胞离体
①必要条件： 一定的营养物质、激素和其他
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例 对植物细胞发育方向的影响 生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化
生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑 制根的分化
生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织生长
（4）pH、温度、光照
pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日 用日光灯照射12h
3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力 的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子， 可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难 或发芽率低等问题
4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法
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人工种子
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二、实验操作 （一）制备MS固体培养基
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使 用4。C保存配制好的培养基母液来制备 1、配植体表面的水分，放入体 积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s， 立即将外植体取出，在无菌水中清洗

练习1、下图是植物组织培养的简略表示。据此回答：
脱分化 ① ② 再分化 ③ ④
（1）①表示__________________，它能被培养成为④的根本原因是 _________________ _____________________。 （2）②表示____________，它与①相比分化程度____________，全能性 ____________。 （3）若想制成人工种子，应选用____________。 （4）若①是花药，则④是____________，继续对其使用____________处理 可获得____________正常植株，该过程称为____________。 （5）若①是胡萝卜根尖细胞，则培养成④的叶片的颜色为____________， 这说明____________。 （6）若利用此项技术制造治疗烫伤、割伤的药物——紫草素，培养将进行 到____________。 答案： 答案： （1）离体的植物组织或器官 植物细胞具有全能性 （2）愈伤组织 低 高 （3） ） ） ） ③ （4）单倍体植株 秋水仙素 纯合体 单倍体育种 （5）绿色 含有表达叶绿 ） ） 体的基因 （6）② ）
接种
培养
思考：培养过程中为什么需要进行光照？ 答案：在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的 能力，是由细胞到一个个体的演变过程
移栽
思考：在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？ 1、培养基的灭菌；（高压蒸汽灭菌）
栽培
2、外植体的消毒；（酒精、氯化汞） 3、接种的无菌操作；（酒精、酒精灯——灼烧） 4、无菌箱中的培养； 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时原生质体//酶解法 （2）聚乙二醇 （PEG）//诱导不同植物体细胞的原生质体的融合 （3）植物组织培养// 脱分化//再分化 （4）远缘杂交亲本的遗传特征//杂种植株获得双亲的遗 传物质 （5）四 （6）可育//不能，因为不同生物之间存在生殖隔离//克 服远缘杂交不亲合的障碍，大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围 （7） 不遵循，因为生物在进行有性生殖过程中才遵循孟德尔的遗传定律，而植 物体细胞杂交不属于有性生殖。

培养温度控制在18-22℃ 每日用日光灯光照12h
（五）移栽
1、打开封口膜
移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的 封口膜，让试管苗在培养间生长几日。一般放置在20 ～25℃的遮荫环境中，适应5～7d。试管苗不萎蔫，有 新生长的趋势，便可移栽。
2、清洗转移
用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒 的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间
科学，你是国力的灵魂；同时又是社 会发展 的标志 。上午2时33分 9秒上 午2时33分02:33:0920.11.15
3、灭菌
分装好的培养基连同其他器械一起 进行高压蒸汽灭菌
（二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝
2、消毒
①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻 轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理
用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积 分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立 即将外植体取出，在无菌水中清洗
生活中的辛苦阻挠不了我对生活的热 爱。20.11.1520.11.15Sunday, November 15, 2020
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。02:33:0902:33:0902:3311/15/2020 2:33:09 AM
做一枚螺丝钉，那里需要那里上。20. 11.1502 :33:090 2:33No v-2015 -No v-2 0
②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根 据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎 或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的 营养成分和光照条件
③插入时应注意方向，形态学上端朝上，形态学下端 朝下，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸 收水分和养分

2、上面的示意图中还有什么地方不够完善的？ 没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。
3、结合录像外植体灭菌与接种操作，谈谈组织培养污染 的主要途径及怎样预防污染？
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
4、环境不清洁
污染的预防措施
（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁
课题1 菊花的组织培养
通过必修课的学习，我们已经了解到大 多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么， 有没有不用种子来培育植物的方法呢？
扦插
营养繁殖
嫁接
压条
组织培养
扦插
嫁接 压条
植物组织培养简介
植物组织培养是二十世纪发展起来的新 技术，近三十年来由于组织培养基础理论研 究的深入，发展极为迅速，发表的文献浩如 烟海，几乎以植物为研究对象的各个分支学 科都在广泛进行组织培养。
Байду номын сангаас
发展简史
1838-1839年，德国科学家Schleide 和Schwann发表了细胞学说， 奠定了组织培养的理论基础。
1902年，德国植物学家Haberlandt 根据细胞学说，提出单个 细胞的植物细胞全能性（totipotency）理论。
1904年，Hanning 最先成功地培养了萝卜和辣根菜的胚。 1922年，Knudson 采用胚培养法获得大量兰花幼苗。 1934年，White 用番茄根尖建立起第一个活跃生长的无性繁 殖系，从而使非胚器官的培养首先获得成功。 1958年，英国科学家Steward 等用胡萝卜根的愈伤组织细胞 进行悬浮培养，成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株，不但 使细胞全能性理论得到证实，而且为组织培养的技术程序奠定了 基础。 1962年，Murashinge 和Skoog 在烟草培养中筛选出至今仍被 广泛使用的MS培养基。 1964-1966年，印度科学家Guha 和Maheswari 在曼陀罗花药培 养中首次由花粉诱导得到了单倍体植株。 1972年，Carlson 通过两个种的烟草原生质体融合培养，获得 了第一个体细胞杂交的杂种植株。……

刚形成的凝胶珠应在CaCL2溶液中浸泡一段时间，以便Ca2+与Na+充分交换，形成的凝
胶珠稳定。检验凝胶珠是否形成，可用下列方法：用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手 挤压，如果不容易破裂，没有液体流出就表明成功地制成了凝胶珠，还可以用手将凝胶珠在 实验桌上用力摔打，如果凝胶珠很容易弹起，也表明制备的凝胶珠是成功的。
一般认为，采取5℃（相当于冬季，下同）、15℃和25℃（春季和 秋季）、35℃（夏季），这4个水温形成温度递度是比较符合实际 情况的，对现实也有指导意义。
第七页，共十二页。
子课题二：探讨不同(bù tónɡ)种类的洗衣粉对同一污染或不同(bù tónɡ)污 染的洗涤效果的比较
污染 物 油渍
血渍
奶渍
效果的比较。溶液中的酶很难回收(huíshōu)，不能被再次利用，提高了生产成本。2、注意操作步骤的细致和严 谨
Image
12/11/2021
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不能被再次利用，提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量。
固定 化酶
设想：将酶固定在不溶于水的载体上。 优点：酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定
在载体上的酶还可以被反复利用。
实际问题：一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多 产物的形成都是通过一系列的酶促反应才能得到的。
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温 度 ／ 10 20 30 40 50 60 ℃ 果汁量 ／ml
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课题(kètí)2 探讨加酶洗衣粉的洗涤效果
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确定 子课 题
针对课 题分析 变量
讨论如 何控制 变量
设计 实验 方案
动手 实验
得出 结论