实验六：枯草芽孢杆菌生长曲线测定

枯草芽孢杆菌液体培养基生长现象一、引言枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤中的芽孢杆菌，它具有很高的耐受性和适应性。

枯草芽孢杆菌液体培养基生长现象是研究该菌种生长特性和代谢途径的重要内容。

本文将从培养基成分、生长条件、生长曲线、代谢产物等方面对枯草芽孢杆菌在液体培养基中的生长现象进行探讨。

二、培养基成分1. 碳源枯草芽孢杆菌可以利用多种碳源进行生长，如葡萄糖、乳糖、麦芽糖等。

其中，葡萄糖是最常用的碳源之一，因为它可以提供足够的能量和碳源满足细胞代谢需求。

2. 氮源氮源对细胞合成蛋白质和核酸等重要物质具有重要作用。

枯草芽孢杆菌可以利用多种氮源进行生长，如氨基酸、尿素等。

在液体培养基中，通常使用的氮源是酵母提取物、蛋白胨等。

3. 矿物质矿物质对于细胞代谢和生长发育也具有重要作用。

在枯草芽孢杆菌液体培养基中，通常添加一定量的钠盐、钙盐、镁盐等矿物质。

4. 其他添加剂为了促进细胞生长和代谢，液体培养基中还可以添加一些其他的添加剂，如维生素、胆碱等。

三、生长条件1. 温度枯草芽孢杆菌的适宜生长温度为28-37℃。

在液体培养基中，通常选择适宜温度进行培养。

2. pH值枯草芽孢杆菌对pH值的适应范围比较广泛，一般在6.5-8.5之间。

在液体培养基中，通常调节pH值到适宜范围进行培养。

3. 氧气供应枯草芽孢杆菌是一种好氧菌，需要充足的氧气供应才能正常生长。

因此，在液体培养过程中需要进行充分的通气。

4. 摇床转速摇床转速对于液体培养基中细胞的生长和代谢有很大影响。

在枯草芽孢杆菌液体培养基中，通常选择适宜的摇床转速进行培养。

四、生长曲线枯草芽孢杆菌在液体培养基中的生长曲线一般可以分为四个阶段：潜伏期、指数增殖期、平台期和衰退期。

1. 潜伏期潜伏期是指细胞在刚开始培养时，由于适应环境和准备合成新细胞所需物质等原因，细胞处于一个相对静止状态。

在这个阶段内，菌落数量并没有显著增加。

2. 指数增殖期当细胞逐渐适应环境并开始合成新的细胞时，就进入了指数增殖期。

枯草芽孢杆菌液体培养基生长现象概述在微生物学中，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的革兰氏阳性细菌。

它广泛存在于土壤和水中，并且被广泛应用于食品工业、农业和制药工业等领域。

为了研究枯草芽孢杆菌的生长现象，在实验室中培养其液体培养基成为常见的研究手段。

枯草芽孢杆菌液体培养基的制备培养基成分枯草芽孢杆菌液体培养基的制备需要以下基本成分： 1. 水 2. 碳源：常见的碳源包括葡萄糖、麦芽糖等。

3. 氮源：常见的氮源包括酵母提取物、氨基酸等。

4. 矿盐：如硫酸镁、氯化钠等。

5. 培养基调节剂：如pH调节剂、酒石酸等。

制备步骤1.将适量的水加热至沸腾，然后冷却至室温。

2.在冷却后的水中逐一加入碳源、氮源和矿盐，并搅拌均匀。

3.检查溶液的pH值，并使用pH调节剂进行调整，使其接近中性。

4.在完成以上步骤后，培养基溶液已制备好，可装入适当的容器中。

枯草芽孢杆菌液体培养基的生长现象枯草芽孢杆菌在液体培养基中的生长现象受多种因素的影响，并可呈现出多种特征。

生长曲线枯草芽孢杆菌在液体培养基中的生长通常可分为四个阶段：潜伏期、指数增长期、平稳期和死亡期。

潜伏期潜伏期是细菌在培养基中适应环境的过程，此时细菌数量增长较慢，可持续数小时至数天。

指数增长期指数增长期是细菌数量迅速增加的阶段，细菌以指数倍增长。

平稳期在平稳期，细菌数量达到一定水平，净增长率趋于零。

此时，生长速率与死亡速率之间达到平衡。

死亡期当细菌数量超过一定阈值时，资源的枯竭和毒性物质的积累可能导致细菌数量开始减少，进入死亡期。

形态特征枯草芽孢杆菌在液体培养基中呈现出以下形态特征： 1. 长杆状细胞：在培养基中，枯草芽孢杆菌通常呈现出长杆状的形态。

2. 枯草芽孢的形成：在适宜的条件下，枯草芽孢杆菌可以形成孢子，这些孢子在液体培养基中可观察到。

影响因素枯草芽孢杆菌液体培养基的生长受到多种因素的影响，包括： 1. 温度：枯草芽孢杆菌在不同温度下的生长速率存在差异，适宜的温度有助于细菌的生长。

蜡样芽孢杆菌生长曲线的测定蜡样芽孢杆菌是一种常见的细菌，它在生物学和医学领域中都有着重要的应用。

为了更好地了解蜡样芽孢杆菌的生长规律，科学家们通常会使用生长曲线来进行测定。

本文将介绍蜡样芽孢杆菌生长曲线的测定方法和结果。

一、蜡样芽孢杆菌的生长特点蜡样芽孢杆菌是一种革兰氏阳性菌，它的生长需要一定的温度和营养物质。

在适宜的条件下，蜡样芽孢杆菌的生长速度非常快，可以在短时间内形成大量的细胞。

同时，蜡样芽孢杆菌的生长也受到环境因素的影响，如温度、pH值、营养物质等。

蜡样芽孢杆菌生长曲线的测定通常采用光密度法。

具体步骤如下：1.准备培养基：将适量的蜡样芽孢杆菌接种到含有营养物质的培养基中，使其在适宜的条件下生长。

2.测定光密度：在培养过程中，每隔一段时间就用分光光度计测定培养液的光密度。

光密度的值反映了细胞数量的变化，因此可以用来绘制生长曲线。

3.绘制生长曲线：将测定到的光密度值绘制成时间的函数图像，即可得到蜡样芽孢杆菌的生长曲线。

三、蜡样芽孢杆菌生长曲线的结果分析蜡样芽孢杆菌的生长曲线通常可以分为四个阶段：潜伏期、指数期、平稳期和衰退期。

1.潜伏期：在培养开始的早期，蜡样芽孢杆菌的生长速度较慢，此时的生长曲线呈现出一个平缓的上升趋势。

2.指数期：当蜡样芽孢杆菌适应了培养条件后，它的生长速度会迅速加快，此时的生长曲线呈现出一个急剧上升的趋势。

3.平稳期：当蜡样芽孢杆菌的生长速度达到最大值后，它的生长速度会逐渐趋于稳定，此时的生长曲线呈现出一个平缓的上升趋势。

4.衰退期：当蜡样芽孢杆菌的生长环境变得不适宜时，它的生长速度会逐渐减缓，此时的生长曲线呈现出一个下降的趋势。

通过对蜡样芽孢杆菌生长曲线的测定和分析，我们可以更好地了解蜡样芽孢杆菌的生长规律，为其在生物学和医学领域中的应用提供更加准确的数据支持。

蜡样芽孢杆菌生长曲线的测定是一项非常重要的实验技术，它可以帮助我们更好地了解蜡样芽孢杆菌的生长规律，为其在生物学和医学领域中的应用提供更加准确的数据支持。

第1篇一、实验目的本研究旨在通过实验，评估不同菌株在不同盐浓度条件下的生长状况，从而筛选出具有耐盐特性的菌株。

通过对比分析，为后续的耐盐微生物应用研究提供理论依据。

二、实验材料1. 菌株：从土壤、水体等环境中分离得到10株疑似耐盐微生物菌株。

2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、含不同盐浓度的牛肉膏蛋白胨培养基。

3. 仪器与设备：高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、电子天平、移液器、显微镜等。

三、实验方法1. 菌株活化：将10株疑似耐盐微生物菌株分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，在37℃恒温培养箱中培养24小时。

2. 盐浓度梯度设置：根据实验要求，配制不同盐浓度的牛肉膏蛋白胨培养基，分别为0、0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%的NaCl溶液。

3. 菌株接种：将活化后的菌株分别接种于不同盐浓度的牛肉膏蛋白胨培养基中，每个菌株重复3次。

4. 培养与观察：将接种后的培养基置于37℃恒温培养箱中培养，每隔24小时观察菌株的生长状况，记录菌落形态、生长速度等指标。

5. 数据处理：对实验数据进行统计分析，比较不同菌株在不同盐浓度条件下的生长差异。

四、实验结果1. 菌株生长状况通过观察不同盐浓度条件下菌株的生长状况，发现以下结果：（1）在0%盐浓度下，所有菌株均能正常生长，菌落形态良好。

（2）随着盐浓度的增加，部分菌株的生长受到抑制，菌落形态逐渐变小，生长速度减慢。

（3）在9%和10%盐浓度下，大部分菌株生长受到严重影响，菌落形态发生变形，生长速度明显减慢。

2. 菌株耐盐性比较根据实验结果，对不同菌株的耐盐性进行比较，结果如下：（1）菌株A：在0.5%和1%盐浓度下生长良好，2%盐浓度下生长受到抑制，3%盐浓度下生长缓慢，4%盐浓度下生长严重受抑制。

（2）菌株B：在0.5%和1%盐浓度下生长良好，2%盐浓度下生长受到抑制，3%盐浓度下生长缓慢，4%盐浓度下生长严重受抑制。

（3）菌株C：在0.5%和1%盐浓度下生长良好，2%盐浓度下生长受到抑制，3%盐浓度下生长缓慢，4%盐浓度下生长严重受抑制。

实验酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定1 目的要求（1）了解酵母菌、细菌等单细胞微生物生长曲线的特点及测定原理；（2）学习用血球计数板计数法和比浊法分别测定酵母和细菌的生长曲线。

2 基本原理生长曲线是单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。

测定时一般将一定数量的微生物纯菌种接种到一定体积的已灭菌的适宜的新鲜培养液中，在适温条件下培养，定时取样测定培养液中菌的数量，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，绘制得到生长曲线。

不同的微生物其生长曲线不同，同一微生物在不同培养条件下其生长曲线亦不同。

但单细胞微生物的生长曲线规律基本相同，生长曲线一般分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。

测定一定培养条件下的微生物的生长曲线对科研和实际生产有一定的指导意义。

测定生长曲线时需要对生长的单细胞微生物定时取样计数，对于酵母细胞和比较大的细菌细胞可采用血球计数板计数法计数，亦可采用比浊法计数，但对于小的细菌细胞一般采用比浊法。

比浊法是根据培养液中菌细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比的关系，利用光电比色计测定菌悬液的光密度值（OD值），以OD值来代表培养液中的浊度即微生物量，然后以培养时间为横坐标，以菌悬液的OD值为纵坐标绘出生长曲线。

此方法所需设备简单，操作简便、迅速。

血球计数板法是利用一块血球计数板来进行计数的。

血球计数板是一块特制的厚玻璃片，中央平台比两边平台低0.1mm，上有两个被精细刻化为400个小方格的格网，面积为1mm2，加盖盖玻片后即构成0.1 mm3体积的计数室。

血球计数板有两种规格：一种是将1 mm2面积的网格划分为25个大格，每个大格再分成16个小格，既25´16；另一种为16´25。

计数时只需无菌操作将稀释到适宜浓度的菌悬液取一滴从盖玻片一侧渗入到计数室，待静置平衡后于显微镜高倍镜下计数，用下面公式算出菌液中细胞数。

单细胞微生物细胞数/mL=5个中格内细胞数¸5´25（或16）´104´菌液稀释倍数3 实验材料3．1 菌种酵母菌和大肠杆菌。

生长曲线测定方法
二、间接法：与微生物生长量平行的生理指标很多，可以根据实验目的和条件适当选用。

如测含氮量（一般霉菌的含氮量为其干重的6.5%，含氮量乘以6.25为粗蛋白含量），还有如测含碳量以及测磷、DNA、RNA、ATP、DAP、几丁质或N-乙酰胞壁酸等含量等。

具体测定时你还要得查点相关资料。

请问各位大侠放线菌生长曲线改怎么测呢?谢谢!
三角瓶摇床生长发酵，加入足量的玻璃珠不让菌体长成团状，使菌体均匀分布在液体培养基中！然后每隔一定时间取样分析。

用分光光度计测定OD值即可。

如果菌体浓度过大可先稀释后在测OD值！波长大概在600nm左右！
一般情况下，形成菌丝的微生物的生长曲线，是取培养液离心收集沉淀（工业上通常3000~4000rpm，10min），测沉淀占总体积的百分比，也有称量菌丝体干重的。

楼上的说的方法不能符合发酵过程的真实情况。

另外不同的菌测定OD使用的波长不同。

大肠杆菌是600nm。

使用波长的选择应该跟菌的大小及形态有关。

这方面有一篇文献，大家感兴趣的话可以查询一下。

其实放线菌要看哪些属了，有些属容易产生菌丝，而有些属不产生菌丝球。

本人在做课题的时候就筛选得到一株放线菌，属于北里孢菌属，在摇瓶发酵和发酵罐中发酵时，就没有菌丝球的产生，所以我在实验时就采用测量OD660的方法来测定生长情况的。

但我也做过链霉菌菌的发酵，链霉菌很容易产生菌丝球，我所采用的是称干重法做的。

所以我觉得楼主应该根据实际情况来具体确定你的实验应该采用哪种测量方法了。

[精品]细菌生长曲线的测定细菌生长曲线的测定是细菌学中的一项重要实验。

它可以帮助我们了解细菌的生长繁殖规律及其影响因素，为控制细菌繁殖提供理论依据。

本次实验将介绍如何通过外观观察、菌落计数及测定细菌生物量的方法，获得细菌在液体培养基中的生长曲线。

实验步骤：一、准备实验材料和试剂1、选取一种细菌菌株，本次实验选择了大肠杆菌（Escherichia coli）；2、配置好液体培养基，一般为普通营养琼脂培养基、肉汤培养基等；3、消毒好实验室的工作台面及实验仪器；4、准备好移液管、试管、比色管和加热消毒的线圈镊子等实验用具。

二、制备不同浓度的菌液1、挑选一根菌棒，从培养基上接入一些带有细菌的菌落，将菌落均匀涂抹于培养基表面；2、将含有细菌的培养基放置在恒温摇床中，在适宜的温度下进行培养；3、当细菌生长至一定程度（一般在对数生长期）时，用无菌的移液管，在培养基中取出一定量的菌液；4、分别将不同体积的菌液加入到含有培养基的试管中，制备成不同浓度的菌液。

三、测定不同浓度菌液对应的OD600值1、将制备好的不同浓度菌液放入洗涤过的比色管中；2、由于细菌太小，肉眼观察不能得出其数量的增多或减少，因此需要使用分光光度计在600nm处测量各个浓度的菌液的吸光度（OD）值；3、重复测量3次，取平均值计算OD600；4、根据OD600值和菌液中细胞数量的线性关系，可通过OD600值推算出细胞数。

2、每隔2-3个小时，取出一定量的菌液，测量其OD600值，记录下菌液对应时间的值；3、采用计数培养法，每隔一定时间取出一定体积的菌液，进行菌落数的计数；4、利用OD600值曲线和菌落数曲线绘制出细菌生长曲线。

实验注意事项：1、实验期间需在无菌条件下操作，防止细菌的外界感染对实验结果的影响；2、实验者需佩戴适当的防护手套及实验服，以免对人体造成伤害；3、制备好菌液后需要及时放置在摇床中，防止菌落外的细菌感染进去；4、测量OD600值时比色管必须清洗干净，用甲醇或无菌去离子水。

菌种的分离与鉴定---大肠杆菌与枯草芽孢杆菌的简单染色及大小测定（一）实验目的及要求1.学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本技术2.了解枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的形态特征并相互区别3.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术（二）实验原理1．染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物，前者赋予了染料颜色的特征，后者使染料能变成盐，简单染色是指用单一染料对菌体进行染色2．带负电荷的细菌通常与带正电荷的碱性染料结合，所以一般用碱性染料对细菌染色（三）实验器材及实验用品实验器材：显微镜、染料废液缸、接种环、酒精灯、镜台测微尺、香柏油、滤纸、毛细玻璃管、吹风机、载玻片等实验用品：碱性美兰染料、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、生理盐水、香柏油等（四）实验内容简单染色：1.涂片载玻片浸在乙醇缸中待用，用镊子取出两片载玻片，分别在缸内壁上沥一下，然后用酒精灯烧去玻片上残余乙醇和可能存在的油污，残留的乙醇烧尽即可，不要一直灼烧载玻片；用记号笔分别在两张载玻片上做好记号，一个载玻片用于观察枯草芽孢杆菌，另外一个用于观察大肠杆菌。

分别在两片载玻片的中央滴上半滴生理盐水，在酒精灯旁用接种环分别从枯草芽孢杆菌和大肠杆菌培养基上沾取菌种涂抹在载玻片上，使菌液在载玻片上形成均匀的菌膜。

2.干燥自然干燥或用电风机冷风吹干3.固定涂菌面朝上，通过火焰2-3次，此操作称为热固定，其目的是让细胞质凝固以固定细胞形态，并使之牢固地附着在载玻片上。

固定温度不应太高（以玻片背面不太烫手为宜）4.染色将载玻片平放于载玻片支架上，滴加染液覆盖涂菌部位即可，用碱性美兰染料染色时要染1-2分钟5.水洗倾去染液，用缓流自来水冲洗，水流不宜过急、过大，应使水从载玻片的一端落下，勿直接冲洗涂片处，至洗出的水呈无色为止6.干燥用吸水纸吸去多余水分，自然干燥或电吹风冷风吹干7.镜检涂片干燥后置于显微镜下观察记录微生物大小的测定：8.校正目镜测微尺将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜的载物台上。

文件名称枯草芽孢杆菌活菌数的测定操作规程文件编号编制人编制日期年月日颁发部门审核人审核日期年月日印制份数批准人批准日期年月日生效日期年月日分发部门质量管理部、生产部目的：建立枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定标准操作规程范围：本方法适用于的枯草芽孢杆菌活芽孢的测定责任人：内容：1.仪器与工具：电子天平、生物显微镜、摇床、18×180mm试管、500ml三角瓶、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管2．试剂与试液：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、无菌蒸馏水、等。

3.检测培养基配方：牛肉膏3g、蛋白胨10g、琼脂16g、氯化钠5g、蒸馏水1000ml，调至PH7.2，121℃灭菌30min。

4.检测步骤：4.1 菌液制备：采样量不少于500g，从所采的样品中精确称取10.00g试样，加入已灭菌的带玻璃珠（玻璃珠在80个左右）的500ml锥形瓶中，加入90ml已灭菌的无菌水，在摇床上200r/min摇动60min，即成母液的菌悬液。

4.2 用1ml无菌吸管吸取1ml上述母液的菌悬液，加入9ml无菌水混匀成1：1×102稀释的菌悬液，这样依此稀释，直至得到1：106；1：107；1：108；1：109等浓度（每个稀释度必须更换无菌吸管）。

4.3向每个灭菌培养平皿中倒入约12ml培养基，混合均匀，待凝固后备用。

4.4用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释浓度菌悬液0.2ml，加至已凝固好的培养基中，用涂布棒涂匀，在无菌操作台中静置30min后，倒置于37℃的恒温培养箱内培养18h—24h。

每个样品取3个连续适宜稀释度，每个稀释度重复3次，同时加入无菌水的空白对照，每个稀释度取5个到10个菌落的菌体，涂片染色，显微镜观察识别后计数菌落。

5.菌落计数：5.1 以平板上出现20个——200个菌落数的稀释度平板为记数标准，并确定为稀释倍数。

5.2 当只有一个稀释度，其平均菌落数在20个——200个之间时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数。

枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程一、实验器材准备1.带有盖子的培养皿2.加满蒸馏水的试管3.注射器及针头4.培养基、琼脂、葡萄糖、干燥棉签5.无菌铲子6.无菌尖嘴瓶7.显微镜、移液器、平板振荡器等二、样品的采集和处理1.选择代表性的土壤样品，并在24小时内用无菌探针采集5个不同位置的样品。

2.将每个样品混合均匀，取适量的土壤放入无菌容器准备使用。

三、菌液的制备1.取一个含有褐青素盐琼脂（PDA）培养基的无菌尖嘴瓶，将葡萄糖加入培养基中，按照比例加入适量的样品。

2.将培养基瓶密封并用高压灭菌器进行高温高压灭菌，杀死培养基中的已有细菌。

3.灭菌后将培养基倒入带有高度透明度的培养皿中，使其凝固。

四、制备样品的稀释液1.用蒸馏水装满试管。

2.将试管密封并用高压灭菌器进行高温高压灭菌，避免试管中的无菌水受到外界污染。

五、稀释菌液1.使用无菌针头在凝固的培养皿上划线。

2.采用无菌技术，将针头刺入活菌样品中，然后点在琼脂上。

3.在培养皿上划线的其他位置也同样操作。

4.将培养皿倒置在25°C温度下放置24-48小时，直到菌落生长到适当大小。

六、菌液的计数1.使用无菌铲子在菌落上刮取一小段。

2.将刮取物重新悬浮在无菌试管中。

3.按照适当的比例将菌液和蒸馏水混合，制备一系列的稀释液。

4.取稀释液的适量放在培养皿中，使其均匀覆盖整个琼脂表面。

5.将培养皿密封并放置在25°C下培养3-5天。

6.在培养皿上观察并计数活菌数量。

七、结果的统计和计算1.统计每个培养皿上的活菌数目，计算平均值。

2.根据样品的稀释倍数、培养皿中的活菌数目和悬液中的总体积，计算出每克样品中活菌的数量。

八、数据记录和分析1.将实验过程中的数据记录清晰，并进行相关的数据分析和比较。

2.结果的可靠性可以通过加入对照组进行验证，确保实验结果的准确性。

九、实验安全注意事项1.在实验过程中要严格遵守无菌操作的原则，避免外界污染。

2.注意实验室卫生，保持实验环境整洁。

微生物学实验微生物学实验实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。

二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。

培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。

根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。

干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

三、试剂与器材1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。

2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂四、实验内容1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制。

2.调pH不要过头。

3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放物、取物。

4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。

5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。

六、思考题1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么?3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么?4.培养基的配制原则是什么?实验二土壤中微生物分离纯化培养一、实验目的掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。

实验七 测定细菌生长曲线一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；3. 反复练习无菌操作技术；4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。

图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。

生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。

不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。

因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。

测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。

本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。

将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。

注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。

从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。

其计算公式为：2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间；W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。

三、 实验仪器、材料和用具1. 实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组：第（1）小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm第（2）小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm第（3）小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量：选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。