手性高效液相色谱法分析测定缬沙坦对映体

第一讲手性分离色谱手性药物常用的色谱分离方法有：高效液相色谱、气相色谱、毛细管电泳、超临界流体色谱。

手性药物给人类曾经带来过空前的灾难——反应停事件。

概念手性:指一种化合物分子由于其三维空间结构的原因所显示出的相互不能重合，但互为镜像关系，它形象的比喻为人的左右手，这叫手性。

对映体: 由于手性中心连接的四个基团在空间三维排列的不同，对偏振光产生的旋转方向不同，从而产生不能重叠的互为镜像的光学异构体,称对映体。

旋光性:手性药物对映体之间对偏振光的偏转程度相同,但偏转方向相反,即旋光性。

右旋体:能使偏振光按顺时针方向旋转的对映体称为右旋体以d-或（+）-表示。

左旋体:按逆时针方向旋转者称为左旋体以l-或（－）-表示。

外消旋体:等量的左旋体和右旋体构成外消旋体，没有旋光性，以（dl）或（±）表示。

内消旋体:分子中含有手性碳原子，但作为分子整体来说是非手性的。

内消旋化合物是纯净物。

外消旋体与内消旋体的共同之处是：二者均无旋光性。

外消旋体：是混合物，可拆分出一对对映体。

内消旋体：是化合物，不能拆分。

手性药物:是指由具有药理活性的手性化合物组成的药物。

手性药物的表示方法1.dl-或(±)-表示能使偏振光的偏振面按顺时针方向旋转的对映体称为右旋体（dextrotatory），在药名前用d-或(+)-表示；反之，称为左旋体（levorotatory），在药名前加l-或(-)-表示。

外消旋体（racemate）则是由等量的左旋体和右旋体构成，没有旋光性，在其药名前用dl-或(±)-表示。

2. D/L标记法（相对构型）1951年前，人们还无法确定化合物的绝对构型。

费歇尔(Fischer)人为地选定(D)-甘油醛为标准物，以标准参照物来确定药物的立体化学构型，相对构型。

由于D/L构型表示法它只适用与甘油醛结构类似的化合物，对多个手性碳的化合物使用不方便。

与表示旋光方向的d和l容易混淆，目前多限于糖和氨基酸的立体化学命名。

HPLC法测定缬沙坦胶囊的有关物质发表时间：2013-02-25T17:15:14.263Z 来源：《医药前沿》2012年第36期供稿作者：李明杰蒋燕杰郭中明罗兆亮[导读] 该方法准确可靠,专属性强,可用于缬沙坦胶囊有关物质测定。

李明杰蒋燕杰郭中明罗兆亮（山东罗欣药业股份有限公司 276000）【摘要】目的建立测定缬沙坦胶囊有关物质的HPLC方法。

方法用Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水-冰醋酸（500：500：1）为流动相,流速1.0ml?min～(-1),柱温40℃,检测波长230nm,进样量20μl。

结果有关物质各杂质峰与主峰之间的分离良好,且已知单个杂质分离良好。

结论该方法准确可靠,专属性强,可用于缬沙坦胶囊有关物质测定。

【关键词】缬沙坦胶囊有关物质高效液相色谱仪缬沙坦是一种口服有效的特异性的血管紧张素Ⅱ（AT1）受体提起拮抗剂，它选择性地作用于AT1受体亚型，阻断AngⅡ与AT1受体的结合（其特异性拮抗AT1受体的作用大于AT2受体约20,000倍），从而抑制血管收缩和醛固酮的释放，产生降压作用。

临床用于治疗轻、中度原发性高血压[1]。

《中国药典》2010年版收载了缬沙坦原料药及胶囊的含量和有关物质测定方法,本次实验采用《中国药典》2010年版HPLC法对缬沙坦胶囊进行有关物质方法学研究，并与国内上市缬沙坦胶囊质量作了系统的比较。

1 方法与结果1.1 色谱条件与系统适用性[2]色谱柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)；柱温：30°C；流动相：乙腈-水-冰醋酸（500：500：1）；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；检测波长：230nm。

1.2 专属性试验空白干扰试验：精密量取空白溶剂20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果表明，空白溶剂不干扰本品的有关物质测定。

按处方配制不含缬沙坦的空白样品，作为供试品溶液。

缬沙坦的血药浓度测定郭影坤;隋阳【摘要】测定了人血浆中的缬沙坦的药物浓度.以替米沙坦为内标,血浆样品采用液-液萃取法提取,高效液相色谱法测定.色谱柱：Agilent ZORBAZX Eclipse XDB-C18柱(4.6×150 mm,5μm)；流动相：乙腈：0.01 mol·L-1KH2PO4缓冲液( pH=2.96,48：52)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：激发波长265 nm,发射波长378 nm；柱温：30℃.结果缬沙坦在12.5~5000 ng·mL-1浓度范围内线性良好( r=0.9973),平均提取回收率为58.7%,日内、日间精密度RSD为5.13%~7.93%.血浆样品在-20℃反复3次冻融、预处理后室温放置24 h、-20℃冰冻放置1个月后3种不同考察下稳定性均良好.结论本方法准确、快速,适用于缬沙坦的血药浓度测定及药代动力学研究.%Telmisartanas was used as internal standard, plasma samples were extracted with a liquid-liquid method, then valsartan concentration in human plasma was determined by HPLC. Stationary phase:Agilent ZORBAZX Eclipse XDB-C18 column (4.6×150 mm, 5μm);Mobile phase:acetonitrile and 0.01 mol·L-1 KH2PO4 buffer ( pH 2.96, 48︰52); Flow rate: 1.0 mL·min-1; Detection wavelength: excitation wavelength 265 nm, Emission wavelength 378 nm;Column temperature:30 ℃. The results show that the method has better linear when valsartan concentration is in the range of 12.5 to 5 000 ng·mL-1 ( r=0.997 3), the average extracted recovery is 58.7%, and the precision RSD is in the range of 5.13%~7.93%. The stabilities of plasma samples are excellent. This method is simple, accurate and reliable. It is suitable fordetection of the concentration of valsartan in human blood samples so asto study its pharmacokinetics.【期刊名称】《当代化工》【年(卷),期】2013(000)002【总页数】4页(P249-252)【关键词】缬沙坦;高效液相色谱;血药浓度测定【作者】郭影坤;隋阳【作者单位】东北制药集团供销有限公司，辽宁沈阳 110023;东北制药集团供销有限公司，辽宁沈阳 110023【正文语种】中文【中图分类】O657缬沙坦是一种非肽类的血管紧张素 II 受体AT1拮抗剂，选择性作用于AT1受体亚型，从而阻断血管紧张素II介导的生理效应。

摘要手性药物的光学纯度和稳定性是其产品质量的重要指标。

在众多手性拆分的方法中，结晶法因其操作简便，经济，一直是人们关注和研究的热点。

本文以抗高血压药物缬沙坦为例，研究了利用优先结晶拆分高共熔点组成的外消旋化合物缬沙坦的过程，并利用诱导结晶工艺改善了其药物的稳定性。

具体内容如下：利用质量法分别测量了不同对映体含量的缬沙坦在乙酸乙酯和混合溶剂（乙酸乙酯：乙醇=99%:1%，m:m）中的溶解度，根据得到的溶解度数据分别绘制了缬沙坦在两种溶剂体系中的溶解度三元相图。

对比两种溶剂体系中的三元相图，判断外消旋体缬沙坦属于外消旋化合物，且其共熔点组成为S:R(R:S)=90%:10%。

此外，测量了91%(S)-V（表示对映体(S)-缬沙坦的摩尔含量为91%）在两种溶剂体系中的溶解度和介稳区，用于设计和实施优先结晶工艺。

根据三元相图确定了待优化纯度为91%(S)-V的初始浓度，并成功在两个溶剂体系中分别实施优先结晶，得到了光学纯度大于99%的产品。

对比两个体系中的实验结果，在混合溶剂中收率更高，且操作区域更大，更易实现优先结晶，确定混合溶剂为该药物优先结晶的较适宜溶剂体系，说明溶剂的选择对药物的手性拆分影响重大。

此外，根据三元相图理论，提出一种用于快速拆分外消旋化合物的结晶优化方法。

在1L反应釜中研究了自发结晶，诱导结晶，反溶剂结晶和造粒工艺对药物缬沙坦原料药稳定性的影响，然后在5L反应釜中放大诱导结晶工艺研究其制剂适应性。

即将缬沙坦原料药按照配方做成胶囊剂型，做三个月加速稳定性试验研究其化学稳定性。

同时将缬沙坦原料药按照配方做成分散片剂型，研究其崩解速率。

最终确定诱导结晶工艺生产的缬沙坦原料药适用于胶囊剂型和分散片剂型的制作。

研究了几种过程分析技术在结晶过程中的应用。

在本文的结晶研究中，将在线红外，浊度计和在线二维成像应用于结晶过程的研究，并取得了良好的成果，说明了过程分析技术对结晶过程的重要性，应该大力发展其在结晶过程中的应用。

如何应用高效液相色谱法进行手性药物对映异构体拆分对于市场上越来越多对目标物准确定性的要求，而手性产物是其中较为重要的一部分，因此对于手性目标物的检测就显得尤为重要。

一、什么是手性导构和对映异构体？当药物分子中碳原子上连接有4个不相同的基团时，该碳原子被称为不对称碳或手性碳（中心），会导致药物分子存在异构体，如果两个异构体之间的关系如同一个物体的立体结构在照镜子，这个立体结构和它在镜子中的像互为对映异构体（对映体）。

图1是手性对映异构体的图示。

图1 手性对映异构体图示对映体具有相同的物理性质（如熔点，沸点，溶解度，折射率，酸性，密度等），热力学性质（如自由能，焓、熵等）和化学性质。

除非在手性环境（如手性试剂，手性溶剂）中才表现出差异。

对映体对偏振光的作用不同，它们的比旋光度数值相同，但方向相反。

对映体的生物活性不相同，化学反应中表现出等速率。

等量的左旋体与右旋体的混合物构成外消旋体。

从对映体中分离出单纯一个光学异构体的方法称手性拆分。

最普通的手性拆分方法是消旋旋体与光学活性相反的离子（称拆分剂）作用生成非对映体。

手性药物对映体拆分的方法主要有非色谱法和色谱法。

非色谱法（主要包括结晶法、微生物消化法等）耗时长，过程繁琐不能制备高纯度对映体，色谱法是基于把对映体的混合物转换成非对映异构体，然后利用它们在化学或物理性质上的差异进行分离。

主要包括气相色谱(GC)、超临界流体色谱(SFC)、毛细管电泳(CE)和毛细管电色谱(CEC)等。

表1罗列了色谱手性拆分的发展史。

其中高效液相色谱(HPLC)因其独特的优势成为手性分析领域最常用的一种技术。

表1 色谱手性拆分发展史二、HPLC手性拆分方法手性药物拆分法通常分为直接法和间接法两大类。

间接法和直接法的共同特点是均以现代技术为基础并引人不对称中心或光活性分子；不同的是间接法是将其引入分子溶质内，而直接法则是引人分子间。

引人手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异是手性进行光学异构体拆分的基础。

缬沙坦氨氯地平片有关物质研究周志勇;黄鹤飞;张烨【摘要】目的：建立缬沙坦氨氯地平片有关物质含量的测定方法。

方法采用高效液相色谱法，Agilent1220高效液相，（Eclipse plus，250 mm ×4．6 mm，5μm）色谱柱，以磷酸盐缓冲液（取三乙胺10 mL 加水至1000 mL，用磷酸调节pH 值至2．8）为流动相A，以甲醇—乙腈（70∶30）为流动相 B，进行线性梯度洗脱，流速为1．0 mL・ min－1，检测波长为237 nm。

结果氨氯地平与杂质D 分离度为14．44，缬沙坦与杂质 B 的分离度为9．46，且各物质之间有较好的分离；空白辅料对有关物质测定无干扰，专属性良好；强制降解试验中，杂质可与主峰完全分离。

结论该方法结果准确，重复性好，可靠性强，可用于测定缬沙坦氨氯地平片中的有关物质。

%Objective Aimed to establish an analytical method for related substances of valsartan Amlodipine tablets.Methods The sample was determined by HPLC (Agilent1220).The analysis was performed on Eclipse plus C18 column (250 mm ×4.6 mm, 5 μm) with the detection wavelength at 237 ing phosphate buffer (10 ml triethylamine volumetric to 1 000 mL,adjusted to pH 2.8 with phosphoric acid) as mobile phase A, methanol -acetonitrile (70∶30) as mobile phase B, and linear gradient, mobile phase was initi-ated at a flow rate of 1.0 mL・ min-1 .Results The resolution of amlodipine and impuritie D was 14.44;the resolution of amlodipine and impuritie B was 9.46, and there was good resolution between each substance.Conclusions This method is accurate, reproduci-ble and reliable, which can be used to determine the related substances of valsartan Amlodipine tablets.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2016(020)004【总页数】5页(P651-655)【关键词】缬沙坦氨氯地平;有关物质;高效液相色谱【作者】周志勇;黄鹤飞;张烨【作者单位】三峡大学医学院药学系;三峡大学第一临床医学院药剂科，湖北宜昌443003;三峡大学第一临床医学院药剂科，湖北宜昌 443003【正文语种】中文◇药物分析◇缬沙坦氨氯地平片是由诺华公司研发，并于2006年12月获得美国FDA批准用于治疗原发性高血压，用于单药治疗不能充分控制血压的患者。

药物研究中手性分离分析方法及技巧药物研究中手性分离分析是指将手性药物中的手性异构体（也称为对映体）分离出来，并进行定量分析。

由于手性异构体具有不对称的结构，其物理化学性质和药理活性可能差异巨大，因此手性分离分析对于药物研究具有重要意义。

以下将介绍几种常用的手性分离分析方法及技巧。

1.气相色谱法（GC法）：GC法是通过在手性固定相柱上进行气相色谱分析，分离手性异构体。

该方法基于手性碳氢化合物在手性固定相上的不同吸附能力来实现手性分离。

同时，通过合适的手性底物和手性固定相的选择，还可以更好地提高手性分离的选择性和灵敏度。

2.液相色谱法（HPLC法）：HPLC法是手性分离分析中最常用的方法之一、常见的手性固定相有手性液相、手性离子对和手性硅胶等。

通过在手性固定相上进行液相色谱分析，利用手性化合物在固定相上的差异相互作用，实现手性分离。

此外，还可以结合负载式手性液相色谱法、手性离子对液相色谱法等技术，提高手性分离效果。

3.毛细管电泳法（CE法）：CE法是一种高效、快速的分离技术，特别适用于分析手性药物。

通过在毛细管中施加电场，利用手性化合物在毛细管中的迁移速率差异实现分离。

此外，还可以通过改变运行缓冲液的组成、pH值等条件，调节手性分离的选择性和分离效果。

除了上述主要的手性分离分析方法外，还存在一些辅助技巧和方法，可以进一步提高手性分离的效果：1.共处理：将两个手性化合物混合在一起进行共处理，通过比较混合物中手性峰的相对峰度等信息，来判断手性分离的效果。

2.离子对调整：通过调整分析液中离子对的浓度和种类，来改变手性分离的效果。

一般来说，手性离子对可以提高手性分离的分辨率和选择性。

3.pH调控：通过改变液相色谱系统中溶液的pH值，可以影响毛细管电泳法和液相色谱法中手性分离效果。

pH值的改变可以调节化合物分子的电荷状态，从而影响手性分离的选择性。

总之，手性分离分析方法及技巧在药物研究中起着重要的作用。

通过合理选择合适的手性分离方法，并结合辅助技巧和方法，可以实现对手性异构体的高效、准确的分离和定量分析，从而为药物研究提供有价值的数据。

反相高效液相色谱法研究缬沙坦分散片人体生物等效性张锋【期刊名称】《海峡药学》【年(卷),期】2008(020)005【摘要】目的研究缬沙坦分散片在人体内的相对生物利用度,与参比制剂(缬沙坦胶囊)进行比较,确定其是否具有生物等效性.方法 20名健康受试者单剂量随机交叉口服受试制剂80mg和参比制剂80mg后,用HPLC-荧光法测定血浆中缬沙坦的浓度.以参比制剂为标准对照,用面积法估算受试制剂的相对生物利用度.结果缬沙坦分散片的Tmax＝1.8±0.7h,Cmax＝31 42.02±931.93ng/(mL·h),AUC0-t＝4267.25±1763.96ng/mL·h,方差分析结果表明,受试制剂和参比制剂间的AUC0-96、Cmax、Tmax没有显著性差异(P＞0.05).结论本法灵敏、简便、准确度和精密度高. 受试制剂与参比制剂具有生物等效性,且受试制剂的达峰时间早于参比制剂,最大药物浓度大于参比制剂.【总页数】3页(P104-106)【作者】张锋【作者单位】江苏省疾病预防控制中心,南京,210009【正文语种】中文【中图分类】R969.1【相关文献】1.缬沙坦分散片人体生物等效性研究 [J], 霍强;杨敏;吴华璞;蒋志文2.罗红霉素片和胶囊在健康人体的药代动力学及人体生物等效性研究 [J], 林建阳;冯婉玉;陈之光3.反相高效液相色谱法检测阿莫西林-克拉维酸钾(8∶1)干混悬剂血药浓度及生物等效性研究 [J], 刘孟斯;尹运涵;李薇;彭真珍;高芳;刘丽;赵春杰4.缬沙坦分散片与胶囊在健康人体的相对生物利用度研究 [J], 张志华;丁劲松;欧阳利龙;郭歆;何周康5.复方缬沙坦分散片在健康人体内的药物动力学 [J], 黄建耿;斯陆勤;李高因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPLC法在药物对映体的分离和测定中的应用（转）摘要：由于药物对映体之间在药理、毒理及吸收等方面存在较大差异，因此，建立分离和测定对映体化合物的方法十分重要。

本文综述HPLC法在分离和测定药物对映体的常用方法，包括手性衍生化试剂、手性流动相和手性固定相在药物对映体分离测定中的应用。

对对映体化合物的分析鉴定有指导意义。

手性化合物的拆分是当前分析化学中最为活跃的领域之一，自然界中的许多化合物都是有旋光性的，而合成手性药物中大多（88%）是外消旋体，许多手性药物的对映体在生理过程中显示了不同生理活性。

据研究反应停的致畸作用主要是由于其（S）-（-）异构体所致。

因此，建立高专属性、高灵敏度、高分离度的对映体拆分和测定方法，对提高药物的活性、减小副作用，深入研究药物的作用机理等具有重要的理论和实际意义。

对映体化合物之间除对偏振光的偏转方向不同外，具有完全相同的理化性质，因而其分离比较困难。

传统的拆分方法有分步结晶、微生物和酶消化法等，或者用手性衍生化试剂将其转化成非对映体，然后根据其物理性质不同进行分离，但这些方法难于进行微量的分离和测定。

80年代以来，随着快速、准确、微量的光学异构体的HPLC拆分及测定方法的建立和发展，使HPLC迅速成为药物对映体分离和测定最为广泛应用的方法。

手性HPLC拆分法是以现代HPLC技术为基础，引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异而进行分离。

通常分间接法和直接法，前者是对映体混合物以手性试剂作柱前衍生，形成一非对映体，然后以常规（偶也见手性）固定相分离。

后者是直接以手性流动相（CM P）或手性固定相（CSP）直接进行分离。

1手性衍生化试剂法手性衍生化试剂（CDR）法是在分子间引入手性中心，其产物为非对映异构体(diaster eomer，DSTM),从而进行分离。

下列情况通常选用CDR法进行拆分：(1)不宜直接拆分。

添加某些基团，以增加色谱系统的选择性。

如游离胺类在CSP上往往是颇弱的色谱性质，生成中性化合物后则获显著改善。

利用手性固定相高效液相色谱法对焦谷氨酸对映异构体的分离1．3疗效评价疗程为期3个月，对两组的疗效进行比较分析。

显效：监测患者的舒张压在一定时期稳定下降≥10mm Hg ，降至到正常范围（＜90mm Hg ），或下降＜20mmHg ；有效：患者的舒张压下降＜10mm Hg ，降至到正常范围，或下降10 20mm Hg ，或着是收缩压下降＞20mm Hg ；无效：以上标准均未达标。

1．4统计学处理采用SPSS 12．0统计软件分析，计量资料以计数χ2检验。

以P ＜0.05为差异有统计学意义。

2结果经过3个月的治疗，两组取得了不错的疗效，但从显效率和总有效率来看，观察组明显优于对照组（P ＜0.05），见表1。

表1两组患者疗效比较（例）组别例数显效有效无效总有效率（%）对照组441720784．1观察组443013197．83讨论高血压是内科最为常见的心血管疾病，不仅因为其患病率高，而且由于老龄化，还常伴有脂肪和糖代谢的紊乱以及心、脑、肾等器官的损伤。

预防高血压已经作为全球范围内最为重大的卫生问题，随着人们物质生活水平的提高，其病由老龄化呈现年轻化的趋势，其发病率已经逐年在增长，严重的威胁人类健康和生活质量。

依那普利作为临床常用的血管紧张素转换酶抑制剂，能够有效的抑制血管内皮中的血管紧张转换酶的活性，而且能够降低血管紧张素和醛固酮的水平，在通过减少外周血管的阻力及舒张血管平滑肌来得以实现降压的作用。

氢氯噻嗪则是临床常用的利尿剂，其作用于肾小管的远端的，可有效抑制肾小管对Na +、Cl -、K +的重吸收，减少血容量，从而减轻了心脏的容量负荷，使心输出量下降而起到降压的作用；还持续用药，血容量、体内的钠总量和心输出量渐趋正常，其对血管紧张素转换酶抑制剂迅速起效及增强，使得外周血管内的钠量减少，协同作用，通过Na +、K +细胞的内交换，而Ca +含量减少使血管平滑肌对去甲肾上腺素水平的缩血管反应降低。

依那普利与氢氯噻嗪联用，即可通过协同作用，加强效果，又可通过互补作用持续作用。

反向高效液相色谱法紫外测定缬沙坦含量的方法学研究陈岚;张震华;谢之微【期刊名称】《西部医学》【年(卷),期】2015(27)3【摘要】目的建立高效液相色谱法测定缬沙坦原料的含量.方法采用Waters Symmetry C18柱(150 mm×4.6mm,5μm),用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水冰醋酸(500∶500∶1)为流动相;设定检测波长为225nm,流动相流速为1.0ml/min.取样品适量,精密称定,加流动相溶解并定量稀释制成每1ml约含缬沙坦0.05mg的样品溶液;另取缬沙坦对照品适量,精密称定,加流动相溶解并定量稀释制成每1ml约含缬沙坦0.05mg的对照品溶液.上述供试品溶液与对照品溶液稀释相同倍数后经过精密度试验、重复性试验、稳定性试验、回收率试验、测定定量项、样品测定等步骤.结果在进样浓度为5.0～75.0μg/ml范围内与峰面积线性良好(r=0.9999,n=18),平均回收率为100.9％(RSD％ =0.49％,n=9).结论反向高效液相色谱法专属性好,准确,灵敏,用于缬沙坦含量的测定结果可靠.【总页数】3页(P452-454)【作者】陈岚;张震华;谢之微【作者单位】上海交通大學附属瑞金医院药剂科,上海卢湾200025;上海交通大學附属瑞金医院药剂科,上海卢湾200025;上海交通大學附属瑞金医院药剂科,上海卢湾200025【正文语种】中文【中图分类】R927【相关文献】1.高效液相色谱法测定复方缬沙坦片中缬沙坦的含量 [J], 杨卿2.高效液相色谱法测定硝苯地平片含量的方法学研究 [J], 赵灵芝;刘春叶;王海洋;苗延青;张雪娇3.高效液相色谱法测定盐酸格拉司琼氯化钠注射液中有关物质和含量测定的方法学研究 [J], 魏玮;赵金会4.反向高效液相色谱法联合紫外检测器同时测定解毒消炎茶中绿原酸等9种不同极性成分含量效果分析 [J], 郭艳玲5.反相高效液相色谱法测定益气生血胶囊中黄芪甲苷含量的方法学研究 [J], 孙宾娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。