产纤维素酶细菌的分离及产酶条件研究

产纤维素酶霉菌的分离和筛选

班级:09生物技术

指导老师：黄志华

组别: 第五小组

组员：吴志娟、戴剑鹤、柯佳宝、潘凯仑、王志辉

（24-29号）

组长：吴志娟

一．实验目的

1.进一步复习生物化学、微生物学等相关专业知识。

2.掌握产纤维素酶细菌的筛选、纯化和保藏的方法。

3.学会设计实验计划。

4．综合培养动手操作能力及创新精神。

二. 实验原理

纤维素（cellulose）作为植物光合作用的主要多糖类产物，是高等植物细胞壁的主要成分，是公认的自然界数量最丰富、最廉价的可再生有机物质资源, 探索纤维素资源的有效利用方法具有重要的意义。纤维素酶的来源很广泛，自然界中能产生纤维素酶的物种非常多。在过去的半个世纪内，人们在各种原生动物、圆虫类、软体动物、甲壳类、昆虫、藻类、真菌类、细菌及放线菌中都发现了纤维素酶，近年来陆续在古菌中也发现很多纤维素酶的存在，但微生物是纤维素酶的主要来源，其中主要有真菌（霉菌）、细菌和放线菌。

菌种采集:产纤维素酶霉菌的采集选择在纤维素含量较高的地方，如花园表层土壤、腐烂的木头、造纸厂废水及反刍动物的瘤胃及其排泄物等。本次实验拟从森林土中获得产酶菌株。采样的土层太深则厌氧菌占优，而浅层土受紫外线照射，细菌难以存活。故实验选取距表层土壤8cm处的土壤进行筛选。

纤维素刚果红培养基筛选菌种的原理：通过刚果红鉴定板来鉴定产纤维素酶霉菌是一种快速简便的筛选方法,透明圈直径和鉴定板孔径大小的比值能够直接反映该霉菌产纤维素酶的能力,其原理是刚果红是一种能够和大分子多糖相结合的染色剂,染色之后能和纤维素结合形成红色,产纤维素酶霉菌在培养基平板上培养后产的生纤维素酶将纤维素水解成葡萄糖和纤维二糖等小分子糖,在用刚果红染色之后没有被水解的纤维素能够和刚果红结合显红色,而水解的部位则不能和刚果红结合而出现透明圈。

三．实验器材与试剂

1.样品：后山植物林地土壤，于地下8cm左右。

高产纤维素酶青霉菌的筛选及产酶条件的研究　

胡丹刘霞　雷颉　

（南昌理工学院生物与环境工程系，南昌３３００１３）　

摘要：本文从稻田土壤中分离到一株产纤维酶活力高的ｘ一５菌株，经形态特征及生理生化特征初步　

鉴定为半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，青霉属（Ｐｅｎｉｅｉｌｌｉｕｍ）。对青霉菌ｘ一５菌株进行发酵培养　

条件的研究结果表明，以５．Ｏ％稻草粉为碳源，３．Ｏ％豆饼粉为氮源，装液量为６０ｍＬ，接种量为５．Ｏ％，培养　

温度为２６～２８℃，初始ｐＨ４．５～６．０，培养１２０ｈ，产酶活力最高，ＣＭＣ酶活为７５．７２ｌＵ／ｌＩｌＬ，ＦＰ酶活为　

６．６８１Ｕ／ｍＬ。　关键词：纤维素酶；青霉属；液体发酵　

中图分类号：ＴＳ２０１．２＋５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—２５１３（２００７）０２—００８０一ｏ５　

Ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｃｈ　ｏｆ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　

ｏｆ　ａ　ｈｉｇｎ　ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ・－－ｐｒｏｄｕｃｔｉｎｇ　ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｔｒａｉｎ　

ＨＵ　Ｄａｎ　ＬＩＩＪ　Ｘｉａ　ＬＥＩ　Ｊｉ　

（Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｆｉｎｇ，　Ｎａｎｃｈａｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｎａｎｃｈａｎｇ　３３００１３）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｅ　ｇｏｔ　ｓｔｒａｉｎ　Ｘ一５　ｗｈｉｃｈ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｈｉｇｈ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｅｌｌｕＩｏｓｅ　ｂｙ　ｉｎｔｅｎｄ　ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｐｕｔｒｉｄ　ｗｏｏｄ．Ｂｙ　ｍｏ—　

ｄａｌｉｔｙ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ａｎｄ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ｍｅｎｓｕｒａｔｅｄ，ｗｅ　ｃａｎ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎ　ｂｅｌｏｎｇ　ｔｏ　Ｆｕｎｇｉ　

Ｉｍｐｏｒｆｅｃｔｉ，Ｍｏｎｉｌｉａｌｅｓ，Ｍｏｎｉｌｉａｃｅａｃｅ，Ａｓｐｏｒｇｉｌｌｅａｅ，Ｐｅｎｉｅｉｌｌｉｕｍ．Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｂｙ　ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ　

从土壤中分离产几丁质酶的真菌

作者： 王春 学号:11101680

摘要：几丁质是自然界中储量仅次于纤维素的生物多聚体,它广泛存在于真菌、硅藻、节肢动物和原生动物等生物体中,是绝大多数真菌细胞壁的结构物质,同时还是昆虫中肠围食膜的主要成分[1].几丁质酶(Chitinase,EC3.4.1.14)[2]可催化水解几丁质的β21,4糖苷键生成N2乙酰2D2氨基葡萄糖(NAG),它在植物病虫害,尤其是对真菌病的防治方面,以及在几丁质废物的转化和利用等方面都具有重要作用,其研究受到人们的广泛重视.通过几丁质作为碳源,从土壤中筛选产几丁质酶菌株.

1 材料与方法

1.1 培养基

1.1.1 平板培养基 (1)细菌几丁质培养基(分离用):蛋白胨10g,K2HPO40.7g,MgSO40.5g,KH2PO40.3g,胶体几丁质5.0g,琼脂15～20g,蒸馏水1L,pH值为7.2.(2)纯几丁质培养基:胶体

几丁质5.0g,KNO31.0g,NaCl0.5g,K2HPO40.5g,MgSO40.5g,FeSO40.01g,琼脂20g,蒸馏水1L,pH值为7.2.1.1.2 摇瓶培养基 (1)种子培养基(LB培养基):蛋白胨10g,酵母膏5g,NaCl10g,蒸馏水1L,pH值为7.0.(2)发酵培养基:用细菌几丁质培养基(分离用),但不加琼脂

1.2 菌株的分离

1.2.1 菌株初步分离 从生产几丁质的工厂排污沟附近土壤采集土样,经过烘干及风化干燥,置于60目分样筛过筛,备用.称取1g土样放入加有9mL无菌水的离心管,分别稀释制成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释倍数的土壤溶液.从10-3,10-4,10-5,10-6不同稀度倍数的4管土壤稀释液中各吸取0.1mL,接种在纯几丁质培养基和细菌几丁质培养基的平板上,用涂布棒涂布均匀,在30℃下培养72h.

纤维素酶的生产工艺及分富提纯

:来帅艸学号：4 3晓三连通信工程

摘要：

纤维素酶是一种重要的酶产洗，是一种复合酶，主要由外切（3-葡 聚糖酶、切卩■葡聚毎酶和B •葡萄热苜酶等组成，还有很需话力的木 聚糖酶。由于纤维素酶亦饲料、酒精、纺织和食品等领域具有巨丸的 市场潜力，己菠国外业人士看好，将是继糖化酶、淀粉酶和蛋勺酶之 后的第四大工业酶种，甚至亦中国完全有可能成为第一大酶种，因此 纤维素酶是酶制剂工业中的一个新的增长点。是可以将•纤维素分鮮成 篆糖或单毎的蛋勺质。

关键词：发酵由；盐析法；凝胶过滤；离子交换层析；电冰

Abstract:

Cellulase is an important enzyme products, a complex enzyme, mainly by

the exo- j3 -glucanase. en do- j3 -glucanase and 3-glucosidase and other

components, there are very high energy Xylanase. Because cellulase has

great market potential in the fields of feed, alcohol, textile and food, it has

been regarded as the fourth largest in dustrial enzyme after saccharifyi ng

enzyme, amylase and protease, even in China it is entirely possible to

become the largest enzyme species, so the enzyme enzyme industry is a

new growth point. Is a protein that can decompose cellulose into