水稻稻瘟病抗性基因Pi_ta的SNP检测方法_张羽
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水稻抗稻瘟病基因Pi-ta的分子标记辅助选择
水稻抗稻瘟病基因Pi-ta的分子标记辅助选择王忠华;贾育林;吴殿星;夏英武【期刊名称】《作物学报》【年(卷),期】2004(30)12【摘要】利用已建立的水稻抗稻瘟病基因Pi-ta显性分子标记对30个品系和157个来自不同国家的一些水稻品种进行分子鉴定,并采用稻瘟病菌菌株ZN57(IC-17)和ZN61(IB-49)人工接种试验进行致病性测试.结果表明,大部分品系和少数水稻品种含抗病基因Pi-ta,且对稻瘟病菌菌株ZN57和ZN61表现抗病反应.除此之外,利用两对显性分子标记YL155/YL87和YL183/YL87对350个杂交F3代株系进行早期筛选,得到118个抗病基因Pi-ta纯合的株系.这些株系田间抗性调查结果表明,抗病基因存在与否与田间抗性相吻合.因Pi-ta基因与许多其他抗病基因紧密连锁,而使含有Pi-ta基因的品种具有广谱抗性,由此确立了Pi-ta基因显性分子标记在育种辅助选择中的应用价值.【总页数】7页(P1259-1265)【作者】王忠华;贾育林;吴殿星;夏英武【作者单位】浙江万里学院生物技术研究所,浙江宁波,315100;USDA-ARS Dale Bumpers National Rice Research Center Stuttgart Arkansas USA,72160;浙江大学原子核农业科学研究所,浙江杭州,310029;USDA-ARS Dale Bumpers National Rice Research Center Stuttgart Arkansas USA,72160;浙江大学原子核农业科学研究所,浙江杭州,310029;浙江大学原子核农业科学研究所,浙江杭州,310029【正文语种】中文【中图分类】S511【相关文献】1.黑龙江省水稻种质资源抗稻瘟病基因Pi-ta的分子标记检测 [J], 黄晓群;郭震华;王瑞英;张兰民;王翠;周雪松;赵海新2.水稻抗稻瘟病基因Pi-ta共显性分子标记的建立 [J], 王忠华;Redus MARC;贾育林3.利用分子标记辅助选择聚合水稻Pi-ta、Pi-b和Wx-mq基因 [J], 姚姝;陈涛;张亚东;朱镇;赵庆勇;周丽慧;赵凌;赵春芳;王才林4.利用分子标记辅助选择聚合水稻抗病基因Pi-ta、Pi-b和Stv-bi [J], 王军;杨杰;陈志德;范方军;朱金燕;杨金欢;仲维功5.利用分子标记辅助选择聚合水稻Pi-ta,Pi-b和Pi-9基因 [J], 刘凯;唐红生;孙明法;宛柏杰;赵绍路;朱静雯;张桂云;代金英;严国红;王爱民;朱国永因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
106份水稻材料稻瘟病抗性鉴定及Pi9基因的分子检测
106份水稻材料稻瘟病抗性鉴定及Pi9基因的分子检测水稻是我国的重要粮食作物之一，然而由于种种原因，水稻在生长过程中容易受到病害的侵扰。
稻瘟病是一种十分常见的水稻病害，严重影响了水稻的产量和质量。
为了解决这一问题，科研人员对水稻的抗病性进行了深入研究，在这一过程中，Pi9基因被发现具有一定的抗稻瘟病功能。
本文将介绍一项关于106份水稻材料稻瘟病抗性鉴定及Pi9基因的分子检测的研究。
一、稻瘟病简介稻瘟病是由水稻瘟病菌引起的一种病害，其主要特点是叶片和穗部出现病斑，叶片病害以细长或圆形褐色病斑为主，穗部病害则表现为病穗、烂穗。
稻瘟病菌主要通过空气传播的方式进行传播，一旦发生大面积的病害，将会导致水稻的减产，甚至全面歉收。
水稻的稻瘟病抗性一直是研究的热点之一。
二、稻瘟病抗性鉴定在本项研究中，科研人员首先收集了106份不同地区的水稻材料，这些材料覆盖了我国的不同水稻种质资源。
然后通过人工接种稻瘟病菌的方法，在人工控制条件下进行稻瘟病抗性鉴定。
经过一系列的观察和鉴定，得出了不同水稻材料对稻瘟病的抗性表现。
接着，选取了抗病材料和感病材料进行了下一步的Pi9基因分子检测。
三、 Pi9基因的分子检测Pi9基因是水稻中一个非常重要的抗稻瘟病基因，其在水稻抗稻瘟病过程中发挥着重要的作用。
为了了解106份水稻材料的Pi9基因特征，科研人员进行了相应的分子检测工作。
通过PCR扩增和测序分析等技术手段，成功地对106份水稻材料的Pi9基因进行了分子检测，并比较了不同材料之间的差异。
最终，得出了一些有关Pi9基因在不同水稻材料中表达情况的重要结果。
四、研究结果及意义本项研究为水稻抗稻瘟病的品种筛选和抗病性机制的研究提供了重要的科学依据，为水稻的抗病育种工作提供了重要的实验基础。
希望在不久的将来，能够通过这些研究成果，培育出更加高产、抗病的水稻新品种，为我国的粮食生产做出更大的贡献。
106份水稻材料稻瘟病抗性鉴定及Pi9基因的分子检测
106份水稻材料稻瘟病抗性鉴定及Pi9基因的分子检测水稻稻瘟病是水稻生产中一种严重的病害，给水稻的生长和产量带来了巨大的损失。
稻瘟病主要由稻瘟病菌引起，主要以霉链菌孢子对水稻叶片进行侵染，引起水稻叶片的大片枯黄和凋萎。
在水稻的栽培过程中，水稻的抗病能力是至关重要的。
为了改善水稻的抗病性，科研人员一直在进行相关研究。
本研究选取了106份不同材料的水稻进行稻瘟病抗性鉴定及Pi9基因的分子检测。
我们使用了专门的鉴定方法对这106份水稻材料的抗病性进行了鉴定。
我们对这些材料进行了Pi9基因的分子检测，以了解Pi9基因在不同水稻材料中的分布和变异情况。
通过这两方面的研究，我们旨在为水稻品种的选育和抗病育种提供参考和借鉴。
我们对这106份水稻材料进行了稻瘟病抗性的鉴定。
我们采用了人工接种法和自然发病调查相结合的方法，分别对这些水稻材料进行了稻瘟病抗性的评价。
在人工接种的实验中，我们使用了已知的高致病菌株对水稻材料进行了接种，然后观察了接种后水稻材料的发病情况和病情严重程度。
在自然发病调查中，我们选取了适宜的稻田进行了全程的田间观察和调查，以了解不同水稻材料在自然条件下的抗病情况。
通过这两种方法的结合，我们获得了106份水稻材料的抗病性评价结果，并对其进行了分类和等级划分。
结果显示，106份水稻材料中具有不同程度的稻瘟病抗性。
有的材料表现出较强的抗病性，发病情况较轻，叶片凋萎程度较低；而有的材料则表现出较弱的抗病性，叶片凋萎较为严重。
通过对这些材料的抗病性进行评价和分析，我们筛选出了具有较强稻瘟病抗性的优良材料，为后续的育种工作提供了重要的候选材料。
通过Pi9基因的分子检测，我们发现这些水稻材料中的Pi9基因存在较大的多态性和变异性。
有的材料中Pi9基因表现出较高的抗性，而有的材料则表现出较低的抗性。
通过对Pi9基因的分子检测和分析，我们发现了一些具有较强抗病性的水稻材料中Pi9基因的特异位点和基因型，这些信息为进一步的抗病育种工作提供了重要的线索和依据。
106份水稻材料稻瘟病抗性鉴定及Pi9基因的分子检测
106份水稻材料稻瘟病抗性鉴定及Pi9基因的分子检测水稻（Oryza sativa L.）是世界上三大粮食作物之一，也是中国的主要粮食作物之一。
水稻生长过程中常常受到各种病害的侵袭，其中水稻稻瘟病是水稻主要病害之一，严重影响着水稻的产量和质量。
为了解决水稻稻瘟病对水稻产量和质量的影响，科研工作者们通过对水稻材料进行稻瘟病抗性鉴定以及Pi9基因的分子检测，以期开发出抗稻瘟病的新品种，提高水稻的产量和质量。
一、水稻稻瘟病的危害水稻稻瘟病是由水稻稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）引起的一种病害。
水稻稻瘟病菌侵染水稻植株后，会在水稻叶片和秆上形成黑色小斑，造成水稻叶片萎缩、枯黄、凋零，甚至导致水稻全株死亡。
严重影响水稻的正常生长和发育，导致产量大幅下降。
目前，除了化学药剂防治外，培育抗稻瘟病的水稻品种是控制稻瘟病的有效途径之一。
了解水稻材料的稻瘟病抗性以及Pi9基因的分子检测是非常重要的。
二、水稻材料稻瘟病抗性鉴定水稻材料的稻瘟病抗性鉴定是培育抗稻瘟病水稻品种的基础工作。
通过对水稻材料进行稻瘟病抗性鉴定，可以筛选出抗病性较好的水稻材料，为后续的抗病性育种工作提供重要的参考。
稻瘟病抗性鉴定通常采用人工接种法和田间鉴定法相结合的方法进行。
收集不同来源、不同类型的水稻材料，包括品种、近等亲系和杂交组合等。
然后，在人工条件下采用稻瘟病菌进行人工接种，观察水稻材料的病情发展情况，记录病情的特征和程度。
还需要在田间条件下进行鉴定，以更好地模拟自然环境下的病害发生情况，评价水稻材料的稻瘟病抗性。
三、Pi9基因的分子检测Pi9基因是水稻抗稻瘟病的重要基因之一。
Pi9基因编码的蛋白质可以识别稻瘟病菌并触发植物的抗性反应，从而提高水稻对稻瘟病的抗性。
Pi9基因的分子检测对水稻抗稻瘟病的研究具有重要意义。
Pi9基因的分子检测通常采用PCR技术或其他分子生物学方法进行。
利用Pi9基因的已知序列设计引物，进行PCR扩增反应得到Pi9基因的DNA片段。
《水稻稻瘟病抗性基因Pi-ta~2的候选基因筛选与初步分析》
《水稻稻瘟病抗性基因Pi-ta~2的候选基因筛选与初步分析》摘要：本文旨在通过生物信息学方法和实验手段，筛选和初步分析水稻稻瘟病抗性基因Pi-ta~2的候选基因。
研究采用了新一代测序技术结合田间实验方法，系统地确定了相关基因型与抗性之间的关系，并基于数据分析提出若干关键候选基因。
通过本文的分析，我们为进一步的水稻稻瘟病抗性育种工作提供了理论基础和实践依据。
一、引言水稻稻瘟病是全球水稻生产面临的重要病害之一，严重威胁着粮食安全和农业的可持续发展。
而基因育种是有效防控该病害的重要途径。
本研究的重点在于寻找水稻稻瘟病抗性基因Pi-ta~2的候选基因，以期为水稻抗病育种提供理论支持。
二、材料与方法1. 材料本研究所用材料为不同抗性水平的水稻品种，以及相应的田间种植样本。
2. 方法（1）测序技术：采用新一代测序技术对水稻品种进行全基因组测序，获取大量SNP（单核苷酸多态性）数据。
（2）生物信息学分析：利用生物信息学软件和数据库对SNP数据进行筛选和分析，初步确定与稻瘟病抗性相关的候选基因。
（3）田间实验：在田间环境下，对筛选出的候选基因进行表型鉴定和验证。
三、结果与分析1. 测序结果与SNP分析通过对不同抗性水平的水稻品种进行全基因组测序，我们获得了大量的SNP数据。
经过初步分析，我们筛选出了一批可能与稻瘟病抗性相关的SNP位点。
2. 候选基因筛选基于SNP数据和生物信息学分析，我们初步确定了若干与稻瘟病抗性相关的候选基因。
这些基因在抗病品种中具有较高的表达水平，且与已知的稻瘟病抗性基因有较高的连锁性。
3. 田间实验验证在田间环境下，我们对筛选出的候选基因进行了表型鉴定和验证。
结果表明，部分候选基因确实与水稻的稻瘟病抗性密切相关。
其中，Pi-ta~2基因的变异体在抗病性方面表现出明显的优势。
四、讨论本研究通过新一代测序技术和生物信息学分析，成功筛选出了一批与水稻稻瘟病抗性相关的候选基因。
其中，Pi-ta~2基因的变异体在田间实验中表现出较强的抗病性。
水稻抗稻瘟病基因pi9的snp分子标记的开发和应用
水稻抗稻瘟病基因pi9的snp分子标记的开发和应用下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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黄淮稻区推广水稻品种稻瘟病抗性基因Pi9和Pi-ta的分子鉴定
黄淮稻区推广水稻品种稻瘟病抗性基因Pi9和Pi-ta的分子鉴定李俊周;田志强;刘李鑫哲;董楠楠;索阳;赵全志【摘要】为明确Pi9和Pi-ta2个稻瘟病抗性主效基因在黄淮稻区种植水稻品种中的分布状况,利用分子标记对60个水稻品种进行Pi9和Pi-ta抗稻瘟病基因的分子鉴定.结果表明,60个检测品种中31个含有Pi9抗性基因,9个含有Pi-ta抗性基因,郑稻18、豫农粳12号、豫稻16、泰香2号、武香粳14号和武运粳21号等6个品种携带2个抗病基因.黄淮稻区水稻育种Pi9基因利用广泛,Pi-ta基因利用较少,今后应加强Pi-ta及更多主效广谱抗稻瘟病基因的聚合利用.【期刊名称】《种子》【年(卷),期】2018(037)009【总页数】4页(P1-4)【关键词】分子标记;稻瘟病;Pi9;Pi-ta;分子鉴定【作者】李俊周;田志强;刘李鑫哲;董楠楠;索阳;赵全志【作者单位】河南粮食作物协同创新中心,河南省水稻生物学重点实验室,河南农业大学,郑州450002;河南粮食作物协同创新中心,河南省水稻生物学重点实验室,河南农业大学,郑州450002;河南粮食作物协同创新中心,河南省水稻生物学重点实验室,河南农业大学,郑州450002;河南粮食作物协同创新中心,河南省水稻生物学重点实验室,河南农业大学,郑州450002;河南粮食作物协同创新中心,河南省水稻生物学重点实验室,河南农业大学,郑州450002;河南粮食作物协同创新中心,河南省水稻生物学重点实验室,河南农业大学,郑州450002【正文语种】中文【中图分类】S435;S511水稻是全球重要的粮食作物之一，我国50%以上人口以稻米为主食。
稻瘟病又称稻热病，是由子囊菌引发的真菌性病害。
水稻稻瘟病主要通过气流传播，在水稻生长全生育期均可发病，对水稻生产威胁极大，许多水稻品种因抗病性不佳，常造成严重损失，甚至绝产。
利用抗稻瘟病基因培育抗稻瘟病水稻新品种是最有效的防治稻瘟病手段，也是分子育种的主要方向[1]。
106份水稻材料稻瘟病抗性鉴定及Pi9基因的分子检测
106份水稻材料稻瘟病抗性鉴定及Pi9基因的分子检测水稻是世界上最重要的粮食作物之一，而稻瘟病则是全球范围内对水稻产量造成严重威胁的病害之一。
稻瘟病是由稻瘟菌引起的，主要表现为叶片、叶鞘和穗部的病变，严重影响水稻的生长发育和产量。
研究水稻对稻瘟病的抗性机制，寻找具有抗稻瘟病基因的水稻种质资源，是提高水稻产量和抗病性的重要途径之一。
在过去的研究中，已经发现了许多水稻抗稻瘟病基因，其中Pi9基因是其中一个重要的抗性基因。
Pi9基因编码的蛋白可以与稻瘟菌特异性结合，启动水稻植物的抗性反应，进而提高水稻对稻瘟病的抵抗能力。
通过对水稻种质资源中Pi9基因的分子检测和抗性鉴定，可以为育种工作提供重要的参考信息。
本研究中，我们选取了106份水稻材料，对其进行了稻瘟病抗性鉴定，并对其Pi9基因进行了分子检测，旨在揭示不同水稻材料对稻瘟病的抗性特点，为未来水稻育种提供相关的基础数据。
实验材料和方法1. 实验材料本研究选取了106份水稻材料进行研究，这些材料包括自然界中的野生水稻、栽培水稻以及一些已鉴定出的具有抗稻瘟病特性的水稻品种。
这些材料来源于不同的地理区域，包括东南亚、南亚、东亚和非洲等地。
通过对这些水稻材料的研究，我们可以获取来自不同地理环境的水稻抗稻瘟病基因的信息，为今后的育种工作提供更多的选择。
2. 稻瘟病抗性鉴定稻瘟病抗性鉴定是本研究的重点内容之一。
我们采用人工接种方法，将稻瘟菌接种于水稻材料的叶片上，并观察其抗性表现。
我们结合病情的严重程度、病斑的面积和叶片的感染程度等指标，对水稻材料的抗性进行了评定。
3. Pi9基因的分子检测Pi9基因的分子检测是本研究的另一个重要内容。
我们利用PCR技术从水稻材料中提取DNA，并利用Pi9基因的特异性引物对其进行扩增和测序。
通过分析Pi9基因的序列信息，我们可以了解不同水稻材料中Pi9基因的多态性和变异情况。
结果和讨论1. 水稻材料的稻瘟病抗性鉴定结果经过稻瘟病抗性鉴定，我们发现106份水稻材料中，有部分材料表现出较高的抗性。
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水稻稻瘟病抗性基因Ｐｉ－ｔａ的ＳＮＰ检测方法张羽１ 张晓娟１ 杨凤娇２ 冯志峰３（１陕西理工学院生物科学与工程学院，陕西汉中７２３０００；２北京林业大学，北京１０００８３；３陕西省汉中市农业科学研究所，陕西汉中７２３０００）ＳＮＰ－ｂａｓｅｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｒｉｃｅ Ｂｌａｓｔ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｇｅｎｅ Ｐｉ－ｔａＺＨＡＮＧＹｕ１，ＺＨＡＮＧＸｉａｏ－ｊｕａｎ１，ＹＡＮＧＦｅｎｇ－ｊｉａｏ２，ＦＥＮＧＺｈｉ－ｆｅｎｇ３（１Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈａｎｚｈｏｎｇ ７２３０００，Ｃｈｉｎａ；２Ｂｅｉｊｉｎｇ ＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８３，Ｃｈｉｎａ；３ Ｈａｎｚｈｏｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｚｈｏｎｇ ７２３０００，Ｃｈｉｎａ）ＺＨＡＮＧ Ｙｕ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏｊｕａｎ，ＹＡＮＧ Ｆｅｎｇｊｉａｏ，ｅｔ ａｌ．ＳＮＰ－ｂａｓｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｒｉｃｅ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅＰｉ－ｔａ．Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒｉｃｅ Ｓｃｉ，２０１３，２７（３）：３２５－３２８．Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｏｎｌｙ ｏｎｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｉｃｅ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ Ｐｉ－ｔａ ａｎｄ ｉｔｓ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ａｌｌｅｌｅ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｉｓ，ａ ＳＮＰ－ｂａｓｅｄ Ｐｉ－ｔａ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｅｓｔａｂｉｓｈｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｅｔｒａ－ｐｒｉｍｅｒ ＡＲＭＳ ＰＣＲｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｉ－ｔａ ｇｅｎｅ ａｍｏｎｇ ６２ｒｉｃｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｆｒｏｍ ｎａｔｉｏｎａｌ ｒｉｃｅ ｒｅｇｉｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｉｎ ｔｈｅ ｕｐｐｅｒＹａｎｇｔｚｅ Ｒｉｖｅｒ ｉｎ ２０１２ａｎｄ ９７ｒｉｃｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｆｒｏｍ ｒｉｃｅ ｒｅｇｉｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｉｎ Ｓｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｉｎ ２０１２ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｗａｓ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ＳＮＰ ｍａｒｋｅｒ ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ ｒｅｐｏｒｔｅｄ．Ｉｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ｂｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｉ－ｔａ ｇｅｎｅ ｉｎ ｒｉｃｅ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｒｉｃｅ ｂｌａｓｔ；Ｐｉ－ｔａ；ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ；ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ张羽，张晓娟，杨凤娇，等．水稻稻瘟病抗性基因Ｐｉ－ｔａ的ＳＮＰ检测方法．中国水稻科学，２０１３，２７（３）：３２５－３２８．摘 要：针对稻瘟病抗性基因Ｐｉ－ｔａ位点上的抗感基因的编码产物仅有１个氨基酸的差异，利用已经建立的检测该基因的ＳＮＰ方法以及作者在该基因编码序列构建的四引物扩增受阻突变体系ＰＣＲ，对６２份２０１２年长江上游国家水稻区域试验材料和９７份陕西省水稻区域试验材料进行了Ｐｉ－ｔａ基因检测，２种分子标记检测结果一致。
该方法的检测结果真实可靠，可以用于检测水稻Ｐｉ－ｔａ基因位点。
关键词：稻瘟病；Ｐｉ－ｔａ；检测方法；单核苷酸多态性中图分类号：Ｓ４３５．１１１．４＋１；Ｓ５１１．０３４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－７２１６（２０１３）０３－０３２５－０４ 稻瘟病是造成水稻严重减产的主要病害之一，在全球８５个水稻种植国家和地区都有发生。
每年因稻瘟病导致的生产损失约占总产量的１０％～１５％［１］。
目前控制稻瘟病最好的方法是发掘广谱稻瘟病抗性基因或主效ＱＴＬ，通过聚合育种，得到广谱持久抗病的水稻品种。
因此，抗性基因分析以及抗源筛选就显得尤为重要［１－６］。
２０世纪６０年代中期，日本率先开展了水稻品种稻瘟病抗性基因分析的研究工作，截至２０１２年６月，已至少报道了６３个抗稻瘟病位点共７７个主效基因。
随着分子标记种类和数量的不断增加，稻瘟病抗性基因的定位及克隆得到了迅猛发展［７－１１］。
研究表明，稻瘟病抗性基因Ｐｉ－ｔａ位于水稻第１２染色体靠近着丝点附近的区域，定位于ＢＡＣ克隆ＢＡＣ１４２Ｅ８［１２］上的ＲＦＬＰ标记ＲＧ２４１与ＲＺ３９７之间，遗传距离分别是５．２ｃＭ和３．３ｃＭ。
Ｐｉ－ｔａ基因包含２个外显子和１个１ ４６３ｂｐ的内含子，编码一个长度为９２８个氨基酸的细胞质膜受体蛋白。
Ｐｉ－ｔａ位点上抗感基因的编码产物仅有１个氨基酸的差异，由于出现了一个单核苷酸多态性（ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＮＰ），即由密码子ＧＣＴ变为ＴＣＴ，第９１８个氨基酸位点由抗病产物的丙氨酸变异为感病产物的丝氨酸［１３］。
时克等［１４－１６］研究表明，主效抗稻瘟病基因Ｐｉ－ｔａ在中国很多稻区表现高水平的稻瘟病抗性，被广泛应用于中国的水稻育种和生产。
ＳＮＰ主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的ＤＮＡ序列多态性，这种变异可由单个碱基的转换或颠换引起，也可由碱基的插入或缺失所致。
它是继第一代分子标记限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和第二代分子标记微卫星多态性（即简单序列重复ＳＳＲ）这２类遗传标记之后出现的第三代分子遗传标记，具有分布广泛、数量多、遗传稳定等特点。
２００５年发表的水稻基因组序列全图显示，籼、粳稻间ＳＮＰ位点多达８０１２７个，平均每１５４个碱基就存在一个ＳＮＰ，ＳＮＰ频率达０．６５％，是拟南芥２个生态型Ｃｏｌｕｍｂｉａ和Ｌａｎｄｓｂｅｒｇ之间ＳＮＰ频率的２０倍［１７］。
随着ＤＮＡ分子标记技术的发展，大批与稻收稿日期：２０１２－０８－０８；修改稿收到日期：２０１３－０２－１８。
基金项目：陕西省教育厅专项科研项目（１２ＪＫ０８１５）；陕西省科技厅农业科技创新项目（ＮＫＣ０１－０１）。
５２３中国水稻科学（Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒｉｃｅ Ｓｃｉ），２０１３，２７（３）：３２５－３２８ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｉｃｅｓｃｉ．ｃｎＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－７２１６．２０１３．０３．０１４瘟病抗性基因紧密连锁的分子标记被开发，特别是一些基于抗性基因本身序列所开发的特异性分子标记（功能标记）［１８－２２］，为快速、准确、系统地鉴定抗稻瘟病基因型水稻品种以及高效开展稻瘟病抗性基因聚合育种带来了新的契机。
随着功能基因组时代的到来，ＳＮＰ作为一种高通量、能自动检测基因组中的核苷酸序列变化的标记方法，将会在水稻基因位点突变鉴定、特异基因鉴定等基因研究方面起到巨大的作用。
而四引物扩增受阻突变体系ＰＣＲ（ｔｅｔｒａ－ｐｒｉｍｅｒ ＡＲＭＳ ＰＣＲ）是一种在普通ＰＣＲ基础上发展起来、专门用于检测ＳＮＰ的技术，它综合了扩增受阻突变体系（ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ，ＡＲＭＳ）和四引物ＰＣＲ（ｔｅｔｒａ－ｐｒｉｍｅｒ ＰＣＲ）技术的优点，能准确、快速检测ＳＮＰ，可以区分等位基因是否纯合，而且费用低廉。
本研究利用Ｈａｙａｓｈｉ等［２１］报道的检测Ｐｉ－ｔａ的特异分子标记以及作者在稻瘟病抗性基因Ｐｉ－ｔａ区域设计的四引物扩增受阻突变体系ＰＣＲ（ｔｅｔｒａ－ｐｒｉｍｅｒＡＲＭＳ ＰＣＲ）方法，探索出一套合适的ＳＮＰ检测方法，进行该基因位点检测，从而为检测稻瘟病抗性基因Ｐｉ－ｔａ提供快速、有效、简单的方法。
１ 材料与方法１．１ 实验材料２０１２年长江上游国家水稻区域试验材料６２份和陕西省水稻区域试验材料９７份由陕西省水稻研究所提供，阳性对照材料Ｔｅｔｅｐ由国家水稻种质资源中期库提供，阴性对照材料日本晴由中国农业科学院作物科学研究所水稻种质资源中期库提供。
１．２ 方法１．２．１ 引物设计本研究利用２种ＳＮＰ检测方法对Ｐｉ－ｔａ进行基因分型研究，一种利用Ｈａｙａｓｈｉ等［２１］报道的编号为ｔａ５的引物对，其中敏感引物对序列为５′－ＣＡＧＣＧＡＡＣＴＣＣＴＴＣＧＣＡＴＡＣＧＣＧ－３′／５′－ＣＧＡＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＡＣＴＡＴＡＧＴＡＴＣＣ－３′；抗性引物对序列为５′－ＣＡＧＣＧＡＡＣＴＣＣＴＴＣＧＣＡＴＡＣＧＣＡ－３′／５′－ＣＧＡＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＡＣＴＡＴＡＧＴＡＴＣＣ－３′。
其原理如下：两条相邻的寡核苷酸与模板退火，只有当其在接合处与模板完全匹配时才会在连接酶的作用下连接在一起。
因而等位基因特异性寡核苷酸能够探察多态性位点碱基的性质。
加入两条互补于待测ＳＮＰ位点一侧序列的等位基因特异性探针和一条互补于待测ＳＮＰ位点另一侧序列的公共探针；在ＤＮＡ连接酶的作用下，与目标ＤＮＡ单链完全互补的等位基因特异性探针和公共探针发生连接反应。
连接产物变性后作为探针的模板进入下一个循环。
如果等位基因特异性探针的３′端存在错配，则不会发生连接反应，抗感引物只在３′端有一个碱基的差异，抗性引物中为Ｇ，敏感引物中为Ａ，而它们的反向引物是相同的。
同一个材料经抗性引物（Ｒ）和敏感引物（Ｓ）分别扩增，ＰＣＲ产物相邻点样，如果只有抗性引物扩增出条带，则该材料为抗性基因纯合体（ＲＲ）。
如只有敏感引物扩增出条带，则该材料为敏感性基因纯合体（ＳＳ）。
Ｒ引物和Ｓ引物都扩增出条带，该材料为抗性基因杂合体（ＲＳ）。
另一种为四引物扩增受阻突变体系ＰＣＲ法。
从ＮＣ－ＢＩ网站（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）ＧｅｎＢａｎｋ中得到编码稻瘟病抗性基因Ｐｉ－ｔａ的基因序列。
设计引物时将突变碱基落在突变引物的３′端，根据Ｔａｑ酶缺乏３′→５′外切酶活性的特点，３′末端错配碱基的引物，其延伸速度低于正常末端碱基配对的引物的延伸速度，所以特异长度的扩增条带就不会出现，从而就表明模板ＤＮＡ与引物３′末端没有相应的突变。
反之，则表明模板ＤＮＡ上存在与引物３′末端相应的突变碱基。
３′末端的碱基可以设计成与抗性基因序列完全互补而与敏感基因序列不互补，也可以设计成与敏感基因序列互补而与抗性不互补。
抗性正向引物为５′－ＣＣＧＴＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＴＴＴＡＣＴＴＧ－３′；敏感反向引物为５′－ＣＡＡＧＴＣＡＧＧＴＴＧＡＡＧＡＴＧＣＡＴＴＧＡ－３′；外引物上游序列为５′－ＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＡＣＴ－３′；外引物下游序列为５′－ＴＴＡＧＧＧＣＣＡＡＣＡＴＴＣＴＡＣＧＧ－３′。