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BB-Red(EB替代物)使用说明货号:B9130保存条件:2~8℃避光保存有效期:1年产品简介:BB-Red是EB（Ethidium bromide）溴化乙锭的换代产品，用于凝胶中核酸的染色。
BB-Red 比EB诱变性和毒性大幅度降低，而灵敏度、稳定性均不降低。
BB-Red由于相对于EB难以进入细胞的，这样就大大降低了对细胞的毒性。
BB-Red的稳定性很好，可以微波炉加热，可以室温保存，含BB-Red的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。
BB-Red具有和EB几乎相同的光学性质，即激发光和发射光都非常接近，这样可以直接用BB-Red替换EB，而不必更换已有的凝胶观察、拍照或成像系统。
BB-Red和EB非常相似，可以直接倒制在凝胶中，也可以在凝胶电泳完成后再进行染色。
BB-Red对于核酸的迁移率影响非常小，小于SYBR Green I对于核酸迁移率的影响。
BB-Red和EB一样作为荧光染料均需避光保存，但在使用过程中的室内光照不会影响其使用效果。
注意事项:BB-Red虽然相对于EB其诱变性和毒性大幅度降低，但是核酸类荧光染料仍然可能还有未曾检测到的其他毒性，操作时注意适当防护，不可用手直接接触。
使用方法：1.琼脂糖凝胶中添加BB-Red。
在琼脂糖完全溶解后，适当冷却后，按照每100ml胶液加入50μl BB-Red比例(2000:1)加入BB-Red。
混匀后即可制胶。
2.电泳完毕后染琼脂糖凝胶按照每100ml100mM NaCl溶液中加入100~200μl BB-Red比例(500~1000:1)加入BB-Red，制成BB-Red染色液。
把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当容器中，加入用100mM NaCl溶液配制成的BB-Red染色液，确保盖住凝胶，染色10~15分钟。
染色时间根据胶的厚度来定，胶厚则需染色时间长一些。
染色完毕后即可在紫外灯下即可观察DNA条带。
也可以在染色后用水漂洗1~2次，每次3~5分钟，以消除背景，即可观察到更清晰的条带。
1---------SYBR Green I可以替代很多实验室现在已经在用了SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。
至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。
可适用于多种电泳分析。
SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳，和毛细管电泳等。
SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。
另外，SYBR Green I 与EB相比，诱变能力大大降低。
SYBR Green I 核酸染料特点高灵敏：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
操作简单：无须脱色或冲洗。
适用范围广：可适用于多种电泳分析。
使用方便：不影响其它修饰酶作用。
经济：价格比银染便宜。
电泳用SYBR Green I 使用方法SYBR Green I预染方法1. 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳2. 工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR GreenⅠ工作液。
SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。
3. 制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。
4. 样品染色：向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。
SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。
5. DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。
1.GeneFinder核酸染料GeneFinder是新型核酸染料，具有安全、灵敏等突出优点，可以代替溴化乙锭(EB)作为各种核酸电泳的染色剂。
与强致癌性的EB不同，GeneFinder毒性很低，使用安全，可有效保护实验操作者和环境。
GeneFinder与dsDNA结合荧光信号可增强800—1000倍，其检测核酸的灵敏度比EB染色法平均高10倍左右，与SYBRGreenI染料的灵敏度相当。
另外，该染料同样能引起有机体突变，在使用时候一样要采取适当的保护措施。
1.1.GeneFinder的特点：1. 安全性：GeneFinder核酸染料致突变性远低于EB数倍甚至数十倍2. 灵敏度：检测核酸的灵敏度平均高于EB染色法10倍左右3. 操作简单：本染料有多种使用方法，操作简单4. 适用范围：适用于多种核酸电泳分析，可以对DNA、RNA、及寡核苷酸等进行染色5. 兼容性：对常用酶（如Taq酶、逆转录酶、内切酶、连接酶等）没有抑制作用2.Goldview核酸染料GoldenView是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldenView与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
在100ml琼脂糖胶溶液中加入5-10µlGoldenView即可。
在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，也可用于染RNA。
无致突变性；而溴化乙锭EB是一种强致癌剂，选用GoldenView代替EB比较明智和安全。
目前尚未发现Geneview有致癌性，但是在使用中发现它有一定的刺激性，在使用过程中应戴上手套。
Goldview对于大片段DNA的染色效果还行，但是对于500bp以下的片段效果不是很好，还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般5-10min条带就会消失。
所以应该抓紧时间拍照后再观察。
另外Goldview不适用于胶回收。
灵敏度差，本底色严重，不利于回收，不稳定。
SYBR Green I使用介绍SYBR Green I核酸染料简介SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单，无须脱色或冲洗；至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低，可适用于多种电泳分析。
SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。
SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用；另外，SYBR Green I 与EB相比，诱变能力大大降低。
SYBR Green I 核酸染料特点● 灵敏高：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
● 操作简单：无须脱色或冲洗。
● 适用范围广：可适用于多种电泳分析。
● 使用方便：不影响其它修饰酶作用。
● 经济：价格比银染便宜。
电泳用SYBR Green I 使用方法简介一、SYBR Green I预染色方法1、该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
2、工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR Green Ⅰ工作液。
SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。
3、制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。
4、样品染色：向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。
SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。
5、DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和5μL DNA Marker稀释液和1μLSYBR Green Ⅰ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。
溴化乙(ethidium bromide )：溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。
溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。
缺点：溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。
许多人认为溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性。
EB的替代物：GelRed和GelGreen、SYBR Green Ⅰ、GoldView、GelRed和GelGreen：是一种新型的聚次甲基染料，不能穿透细胞膜，但可以和游离的DNA 高效结合，是一种高灵敏的核酸染料，与EB染料灵敏度相当。
不具有致癌毒性，是一种安全的核酸染料。
废弃的Gill green在自然环境下会分解，因此无需特殊处理。
优点：1.无毒性：具有独特的油性和大分子量特点因此不能穿透细胞膜进入细胞内，诱变性远远小于EB。
2.灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色。
3.稳定性高:室温、酸碱溶液极其稳定，耐光强，不挥发。
4.信噪比高：样品荧光信号强，背景低。
5.用法简单：可制胶中加，也可电泳后染色。
缺点：价格昂贵。
SYBR GreenⅠ：是高敏度的DNA荧光染料，在紫外照射透视下，与双链DNA接合的SYBR GreenⅠ呈现绿色荧光，单链DNA则呈橘黄色。
适用于各种电泳分析。
优点:1.高灵敏度：与双链DNA的亲和力非常高，因此可用作电泳前染色，至少可检出20pgDNA，高于EB25~100倍。
2.信噪比高：样品荧光信号强，背景低。
3.适用范围广：适用于多种凝胶电泳方法，琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳。
4.对分子生物学中常用的酶（Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶）没有抑制作用。
与EB相比，诱变能力大大降低。
缺点：不稳定，易降解。
GoldView：是一种可以替代EB的新型核酸染料，采用琼脂糖电检测DNA时，其与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
实验室常用有毒药品关键词：实验室常用药品溴化乙锭EBDEPC焦碳酸二乙酯PMSF苯甲基磺酰氟乙腈甲醇1. 溴化乙锭（EB）：大家都比较熟悉了。
具有强诱变致癌性，使用时一定要戴一次性手套，注意操作规范，不要随便触摸别的物品。
2. DEPC（焦碳酸二乙酯）：闻起来香香甜甜的，可是害人不眨眼！一种强有力的蛋白质变性剂，而且怀疑是致癌剂。
开瓶时将瓶子远离你，内压可导致溅泼。
操作时戴合适的手套，穿工作服，并在化学通风橱里进行。
3. PMSF（苯甲基磺酰氟）：是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂。
它对呼吸道黏膜，眼睛和皮肤有非常大的破坏性. 可因吸入，咽下或皮肤吸收而致命. 戴合适的手套和安全眼镜，始终在化学通风橱里使用。
在接触到的情况下，要立即用大量的水冲洗眼镜或皮肤，已污染的工作服丢弃掉。
4. 乙腈，易挥发易燃，是一种刺激物和化学窒息剂，通风橱中远离热、火。
5. 放线菌素D，是一种致畸剂和致癌剂，通风橱中操作。
6. alpha-鹅膏蕈毒环肽，具有强毒性，可能致命。
7. N'N'-亚甲双丙烯酰胺，有毒，影响中枢神经系统，切勿吸入粉末。
8. 甲醇，有毒，能引起失明。
9. 乙酸（浓的）：可能因为吸入或皮肤吸收而受到伤害，要戴手套和护目镜，最好在化学通风橱中操作。
10. 过硫酸酸铵：对粘膜和上呼吸道、眼睛和皮肤又较大危害性，吸入可致命。
操作时戴手套、护目镜。
始终在通风橱中操作。
11. 氯化铯：可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。
操作时戴手套和护目镜。
12. DTT：很强的还原剂，散发难闻的气味。
可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。
当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中操作。
13. 甲醛：毒性较大且易挥发，也是一种致癌剂，易通过皮肤吸收，对眼睛、粘膜和上呼吸道有刺激和损伤作用。
避免一如其挥发的气雾。
戴手套和护目镜。
始终在通风橱中操作。
远离热、火花及明火。
14. Trizol ：对眼睛有刺激性，腐蚀皮肤。
转基因大豆的检测实验设计生物技术安全评估 092012年5月目录前言........................................................................3. 实验一大豆样品的准备 (4)实验二大豆DNA的提取和纯化 (4)实验三靶标基因的扩增 (6)实验四反应产品检测 (10)实验五结果分析 (12)参考文献 (12)前言随着转基因工程技术的迅速发展与在生物改良及遗传育种中的大规模应用，转基因生物（Genetically Modified Organism）及其产品的种类越来越多，含有的外源基因类型也越来越多。
抗草甘膦（glyphosate）大豆（商品名，roundup ready soybean）是在传统大豆株Variety A5403中转入外源基因CAMV-35S启动子、抗草甘膦基因CP4-EPSPS和NOS终止子而得到。
它是目前使用最广的转基因作物之一，每年至少有800万吨转基因大豆进入我国市场。
因此，研究抗草甘膦大豆的快速检测方法具有重要意义。
基于核酸的检测技术主要有PCR 方法和基于PCR 原理的其他检测方法如多重PCR、巢式PCR 等等。
普通PCR 方法已经成为转基因检测中常用的方法，通常是作为定性检测方法，早在2003 年就成为出入境检验检疫系统的行业标准。
这些标准涉及的转基因作物有大豆（SN/T 1195-2003）、玉米(SN/T 1196-2003)、棉花(SN/T 1199-2003)、油菜籽(SN/T 1197-2003)、烟草(SN/T 1200 -2003) 和马铃薯(SN/T 1198 -2003)。
目前广泛应用于进出口商品的转基因成分检测。
随后在2004 年又制定了转基因定性检测的国标(GB/T 19495.4-2004)，该国标中用的方法还是普通PCR。
因此，普通PCR 方法的研究主要在于新的转基因作物的鉴定研究。
eb染料作用
EB（溴化乙锭）是一种高度灵敏的嵌入性芳香族荧光化合物，通常用于分子遗传学、DNA和染色质结构分析等研究中。
它与单链或双链DNA高效结合，结合后的复合物在紫外照射下（300nm左右）会发出明亮的橙红色荧光，从而便于观察。
然而，EB具有明显的毒性，并且能诱导遗传物质（DNA）突变，具有高致
癌性，对人体潜在危害非常大。
因此，现在很多人对其敬而远之，后续也就随之出现了多种以安全性为主打的无毒/低毒的核酸染料，俗称EB替代染料。
请注意，虽然EB在某些领域仍被使用，但其高毒性和潜在的致癌性使其存
在一定的风险。
因此，使用EB时一定要遵守安全操作规范，并确保在专业
人员的指导下进行。
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SYBR Green I可以替代很多实验室现在已经在用了
SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。
至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。
可适用于多种电泳分析。
SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳，和毛细管电泳等。
SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。
另外，SYBR Green I 与EB相比，诱变能力大大降低。
SYBR Green I 核酸染料特点
高灵敏：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
操作简单：无须脱色或冲洗。
适用范围广：可适用于多种电泳分析。
使用方便：不影响其它修饰酶作用。
经济：价格比银染便宜。
电泳用SYBR Green I 使用方法
SYBR Green I预染方法
1. 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳
2. 工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR GreenⅠ工作液。
SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。
3. 制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。
4. 样品染色：向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。
SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。
5. DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。
6. 上样、电泳：按常规操作。
SYBR Green I后染方法
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用PH 7.0 - 8.5 的缓冲液（如：TAE，TBE 或TE），按照10000：1的比例稀释SYBR GreenⅠ浓缩液，混匀，制成染色溶液。
3. 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。
室温振荡染色10-30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。
聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆
盖整个胶板，并染色30分钟。
玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。
4. 用蓝盾TM观测。
蓝光可透过玻璃，观测聚丙烯酰胺凝胶时，可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入蓝盾TM内观测。
SYBR Green I使用注意事项
1. 在"SYBR GreenⅠ预染色方法"中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。
2. 在常规用酒精沉淀核酸的过程中，SYBR Green I 可以全部从双链核酸上去掉。
3. 如果想对用SYBR Green I 染过的胶进行Southern blots，建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%- 0.3% 的SDS。
4. 在紫外照射透视下，与双链DNA 接合的SYBR Green I 呈现绿色荧光。
如果胶中含有单链DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。
5. SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。
建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
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GoldView™代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料
目录号规格价格
HGV-11ml85元
GoldView™核酸染料——使用说明
概述
GoldView™是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA 时，GoldView™与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而且也可用于染RNA。
通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。
因此用Goldview™代替EB不失为一种明智的选择。
使用方法
1. 将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）在微波炉中融化。
2. 加入5µl GoldView，轻轻摇匀，避免产生气泡。
3. 冷却至不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4. 电泳完毕在紫外灯下观察。
若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰、背景较低的照片。
注意事项
1. 胶厚度不宜超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。
2.加入GoldView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。
3. 通过凝胶电泳回收DNA片段时，建议使用GoldView染色，在自然光下切割DNA条带，避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。
4. 虽然未发现GoldView有致癌作用，但对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。
电泳结果显示GV灵敏度与EB相当
中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所检验报告。
