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发酵工程-种子制备共38页PPT资料

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5发酵种子制备与发酵机制知识课件

5发酵种子制备与发酵机制知识课件

❖ 大量地接入培养成熟的菌种的优点：
➢ 缩短生长过程的延缓期，因而缩短了 发酵周期，提高了设备利用率
➢ 节约发酵培养的动力消耗 ➢ 有利于减少染菌机会
放射形土壤杆菌多糖（ARPS） 发酵过程中不同的种龄对多糖产量的影响
（舒琴）
镜检：24小时多个杆菌首位相连成线形，处于繁殖旺盛期 30小时开始出现芽孢
➢ 固体培养法：三角瓶、蘑菇瓶、克氏 瓶、培养皿等麸皮培养。
实验室阶段种子培养物选择的原则
A. 目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点最 终的培养物可分为两类：
对于不产孢子和芽胞的微生物 ——获得一定数量和质量的菌体
对于不产芽孢和孢子的微生物，实验室阶段的种子扩培 最终是获得一定数量和质量的菌体，如谷氨酸的种子培 养。
在发酵产品的放大中，反应级数的确定是非常重要 的一个方面
发酵级数确定方法
菌种的性质(如菌种传代后的稳定性) 瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁殖速度 发酵罐中种子培养液的最低接种量 种子罐与发酵罐的容积比 生产规模 随工艺条件的改变作适当的调整
二.种子质量的判断方法
❖ 通常检测的培养液中参数 ➢ pH是否在种子要求的范围之内 ➢ 糖、氨基氮、磷酸盐的含量 ➢ 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观 ➢ 有无杂菌污染
0.025% 0.015%
薯干粉
成分
麦芽汁 薯干粉 (NH4)2SO4 琼脂
斜面 麦汁
2%
种子罐 发酵
10% 22-28% 0.5%
种子制备过程举例
一、谷氨酸生产的种子制备 制备过程 斜面菌种 →一级种子培养 →二级种子培养
→发酵
1、斜面
培养基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化钠 0.5 琼脂 2%， pH 7.0-7.2

发酵工程.ppt

发酵工程.ppt

发酵工Байду номын сангаас的应用
（1）医药工业：抗生素、维生素、动物激素、药 用氨基酸、核苷酸(如肌苷)、重 组乙肝疫苗、单克隆抗体等
（2）食品工业：①传统发酵产品 ②生产各种食品添加剂 ③解决粮食短缺问题 （如单细胞蛋白的生产）
常见的几类食品添加剂
2.培养基的营养要协调，以利于产物的合成。 3.培养基在满足微生物的营养需求的基础上应尽量降 低生产成本，以得到更高的经济效益。
2.举例：
发酵生产常采用天然成分的液体培养基。而且，经常 用野生的植物淀粉、甘蔗渣、秸秆，以及乙醇、醋酸 等石化产品代替粮食来配制培养基。
灭菌
包括设备灭菌和培养基灭菌
1、灭菌的原因：
2、接种：
接种过程中要注意防止杂菌污染
发酵过程
1、发酵产物：
发酵产物主要在菌体生长的稳定期产生。
2、发酵进程：
在发酵过程中随时取样检测培养液中细菌数 目、产物浓度以了解发酵进程，及时添加必 需的培养基成分来延长菌体生长稳定期的时 间，以得到更多的发酵产物 。
3、发酵条件：
发酵生产中温度、pH、溶氧量等对发酵过程 有重大影响。
在发酵过程中如混入其他微生物，将与菌种 形成竞争关系，对发酵过程造成不良影响 。
2、举例：
如果在谷氨酸发酵过程中混人放线菌，则放 线菌分泌的抗生素就会使大量的谷氨酸棒状 杆菌死亡。如果在青霉素生产过程中污染了 杂菌，这些杂菌则会分泌青霉素酶，将合成 的青霉素分解掉。
扩大培养和接种
1、扩大培养：
扩大培养是将培养到对数期的菌体分开，分头 进行培养，以促使菌体数量快速增加，能在短 时间里得到大量的菌体
发酵工程简介
发酵工程生产实例
1、菌种的选择 2、培养基的选择

种子扩大培养1.pptx

种子扩大培养1.pptx

对接种物的一般要求：
1）应以高产菌株中分离获得的纯系作为出发 菌株。菌株纯度高，性状稳定，不易发生变异。 2）生理活性强。
若以菌体细胞为接种物，应采取正在旺盛生 长的繁殖期细胞，菌体细胞应均匀，同步率高。 以孢子为接种物，应采用易于萌发的孢子。
第21页/共92页
为了提高孢子的萌发率，有时需采取一些 特殊措施 如：
过程
孢子的产生条件？
第12页/共92页
孢子制备
1.
放线菌孢子的制备
工艺过程
菌 种
母 斜 面
子 斜 面
摇 种发 瓶 子酵 种 罐罐 子
第13页/共92页
注意事项
① 限制碳源(约1%)和氮源(不超过0.5%)； ② 培养温度多为28 ℃ ，少数为37 ℃ ，培养时间为5~14天； ③ 采用孢子进罐：工艺简单，批间差异小，便于控制孢子质量；采用菌丝进罐：
近年来，不少厂家以加大种子量及采用丰 富培养基作为获得高产的措施；有的产品采用 两个种子罐接一个发酵罐的双种法。
如卡那霉素生产中采用双种比单种的发酵 单位提高8%，且达到产量高峰的时间提前。
第44页/共92页
但如果接种量过大，往往使菌体生长过快、 培养液黏度增加，造成溶氧不足，从而影响产 物的合成。
第4页/共92页
过滤常数 比热死速率 比生长速率
发酵工程的流程
空气 空气净化处理
保藏菌种 斜面活化 扩大培养
原料预处理
培养基制备灭菌
种子罐 发酵罐
灭菌
产物分离纯化
成品
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种子扩大培养
现代的发酵工业生产规模越来越大，每只发酵罐 的容积有几十立方米甚至几百立方米，要使小小的微生物在 几十小时的较短时间内，完成如此巨大的发酵转化任务，那 就必须具备数量巨大的微生物细胞才行。

《发酵工程》课件3

《发酵工程》课件3
菌种选育
根据生产需要选择具有优良性状的菌 株，通过诱变、基因工程等手段进行 改良。
菌种保藏
采用低温、干燥、缺氧等方法，保持 菌种活力和纯度，延长菌种使用寿命 。
种子扩大培养
种子制备
将保藏的菌种进行活化，并进行一定时间的培养，其恢复 活力。
种子扩大培养
将活化后的菌种进行扩大培养，使菌体数量增加，满足发酵 需求。
03
描述产物生成速率的数学模型，包括产物浓度和产物生成速率
之间的关系。
发酵过程中的物质变化
底物消耗
在发酵过程中，底物被微生物消耗转化为代谢产物。
产物生成
在发酵过程中，微生物通过代谢过程生成目的产物。
副产物生成
在发酵过程中，除了目的产物外，还可能生成其他副 产物。
03
发酵工艺流程
菌种的选育与保藏
现代
基因工程、蛋白质工程和代谢工 程等新兴技术的引入，推动发酵
工程不断创新和发展。
发酵工程的应用领域
抗生素生产
利用微生物发酵生产抗生素，用于治疗各种疾 病。
食品工业
生产面包、啤酒、酸奶等食品，改善食品品质 和口感。
生物能源
利用微生物发酵生产乙醇、丁醇等生物燃料， 替代化石能源。
02
发酵工程的基本原理
连续发酵与高密度发酵技术的挑 战
需要解决发酵过程中的菌种退化、产物抑 制等问题，以及设备设计和操作难度。
代谢工程与合成生物学在发酵工程中的应用
代谢工程
通过调节微生物代谢途径，提高产物的合成效率和产量。
合成生物学
利用基因编辑技术构建人工生物系统，实现新产品的设计和生产。
代谢工程与合成生物学在发酵工程中的应用案例
产物精制
对提取出的产物进行纯化 ，去除杂质，提高产品质 量。

发酵工程 5 种子制备

发酵工程 5 种子制备

种子扩大培养应根据菌种的生理特性，选
择合适的培养条件来获得代谢旺盛、数量足
够的种子。
优良的种子可以缩短生产周期、稳定产量、 提高发酵效率和设备利用率。
1、菌种的扩大培养的目的
接种量的需要；
菌种的驯化；
缩短发酵时间，提高发酵罐的利用率，以及减
少染菌。
2、作为种子必须具备的条件
1）生命力旺盛，移至发酵罐后能迅速生长，
峰的时间，但接种量过多往往使菌丝生长过快，
培养液粘度增加造成溶解氧供应不足而影响产物
的合成。
6、影响种子质量的因素
1）种子培养基原材料质量：不同产地、不同批 次的麸皮、大（小）米、琼脂等。 2）培养条件：温度、湿度、通气量、搅拌强度、
pH、泡沫等。
3）斜面冷藏时间：斜面冷藏对孢子质量的影响
与孢子成熟程度有关，冷藏时间对孢子的生产
生产过程中通常测定的参数有： 1）检测种子液的pH是否在种子的要求范围内；
2）检测种子液中的糖、氨基氮、磷酸盐的含量；
3）检查种子液中的菌丝形态、菌丝浓度和培养液外
观（色泽、气味、浑浊度、颗粒等）；
4）检查有无杂菌污染；
5）其他参数，如接种前某些酶的活力、种子罐的溶
氧和尾气（CO2、O2）等。
4、种子制备的流程
8、种子异常分析
1）菌种生长发育缓慢或过快
这与孢子质量及种子罐的培养条件有关，一般情
况下，通入种子罐的无菌空气温度低、培养基灭 菌质量差是种子生长、代谢缓慢的主要原因。 2）菌丝结团
菌丝在液体培养条件下成团或菌球。这会影响菌
丝的呼吸及对营养物质的吸收。这与通气搅拌相 关，加入某些表面活性剂如吐温80可促进菌丝 分散。
能力也有影响，通常冷藏时间越长，生产能力 下降越多。

5 微生物工程 第五章 发酵工业种子制备

5 微生物工程 第五章 发酵工业种子制备

种子培养基特点：
有较完全和丰富的营养物质，糖分少，需充
足氮源和生长因子，无机氮源比例大；
各种营养物质的浓度不必太高； 供孢子用的种子培养基，可添加易被吸收
利用的碳源和氮源；
应考虑与发酵培养基的主要成分相近。
pH
选择最适种子培养pH的原则是获得最
大比生长速率和适当的菌量。
培养最后一级种子的培养基的pH应接
可减少种子罐污染杂菌的机会，减少消 毒及值班工作量，减少因种子罐生长异 常而造成的发酵波动。
种子罐级数确定方法：
菌种的性质(如菌种传代后的稳定性); 瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁殖速度; 发酵罐中种子培养液的最低接种量; 种子罐与发酵罐的容积比; 生产规模; 随工艺条件的改变作适当的调整。
3、二级种子(种子罐)
培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解 糖代替，浓度为2.5% 培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐 的1%）, 32℃培养7-10个小时
培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基
种子的质量要求： 108-109个/mL 大小均匀，呈单个或八字排列 pH 7.0-7.2时结束，6.8→8→7.0-7.2 活力旺盛
重点
扁瓶固体培养基或摇瓶培养基中扩大培养，
完成实验室种子制备；
一级种子罐，制备生产用种子；视情况确定
扩大级数，完成生产车间种子制备；
种子转种至发酵罐
工业发酵种子制备过程：
实验室种子制备阶段：
琼脂斜面至固体培养基扩大培养（如茄
子瓶斜面培养等）或液体摇瓶培养；
生产车间种子制备阶段：
制的条件也与酿造时不同。
面包酵母的扩大培养
初始种子培养也要求采用纯种培养 大容积发酵培养时，没有无菌要求

第六章 发酵工程 PPT课件


生物下游一般过程
§6-5 生化反应器
生化反应器类型 通用式发酵罐 气升式发酵罐 其他生物反应器形式
生化反应器类型
• 酶反应器：单相式、多相式 • 发酵反应器器：液态、固态
通用式发酵罐
通气 搅拌：传质
传热
气升式发酵罐
气升式发酵罐的优点 是能耗低，液体中的 煎切作用小，结构简 单。在同样的能耗下， 其氧传递能力比机械 搅拌式通气发酵罐要 高得多。
发酵的基本过程
发酵过程形式
• 批式发酵
• 补料发酵→带放（半连续发酵）
• 连续发酵→多级连续发酵
• 发酵-分离耦合 • ……
连续发酵
连续发酵是指以一定的速度向发酵罐内添加新 鲜培养基，同时以相同速度流出培养液，从而 使发酵罐内的液量维持恒定的发酵过程。
优点 ① 可提高设备利用率和产量； ② 发酵中各参数趋于恒值，便于自动控制； ③ 易于分期控制。可以在不同的罐中控制不同的条件。
• 初级、次级代谢产物 • 生物大分子（酶、多糖） • 菌体 • 利用微生物发酵进行转化反应
§6-2 工业微生物
常见种类 菌种选育与保藏
常见工业微生物种类
• 细菌 • 放线菌 • 酵母菌 • 霉菌
细菌的形态（单细胞）
• 球菌 • 杆菌 • 螺旋菌
•
细 菌 细 胞 结 构 模 式 图
放线菌
•
固态发酵罐
课外书籍资料
• 微生物与发酵基础教程，宋超先，天津大学出版社， 2007
• 发酵工艺，孙俊良，中国农业出版社，2008 • 生物反应工程原理，贾士儒，科学出版社，2008 • 微生物工程工艺原理，姚汝华，华南理工大学出版社
1996 • 生化工程，伦世仪，中国轻工业出版社，1993 • 生化反应工程，山根恒夫，西北大学出版社，1992 • 发酵工艺学原理，（英）P·F·斯坦伯里，中国医药科技

发酵工业的种子制备


适应性强，生产能力稳定
2、种子质量的判断方法

通常检测的培养液中参数
pH是否在种子要求的范围之内
糖、氨基氮、磷酸盐的含量 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观 有无杂菌污染

其他参数，如接种前酶活、种子罐的溶氧和尾气 等
3、种子制备

步骤：
斜面培养基中活化；
扁瓶固体培养基或摇瓶培养基中扩大培

种子罐培养：
一、获得足够的菌种数量，
二、种子罐的培养基接近发酵罐培养的醪液成
分和培养条件，使菌体适应发酵环境
种子罐级数的确定
种子扩大的级数：制备种子需逐级扩大培 养的次数

种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并 减少由于多次转种而带来的染菌机会以及减少因 种子罐生长异常而造成的发酵波动 但考虑能否在一定时间内获得优质、足量的种子 以满足发酵的需求



e.g 产黄青霉菌(P.chrysogonum) 原始菌种 斜面试管 获得孢子 250ml 茄子瓶（
大米或小米） 25 ~28 ℃ ，4~14天 成熟（在真空下抽去水
分，使水分含量在10%以下，于4 ℃冰箱保存）。
e.g.
Glutamic acid-producer：（谷氨酸生产菌） 固体试管斜面（32 °C ，18~24小时）

确定方法
菌种的性质(如菌种传代后的稳定性)
瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁殖速度
发酵罐中种子培养液的最低接种量 种子罐与发酵罐的容积比 生产规模 随工艺条件的改变作适当的调整
4、种龄与接种量
※
接种龄：种子罐中培养的菌体从开始移入
下一级种子罐或发酵罐时的培养时间 种子培养期应取菌种的对数生长期为宜， 菌种过嫩或过老，不但延长发酵周期，而 且会降低产量。

5发酵种子制备与发酵机制知识课件


2.霉菌孢子的制备
注意事项
① 天然农产品因具有独特的营养成分 和较大表面积而适合作霉菌的培养基
② 培养温度多为25~28 ℃ ，培养时间为 4~14天
3. 细菌孢子的制备
注意事项 ① 适合采用碳源限量而氮源丰富的培
养基 ② 培养温度多为37 ℃ ，少数为28
℃ ，培养时 间细菌菌体为1~2天， 产芽孢的细菌为5~10天
孢子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过1个月
❖ 其他参数，如接种前酶活、种子罐的溶氧和 尾气等
种子制备
❖ 步骤： ➢ 斜面培养基中活化； ➢ 扁瓶固体培养基或摇瓶培养基中扩大培 养，完成实验室种子制备 ➢ 一级种子罐，制备生产用种子；视情况 确定扩大级数，完成生产车间种子制备； ➢ 种子转种至发酵罐
三.种子制备过程
❖ 实验室种子制备阶段：琼脂斜面至 固体培养基扩大培养（如茄子瓶斜 面培养等或液体摇瓶培养
在发酵产品的放大中，反应级数的确定是非常重要 的一个方面
发酵级数确定方法
菌种的性质(如菌种传代后的稳定性) 瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁殖速度 发酵罐中种子培养液的最低接种量 种子罐与发酵罐的容积比 生产规模 随工艺条件的改变作适当的调整
二.种子质量的判断方法
❖ 通常检测的培养液中参数 ➢ pH是否在种子要求的范围之内 ➢ 糖、氨基氮、磷酸盐的含量 ➢ 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观 ➢ 有无杂菌污染
优良种子应具备的条件/种子的 要求：
➢ 生长活力强，延迟期短；(接种后在发酵罐
中能迅速生长)
➢ 生理状态稳定； ➢ 浓度及总量能满足大容量发酵罐接种量的要求； ➢ 无杂菌污染，保证纯种发酵； ➢ 适应性强，生产能力稳定
种子制备原理与技术：

发酵工程PPT


生物转化的反应类型
• 氧化反应
– – – – – – – – – – – – 羟基化 醇基氧化 环氧化作用 碳-碳键的裂开 双键的导入反应 过氧化反应 杂原子氧化 还原酮到醇 还原醛到醇 还原某氢过氧化物到醇 还原烯醇到伯醇 双键饱和
• 异构化
– – – – – △6-3-酮异构化成△4-3-酮 D高环化 反频哪酮重排 醇差向（立体）异构 5α－8α表二氢化合物重排到桥 氧醇结合 羟基乙酰化 糖苷化 酚醚形成 胺的乙酰化 甾体生物碱与碳酸相结合
• 微生物药物由什么组成？
– – – – 微生物的整体或部分实体 微生物的初级代谢产物 微生物的次级代谢产物 微生物合成的产物
• • • • • •
抗生素（antibiotic） 酶抑制剂 (enzyme inhibitor) 免疫调节剂 (immunomodulator) 受体拮抗剂 (receptor antagonist) 抗氧化剂 (antioxidant) 维生素、氨基酸、有机酸等传统药物 (vitamin,
微生物药物生物合成途径 的基因改变
• 突变生物合成 • 原生质体融合 • 基因操作
– 限速酶的基因操作 – 调节基因的操作 – 转座子的操作 – 自主复制质粒的导入
组合生物合成
• 组合生物合成（combinatorial biosynthesis）是指 结构不同但生物合成途径相似的次级代谢产物合 成基因之间可以进行重组、组合或互补产生新结 构的化合物。 • 基本原理 组合生物合成首先是建立在天然产物生物合 成的基础之上的。天然产物的生物合成是由一系 列酶系作为介导，由低级代谢物起始，经过一系 列反应最终合成终产物。组合生物合成的目的是 在了解每个酶系在天然合成过程中作用的基础上， 重新组合以创制新结构的化合物，这种新组合的 可能性是建立在次级代谢合成酶对底物的宽容性 及特异性之上的。
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链霉素生产中，斜面孢子在6℃冷藏两 个月后的发酵单位比冷藏一个月的降低18％， 比冷藏3个月的降低35％。
培养基
培养种子的目的：
扩大培养，增加细胞数量； 同时也必须培养出强壮、健康、活性
高的细胞。为了使细胞迅速进行分裂 或菌丝快速生长。
种子培养基特点
有较完全和丰富的营养物质，糖分少，需充足 氮源和生长因子，无机氮源比例大； 各种营养物质的浓度不必太高； 供孢子用的种子培养基，可添加易被吸收利 用的碳源和氮源；
提供适宜的生长环境 种子无杂菌检查，保证纯种发酵。
种子液生化分析项目主要有：营养基质的消 耗速度、pH变化、溶氧变化、色泽和气味等
种子制备的放大原理与技术
细菌发酵时的种子扩大培养； 细菌发酵过程中种子扩大培养的主要目的是
为了获得大量的活力强的种子 ； 种龄对于生芽孢的种子尤其重要。若接种物
菌种产孢子能力不强或孢子发芽慢，可用摇 瓶液体培养法
不产孢子的菌种，保藏基础上，在一定温度 下活化即可
种子扩大培养阶段
液体培养法：液体试管、三角瓶摇床 振荡或回旋式培养。
表面培养法：茄子瓶、克氏瓶或瓷盘 培养。
固体培养法：三角瓶、蘑菇瓶、克氏 瓶、培养皿等麸皮培养。
生产车间种子制备
通气与搅拌
足够的通气量，以保证菌种代谢正 常，提高种子的质量
搅拌可提高通气效果，促进生长繁 殖，过度搅拌导致培养液大量涌泡， 液膜表面的酶易氧化变性，泡沫过 多增加染菌机会，增加能耗。
丝状微生物不宜剧烈搅拌。
斜面冷藏时间
对孢子的生产能力有较大影响 冷藏时间越长，生产能力下降越多
种子制备过程
实验室种子制备阶段：琼脂斜面至 固体培养基扩大培养（如茄子瓶斜 面培养等或液体摇瓶培养
生产车间种子制备阶段：种子罐扩 大培养
实验室种子制备
无菌方式接保藏的菌种至斜面培养基上，成 熟后挑选正常菌落至试管斜面和摇瓶。
菌种产孢子能力强及孢子发芽、生长繁殖迅 速，可用固体培养基培养孢子
实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接到种子 罐进行扩大培养
种子罐培养一获得足够的菌种数量，二 种子 罐的培养基接近发酵罐培养的醪液成分和培养 条件，使菌体适应发酵环境
种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制， 并减少由于多次转种而带来的染菌机会以及 减少因种子罐生长异常而造成的发酵波动
但考虑能否在一定时间内获得优质、足量的 种子以满足发酵的需求
放射形土壤杆菌多糖（ARPS） 发酵过程中不同的接种龄对多糖产量的影响
接种种龄和接种量
接种量：移入的种子液体积和接种后培养液 体的体积的比例
接种量过多，菌丝生长过快、溶氧不足，衰 老细胞增加等，发酵后劲不足
种量过少延长发酵周期，形成异常形态，而 且易造成染菌。
以生产菌种在发酵罐中的繁殖速度依据 接种量的大小直接影响发酵周期。
本章内容：
种子制备原理与技术 影响种子质量的因素 种子质量的控制措施 种子制备的放大原理与技术
种子制备原理与技术
优良种子应具备的条件 生长活力强，延迟期短； 生理状态稳定； 浓度及总量能满足发酵罐接种量的要求； 无杂菌污染，保证纯种发酵； 适应性强，生产能力稳定
培养温度
温度过低，菌种生长发育缓慢 温度过高会使菌丝过早自溶
在制备土霉素生产种子过程中，高于37℃培养时， 孢子接入发酵罐后表现出糖代谢变慢，氨
基氮回升提前，菌丝过早自溶，效价降低等现象。
湿度
湿度低，孢子生长快； 湿度大，孢子生长慢
制备土霉素生产菌种龟裂链霉菌孢子时 发现，在含有少量水分的试管斜面培养基下 部孢子长得较好，而斜面上部由于水分迅速 蒸发呈干瘪状，孢子稀少
在放射形土壤杆菌多糖（ARPS） 发酵过程中不同的接种量对多糖产量的影响
影响种子质量的因素
斜面冷藏时间
原材料质量
培养基
培养温度 pH 湿度 通气与搅拌
原材料质量
原材料质量波动引起种子质量不稳定 原材料质量波动的主要原因：无机离子
含量不同（微量元素Mg2+、Cu2+、Ba2+ 能刺激孢子的形成，磷含量太多或太少 也会影响孢子的质量）。
种子质量的判断方法
通常检测的培养液中参数 pH是否在种子要求的范围之内 糖、氨基氮、磷酸盐的含量 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观 有无杂菌污染
其他参数，如接种前酶活、种子罐的 溶氧和尾气等
种子制备
步骤： 斜面培养基中活化； 扁瓶固体培养基或摇瓶培养基中扩大培 养，完成实验室种子制备 一级种子罐，制备生产用种子；视情况 确定扩大级数，完成生产车间种子制备； 种子转种至发酵罐
含大量芽孢，将给后续发酵带来较长迟滞期
举 例：
梭状芽孢杆菌发酵丁醇－丙酮时种子扩大培养的程序
酵母发酵时的种子扩大培养
应考虑与发酵培养基的主要成分相近。
pH
选择最适种子培养pH的原则是获得 最大比生长速率和适当的菌量
培养最后一级种子的培养基的pH应 接近于发酵培养基的pH，以便种子 能尽快适应新的环境
种子质量的控制措施
菌种稳定性的检查 测定其生产能力，从中挑选高产菌株，并 及时对退化菌种进行复壮
种龄与接种量
接种龄
种子罐中培养的菌体从开始移入下一级种 子罐或发酵罐时的培养时间
种子培养期应取菌种的对数生长期为宜， 菌种过嫩或过老，不但延长发酵周期，而 且会降低产量。
大量地接入培养成熟的菌种的优点：
缩短生长过程的延缓期，因而缩短了 发酵周期，提高了设备利用率
节约发酵培养的动力消耗 有利于减少染菌机会
种子罐级数的确定
种子扩大的级数：制备种子需逐级扩 大培养的次数 级数愈少，愈利于简化工艺及控制， 并可减少种子罐污染杂菌的机会，减 少消毒及值班工作量，减少因种子罐 生长异常而造成的发酵波动。
确定方法
菌种的性质(如菌种传代后的稳定性) 瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁殖速度 发酵罐中种子培养液的最低接种量 种子罐与发酵罐的容积比 生产规模 随工艺条件的改变作适当的调整