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Catalog Number EK220-48EK220-96定量检测血清、血浆和细胞培养上清中的小鼠白细胞介素(IL-20)浓度。
本产品仅用于科学研究，非诊断试剂，不能用于临床诊断。
一、产品介绍1.背景介绍人白细胞介素20(IL-20)是IL-10细胞因子家族中的一员，与IL-10有约28%的氨基酸同源性，与小鼠IL-20有约76%的氨基酸同源性。
IL-20由活化的角质细胞和单核细胞产生，通过角质细胞和其它上皮细胞上的2个不同的细胞表面受体复合物传递细胞内信号。
该细胞因子的特异性受体在皮肤中表达，在银屑病皮肤中显著上调，这表明该蛋白在外皮和银屑病中起作用。
另外，IL-20调节角质细胞在炎症特别是与皮肤有关的炎症过程中的增殖和分化。
IL-20同样引起多能造血祖细胞的扩增。
过表达人和小鼠的IL-20导致角质细胞增生、表皮分化异常和新生儿致死率升高。
此外，研究还发现IL-20参与如下生理或病理过程：Ⅱ型糖尿病皮肤病、骨调节、乳腺癌的发展及骨溶解症、狼疮性肾炎、血管内皮细胞组织、血管成熟和重塑、动脉粥样硬化等。
2.检测原理本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。
特异性抗小鼠IL-20抗体预包被在高亲和力的酶标板上。
酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的IL-20与固相抗体和检测抗体结合。
洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。
洗涤后，加入显色底物TMB ，避光显色。
颜色反应的深浅与样本中IL-20的浓度成正比。
加入终止液终止反应，在450nm 波长(参考波长570-630nm)测定吸光度值。
3.试剂盒检测的局限1)请在本试剂盒标示的有效期内使用。
2)试剂盒的试剂不能与其他批号的试剂或其他来源的试剂混合使用。
3)任何标准品稀释、操作人员、移液技术、洗涤技术、孵育温度、试剂盒保存时间的改变，都将影响结合反应。
4)本试剂盒在设计上去除或降低了生物学样本中的一些内源性干扰因素，并非所有可能的影响因素都已经去除。
・90・Chinese Journal of New Clinical Medicine,Janua/2022,Volume15,Number1[28]Hu Y,Lin J,Yuan Y,et al.Sodium butyrate mitigates type2div-betesbyonhobotongPERK-CHOPpathwayoeendopiasmoceetocuium stress&J].Environ Toxicol Phaonacol,2018,64*112-121. [29]Eve/ngton EA,Gibbard AG,Swinny JB,et al.Molecular characterization of GABA-A receptor subunit diversity within major pe-ph-erW organs and their plasticity in response t early life psychosocial stress&J].Front Mol Neurosci,2018,11*18.[30]Rosman P,Ashcroft FM.Pancreatic p-cell eUcthcai activity andinsulin secretion*of mice and men[J].Physiol Rev,2018,98(1): 117-214.[31]SoX,ShangW,Zhou Z,eia.Gamma-amonobuiyeocacod eneochedeocebean doeia i enuaiesonsu on eesosianceand baanceseneegyeipendo-iueeeoamodoeocaioon oeguimoceobooiaand shoei-chaon ea i yacods[J].J Ag/c Food Chem,2018,66(4)*881-890.[32]Pat t Don E,Ryan PM,Wiley N,et al.Gamma-aminobuty/c acidproducing lacto b acilli posidvely/feet metbolism and depressive-like behaviour in a mouse model of metabolic syndrome&J].Sci Rep, 2019,9(1)*16323.[33]Sohrabipous S,Shari-MR,TXebi A,et X.GABA dramaXcal l y improvcsglucose to/ranco in ireptozotocin-induced diWe-c mW fed with high-fat diet&J].Eur J Pharmacol,2018,826*75-84.[34]Untereincs A,Abde S,Bhattacha/ee A,et al.GABA promotes1cell prolUeraXon,but docs net overcome impaired glucose homeost/isa s ocoaid woih doi-onducLd obLsoiy[J] .FASEBJ,2019,33(3)*3968-3984.[35]Nge DH,Vo TS.An updated mview on pha/iaceuhcai propehiesoegamma-amonobuiyeocacod[J] .Moecu es,2019,24(15)*2678. [36]Reogsiad CS,Samonson CE,RaoneyJF3ed,eia.Guimoceobespeo-moiecoonocseeoionon peoducioon iheough an e e cioeshoei-chaon ea i yacodson enieeocheoma e on ces[J].FASEBJ,2015,29(4)*1395-1403. [37]AgusA,PanchaosJ,Soko)H.Guimoceobooiaeegu aioon oeieypio-phan meiaboosmon heaih and dosease[J].Ce)HosiMoceobe,2018,23(6)*716-724.[38]WaianabeH,NakanoT,SaoioR,eia.Seeoionon ompeoeeshogh eaidoeionduced obesoiyon moce[J].PLoS One,2016,11(1)*e0147143. [39]Moon JH,KomYG,KomK,eia.Seeoionon eegu aiesadu i1-ce)ma s bysiomu aiongpeeonaia)1-ce)peooeeeaioon[J].Doabeies,2020,69(2)*205-214.[40]PappoaMA,Pe e y G,FangX,eia.Indoesase s enioa)medoaioeson ihegui-beaon aios.Theoeeoeon AaheomeeSsdosease[J] .Neueo-boo)Dos,2021,156*105403.[收稿日期2021-08-31][本文编辑韦颖吕文娟]本文引用格式王中英，常丽纳,Xiang Fang.肠道菌群代谢产物与胰岛素抵抗相关衰老疾病的研究进展&J].中国临床新医学,2022,15(1)*86-90.新进展综述白细胞介素1与绝经后骨质疏松症相关性研究进展俸玉，姚娜，袁博琳（综述），陈奇刚（审校）基金项目：云南省科技计划项目&编号*2017FF116（A43）］；昆明市卫生健康委医药卫生科技计划项目（编号*2018-1101006）；昆明市科技计划项目（编号:2019-1-S25318000001398）作者单位：650500昆明，云南中医药大学（俸玉，袁博琳）；650505昆明，云南中医药大学第三附属医院（姚娜，陈奇刚）作者简介：俸玉，在读硕士研究生，研究方向:运动系统疾病的中西医结合康复。
药 物 生 物 技 术Pharm aceutical Biotechno logy 2006,13(3):214~218白细胞介素 1受体拮抗剂(IL 1ra)对大鼠佐剂性关节炎的影响*季常新1,颜天华2,王秋娟2*(1.中国药科大学镇江校区,江苏镇江212003;2.中国药科大学生理教研室,江苏南京210009)摘 要 研究IL 1r a(Inter leukin 1Recepto r A ntago nist)对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用。
采用SD大鼠作为受试动物,一侧足爪注射完全弗氏佐剂造成大鼠佐剂性关节炎(A djuvant arthr itis,AA)模型,检测足爪肿胀度、脾淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞产生IL 1的水平。
结果:IL 1ra能明显减轻A A大鼠足肿胀程度;明显减少A A大鼠足爪评分分值;明显降低AA大鼠B淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞I L 1的产生,可恢复降低的T淋巴细胞增殖反应。
病理组织学观察结果表明,IL 1ra可明显减轻A A大鼠关节中炎性细胞浸润、滑膜增生、血管翳形成、软骨和骨的破坏。
IL 1r a对A A有明显的治疗作用关键词 白细胞介素 1受体拮抗剂;佐剂性关节炎;完全弗氏佐剂中图分类号:R965 1 文献标识码:A 文章编号:1005 8915(2006)03 0214 05类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种免疫介导的慢性、炎症性和破坏性疾病,其病变主要在于滑膜,滑膜的增生、增厚是造成关节损害的主要病理基础之一,晚期导致的关节周围肌肉萎缩,患病关节发生畸形性强直,导致永久性残疾。
据文献报道未经治疗的病人,30年的致残率为60%,目前RA仍属一种难治性疾病。
国外有资料表明IL 1ra对关节炎有明显的治疗作用[1~3],作者以佐剂性关节炎为模型对它的药效作用和机制作了初步的研究。
1 材 料1.1 动物SD大鼠,体重(180 20)g,雄性;C57BL/6J 小鼠,雄性,体重(20 2)g,购于安徽医科大学动物实验中心,皖实动准字第01号。
GMP级重组人白介素10（冻干粉）Recombinant Human IL-10作用机理：白细胞介素-10(IL-10)是多种哺乳动物细胞类型产生的免疫抑制细胞因子，包括巨噬细胞、单核细胞、T细胞、B 细胞和角质形成细胞。
IL-10 抑制 IL-1 和 TNF-α等促炎细胞因子的表达.和 IL-4 一样，IL-10 增强了体液免疫反应，减弱了细胞介导的免疫反应.人白细胞介素-10 对小鼠细胞具有活性，而小鼠白细胞介素-10 对人细胞无活性。
规格参数：货号：TL-639 规格：50ug产品信息：表达宿主：人HEK293细胞同源名称：B-TCGF, CSIF, TGIF ,IL-10,IL10A ,GVHDS,MGC126450,MGC126451,RP11-262N9.1,Interleukin-10 蛋白序列：DNA 序列编码人 IL-10（NP_000563.1）表达带有 His 标签在 C 末端分子量：IL-10 包含 166 个氨基酸，预测分子量为 19.5kd纯度：≥95%采用 SDS-PAGE 凝胶和高效液相色谱分析内毒素：≤0.01EU/ug（凝胶法）生物活性：确定通过剂量依赖性作用，与人白细胞介素 4(IL-4)共同刺激 MC/9 细胞，ED 50为≤2.0ng/mL，对应的特异性活性为≥5×105 IU/mg纯化方式：层析纯化性状：白色疏松体保存温度：2-8℃有效期：24 个月生产厂家：同立海源生物使用说明：稳定性和储存：冻干的样本的可以在4℃保存 24 个月，溶解后的液体可以于-20℃保存 6-12 个月，并且避免反复冻融相关产品：Human IL-2、Human IL-15、Human IL-12、Human IL-6、Human IL-18、Human IL-21、Human IFN-γ、Human GM-CSF、Human EGF、NK细胞培养试剂盒。
小鼠nk细胞体外激活方法
NK（Natural Killer）细胞是一类重要的免疫细胞，它们能够识别和杀伤感染细胞和肿瘤细胞。
在体外激活小鼠NK细胞时，常见的方法包括以下几种：
1.IL-2诱导激活：
•将小鼠NK细胞分离提取，然后在含有IL-2（白细胞介素-2）的培养基中培养。
IL-2是一种促进NK细胞增殖和活化的细胞因子。
•在培养基中添加一定浓度的IL-2，通常是在10-100单位/毫升的范围内。
•NK细胞将在IL-2的作用下逐渐扩增和激活，可以在培养的几天内观察到细胞增殖和活性的增加。
2.细胞因子刺激：
•除了IL-2外，其他一些细胞因子也可以用来激活小鼠NK细胞，如IL-15、IL-12等。
•将小鼠NK细胞在含有这些细胞因子的培养基中培养，可以促进细胞的增殖和活化。
3.抗体刺激：
•使用一些激活NK细胞的单克隆抗体，如抗CD16、抗NK1.1等。
•将小鼠NK细胞与这些抗体共培养，可以诱导细胞活化，并增强其杀伤活性。
4.共培养：
•小鼠NK细胞可以与其他细胞类型共同培养，如小鼠巨噬细胞、树突状细胞等。
•这些共培养细胞可以释放一些激活NK细胞的因子，促进NK细胞的增殖和活化。
在进行体外激活小鼠NK细胞时，需要根据实验需求和研究目的选择合适的方法，并优化培养条件以获得最佳的实验效果。
养阴益气活血方药对干燥综合征NOD小鼠血清及颌下腺TNF—α，IL—1β表达的影响目的：观察养阴益气活血方药对干燥综合征（Sjogren′s syndrome，SS），non-obese diabetic（NOD）小鼠血清及颌下腺组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-lβ（interleukin-lβ，IL-1β）表达的影响。
方法：32只NOD小鼠随机分为模型组、中药组、羟氯喹组、中西药组，每组8只Balb/C 小鼠作为正常对照（正常组）。
中药组每天按100 g·kg-1灌胃养阴益气活血煎剂0.4 mL，羟氯喹组每天按照60 mg·kg-1剂量灌胃羟氯喹0.4 mL；中西药组每天灌胃中药养阴益气活血煎剂（50 g·kg-1）+羟氯喹（60 mg·kg-1）0.4 mL。
实验进行8周后股动脉取血，处死小鼠，解剖摘取颌下腺组织，酶联免疫法检测血清TNF-α，IL-1β水平，免疫组织化学法检测颌下腺组织TNF-α，IL-1β蛋白的表达。
结果：模型组NOD小鼠血清和颌下腺组织TNF-α，IL-1β水平均明显高于其他各组（P＜0.05）。
正常组血清TNF-α水平均低于其他各组，但与中药组无统计学意义；中药组、中西药组血清IL-1β水平低于羟氯喹组（P＜0.05），与正常组无明显差异。
中药组、中西药组TNF-α蛋白表达与正常组无明显差异，而中西药组明显低于羟氯喹组（P＜0.05）。
中西药组IL-1β表达与正常组无明显差异。
结论：养阴益气活血煎剂能下调干燥综合征NOD小鼠血清和颌下腺TNF-α，IL-1β水平，养阴益气活血煎剂可能通过调节Th1/Th2细胞因子水平，来改善颌下腺病理损害，达到治疗SS的作用。
标签：干燥综合征；NOD小鼠；养阴益气活血中药；TNF-α；IL-1β干燥综合征（Sjogren′s syndrome，SS）是一种侵犯唾液腺、泪腺等外分泌腺的慢性系统性自身免疫性疾病，其病因和发病机制尚不清楚。
小鼠白细胞介素（17(IL）17)说明书小鼠白细胞介素-17(IL-17)酶联免疫测定试剂盒使用说明本试剂盒仅用于研究目的检测范围:3PG/mL-120 pg/mL目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样品中白细胞介素-17的含量实验原理本试剂盒采用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素-17的水平用纯化的小鼠白细胞介素-17抗体包被微孔板，制备固相抗体。
将白细胞介素-17(IL-17)依次加入包被有单克隆抗体的微孔中，然后与辣根过氧化物酶标记的白细胞介素-17(IL-17)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标记的抗体复合物。
彻底清洗后，加入基质TMB进行显色TMB 在辣根过氧化物酶的催化下变成蓝色，在酸的作用下变成黄色。
颜色的深度与样品中的白细胞介素-17呈正相关。
用酶标仪在450纳米波长下测定吸光度(吸光度值)，用标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素-17的浓度。
试剂盒由1 2 3 4 5 6 30倍浓缩洗涤液酶标试剂酶标包被板样品稀释液显影剂A溶液显影剂B溶液20毫升× 1瓶6毫升×1瓶1 2孔×8条6毫升×1瓶6毫升×1瓶6毫升×1瓶6毫升×1瓶6毫升×1瓶/瓶789 10112终止液标准(240皮克/毫升)标准稀释液说明书密封板膜密封袋6毫升×1瓶0.5毫升×1瓶1.5毫升×1瓶1部分2件1 96T 256组成标本采集后应尽快提取，提取应根据相关文件进行，提取后应尽快进行实验如果不能立即进行试验，样品可以在-20℃下保存，但应避免重复冻融2。
因为NaN3抑制辣根过氧化物酶(HRP)活性，所以不能检测到含有NaN3的样品。
操作步骤1。
标准稀释:该试剂盒提供原始标准样品的一个标准样品。
用户可以根据下图在小试管中稀释120皮克/毫升60皮克/毫升30皮克/毫升15毫克/毫升7.5毫克/毫升5号、4号、3号、2号、1号、150微升原标准品、150微升标准稀释液、150微升5号标准品、150微升标准稀释液、150微升4号标准品、150微升标准稀释液、150微升标准稀释液、150微升标准稀释液、150微升标准稀释液、150微升3号标准品、150微升样品添加:分别设置空白孔(空白对照孔不添加样品和酶标试剂，其他步骤相同)、标准孔和个待测样品孔将50μl标准物质准确加入酶标包被板，将40μl样品稀释液加入待测样品孔，然后加入10μl待测样品(样品最终稀释5倍)添加样品将样品添加到酶标板孔的底部，尽量不要接触孔壁，轻轻摇动并混合均匀。
人白细胞介素2（IL-2）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T40pg/ml-1200pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2（IL-2）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素2（IL-2）水平。
用纯化的人白细胞介素2（IL-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2（IL-2），再与HRP标记的白细胞介素2（IL-2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2（IL-2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素2（IL-2）浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
小鼠白细胞介素1（IL IL--1）酶联免疫酶联免疫分析分析分析（（ELISA ）试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中白细胞介素-1（IL-1）含量。
实验原理实验原理：：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素1（IL-1）水平。
用纯化的小鼠白细胞介素1（IL-1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素1（IL-1），再与HRP 标记的白细胞介素1（IL-1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素1（IL-1）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素1（IL-1）浓度。
试剂盒组成试剂盒组成： 试剂盒组成 48孔配置96孔配置保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：270ng/L 0.5ml ×1瓶 0.5ml ×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 1.5ml ×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 显色剂A 液 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 显色剂B 液 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 终止液3ml ×1瓶 6ml ×1瓶 2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml ×20倍）×1瓶（20ml ×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA 、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS （PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml 左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS ，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS （PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
操作步骤1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100µl ，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl ，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100µl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl ，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl 弃掉，再各取50µl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50µl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl ，混匀后从第七、第八孔中分别取50µl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl ，混匀后从第九第十孔中各取50µl 弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50µl ，浓度分别为180 ng/L ，120 ng/L ，60 ng/L ，30ng/L ，15 ng/L ）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl ，然后再加待测样品10µl （样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T 的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl ，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl ，再加入显色剂B50µl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50µl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项注意事项：：1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算计算：：以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标， 在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释 倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值 代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释 倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）试剂盒性能试剂盒性能：：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.990以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围检测范围：： 10ng/L -200 ng/L 保存条件及有效期保存条件及有效期：： 1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月Mouse Interleukin 1FOR RESEARCH USE ONLYDrug NamesGeneric Name：Mouse Interleukin 1(IL-1) ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of IL-1 concentrations in Mouse serum, blood plasma, and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Mouse IL-1 level in the sample, use Purified Mouse IL-1 antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add IL-1 to wells, Combined IL-1 antibody which With HRP labeled, become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of IL-1 in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kitMaterials provided withthe kit48determinations96 determinations Storage User manual 1 1Closure plate membrane 2 2Sealed bags 1 1Microelisa stripplate 1 1 2-8℃Standard：270ng/L0.5ml×1 bottle0.5ml×1 bottle2-8℃Standard diluent 1.5ml×1 bottle 1.5ml×1 bottle2-8℃HRP-Conjugate reagent3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Sample diluent3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Chromogen Solution A3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Chromogen Solution B3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Stop Solution3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃wash solution （20ml×20 fold）×1bottle（20ml×30 fold）×1bottle2-8℃Specimen requirements1.serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.2.plasma-use suited EDTA, citrate or heparinized plasma as an anticoagulant,mix 10-20mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.5.Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidlyfrozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）,Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant.Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100µl to the first and the second well, then add Standard dilution 50µl to the first and the second well, mix; take out 100µl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately. then add Standard dilution 50µl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50µl from the third and the forth well discard, add 50µl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50µl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50µl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50µl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50µl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50µl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50µl from the ninth and the tenth well discard(add Sample 50µl to each well after Diluting ,(density: 180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30ng/L,15 ng/L)2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40µl to testing sample well, then add testing sample 10µl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50µl to each well, except blank well.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50µl to each well, Stop the reaction(the blue colorchange to yellow color).11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 min, if the number of sample is much , recommend to use Volley .4.if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8.All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9.Do not mix reagents with those from other lots.CalculateAssay range10ng/L -200 ng/LStorage and validity1．Storage ： 2-8℃. 2．validity ： six months.Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.This chartis for reference only。
