实验三 伪狂犬病的诊断
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2017年第07期经济动物犬伪狂犬病也称犬奥耶斯基氏病。
本病是由疱疹病毒科疱疹病毒属的伪狂犬病毒引起的一种急性、热性传染病,除感染犬外也感染其他哺乳动物,如猪、牛、羊等。
临床上主要表现脑脊髓炎和皮肤奇痒。
1流行病学在自然条件下,本病除感染犬外,也能感染牛、羊、猪及鼠类。
鼠类是主要的贮存宿主。
病犬、病畜及带毒动物是传染源。
其中主要是猪和鼠,鼠类动物多呈不显性感染而带毒。
犬和猪吃了病死鼠以后而感染发病。
病猪通过鼻汁、眼分泌物、乳汁、阴道分泌物及尿排出病毒。
因此猪常常是犬的传染源。
病毒通过多种途径感染犬而使其发病。
病毒侵入黏膜或皮下后,由神经途径达到神经中枢,病毒在神经节细胞和神经胶质细胞中繁殖,从而引起神经症状。
2临床症状本病的潜伏期1~8d,长的21d。
犬常因吃了带毒的鼠或死于本病的猪的肉及内脏而感染。
初期精神不振、废食,卷缩而坐。
而后出现兴奋、跳跃等神经症状,疯狂咬痒部。
以后出现麻痹、吞咽困难、流涎、反应迟顿、呼吸困难,病后1~2d死亡。
经外伤感染的犬,最初舐咬皮肤伤处,搔抓和嘶咬伤处,使创面扩大、加深、周围组织肿胀,继发感染溃烂而死亡。
3病理学诊断剖检病死犬,可见皮肤上有损伤,流出血液和组织液,所有脏器充血、出血。
有明显神经症状的病例。
中枢神经系统呈弥漫性、非化脓性脑膜炎和神经节炎。
有明显的血管套及弥漫性局部胶质细胞反应,并有广泛的神经节细胞及胶质细胞坏死。
一般检查时,无脑炎的病例占15%~20%。
4病原学诊断取可疑病犬脑组织1份,加9份肉汤培养基或生理盐水制成悬液,并在1m L中加青霉素、链霉素500~1000I U,放于4℃冰箱12~24h,经1500转/m in离心后取上清液,备用。
养。
取离心的上清液接种于地鼠的肾细胞(维持液量20:1),置于37℃温箱中进行培养,一般在接种后24h细胞出现聚融和萎缩,见到坏死病变。
也可取培养物用电子显微镜观察病毒形态加以确诊。
(2)动物接种。
取病犬脑组织加生理盐水研碎后制成悬液,给小鼠脑内或鼻内接种会出现发痒症状,可持续12h。
基金项目:新疆维吾尔自治区少数民族科技骨干特殊培养计划(XJ2022081);肉牛养殖项目(H001)牛伪狂犬病的诊断与防疫措施吾买尔江·牙合甫1,阿丽米热·买买提1,艾海提.买买提21.新疆农业大学动物医学学院新疆草食动物新药研究与创制重点实验室,新疆乌鲁木齐8300522.哈密市伊州区陶家宫镇人民政府农业(畜牧业)发展服务中心,新疆哈密839000摘 要 伪狂犬病是由伪狂犬病毒(pseudorabiesvirus,PRV)引起的家畜及野生动物的急性传染病,患病牛具有发热、奇痒、脑脊髓炎等典型临床症状。
该病致死率高,传染性强,可对养殖业造成巨大损失。
对伪狂犬病的病原学、临床症状、诊断和预防要点等进行综述,以期为兽医工作人员及养殖户提供参考。
关键词 牛;伪狂犬病;诊断;预防doi:10.19567/j.cnki.1008-0414.2023.05.019 引言伪狂犬病病毒(pseudorabiesvirus,PRV)又叫“奥耶斯基氏病”(aujesky’sdisease,AD),是由猪疱疹病毒Ⅰ型引起的伪狂犬病病毒。
该病发现于1813年,多数家畜动物出现瘙痒、狂躁后死亡现象,1912年该病被设立为独立的一个疾病。
猪一直被认为是唯一的自然宿主和宿主,并且PRV病猪或PRV携带猪是PRV的主要传染源,它能引起家畜、野生动物的急性致死性传染病[1]。
国内外陆续报道有羊、狼、貂、狐狸感染PRV的事件发生,牛养殖场中牛伪狂犬病也时常发生,称“疯痒病”(Maditch),主要表现为狂躁、咽喉麻痹、呼吸困难以及发热、局部痒,脑脊髓炎症状为主要临床特征,感染后病死率高、病程短,致死率高达90%~100%。
病原学伪狂犬病病毒属疱疹病甲亚科,核衣壳直径为105~110nm,病毒粒子呈球形,线状双股DNA病毒,直径在110~150nm。
病毒有囊膜,囊表面有呈放射状排列的纤突,长8~10nm。
病毒可在猪肾、兔肾、牛睾丸、鸡胚成纤维等多细胞中生长繁殖,并形成核内嗜酸性包涵体。
实验三伪狂犬病的诊断
一.实验目的:
⒈熟悉伪狂犬病的临诊特点。
⒉熟悉伪狂犬病的诊断方法。
二.实验原理:
利用分离的伪狂犬病毒注射实验兔,病毒在动物机体繁殖一段时间后,会影响实验动物的神经系统,实验兔会出现强烈的痒觉,根据这些症状来判断是否含有伪狂犬病毒。
三.内容及方法
1. 伪狂犬病的临床特点
本病发生于牛、绵羊,犬、猫、鼠及猪。
野生动物亦可发生。
牛、绵羊、犬及猫感染本病后症状很特殊而明显。
主要表现为某部皮肤的强烈痒觉。
常使劲地于墙柱上摩擦,直到皮肤撕碎,仍不断摩擦,病畜像疯狂一样,用力制止亦无效果。
体温可达40℃以上。
常发病后48小时内死亡。
成猪一般为隐性感染,怀孕母猪可发生流产、死胎、木乃伊胎儿。
仔猪,尤于新生仔猪病情极严重,常可发生大批死亡。
主要侵害神经系统,表现为神经症状。
2. 实验室诊断
2.1 病料的采集与处理
分离病毒的材料于发热期最好采取中脑、桥脑及延脑,或采取病总部之水肿液、侵入部神经干及脊髓。
病料用培养液制成1:10组织悬浮液。
2.2 兔体接种试验上述悬液经2000r/min离心1Omin,取上清液1~2ml经腹侧皮下或肌肉接种家兔,通常在36-48h后注射部位出现剧痒,病兔啃咬注射部位皮肤,皮肤脱毛、破皮和出血,继之四肢麻痹,体温下降,卧地不起,最后角弓反张,抽搐死亡。
但这种症状只维持几小时,一般常于夜间死亡,可见死兔口内有接种部位咬下的被毛。
亦可脑内接种小鼠,症状可维持12小时,但其敏感性不如兔。
亦可用细胞培养来分离病毒。
许多种哺乳动物细胞均能繁殖本病毒,但最常用的是猪肾传代细胞。
2.3 兔、猪及牛肾原代细胞培养。
病料接种细胞后最早经18小时出现病变(病毒量大),一般经48小时,病毒量很低时要到96小时。
其典型的病变是出现巨细
胞圆形。
部分病变细胞胞浆内颗粒增多,细胞肿大变圆形,而不相互融合,渐渐萎缩坏死。
当细胞全面出现病变后渐自瓶壁脱落。
自出现病变到整个细胞层破坏约经24–48小时。
3.特异性免疫荧光诊断:对可疑病畜或接种动物的中枢神经系统如中脑、桥脑、延脑或脊髓可作冰冻切片或压片,用免疫荧光直接法检查,阳性病例可见神经节细胞胞浆及核内均有荧光。
感染的组织细胞亦可用此法来确定感染的病毒。
4.病毒中和试验;用一株标准伪狂犬病细胞适应毒,以每0.1ml病毒溶液中含有100TCID50的稀释病毒与连续作2倍稀释的被检血清0.1ml混合,57 培养1.5小时,再接种于细胞培养物上。
每个血清稀释度至少要接种4个细胞培养物,每个培养物接种0.2ml。
恢复猪的血清常有1:8到1:64的中和能力。
复习题与作业
1.伪狂犬病的临诊表现,猪与其他动物有什么不同?
2.伪狂犬病的诊断方法那种最简便而可靠?。