凝血酶-抗凝血酶复合物检测方法建立及初步应用
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血浆D-二聚体在老年晚期小细胞肺癌患者化疗前后的变化及临床意义宋龙霞;王越;张盼盼;李丽蕊;崔紫阳;王昊辰;王红阳;黄艳【摘要】目的探讨老年晚期小细胞肺癌患者经EP方案化疗前后血浆D-二聚体数值的变化及其与化疗疗效的相关性.方法肺癌组选取50例确诊为Ⅲ或Ⅳ期小细胞肺癌患者,所有患者经EP方案(依托泊苷+顺铂)进行化疗.另选取50例本院健康体检者为正常对照组.采用酶联免疫荧光法测定肺癌组患者化疗前后血浆D-二聚体的含量及体检者体检当日的血浆D-二聚体含量.结果晚期小细胞肺癌患者化疗前血浆D-二聚体水平高于正常对照组,P<0.001;化疗后疗效评估为有效组患者的D-二聚体含量(0.67±0.15)mg/L显著低于化疗前(1.86±0.13)mg/L,P<0.001,稳定组D-二聚体含量(1.72±0.20)mg/L较化疗前(1.85±0.21)mg/L无显著变化,P>0.05,进展组D-二聚体含量(2.71±0.23)mg/L高于化疗前(1.87±0.22)mg/L,P<0.01.结论血浆D-二聚体水平的高低可作为观察老年晚期小细胞肺癌患者化疗疗效的指标之一.【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2018(023)012【总页数】4页(P2265-2268)【关键词】小细胞肺癌;D-二聚体;化疗;疗效【作者】宋龙霞;王越;张盼盼;李丽蕊;崔紫阳;王昊辰;王红阳;黄艳【作者单位】063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科;063000 河北唐山,华北理工大学附属医院呼吸科【正文语种】中文小细胞肺癌在所有肺癌中虽然仅占20%左右,但小细胞肺癌患者病情进展快,预后差,5年生存率低。
凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)凝血酶是由凝血酶原激活物在钙离子参与下激活凝血酶原而生成的,生理情况下体内仅有少量凝血酶生成,之后很快又与抗凝血酶结合生成凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)而灭活,TAT生成过程:首先肝素先结合于抗凝血酶的赖氨酰基从而使抗凝血酶的分子构象发生改变,然后抗凝血酶-肝素复合物与凝血酶结合形成凝血酶-肝素-抗凝血酶三联复合物,之后肝素解离形成凝血酶-抗凝血酶复合物。
TAT是能够反映凝血酶生成量和凝血酶活性的分子标志物,因此,临床上通过检测血液中TAT可间接测得凝血酶水平。
TAT是衡量凝血酶生成和活性增高的分子标志物。
在血栓性疾病中均有血栓形成病理过程,凝血酶参与的凝血级联反应过度激活是血栓形成因素之一,检测凝血酶即可以反映体内凝血系统的情况,但是由于体内凝血酶产生后迅速与血液中其他物质作用而消失,因此,很难检测血液中凝血酶水平。
而TAT的血液半衰期为3~15分钟而能够测定。
通过测定血中TAT浓度,能够了解凝血激活的程度。
增高的病理状态有:(1)DIC、DIC前状态;(2)深部静脉血栓症(DVT),肺栓塞(PE);(3)部分房颤、二尖瓣狭窄症合并房颤;(4)其他凝血激活状态。
1、THA/TKA 术后第一天TAT水平可以早期预测DVT。
静脉血栓栓塞 (VTE) 是与全膝关节置换术 (TKA) 和全髋关节置换术 (THA) 相关的常见并发症。
它涉及三个危险因素:静脉淤滞、血管损伤和高凝状态。
THA/TKA 手术会导致显著的血液学变化、止血带的使用和围手术期行动不便,从而增加 DVT 的风险。
THA/TKA 的患者需要至少14天的抗凝预防和大约35天的最佳持续时间,到目前为止,还缺乏有效的指标或方法来更早地预测或识别VTE。
目前,P-选择素、D-二聚体或血栓弹力图(TEG)均不能指示血栓形成的风险,TAT对DVT的预测具有高灵敏度但低特异性。
研究显示:THA/TKA 术后第一天TAT水平可以早期预测 DVT。
抗凝血酶(AT)测定1. 实验原理在待测血浆中加入过量的凝血酶,凝血酶与血浆中的AT形成1:1的复合物,剩余的凝血酶作用于显色肽S2765,裂解出显色基团对硝基苯胺(pNA),用405nm测吸光度,显色程度与剩余凝血酶的量成正相关,而与血浆AT的量呈负相关。
2. 标本采集2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
2.23.8%(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
3. 标本存放:全血贮存在4~10oC不超过2小时,最好1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,此血浆在室温22~24oC下可存放2小时,在2~4oC可存放4小时,在-20oC 可存放2周,长时间保存需在冰冻条件下,在-70oC可存放6个月。
冷冻血浆融化时,应将盛血浆的容器置37oC水浴中,并轻轻摇动,使其迅速融化,以免凝血因子消耗,解冻后立即测试。
冷冻过的标本不能再次冷冻,否则结果不准确。
4. 标本运输:低温条件下运输。
5. 标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作该项目检测。
6. 实验材料:6.1每个试剂均购自德国Dade Behring Marburg公司。
1)AT测定试剂盒(代号P/N:20008900)冻干发色底物S2765 2瓶(6mg/瓶)冻干活化X因子试剂(包括牛活化X因子、肝素、缓冲液、牛血清白蛋白)2瓶2)定标血浆Calibration Plasma(代号P/N:8467300)3)正常质控血浆Normal control plasma(代号P/N:8467011)4)异常水平发色底物法质控血浆Abnormal chromogenic control plasma level I/II(代号P/N:8467600)5)Cleaning agent(代号P/N:9832700)6)Cleaning solution(代号P/N:9831700)6.2试剂准备发色底物:用2mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干发色底物,盖上盖子,轻摇至完全溶解,置15~25oC30分钟,用前摇匀,勿用力振摇。
习惯性流产的抗凝血酶原抗体IgG、IgM检测的初步应用的论文【摘要】目的建立人血浆抗凝血酶原抗体(apt)igg、igm 的间接elisa检测方法,并用于检测原因不明习惯性流产病人。
方法采用人凝血酶原包被微孔板,以碱性磷酸酶标记的抗人igg、igm为检测抗体,对35例原因不明习惯性流产患者血浆中的抗凝血酶原抗体igg、igm、igg+igm进行检测,同时计算其阳性率和优势比(or,95%可信限)。
结果所建方法线性范围广,稳定性、特异性、重复性较好。
原因不明习惯性流产患者血清中抗凝血酶原抗体igg、igm、igg+igm阳性率分别为%、%和20%,对照组分别为%、%和5%,p值分别为、及。
结论该法是一种较好的抗凝血酶原抗体igg、igm定量测定法。
原因不明习惯性流产的apt较高于正常妇女,可以作为原因不明习惯性流产患者的辅助诊断指标之一。
【关键词】抗凝血酶原抗体;抗磷脂抗体;流产detection of antiprothrombin antibodies igg,igm in patients with recurrent abortionlin qing1,,peng wei lin2,,li shu gan1,tang wen ying2,zhang yi 1,zhao yue zhen2,zhang rong sheng1,lv hua bei2(entry exit inspection and quarantine bureau,international travel health care center,xiamen 361012 china;children’s hospital,quanzhou 362000,chinaabstract:objective to establish an indirect solid phase elisa method for the detection of antiprothrombin (apt)igg and igm,and apply in patients with unknown recurrent a indirect elisa using the purified human prothrombin for plate coating and akp labeled goat anti human igg or igm as detection antibody was applied to quantify apt igg or igm levels in plasmas from 35 patients with habitud aboreion(ha).their positive rates and odds ratio(or:with 95% confidence interval,ci)were this method had high precision and good linearity and show good sensitivity,specificity,reproducibility and positive rates of igg,igm,igg+igm apt were %,% and 20%,respectively,with unknown recurrent pregnancy loss,compared with %,% and 5% in the controls,p value were ,and conclusion apt are more frequently found in patients with ha than in antiprothrombin assay was validated for the detection of apt,igg,igm,in patients .key words:antiprothrombin antibody;antiphospholipid antibody;abortion抗磷脂抗体(antiphospholipid antibody,apa)是一族主要针对磷脂结合蛋白的异质性抗体。
出凝血抗凝血酶III(AT III)活性测定(第四版)出凝血原理:抗凝血酶III能和凝血酶形成复合物,使之丧失转化纤维蛋白原为纤维蛋白的酶活性。
在血浆中加入过量的凝血酶后,凝血酶与血浆中的AT III形成1︰1复合物,剩余的凝血酶作用于显色剂,裂解出显色基团,其显色程度与血浆中的AT III活性呈负相关。
出凝血标本处置:患者处于休息状态下,采空肚静脉血(急诊病人除外)。
采血者应技术熟练,“一针见血”,以避免组织损伤,使外源性凝血因子进入标本。
最好不与其它实验一路搜集而使血液停留在针管的时刻延长。
采完血后,将血液沿管壁缓缓注入试管,幸免产动气泡;然后迅速将血液和抗凝剂轻轻倒置混匀,幸免使劲震荡。
全血要在1小时内分离血浆。
分离乏血小板血浆时,要在室温下3000rpm离心10分钟,室温下可寄存4小时。
全数实验不能在4小时内完成,应将乏血小板血浆分装在~的小试管中快速冷冻,贮存于-20℃冰箱中。
冷冻过的标本不能再次冷冻,不然结果会不准确。
冷冻血浆融化时,应将盛冷冻血浆的容器置于37℃水浴中,并轻轻摇动,使其迅速融化。
出凝血试剂:试剂购于天津威士达公司AT III试剂盒:试剂盒代号OWWR 15。
试剂包括6×15ml凝血酶试剂;6×3ml底物试剂;1×100ml缓冲液。
凝血酶试剂每瓶用15ml 缓冲液复溶,室温平稳30分钟。
底物试剂每瓶用3ml蒸馏水复溶,室温平稳30分钟。
出凝血仪器:利用Sysmex公司的CA-7000型全自动血液凝固仪。
出凝血操作:按仪器操作步骤执行标准操作。
出凝血6.6.1开机:按下机械侧面的POWER 按钮。
开机后机械进行自检,当屏幕上边显示“Ready:”时能够进行实验。
出凝血6.6.2检查消耗品:一、预备反映杯:打开仪器上盖装反映杯的盖子查看反映杯是不是够量,不足时,需及时添加。
(一次性最多可放1000 个杯子)二、预备试剂:依照仪器对试剂的要求,把试剂预备好,放到仪器内相应位置,注意查看试剂的量和有效期。
临床分析中的血浆凝血酶原时间检测与应用血浆凝血酶原时间(prothrombin time,PT)是一种用于评估凝血功能的检测方法,在临床分析中有着广泛的应用。
本文将对血浆凝血酶原时间检测的原理、检测方法以及其在临床实践中的应用进行综述。
一、血浆凝血酶原时间检测原理血浆凝血酶原时间检测是通过观察血浆中凝血因子的活化程度来评估凝血功能。
其原理基于凝血酶形成过程,即凝血酶原经过活化得到凝血酶。
检测过程中,将凝血活化剂加入患者血浆中,观察计时器的时间,即为血浆凝血酶原时间。
二、血浆凝血酶原时间检测方法目前,常用于血浆凝血酶原时间检测的方法主要有两种,即传统方法和快速方法。
(一)传统方法传统方法是指根据血浆凝血酶原时间的测定原理,使用手动方式进行检测的方法。
常见的传统方法是国际标准化比率(international normalized ratio,INR)测定法。
该方法结合了患者的凝血酶原时间和常规参考血浆样本的凝血酶原时间,通过计算出来的INR值来评估患者的凝血功能。
(二)快速方法与传统方法相比,快速方法更加简便、快速。
常见的快速方法有手持式凝血酶原时间仪、全自动凝血酶原时间仪等。
这些仪器可以准确地测定血浆凝血酶原时间,并且操作简单,结果快速可靠。
三、血浆凝血酶原时间的临床应用血浆凝血酶原时间作为一种评估凝血功能的指标,在临床实践中有着广泛的应用。
(一)抗凝治疗监测血浆凝血酶原时间常被用于监测服用华法林等抗凝药物的患者。
抗凝药物能够延长血浆凝血酶原时间,因此通过监测患者的凝血酶原时间可以调整抗凝药物的剂量,以达到最佳治疗效果。
(二)凝血功能评估血浆凝血酶原时间的测定可以帮助医生评估患者的凝血功能。
通过观察凝血酶原时间的延长或缩短,可以判断凝血因子的缺陷或过剩,从而为临床诊断和治疗提供重要参考依据。
(三)出血性疾病筛查血浆凝血酶原时间检测也常用于出血性疾病的筛查。
某些遗传性凝血因子缺乏或功能异常,会导致血浆凝血酶原时间延长,因此通过测定患者的凝血酶原时间可以初步筛查出血性疾病的可能发生。