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口蹄疫O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书【产品名称】通用名：口蹄疫O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Asia O（ELISA）【包装规格】96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒【预期用途】口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。
本试剂用于检测牛、羊、猪血清中口蹄疫O型抗体，可用于口蹄疫O型疫苗免疫效果评价。
【原理】本试剂盒由预包被口蹄疫O型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液、酶标记物及其他配套试剂组成，应用阻断酶联免疫法（ELISA）原理检测牛、羊、猪血清样本中口蹄疫O型抗体。
实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育，样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原，阻断抗原与板的结合；经洗涤后，再加抗体工作液孵育；经洗涤后加入酶标记物孵育；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫O型抗体。
【试剂盒组成】【储存及有效期】2～8℃保存，有效期12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。
使用期限为2个月。
【适用仪器】含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。
样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用工作洗涤液将待检牛、羊血清先按32倍稀释（如5μl 血清加入155μl 工作洗涤液中，混匀），待检猪血清按16倍稀释（如5μl 血清加入75μl 洗涤液中，混匀），阴、阳性对照不用稀释。
新型口蹄疫苗——合成肽疫苗核心提示：1、什么是合成肽疫苗? 合成肽疫苗(Syntheti Peptide Vaine)是用化学合成法人工合成具有抗原性的多肽而制成的疫苗。
通常合成的多肽参照了病毒蛋白抗原表位中的氨基酸序列，由多个B1、什么是合成肽疫苗?合成肽疫苗(Syntheti Peptide Vaine)是用化学合成法人工合成具有抗原性的多肽而制成的疫苗。
通常合成的多肽参照了病毒蛋白抗原表位中的氨基酸序列，由多个B细胞抗原表位和T 细胞抗原表位共同组成，并具有一定的空间结构。
合成肽技术已用于口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗、乙肝疫苗、艾滋病疫苗和疟原虫疫苗等的设计，但目前成熟的只有口蹄疫合成肽疫苗。
2、猪口蹄疫合成肽疫苗的设计原理口蹄疫病毒的外壳由VP1、VP2、VP3、VP4四种结构蛋白及非结构蛋白构成，其中VP1蛋白作为口蹄疫病毒的最主要免疫抗原得到了全世界的认同，经动物试验发现，VP1上负责保护性免疫的氨基酸区域在129~169之间，所以可以利用化学合成法人工合成这段区域。
VP1蛋白的该区域并不是一个简单的线性结构，Aharya等发现，该区域暴露在病毒表面呈环状，即“G-H”环，该环是主要免疫性抗原，此环状结构具有同辅助性T细胞表面位点相结合的能力。
所以，口蹄疫合成肽疫苗必须解决合成这段区域的空间架构问题。
我们则通过合成肽的环化技术解决了这个问题。
口蹄疫的免疫基础包括B细胞免疫与T细胞免疫的交互作用。
VP1的保护性区域提供了B 细胞免疫的基础，而为了使设计的疫苗增加抗原性，在合成的VP1保护性环状构造上另外合成了一段辅助性T细胞表位，增强了T细胞免疫。
通过以上完善的设计，申联公司通过大量动物试验、中间试验与临床试验，证明该疫苗在免疫原性和安全性上明显优越于传统疫苗，最终在中国被批准为一类新兽药，成为全球第一个获得注册的该类疫苗。
3、合成肽疫苗与灭活疫苗有何区别？类型合成肽疫苗灭活疫苗免疫类型体液免疫、细胞免疫体液免疫、细胞免疫剂型油包水型水包油包水型免疫持续期临床试验检测抗体水平维持至少6个月临床试验检测抗体水平维持4个月左右不良反应基本无不良反应部分有过敏反应生物安全隐患无有带毒的隐患免疫剂量1l 2~3l灭活剂不使用氮丙啶类（有弱毒性）稳定性保存期内免疫原性保持不变随时间延长免疫原性会降低佐剂法国进口ntanide ISA 50V 法国进口206V或国产白油疫苗成份纯粹的合成肽灭活的全病毒、细胞培养物、细胞体碎片温度敏感性2-8℃保存，温度变化不影响其效力2-8℃保存，温度变化影响其效力生产方法固相化学合成单层细胞培养鉴别诊断可以鉴别野毒与疫苗产生的抗体干扰因素多，鉴别困难。
猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫效果评价孙宝权;王昌斌;王小新;贝怀国;杨广本;叶青【摘要】选择猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MAY98/BY/2010株)在两个猪场进行不同免疫剂量、不同首免日龄及与高致病性猪蓝耳病疫苗不同免疫次序试验,于加强免疫后14天、28天、42天及60天采血检测抗体,根据检测结果选择最佳免疫程序在4个辐射猪场使用,结果表明,在加强免疫后60天采血检测,抗体合格率为82.9％,超过农业部规定的免疫抗体合格率≥70％,同时也达到江苏省规定的猪口蹄疫疫苗免疫后抗体合格率≥80％要求,说明该疫苗免疫猪群后能产生很好的抗体保护率.【期刊名称】《养猪》【年(卷),期】2013(000)001【总页数】3页(P102-104)【关键词】猪口蹄疫;O型灭活疫苗;免疫;抗体【作者】孙宝权;王昌斌;王小新;贝怀国;杨广本;叶青【作者单位】江苏洪泽县动物疫病预防控制中心,江苏淮安223100【正文语种】中文【中图分类】S858.285.3猪口蹄疫是一种急性、高度接触性传染病，给养猪生产带来严重威胁，猪场一旦发生将造成严重经济损失，目前疫苗免疫是防控本病的重要途径，为探索猪口蹄疫O型灭活疫苗（O/MAY98/BY/2010株）免疫效果，特在两个规模猪场进行试验，根据试验结果选择最佳免疫程序进而在其他猪场推广，现报告如下。
1.1 试验时间与地点本试验于2012年5—11月底在江苏省洪泽县鑫象猪业有限公司、洪泽县朱坝镇朱高朱海芳生猪养殖场、王坝猪场、岔河金富猪场、岔河张安猪场与洪泽县猪场进行。
1.2 试验材料1.2.1 试验疫苗猪口蹄疫 O型灭活疫苗（O/ MAY98/BY/2010株），由中农威特生物科技股份有限公司生产，生产批号：H120209J，生产日期：20120226，有效期：20130225，规格：100毫升/瓶。
1．2．2 检测试剂猪口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，共购买两批次，批号分别为2012070901、2012101601，生产日期分别为2012年7月9日、2012年10月16日，有效期为6个月。
带你认识猪O型口蹄疫合成肽疫苗（多肽9893）疫苗接种是被世界各国公认为最主要、最经济的口蹄疫预防手段，合成肽疫苗（synthetic peptide vaccine）是利用化学方法或基因工程手段，按抗原决定簇的天然蛋白质氨基酸序列人工合成病原微生物的保护性多肽（含有多个B细胞和T细胞抗原表位），并辅以适当载体与佐剂制备而成的一种新型基因工程疫苗。
理论上讲，该种疫苗是最为理想的安全新型疫苗。
针对口蹄疫病毒的合成肽疫苗研究最早也最成熟，早在1982年，研究人员Bittle J L等便将由人工合成的FMDV O型VP1蛋白第141-160位氨基酸合成肽段以共价键结合于钥孔戚血蓝蛋白（keyhole limpet hemacyanin，KLH）上制备出了第一例合成肽疫苗，试验证明，其能够诱导足够的抗体对牛和猪起到保护作用。
我们国内于2004年由中牧公司生产的FMD合成肽疫苗申请通过了一类兽用生物制品审查，并获得国内第一个合成肽疫苗的新药证书。
2008年随着国内流行毒株变化，适应新流行毒株的猪O型口蹄疫合成肽疫苗（多肽2570+7309）投入生产并被广泛使用。
与传统的疫苗相比，合成肽疫苗有其先天优势1、合成肽疫苗不存在散毒，生物安全度高。
2、合成肽疫苗因为是人工化学合成，所以抗原纯净度极高且含量精确稳定，传统疫苗在血清、细胞培养、灭活等过程中不可避免产生多种杂蛋白、内毒素等杂质。
3、合成肽疫苗免疫注射安全可靠，无副反应，几乎无免疫应激。
4、合成肽疫苗抗体阳性率高，抗体持续时间更长。
5、合成肽疫苗采用VP1蛋白中的一段多肽，不含非结构蛋白（NS蛋白），因此结合合成肽诊断试剂盒易将免疫抗体从感染抗体中区分开来。
2010年随着国内口蹄疫流行毒株变为缅甸98株为主，中牧股份投入研发的新一代猪口蹄疫O型合成肽疫苗（多肽98+93），并成功于2014年6月拿到新兽药证书。
中牧第三代合成肽疫苗（多肽98+93）相比上一代合成肽疫苗有了如下方面提升。
