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大鼠在体单向灌流法研究橙皮苷肠道吸收性质

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基金项目：科技部十一五科技支撑计划课题（2006BAI06A11-14）作者简介：许蕾，女，博士研究生 研究方向：中药制剂的吸收分布研究 *通讯作者：杨中林，女，教授，博士生导师 研究方向：中药制剂研究 Tel ：(025) 85322508 E-mail ：maple_205@ 大鼠在体单向灌流法研究橙皮苷肠道吸收性质许蕾，杨中林*（中国药科大学现代中药教育部重点实验室，南京 210038）摘要：目的 分别考察橙皮苷在大鼠各肠段的吸收动力学特征及不同药物浓度、不同pH 值灌流液对其吸收的影响。

方法 采用大鼠在体肠单向灌流实验方法，用HPLC 对灌流液中的橙皮苷进行分析。

结果 橙皮苷在肠道中的吸收按回肠、空肠、十二指肠、结肠的顺序依次下降，其中在结肠中的吸收显著低于其他肠段（P ＜0.05）；pH 5.0、6.8的酸性条件下肠道对橙皮苷的吸收显著高于pH 7.8弱碱条件（P ＜0.05）；随着橙皮苷浓度的增加其K a 和P app 均逐渐下降，其中质量浓度为2 mg·L -1的溶液P app 显著高于其他2个浓度（P ＜0.05）。

结论 橙皮苷在全肠段均有吸收，但在回肠中吸收较好；弱酸性环境易于橙皮苷吸收；橙皮苷在大鼠肠道的吸收存在饱和现象，其在机体内的转运可能存在主动转运或促进扩散。

关键词：橙皮苷；吸收；在体单向灌流；重量法中图分类号：R965 文献标识码：A 文章编号：1001-2494(2009)08-0594-04Intestinal Absorption Properties of Hesperidin by Single Pass Perfusion Model on RatsXU Lei ，YANG Zhong-lin *(Key Laboratory of Modern Chinese Medicines of Ministry of Education ，China Pharmaceutical University ，Nanjing 210038，China )ABSTRACT ：OBJECTIVE To investigate the absorption kinetics of hesperidin at different intestinal segments of rats and the influence of pH and the drug solution concentration on the absorption kinetic. METHODS In situ single pass perfusion model and HPLC method were used to investigate the absorption and determine the concentration of hesperidin in solution. RESULTS The absorption of hesperidin decreased followed the sequence of ileum, jejunum,duodenum and colon. The absorption in colon was obviously lower than those in other intestinal segments (P ＜0.05). The absorption of hesperidin under acid condition at pH 5.0 and 6.8 was obviously higher than weak alkaline condition at pH 7.8 (P ＜0.05). With the increase of hesperidin concentration ，K a and P app decreased, and P app of 2 mg·L -1 solution was obviously higher than those of the other two concentrantion. CONCLUSION Hesperidin can be absorbed in whole intestinal segments, but best in ileum. The absorption can be better under acid condition. The transport mechanism of hesperidin in vivo is similar to active transport or facilitated diffusion. KEY WORDS ：hesperidin ；absorption ；in situ single pass perfusion ；gravimetric method橙皮苷(hesperidin)为二氢黄酮衍生物，广泛存在于豆科、白桦、唇形花科、蝶形花科、芸香科、柑橘属植物体中。

大量的研究发现，橙皮苷具有显著的抗氧化、抗炎、祛痰平喘、延缓衰老等作用，同时对心血管、肾脏系统都具有显著的药理活性[1]。

因此，在中药新药的创制和研发中，橙皮苷常常被选为指标成分用于定性和定量研究。

在口服制剂的处方前研究中，有必要对药物在口服后体内的吸收情况进行预测。

鉴于橙皮苷在肠道吸收的特性尚未见报道，本实验采用大鼠在体肠单向灌流重量法，考察了橙皮苷在肠道不同区段的吸收情况及不同pH 值灌流液、不同药物浓度对其的影响，为口服剂型设计提供依据。

1 仪器、试药和动物 1.1 仪器LC -20AT 型高效液相色谱仪，SPD -20A 型检测器(日本岛津公司)；HL -2型恒流泵(上海市青浦沪西仪器厂)；B -260恒温水浴锅（上海亚荣生化仪器厂）；BS124S 电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；KQ -250E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药橙皮苷提取物（自制，纯度经HPLC 测定为92.28%）；橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110721-200512）；乌拉坦（上海精细化工科技有限公司）。

甲醇（色谱纯）；乐百氏纯净水；其他试剂为分析纯。

Krebs-Ringer 试剂（以下简称K-R试液，称取NaCl 7.8 g，KCl 0.35 g，NaHCO3 1.37 g，NaH2PO4 0.32 g，MgCl2 0.02 g，葡萄糖1.4 g，加水定容至1 000 mL，即得pH 7.4 K-R试液。

用1.0 mol·L-1HCl或NaOH调节pH为5.0，6.8和7.8）；供试液（分别取一定量橙皮苷提取物，用K-R溶液超声溶解配制成不同浓度的灌流液）。

1.3实验动物SD大鼠，雄性，210~240 g（中国药科大学实验动物中心）。

2方法2.1HPLC分析方法的建立2.1.1色谱条件[2]色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相：甲醇-水-冰醋酸=35∶61∶4，柱温：30 ℃，流速为1.0 mL·min-1，检测波长：283 nm；进样量：20 μL。

2.1.2空白干扰实验取空白肠液进样测定，考察是否对橙皮苷的吸收有干扰。

2.1.3橙皮苷标准曲线绘制精密称取橙皮苷对照品2 mg置100 mL量瓶中，甲醇溶解，配置成20 mg·L-1对照品溶液，从中分别精密吸取0.25，0.5，0.75，1，1.5，2 mL置5 mL量瓶中，用含50%K-R 溶液的甲醇溶液稀释至刻度。

配制成1，2，3，4，6，8 mg·L-1的对照品溶液，分别过0.45 μm滤膜，弃去初滤液，取续滤液20 μL进样，记录色谱图，以质量浓度（mg·L-1）为横坐标，以橙皮苷峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

2.1.4回收率和精密度实验精密称取一定量的橙皮苷对照品，分别用K-R试剂和空白肠液配成2，4，6 mg·L-1的溶液，按照“2.1.1”项操作进样测定，以后者对前者相应浓度的峰面积比值计算绝对回收率。

用2 mg·L-1橙皮苷对照品溶液，于1 d内重复测定5次，计算日内精密度。

2.1.5稳定性实验取K-R溶液进行大鼠在体小肠循环2 h，得空白循环液，以空白循环液配制3.5 mg·L-1橙皮苷供试液，置于37 ℃水浴中，分别于0，1，2，3，4 h取样，测定峰面积。

2.2大鼠小肠在体单灌流实验2.2.1 实验方法实验前将大鼠禁食过夜（自由饮水），腹腔注射20%乌拉坦溶液麻醉(1.3 g·kg-1)，背位固定于操作台上，用红外灯保持37 ℃体温，沿腹中线切开腹部约3 cm，对考察的肠段于两端切口后，用37 ℃的生理盐水将肠内容物冲洗干净，再用空气将生理盐水排空，插管并结扎。

取预热至37 ℃的K-R溶液以0.2 mL·min-1的流速灌流15 min平衡肠道，接着用预热供试液以0.2 mL·min-1的流速循环45 min后，进口处用已知重量的装有供试液的小瓶，以相同流速灌流，同时出口处放另一已知重量的小瓶收集，每隔15 min 迅速更换下一个供试液小瓶和收集液小瓶，冷至室温后，称量供试液小瓶和收集液小瓶的重量。

实验共收集5次流出液。

结束后，在一玻璃板上滴加37 ℃ K-R溶液，将肠段沿插管两端剪下，轻放于滴加的K-R溶液中，测量肠段长度，用细线测量其内径。

实验时按照以下方法对各肠段结扎（不结扎胆总管）：十二指肠段自幽门1 cm处开始，空肠段自幽门15 cm处开始，回肠段为盲肠上行15 cm处开始，结肠段为紧邻盲肠开始，各段均向下取10 cm 左右肠段。

2.2.2肠壁物理吸附的考察剪取清洗后的大鼠肠段约10 cm，用玻璃棒将黏膜层翻出，置于50 mL 已知浓度的橙皮苷药液中，于37 ℃孵育3 h，取出肠段，测定孵育液的药物浓度。

2.2.3灌流管对药物吸附的考察依照文献[3]方法，考察硅胶管壁对药物是否有物理吸附作用。

2.2.4灌流液体积的校正依照文献[4]方法，采用重量法矫正因肠内水分吸收引起灌流液体积的变化。

测定供试液及灌流45~120 min内合并流出液的密度，计算出供试液和流出液的体积差，就是肠道吸收或分泌的水分的体积。

2.3数据处理橙皮苷在肠道内的吸收速率常数(K a)与表观吸收系数(P app)分别按文献[3]公式计算。

3结果3.1HPLC分析方法的建立空白干扰实验结果显示，空白肠液在“2.1.1”色谱条件下对药物的测定无干扰。

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大鼠单向灌流模型研究田蓟苷的在体肠吸收

大鼠单向灌流模型研究田蓟苷的在体肠吸收

大鼠单向灌流模型研究田蓟苷的在体肠吸收目的：研究田蓟苷的大鼠小肠吸收机制。

方法：采用大鼠单向灌流模型，高效液相色谱法测定在体肠灌流田蓟苷的浓度变化，考察加入维拉帕米、利血平、根皮苷及利福平对田蓟苷在大鼠空肠段的Ka，Papp的影响。

结果：与对照组相比，加入维拉帕米、利血平后，田蓟苷在大鼠空肠段的Ka，Papp有显著性增加（P＜0.05）；加入根皮苷后，田蓟苷在大鼠空肠段的Papp 显著性降低（P＜0.05）；加入利福平，田蓟苷在大鼠空肠段的Ka，Papp没有显著性增加。

结论：田蓟苷是P，糖蛋白（P，gp）、乳腺癌多药耐药蛋白（BCRP）及Na+依赖葡萄糖转运载体1（SGLT1）的底物，P，gp与BCRP外排作用是田蓟苷小肠吸收的主要外排机制，田蓟苷能够依赖SGLT1实现在小肠的吸收转运；田蓟苷不是胆盐转运蛋白的底物。

标签：田蓟苷；单向肠灌流；吸收香青兰Dracocephalu mmoldevica L. 为唇形科青兰属植物，它在维吾尔医和民间广泛用于治疗冠心病及血液质旺盛（高血压）、寒性神经性头疼、寒性感冒、气管炎等疾病。

田蓟苷黄酮是香青兰中的主要活性成分[1，2]，含量约占干草的0.2%左右，且经HPLC测定面积百分比大于30%。

课题组前期对田蓟苷在Caco，2细胞模型中的吸收特性的研究结果表明，田蓟苷的摄取量受外排转运蛋白抑制剂的影响，且田蓟苷的口服吸收较差[3]。

大鼠原位单向肠灌流模型是FDA 认可的研究药物吸收代谢的两大模型之一，此模型不仅保证了肠道神经以及内分泌输入的完好无损，同时也保证了血液及淋巴液的供应，提高了生物活性[4]。

因此，鉴于田蓟苷较强的药理活性和药用价值，本实验在前期Caco，2细胞模型研究基础上，采用大鼠单向肠灌流模型对田蓟苷的吸收动力学进行考察，以期更为全面的阐明田蓟苷口服生物利用度较差的原因，为田蓟苷新剂型的研制提供一定的科学依据。

1 材料1.1 仪器LC，10AT高效液相色谱仪（日本岛津）；HH，S11，Z型电热恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂）；TDL，S台式离心机（上海安亭仪器厂制造）；TG16B型台式高速离心机（中国湖南长沙凯达科学仪器有限公司）；电子分析天平（奥豪斯国际贸易有限公司）；T01，100蠕动泵驱动器（保定兰格恒流泵有限公司）。

在体单向灌流法研究阿哌沙班肾衰大鼠肠吸收特性

在体单向灌流法研究阿哌沙班肾衰大鼠肠吸收特性

在体单向灌流法研究阿哌沙班肾衰大鼠肠吸收特性
张欢;汪丽;张优;谢沛;李娜;丁家荣;王雷
【期刊名称】《药学实践与服务》
【年(卷),期】2022(40)6
【摘要】目的研究阿哌沙班在肾衰大鼠体内的肠吸收特性,并考察P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂对阿哌沙班吸收行为的影响。

方法选择肾衰大鼠在体单向灌流法进行肠吸收实验,建立大鼠阿哌沙班肠灌流液HPLC分析方法,以考察大鼠在体肠吸收影响因素。

结果阿哌沙班在各肠段的吸收速率常数(Ka)存在显著性差异(P<0.05),但表观吸收系数(Papp)未见明显差异(P>0.05);大鼠回肠段的Ka和Papp值随药物浓度的增加而降低;加入P-gp抑制剂盐酸维拉帕米(0.1 mmol/L)后,阿哌沙班在空肠和回肠段的Ka和Papp值均明显增加。

结论阿哌沙班在各肠段均有吸收;P-gp抑制剂对阿哌沙班在空肠和回肠段的吸收均有明显的促进作用,表明阿哌沙班为P-gp底物,推测其吸收机制为主动转运。

【总页数】5页(P515-518)
【作者】张欢;汪丽;张优;谢沛;李娜;丁家荣;王雷
【作者单位】海军军医大学第一附属医院肾脏病科;海军军医大学第一附属医院消化内科;上海大学转化医学研究院
【正文语种】中文
【中图分类】R97
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4.在体单向灌流法研究W／O／W型薏苡仁油复乳的大鼠肠吸收特性
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在体肠段灌流模型在中药吸收研究中的应用

在体肠段灌流模型在中药吸收研究中的应用

在体肠段灌流模型在中药吸收研究中的应用（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【关键词】在体肠段灌流模型中药吸收综述口服药物的吸收主要在小肠部位,目前,研究药物肠吸收的体外模型有理化模型和生物模型。

理化模型[1-2]有数学模型计算推导的方法、磷脂膜色谱法、平行人工膜法；生物模型有离体组织模型(刷状缘囊泡BBMV、外翻肠环法、扩散池法、外翻肠囊法)、在体动物模型(在体肠段灌流技术、肠肝血管灌流、细胞模型)。

这些方法利用统计学拟合药物的多项参数(油/水分配系数logP、极性等)与小肠吸收的相关性,作为不同药物吸收评价的筛选模型。

这些模型都有其自身的优缺点,具体应用需视药物性质和实验目的而定。

其中,在体肠段灌流技术通过测定药物经过肠段后从灌流液消失的量来估计药物渗透系数(Peff)[3]。

具有以下优点：①容易通过控制或改变实验条件来观察药物在肠中的整个消除过程和影响因素；②不切断血管及神经,测得的吸收速率等指标与体内法相近,比离体法更接近机体内的真实吸收；③可提高组织存活率和增加取样点；④能避免胃内容物、消化道固有运动等的生理影响；⑤既可用作药物吸收研究亦可用作稳定性研究；⑥比重分析或在回流液中加入无吸收标记物分析小肠水分转运对药物浓度的影响；⑦方法操作简便,准确性较高。

笔者现就在体肠段灌流技术及其在中药口服吸收研究方面的应用作一综述。

1 在体肠段灌流技术与药物体内吸收的相关性小肠吸收模型适用与否取决于由模型测得的参数(如通透性)是否与体内测得的参数(如吸收)之间有较好的相关性,如果存在相关性,则可以用通透性作筛选指标。

Zhao YH等[4]通过对158种药物的研究表明,鼠小肠吸收模型与人类小肠吸收模型相似,用鼠小肠吸收模型所得的数据能够有效应用于人类小肠吸收的预测。

Lennernas H 等[5-7]列出了具不同吸收特点的化合物,对在体鼠肠段灌流模型(A)和人体内空肠局部灌流模型(B)测得的有效Peff进行了测定。

在体单向灌流法研究厄贝沙坦的大鼠肠吸收

在体单向灌流法研究厄贝沙坦的大鼠肠吸收

在体单向灌流法研究厄贝沙坦的大鼠肠吸收师云才;蒋曙光;周建平;袁静;周湘颖【摘要】目的：考察厄贝沙坦在大鼠四肠段的吸收状况，以及浓度、pH值对药物吸收的影响。

方法按照大鼠在体单向肠灌流实验方法，采用不同浓度、不同pH值的药物溶液进行单向肠灌流实验，用酚红校正灌流溶液体积，考察各浓度、各pH 值药物溶液在大鼠十二指肠、空肠、回肠和结肠四个肠段的吸收速率常数Ka 和有效渗透系数Pef ，SPSS 19．0软件对吸收速率常数Ka 和有效渗透系数Pef的数据进行单因素方差分析，以P＜0．05作为差异具有统计学意义。

结果当灌流液中药物浓度较低时（50、100 mg·L-1），十二指肠与空肠、回肠以及结肠的吸收速率常数（Ka）差异有显著性，空肠、回肠和结肠之间差异无显著性；当灌流液中药物浓度较高（150 mg·L-1）时，四肠段的Ka 均差异无显著性；药物在十二指肠的吸收受到药物浓度的影响，而空肠、回肠和结肠三个药物浓度的吸收情况差异无显著性；不同pH值的药物肠灌流液，其在各肠段的吸收差异无显著性。

结论厄贝沙坦为全肠道吸收的药物，且以十二指肠为主要吸收部位，溶液pH值对药物的吸收没有影响。

%Objective The purpose of the present study was to investigate the absorption of irbesartan in various intestinal segments,and to study the effect of concentration or pH on the drug absorption.Methods Single-pass intestinal perfusion model in rats were usedin our study,We used drug solutions of different concentration and pH to study the drug’s absorption rate constant(Ka)and effect ab-sorptioncoefficient(Peff)in duodenum,jejunum,ileum and colon.Then we study Ka and Peff by one-way ANOVA,with P <0.05 asdifference is statistically significant.Results When we use low concentrations (50 or 100 mg·L -1 ),Kaof duodenum is statisticallysignificant with jejunum,ileum and colon,while Ka of jejunum,ileum and colon were not statistically significant.And Ka of duodenum,jejunum,ileum and colon were not statistically significant when we use a high concentration(150 mg·L -1 ),The drug’s absorptionwere not statistically significant with different pH perfusion solutions.Conclusion Irbesartan can be good absorbed in the whole intes-tinal,especially in duodenum.And its absorption won’t be affected by pH.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2014(000)010【总页数】4页(P1829-1832)【关键词】厄贝沙坦;单向肠灌流;吸收速率常数;有效渗透系数【作者】师云才;蒋曙光;周建平;袁静;周湘颖【作者单位】中国药科大学，江苏南京 211198;中国药科大学，江苏南京 211198;中国药科大学，江苏南京 211198;University of Liverpool，UK;中国药科大学，江苏南京 211198【正文语种】中文厄贝沙坦是一种血管紧张素Ⅱ受体的拮抗剂，主要用于治疗轻中度的高血压，其不良反应较少、耐受性较高，疗效好。