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一、口蹄疫疫苗口蹄疫疫苗是由强毒接种悬浮培养BHK-21细胞，收获细胞毒液，经二乙烯亚胺(BEI)灭活，与油佐剂混合乳化制成的灭活疫苗，同时灭活疫苗是目前我国用于预防口蹄疫的主要产品。
二、疫苗制苗毒株口蹄疫病毒抗原性多变，各血清型间无交叉免疫性。
同一型内又存在多种不同毒株，它们之间也有明显的抗原差异，有的能够提供部分交叉保护，有的完全不能。
目前，国际上普遍采用细胞中和试验或ELISA方法计算r值，以此反映毒株间的抗原关系。
r值愈接近1，毒株间抗原关系愈靠近；反之，抗原关系疏远，毒株差异较大。
r值是反映了一个毒株的抗血清对另一个毒株抗原的交叉反应程度。
通过我国口蹄疫流行变化来看，病毒往往发生变异之后，原有的疫苗株对新的流行毒株没有保护或保护力下降。
因此，所选疫苗毒株必须与流行毒株在抗原特性上相互匹配，免疫才能有较好的效果。
三、口蹄疫疫苗146S口蹄疫疫苗146S，即完整的病毒颗粒，口蹄疫完整病毒颗粒和组装体在蔗糖密度梯度中的沉降系数有所不同。
完整病毒粒子的沉降系数为146S，无核酸的空衣壳沉降系数为75S，由VP0、VP1和VP3各5 个分子组成的五聚体沉降系数为12S，由VP0、VP1和VP3各一分子组成的单体沉降系数为5S。
完整的病毒颗粒以及降解产物空衣壳（75S）可引起较好的免疫保护效力，对于体液免疫，尽管12S和5S结构蛋白免疫原性较弱，但两者仍具有细胞免疫和免疫增强的作用，可提高免疫应答水平[1]。
根据146S的生化特性，现阶段可采用蔗糖密度梯度离心法、单克隆抗体夹心ELISA定量法、分子排阻色谱法、蛋白层析法等方法测定口蹄疫病毒抗原含量，但目前还没有能够检测刺激机体产生抗体的75S含量的方法，同时国家对口蹄疫疫苗146S的含量以及检测方法均没有相关标准和要求，不同企业、不同检测机构使用的检测方法不同，检测结果也会有差异，虽口蹄疫灭活疫苗以体液免疫为主，但细胞免疫水平也是衡量疫苗免疫效力的重要指标，所以检测146S含量不能完全体现疫苗的免疫效力。
口蹄疫疫苗生产工艺口蹄疫是一种由口蹄疫病毒引起的疾病，主要感染偶蹄类动物，如牛、猪、羊等。
为了控制口蹄疫的传播，研发和生产口蹄疫疫苗是非常重要的。
下面将介绍口蹄疫疫苗的生产工艺。
首先，疫苗生产需要进行病毒的分离和培养。
一般来说，选择已经患有口蹄疫的动物组织，如牛或猪的皮肉、淋巴结等，进行样本的采集。
然后将这些样本带回实验室，将其分离出病毒。
分离病毒的方法可以采用组织块悬液法或传代培养法。
目的是获得病毒棉絮，作为后续工艺的原料。
接下来，需要进行病毒的增殖和提取。
首先，将分离得到的病毒棉絮在合适的细胞培养基中进行增殖。
常用的培养基有鸡胚培养基或绵羊胚。
在培养基中，将病毒棉絮接种在适当的培养基中，然后放入恒温箱中，使其细胞增殖。
待细胞增殖到一定的数量后，将细胞和培养基一起收集。
然后通过超离心来获得病毒上清液，即病毒提取物。
病毒提取物需要进行纯化和灭活。
为了提高疫苗的纯度和活性，病毒提取物通常需要进行纯化。
常见的纯化方法是通过离心、膠層慢速流式濃縮等技术。
然后，通过添加适当的灭活剂，如甲酸和硫酸酚，对病毒进行灭活。
这是为了防止疫苗使用后引起病毒感染。
纯化和灭活后，疫苗还需要进行包装。
包装方法主要有液态包装和冻干包装。
液态包装是将病毒提取物注入适当容器中，如小瓶或针筒。
冻干包装则是将病毒提取物在低温下冻结，并通过真空将水分从中去除，最终得到冻干疫苗。
冻干疫苗可以延长其保存时间和增强稳定性。
最后，疫苗需要进行质量检验和包装。
对疫苗进行质量检验是为了保证疫苗的安全性和有效性。
包装是为了便于运输和使用。
常见的包装方法有玻璃瓶封装、塑料瓶封装和针筒封装等。
总结起来，口蹄疫疫苗的生产工艺包括病毒的分离和培养、病毒的增殖和提取、病毒的纯化和灭活、疫苗的包装和质量检验等环节。
每个环节都需要严格控制和操作，确保疫苗的质量和安全性。
只有通过科学的生产工艺，我们才能生产出高质量的口蹄疫疫苗，为控制口蹄疫的传播做出贡献。
猪瘟疫苗微载体悬浮培养生产工艺试验苏玮玮;赵攀攀;丁赫楠;张秀华;么亮;吕晓研;张树成;武华【摘要】为优化猪瘟病毒(CSFV)的BT细胞悬浮培养工艺以提高CSFV抗原含量,采用2L生物反应器对BT细胞的最佳接种密度、CSFV的最佳接种剂量进行了摸索和优化,采用优化的工艺参数,进行了BT细胞5倍消化放大工艺验证,同时对比了BT细胞悬浮培养工艺与转瓶培养工艺增殖CSFV的差异.结果表明,在3 g/L微载体浓度下,采用1.5 ×105个/mg的细胞初始接种密度,培养72 h可获得最佳细胞密度;采用MOI(感染复数)为0.5的接种剂量可收获≥106.8 FAID50/mL的CSFV抗原;BT细胞从2L到10 L生物反应器的5倍消化放大工艺验证试验,3批细胞培养96 h均能达到4.0×106个/mL以上;悬浮培养工艺增殖的CSFV抗原含量约是转瓶培养工艺的15倍.以上试验为猪瘟疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2018(054)003【总页数】4页(P108-111)【关键词】猪瘟疫苗;生物反应器;微载体;悬浮培养【作者】苏玮玮;赵攀攀;丁赫楠;张秀华;么亮;吕晓研;张树成;武华【作者单位】华威特(江苏)生物制药有限公司,江苏泰州225300;华威特(江苏)生物制药有限公司,江苏泰州225300;华威特(江苏)生物制药有限公司,江苏泰州225300;华威特(江苏)生物制药有限公司,江苏泰州225300;华威特(江苏)生物制药有限公司,江苏泰州225300;华威特(江苏)生物制药有限公司,江苏泰州225300;华威特(江苏)生物制药有限公司,江苏泰州225300;华威特(江苏)生物制药有限公司,江苏泰州225300【正文语种】中文【中图分类】S852.65+1猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性传染病。
猪瘟病毒为黄病毒科瘟病毒属成员,病毒粒子呈球形,核衣壳为二十面体对称,为有囊膜的单股正链RNA病毒。
口蹄疫灭活疫苗的生产工艺及蛋白检测摘要：在实际生产中疫苗纯度影响感染与免疫鉴别诊断，也与疫苗副反应有关，是影响疫苗应用的重要因素之一，也是目前兽用口蹄疫疫苗质量控制中的关键点。
如何改进生产工艺，提高疫苗中有效抗原（146S）含量，降低口蹄疫病毒非结构蛋白等杂蛋白含量，生产出高效优质口蹄疫灭活疫苗是国内口蹄疫疫苗生产技术革新的首要目标。
目前我国对口蹄疫灭活疫苗成品检验各项中尚没有关于纯度检验的要求。
口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量的测定，可间接反映疫苗纯度，因此，建立一种准确、高效、简捷的测定口蹄疫灭活疫苗蛋白质含量的方法是十分必要的。
本研究通过比较凯氏定氮法，改良Lowry法和考马斯亮蓝法三种较常见的蛋白质含量测定方法，筛选出一种能够准确、高效、简捷地测定口蹄疫灭活疫苗蛋白质含量的方法。
三种检测方法比较表明，改良Lowry法能较真实的反映口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量；与凯氏定氮法相比，此方法操作简单，工作效率高，而且低耗。
关键词：口蹄疫灭活疫苗；生产工艺；蛋白质含量测定；改良Lowry法口蹄疫(FMD)灭活疫苗是利用常规技术制造的以灭活病毒为抗原的一类疫苗，是通过实验筛选的田问毒株作为疫苗种毒，经病毒培养系统大量增值，对获得的病毒灭活处理添加佐剂制成的疫苗[1]，灭活疫苗因其安全有效而被广泛应用。
口蹄疫灭活疫苗中主要成分为抗原和佐剂，纯化不完全的疫苗中可能会含有细胞碎片、血清、病毒非结构蛋白等杂蛋白，使用过程中会引发动物副反应，同时疫苗中病毒非结构蛋白的存在给病毒感染和疫苗免疫的鉴别诊断带来困难[2-3]。
因此，选择一种适合、简便、快速、灵敏的蛋白质含量测定方法来准确定量口蹄疫灭活疫苗中蛋白质对于疫苗的质量监控意义重大。
目前测定蛋白质含量的方法有多种，包括凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry法、考马斯亮蓝法、2，2’一联喹啉一4，4’一二羧酸法和紫外分光光度法等[4]。
本试验采用凯氏定氮法、改良Lowry法和考马斯亮蓝法这三种较常见的测定方法，测定抽取样品的蛋白质含量，并对之进行比较，最后采用SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)进一步验证测定结果，以期为口蹄疫灭活疫苗蛋白质含量检测方法的遴选和标准化提供实验依据。
