SafracinB的菌种选育及发酵工艺_王向阳

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610404729.4(22)申请日 2016.06.07(71)申请人 赤峰制药股份有限公司地址 024000 内蒙古自治区赤峰市红山区一东街84号申请人 上海希迈医药科技有限公司　上海创诺医药集团有限公司(72)发明人 张国银　陈艳　(74)专利代理机构 上海海颂知识产权代理事务所(普通合伙) 31258代理人 何葆芳(51)Int.Cl.C12N 1/20(2006.01)C12N 1/36(2006.01)C12N 13/00(2006.01)C12N 15/01(2006.01)C12P 25/00(2006.01)C12R 1/125(2006.01)(54)发明名称一种维生素B2高产菌株及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种维生素B2高产菌株及其制备方法，该菌株名称为Bacillus subtilis15-1-11，其特征在于：该菌株可抗浓度为10-100mg/L的8-氮鸟嘌呤、8-氮杂腺嘌呤、6-氮杂胸腺嘧啶、DL-蛋氨酸亚砜、玫瑰黄素。

原始菌株预处理后，经过紫外和化学诱变，然后再经过代谢底物类似物驯化，最后再通过营养培养基和发酵培养基培养即可制备所述菌株。

本发明综合利用物理、化学复合诱变和代谢底物类似物驯化，从而筛选出一种稳定、高产的维生素B2菌株，与原有菌株相比，克服现有技术中维生素B2产量不高的缺陷，在发酵周期不变的情况下，其维生素B2合成能力提高6g/L左右，发酵成本大幅度降低。

权利要求书1页 说明书4页CN 107475142 A 2017.12.15C N 107475142A1.一种维生素B2高产菌株，该菌株名称为Bacillus subtilis 15-1-11，其特征在于：该菌株可抗浓度为10-100mg/L的8-氮鸟嘌呤、8-氮杂腺嘌呤、6-氮杂胸腺嘧啶、DL-蛋氨酸亚砜、玫瑰黄素。

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文献标识码：Ａ
利福霉索（ｒｉｆａｍｙｃｉｎｓ）属于安莎类抗生素，由地中 海拟无枝酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｎｗｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ）产生。广 泛应用于结核病、麻风病等分枝杆菌感染的治疗。 抗生素发酵水平的提高，主要依赖于菌种选育及 培养基和培养条件的优化。利福霉素通过菌种选育获 得高产菌株从而提高生产水平已有报道【１’２ Ｊ。新昌制 药厂的利福霉索Ｂ产生菌通过推理选育获得的突变 株，生产能力已提高了一倍，但在原发酵工艺中不能体 现出应有的优势。本文通过对利福霉素Ｂ发酵培养 基和培养条件优化，找到一条适合该高产菌种规模化 发酵的生产工艺，从而提高利福霉素Ｂ的生产水平。 ｌ材料和方法 １．１菌种 地中海拟无拟酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｌ） ＸＣ－３０１，浙江医药股份有限公司新昌制药厂提供，该 菌种已经多次诱变处理。 １．２材料 种子培养基（％）葡萄糖１．５，黄豆饼粉１．０，淀 粉１．５，蛋白胨１．０，ＫＨ２ＰＯ，Ｉ ０．２，泡敌０．０４。 发酵培养基（％）葡萄糖１０．０，蛋白胨１．０，黄豆
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０ ２４ ４８ ７２ ９６ 丌ｈ１ Ａ：Ｒｅｄｕｃｅｄ ｓｕｇａｒ １２０ １４４ １６８ ９２
Ｈ：Ａｍｉｎｏ
ｎｉｔｒｏｇｅｎ；
Ｃ：ｐＨ；
Ｄ：Ｍｙｃｄｉｕ６ｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ； ｆｅｅｄｉｎｇ ｒｌｆａｍｙｃｉｎ Ｂ
Ｅ：Ｐｒｏｄｕｃｔｉ＇ｄｔｙ
１：Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｆｅｅｄｉｎｇ；２：Ｂａｔｃｈ
［４］Ｓｅ商Ｐ，Ｔｈｉｅｍａｎｎ Ｊ
ｌｎｄ
Ｅ
Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｒｉｆａｍｙｃｉｎｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｇ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９６７；６：２Ｉ

硫酸多粘菌素B菌种选育与发酵工艺的研究随着人们对于自身体质状况的关注度加强，各医学机构科研人员加强了对各项菌种的研发，其中硫酸多粘菌素B菌种是一种治疗由于革兰阴性菌引发疾病的多肽抗生素，且具有明显的功效。

初始之初，硫酸多粘菌素B菌种产品大多依赖从国外引进，为改变该现状，近年来我国加强了对硫酸多粘菌素B菌种的研发，即从生产菌种的诱变育种到最后的发酵工艺，展开了系列的探研，并取得了良好的效果。

标签：硫酸多粘菌素B菌种；选育；发酵工艺目前由于革兰阴性菌引发的各种疾病成为了医学机构首次科研的实验对象。

改革开放初期，对于革兰阴性菌治疗的药物硫酸多粘菌素B菌种我国大多采用从国外引进的方法，在到一定程度上不仅对病人的治疗造成一定的影响，同时也阻碍了我国医学事业的发展。

因此，为改变这种现状，国家加大了对硫酸多粘菌素B菌种的研发，通过相关的实验，进行了菌种的选育，同时探研出适合B菌种种子发酵的相关内容，进而推进我国医疗事业的稳定发展。

1 硫酸多粘菌素B菌种的性质（1）硫酸多粘菌素B菌种的概述。

硫酸多粘菌素B菌种是一种碱性琐环状多肽抗生素，主要是由氨基酸和脂肪组成，是多粘菌素B的硫酸盐形式，在医学的治疗过程中，其主要是针对对革兰阴性菌引的发如大肠杆菌、百日咳杆菌等疾病，具有良好的功效，不仅可用于防治细菌性肠炎，同时对于泌尿性感染、皮肤粘膜感染等也具有其它抗生素所没有的功效。

（2）硫酸多粘菌素B菌种的物理化学性质。

硫酸多粘菌素B菌种是多粘菌素B的一种碱性多肽抗生素的硫酸盐，是一种白色的结晶状粉末，味苦涩，易溶于水却不易溶于酯、酮、氯仿等有机溶剂。

同时，硫酸多粘菌素B菌种的化学性质与外界的因素息息相关，当外界加热温度较高、处于酸碱环境中时，其活力较低，易被分解，容易与有机溶剂等发生反应。

经过研究调查发现，多粘菌素B是由10个氨基酸组成的多肽，在其内部结构中七个多肽相互形成一个脂肪链，但是位于尾部的氨基酸则是散乱存放的，因此在溶液中，多粘菌素B不存在固定的结构，通过相关的实践探知多粘菌素B的分子式为C56H98N16O13.H2SO4，分子量为1301.56，熔点为205-122℃。

收稿日期: 2007-11-16 修回日期: 2008-03-28 作者简介: 林玉双, 女, 生于 1983 年, 在读硕士研究生。 * 通讯作者, E-mail: hongw r56@ t om. com
氨甲酰妥布霉素高产菌株选育及其发酵 特性研究 林玉双等
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那霉素 B 和妥布霉素的分歧代谢途径; 韩国研究者于 2004 年从黑暗链霉菌 AT CC17920 中分离到妥布霉素 生物合成基因簇[ 5] , 有望给妥布霉素的生产带来质的 飞跃, 但阐明各个基因的功能并将其运用于工业化生 产仍需一段过程。本文从菌种选育和工艺优化两方面
ABSTRACT Objective Scr eening a hig h and st able m ut ant st rain f rom S. tenebrari us T s-228 fo r CT B ( carbam oylt obramy cin) product ion. Methods A par ent st rain ( T s-228) w as iso lated by nat ural select ion, t hen t reat ed by UV, and cult ur ed o n plat e cont aining t obramy cin. Finall y, a high yiel d mutant T t -49 w as obt ained t hr oug h sever al cyclic screening . It s pr oduct ivit y w as det ect ed in f lask and the curves of t ypical ferment at ion w ere processed in 50L f erm ent er. Resul ts A m ut ant st rain T t -49 w as cult ured. It s ferm ent at ion t itre increased t o 5869u/ ml which w as 1. 8 t imes hig her t han t he parent st rain T s-228, and t he component rat io of t obr amycin comes up t o 68. 5% . T he f er ment at io n course of T t -49 onl y need 4 days. T he 18h-seed m ycelium and 10% W/ V of inoculat ion w ere used. Conclusions T he com bination of nat ural select ion and U V w as a useful m et hod f or to bram ycin f rom S . tenebrari us. Dissolved ox yg en is an im port ant parameter in ferm ent at ion co ndit ion.