菌株筛选方法
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菌种选育的常用途径引言菌种选育是一种重要的微生物学研究领域,通过对不同菌种的筛选和改良,可以获得具有特定功能的菌株,应用于农业、医药、食品等领域。
本文将详细介绍菌种选育的常用途径,包括菌种筛选、遗传改良和代谢工程等方面。
菌种筛选菌种筛选是菌种选育的第一步,通过对大量的菌株进行筛选,找到具有特定功能的菌种。
常用的菌种筛选途径包括:1. 传统筛选法传统筛选法是指通过传统的培养基和培养条件,观察菌株在不同环境下的生长情况和代谢产物的产量,从中选出具有优良性状的菌株。
这种方法简单易行,但效率较低。
2. 高通量筛选法高通量筛选法是利用自动化设备和高通量平台,对大量的菌株进行快速筛选。
常用的高通量筛选方法包括微孔板筛选、流式细胞术和荧光素酶报告基因等。
这种方法高效快速,能够同时处理多个菌株。
3. 分子生物学筛选法分子生物学筛选法是通过对菌株的基因组进行分析,筛选出具有目标基因或特定代谢途径的菌株。
常用的分子生物学筛选方法包括PCR技术、基因芯片和下一代测序等。
这种方法能够准确地确定菌株的遗传特征,对于寻找具有特定功能的菌株具有重要意义。
遗传改良遗传改良是菌种选育的关键步骤,通过对菌株的基因进行改造或调控,使其具有更好的性状和功能。
常用的遗传改良途径包括:1. 诱变诱变是指通过物理或化学手段对菌株的基因进行改变,产生突变体。
常用的诱变方法包括辐射诱变和化学诱变。
诱变可以导致菌株的遗传多样性增加,从而增加筛选到具有特定功能的菌株的概率。
2. 基因工程基因工程是指通过外源基因的引入或菌株内部基因的改造,使菌株具有特定的性状和功能。
常用的基因工程方法包括基因克隆、基因敲除和基因表达调控等。
基因工程可以准确地改变菌株的遗传特征,实现对菌株的精确改良。
3. 重组DNA技术重组DNA技术是指通过DNA片段的重组和重排,实现对菌株基因组的改造。
常用的重组DNA技术包括PCR扩增、限制酶切和连接等。
重组DNA技术可以实现对菌株基因组的精确改造,为菌种选育提供了有力的工具。
菌种筛选方法菌种筛选是微生物学研究中的一项重要工作,通过筛选出具有特定特性或功能的菌株,可以广泛应用于医药、食品、农业和环境等领域。
本文将介绍一些常见的菌种筛选方法。
一、传统筛选方法1. 纯培养与分离纯培养与分离是最基本的菌种筛选方法。
通过采集样品,将其中的微生物分离出来,并通过重复分离和鉴定,筛选出单一菌种用于后续研究。
这种方法简单易行,但需要进行大量的繁琐工作。
2. 形态学特征筛选菌落形态学特征是菌株之间的重要区别指标,通过观察菌落的大小、颜色、形状等特征,可以初步筛选出具有目标性状的菌株。
这种方法不需要复杂的设备和技术,适合初步筛选大量样品。
3. 生理生化特征筛选生理生化特征是菌株在代谢和生长方面的表现,通过测定菌株对各种生理生化指标的反应,例如抗生素敏感性、产酶能力等,可以进一步缩小筛选范围。
这种方法需要特定的培养基和试剂,对筛选条件有一定要求。
二、分子生物学方法1. PCR扩增PCR扩增是一种常用的分子生物学技术,可以利用特异性引物扩增目标基因。
通过在筛选过程中选择特定的基因片段作为指标,可以筛选出具有目标特性的菌株。
这种方法具有高灵敏度和高特异性,适用于筛选基因工程菌株等特定要求的菌株。
2. 基因芯片基因芯片是一种高通量技术,可以同时检测上千个基因。
通过在菌种筛选中选择合适的探针,可以迅速准确地筛选出具有目标基因表达的菌株。
这种方法操作简便,适用于大规模筛选。
3. 基因重组技术基因重组技术是一种将异源基因导入宿主细胞中的方法,通过构建适当的载体和选择合适的宿主细胞,可以快速筛选出具有目标基因功能的菌株。
这种方法需要相关的分子生物学技术支持,适用于特定的目标筛选。
三、高通量筛选方法1. 微孔板筛选微孔板是一种用于大规模平行筛选的工具,通过在每个微孔中添加不同培养条件和指标物质,可以同时筛选多个菌株。
这种方法高效快速,可以用于大规模筛选和反复筛选。
2. 流式细胞术流式细胞术是一种利用特定染料对菌株进行筛选的方法,通过检测菌株表面或内部的荧光信号,可以筛选出具有特定特性的菌株。
选育菌种的方法一、引言菌种的选育是微生物学研究中的重要环节,它对于促进农业、食品工业、医药领域的发展具有重要意义。
本文将介绍一些常用的选育菌种的方法,包括传统的筛选方法和基于分子生物学的筛选方法。
二、传统的筛选方法1. 随机筛选法随机筛选法是最常用的菌种选育方法之一。
其步骤包括:从自然环境中收集样品,如土壤、水体等,将样品制成适宜的培养基,然后进行培养。
在培养过程中,通过观察菌落的形态、颜色、生长速度等特征,筛选出具有特殊性状或功能的菌株。
2. 生理选育法生理选育法是根据菌株的生理特性进行选育的方法。
通过调节培养条件,如温度、pH值、氧气浓度等,筛选出适应特殊环境的菌株。
例如,有些菌株能够在高温或低温环境中生长,有些菌株能够在酸性或碱性环境中生长,这些菌株可以被应用于相关领域。
3. 抗性筛选法抗性筛选法是利用抗生素或其他抑制性物质来筛选菌株的方法。
通过将菌株培养在含有抗生素或抑制性物质的培养基上,只有具有抗性的菌株才能够生长并形成菌落。
这种方法可以筛选出具有抗生素抗性、耐酸碱或耐高温的菌株。
三、基于分子生物学的筛选方法1. PCR筛选法PCR筛选法是利用聚合酶链反应(PCR)技术来筛选菌株的方法。
通过设计特异性引物,扩增目标基因片段,然后通过电泳分析扩增产物,筛选出具有特定基因的菌株。
2. 基因克隆筛选法基因克隆筛选法是将目标基因插入表达载体中,然后转化到宿主菌中,通过观察宿主菌的表型变化来筛选菌株。
例如,将具有抗性基因的载体转化到宿主菌中,只有转化成功的菌株才能够生长在含有抗生素的培养基上。
3. 荧光筛选法荧光筛选法是利用荧光蛋白标记目标基因,通过观察菌株产生的荧光信号来筛选菌株。
例如,将荧光蛋白基因与目标基因融合,将融合基因转化到宿主菌中,通过观察菌株产生的荧光信号来筛选具有目标基因的菌株。
四、总结菌种的选育是微生物学研究中不可或缺的一环。
传统的筛选方法包括随机筛选法、生理选育法和抗性筛选法,它们通过观察菌株的形态、生长特性和抗性等来筛选菌株。
菌种筛选方法范文菌种筛选是微生物学中的一项重要技术,用于从大量的菌株中筛选出具有特殊性状或功能的菌株。
菌种筛选方法可以根据筛选目的和筛选对象的特点进行选择,以下列举了常用的菌种筛选方法:1.外观筛选法:根据菌落的形态、颜色或大小等外观特征进行筛选。
这种方法适合于筛选出形态特殊的菌株,如颜色较深或较浅的菌株。
2.抗生素抗性筛选法:将菌株培养在含有不同抗生素的培养基上,观察菌株的生长情况,筛选出对其中一种或几种抗生素具有抗性的菌株。
这种方法适合于筛选出耐受抗生素的菌株,如耐药菌株。
3.发酵产物筛选法:筛选产生特定发酵产物的菌株。
如筛选产生抗生素、酶类或有机酸等特殊代谢产物的菌株。
这种方法适合于筛选具有特定功能的菌株。
4.pH、温度耐受筛选法:在不同pH值或温度条件下,培养菌株并观察其生长情况,筛选出对酸碱度或温度变化具有耐受性的菌株。
这种方法适合于筛选出耐受极端环境的菌株。
5.发酵特性筛选法:通过观察菌株在发酵过程中的产物、产率或变化等特性,筛选具有优良发酵特性的菌株。
这种方法适合于筛选工业发酵过程中需要的菌株。
6.代谢产物筛选法:通过检测菌株代谢产物的生物活性或化学特性,筛选具有特定代谢能力的菌株。
如筛选具有抗菌活性的菌株。
这种方法适合于筛选具有特殊生物活性的菌株。
7.遗传筛选法:通过引入特定基因标记,并利用特定基因的表达产物对菌株进行筛选。
如筛选具有目标基因表达的菌株。
这种方法适合于筛选具有特定基因功能的菌株。
总之,菌种筛选方法是根据筛选目的和筛选对象的特点,选取适合的筛选方法进行。
不同的菌株筛选方法可以相互结合使用,以提高筛选效果。
通过合理的筛选方法,可以高效地从大量菌株中筛选出具有特殊性状或功能的菌株,并在工业发酵、医药、食品等领域中得到应用。
微生物菌株的筛选及其在环境治理中的应用微生物是一类非常特殊的生命体。
它们常常起着十分重要的作用,可以影响人类的健康、动植物的生长、土壤的肥沃等方面。
然而,在环境治理中,微生物却可以发挥更加巨大的作用。
微生物的菌株筛选是环境治理的重要手段之一,多年来受到了广泛关注。
本文将从微生物菌株的筛选方法、筛选后的应用以及现代微生物治理方法等方面进行探讨。
一、微生物菌株的筛选方法微生物菌株的筛选是指通过研究和阅读文献资料,从原始的微生物种群中筛选出有用的生物菌株,然后对其进行试验研究,确认其功能和应用价值。
1. 传统微生物菌株筛选法传统菌株筛选法是最为常用的一种方法。
它包括了以下几个步骤:(1)微生物样品的来源微生物样品可以来自土壤、河流、海洋、肠道、病毒等多种渠道。
(2)微生物的富集和筛选在这个阶段,常常采用的是培养和分离的方法。
通过在营养富集基质上培养微生物,然后再分离其单体,筛选出目标物种。
(3)菌株的特性和功能研究在筛选出目标物种的基础上,对其特性和功能进行深入的研究,例如:酶的稳定性、生长条件等。
(4)评价对菌株的应用价值进行评价,包括其对环境的影响、经济价值、安全性等。
2. 现代微生物筛选法传统微生物筛选法虽然简单易行,但是存在着一些缺点,比如筛选效率低,评价标准不够明确等问题。
在这种情况下,现代微生物筛选法应运而生。
它将分子生物学、基因工程、生物统计和高通量筛选等科技手段相结合,从而提高了微生物筛选的效率和准确性。
二、微生物菌株的应用微生物菌株的应用可以分为生产应用和环境应用两种类型。
1. 生产应用(1)工业微生物微生物工业可以生产很多实用的物品,例如乳酸、酵母、酒精、细菌和酶等。
(2)医药微生物微生物有很强的生殖力和代谢活力,因此它可以作为重要的医药材料。
2. 环境应用(1)环境修复由于化工行业和工程建筑的发展,环境污染问题日趋严重,微生物的生化特性被广泛利用于环境修复中,比如:清洁污水、修复地下水污染等。
微生物菌株的筛选及其在环境修复中的应用随着人类社会的不断发展和城市化进程的加快,环境污染问题日益严重,给人类和地球造成了巨大的威胁。
为了解决这一问题,科学家们开始研究和应用微生物菌株在环境修复中的作用。
本文将介绍微生物菌株筛选的方法以及其在环境修复中的应用价值。
一、微生物菌株筛选的方法微生物菌株的筛选是指选择具有一定特殊功能菌株的过程,这些菌株可以在特定环境中对某些有害物质进行降解和转化,或者具有修复受损环境的能力。
以下是一些常用的微生物菌株筛选方法:1.1 原位分离法原位分离法是通过直接从环境中采集样品并进行分离培养,筛选出具有特定功能的微生物菌株。
该方法的优势在于可以直接在目标环境中寻找适应的菌株,可以更好地适应受损环境的修复需求。
1.2 代谢产物筛选法代谢产物筛选法是通过检测微生物培养基中的代谢产物,从中筛选出具有降解有害物质能力的菌株。
如利用基因工程技术,将携带特定代谢途径的基因导入菌株中,使其产生特定的代谢产物,并通过测定代谢产物的生成情况来筛选菌株。
1.3 特异性评价法特异性评价法是通过检测微生物菌株的特定酶活性或基因表达水平,评价其对有害物质的降解能力。
例如,利用PCR技术检测特定降解基因的表达情况,或者通过测定细胞外酶的活性来评价菌株的降解效果。
二、微生物菌株在环境修复中的应用微生物菌株在环境修复中具有广泛的应用价值,主要体现在以下几个方面:2.1 土壤修复土壤污染是一种常见的环境问题,影响着农田的可持续利用和生态系统的正常运行。
微生物菌株可以通过吸附、转化或降解有害物质,改善土壤的物理性质和化学性质,促进土壤的恢复和修复。
2.2 水体治理随着城市化进程的不断加快,水体污染问题日益严重。
微生物菌株可以降解水体中的有机物和重金属等有害物质,提高水体的水质,减少水生生物受到的危害,从而实现水体的治理和修复。
2.3 污水处理工业和家庭排出的废水中含有大量的有机物和污染物,对水环境造成了严重的污染。
高效菌筛选方法及策略菌筛选是指在大量细菌中筛选出具有特定性状或有潜力的菌株。
高效菌筛选方法和策略的研发对于开展微生物研究和利用具有重要意义。
以下是一些常用的高效菌筛选方法及策略。
1.快速筛选方法:快速筛选方法主要通过缩短菌筛选的时间,提高筛选效率。
其中一种常用方法是利用荧光标记在特定条件下或对特定物质的响应。
如利用绿色荧光蛋白(GFP)标记菌株,通过荧光筛选可以快速获取目标菌株。
2.抗性筛选方法:抗性筛选方法通过添加特定抗性基因或对抗特定抗生素,来获得对这些抗生素具有耐受性的菌株。
这样一来,对抗生素的敏感菌株可以被消除,而具有抗性的菌株则可以快速筛选出来。
3.变异筛选方法:变异筛选方法通过利用菌落的形态、色素等可变性特征,筛选出变异菌株。
可以通过菌落形态观察、涂片染色、荧光筛选等方法,快速获得形态或性状变异的菌株。
4.高通量筛选方法:高通量筛选方法利用自动化设备,如微孔板阵列、高通量测序仪等,对大量菌株进行快速筛选。
这种方法主要应用于菌株库的筛选或特定代谢产物高效筛选等方面。
5.代谢产物筛选方法:这种方法通过检测菌株代谢产物的产量或特性,筛选出具有特定代谢产物的菌株。
可以通过色谱-质谱联用技术、高效液相色谱、质谱成像等手段,对菌株代谢物进行分析和筛选。
6.分子筛选方法:分子筛选方法利用特定的分子探针或探测基因,在菌株中筛选具有特定基因或特定基因表达的菌株。
可以通过PCR、南方印迹等技术,对菌株的基因组或转录组进行筛选。
综合利用上述方法和策略,可以实现高效菌株的筛选。
同时,还可以采用多因素组合的策略,如结合菌株形态、生长能力、产物产量和基因组信息等进行筛选。
高效菌筛选方法和策略的研发有助于加快菌株研究和开发,提高微生物资源的利用效率。
食用菌类栽培中的菌种筛选方法在食用菌类的栽培过程中,选择合适的菌种对于提高产量和质量至关重要。
本文将介绍食用菌类栽培中的菌种筛选方法,帮助农民和菌农在栽培实践中做出明智的选择。
一、初步筛选初步筛选是在菌种的基本特性和生态要求的基础上进行的。
它的目的是根据不同菌种的生长条件和适应性,筛选出适合特定环境的菌种。
以下是几种常用的初步筛选方法:1.形态特征观察:不同菌种的形态特征存在差异,如子实体形状、颜色、纹理等。
通过观察这些特征,可以初步区分不同的菌种。
2.生理生化指标检测:通过检测菌种的生理生化指标,如生长速度、产孢量、适应温度等,来评估其适应性和品质特征。
3.病原性检测:某些食用菌类可能存在病原菌种,对于筛选出的菌种进行病原性检测,确保栽培过程中不会受到病害的侵害。
二、实验室筛选在初步筛选的基础上,可以将具备潜力的菌株进行实验室筛选。
实验室筛选主要是通过在控制环境中观察并测定菌株的生长速度、产孢量、品质特征等指标来进行评估。
以下是几种常用的实验室筛选方法:1.菌株培养:将初步筛选出的菌株进行适当的培养,观察其生长情况、菌丝密度等,并记录相应指标。
2.菌株诱导:通过不同的诱导方法,如添加特定营养物质、调节温度湿度等,评估菌株的产孢能力和产香特性。
3.品质评估:将菌株进行品质评估,如食用价值、口感、营养成分等,以确保选出的菌种符合市场需求。
三、田间试验筛选在实验室筛选的基础上,可以将具备潜力的菌种进行田间试验,以进一步评估其适应性和产量表现。
以下是几种常用的田间试验筛选方法:1.不同栽培基质试验:在不同的栽培基质条件下,观察菌种的生长情况和产量表现,并比较其差异,筛选出适应性较强的菌种。
2.不同环境条件试验:在不同的温度、湿度等环境条件下,观察菌种的生长速度和产量表现,并评估其适应性。
3.病害抗性试验:将选出的菌种进行病害抗性试验,观察其在病害侵害下的表现,确保选出的菌种能够在实际栽培中抵御病害。
四、市场验证筛选在经过实验室和田间试验筛选后,仍需进行市场验证以确定最终的菌种选择。
菌株选育方法一、引言菌株选育是微生物学研究中的重要环节,通过选育出高效、高产、高质的菌株,可以提高微生物发酵产物的产量和质量,具有重要的应用价值。
本文将介绍几种常用的菌株选育方法。
二、菌株筛选菌株筛选是菌株选育的第一步,常用的筛选方法有以下几种:1. 形态特征筛选:根据菌株的形态特征进行筛选,如菌落形状、颜色、透明度等。
例如,在筛选产生抗生素的菌株时,可以通过观察菌落的颜色变化来判断菌株的产生抗生素的能力。
2. 生理特性筛选:根据菌株的生理特性进行筛选,如耐高温、耐酸碱等。
例如,在筛选产酶菌株时,可以将菌株培养在不同的温度和pH值条件下,观察其产酶能力的变化。
3. 生长速度筛选:根据菌株的生长速度进行筛选,如菌落形成的速度、菌体生长的速度等。
例如,在筛选高产菌株时,可以通过比较不同菌株的生长速度,选择生长较快的菌株作为高产菌株。
三、遗传改造遗传改造是菌株选育的重要手段之一,通过改变菌株的遗传物质,使其具备特定的性状或功能。
常用的遗传改造方法有以下几种:1. 诱变:通过物理或化学手段引起菌株的突变,产生新的性状或功能。
常用的诱变剂有射线、化学物质等。
例如,在筛选高产菌株时,可以利用诱变剂诱导菌株发生突变,然后通过筛选得到高产菌株。
2. 基因工程:利用基因工程技术将外源基因导入菌株中,使其具备特定的性状或功能。
常用的基因工程技术有基因克隆、基因转染等。
例如,在筛选产生重要药物的菌株时,可以将合成该药物的基因导入菌株中,使其具备合成该药物的能力。
四、代谢工程代谢工程是菌株选育的另一重要手段,通过调控菌株的代谢途径和代谢产物分布,提高目标产物的产量和质量。
常用的代谢工程方法有以下几种:1. 基因组学分析:通过对菌株基因组的测序和分析,确定菌株的代谢途径和相关的基因。
例如,在筛选高产菌株时,可以通过基因组学分析找到与目标产物合成有关的关键基因,并进行代谢工程。
2. 代谢通路工程:通过改变菌株代谢途径中的关键酶的活性或表达水平,调控目标产物的合成。
五种菌种选育的方法1. 筛选优良菌株:通过对菌种进行筛选,选出具有较高产量、快速生长、稳定性等良好性状的菌株。
可以通过观察菌株的形态特征、生长速度以及产物产量等指标进行初步筛选。
2. 交配选育:将具有不同有益特征的两个菌株进行交配,产生具有更优秀性状的杂种,进一步提高菌种的产量和品质。
3. 基因工程改良:通过基因工程技术对菌株的基因进行修改和调整,强化其有益性状,例如提高产量、耐逆性或产物纯度。
4. 微生物育种:利用微生物的自然变异、诱变或基因重组等方法,通过筛选和选育,培育出具有优良性状的菌株。
5. 隔离培养:从自然环境或特定寄主体内分离出有良好性状的菌株,单独培养并进行繁殖,以保持其稳定性和纯度。
6. 高通量筛选:利用高通量技术,如高通量测序、高通量筛选装置等,对大量菌株进行快速筛选和检测,以选取具有优良性状的菌株。
7. 环境适应培养:通过将菌株暴露在不同环境条件下,如不同温度、盐度、pH值等,挑选出能适应多种环境的菌株,提高其应用广泛性和稳定性。
8. 选择性培养基:根据特定的性状需求,调配选择性培养基,利用特定生理功能或代谢产物的需求,筛选出具有目标性状的菌株。
9. 抗菌素筛选:利用抗菌素对菌株进行筛选,选择出对某种特定抗菌素敏感或耐药的菌株,为后续应用提供基础。
10. 应激培养:通过暴露菌株于适宜剂量的外界应激因子,如氧化应激、低温应激等,筛选出对应激因子具有较高耐受能力的菌株。
11. 连续培养:通过在连续培养系统中进行菌株的增殖和筛选,选出适应此种培养方式的优良菌株。
12. 自动化选育:利用自动化系统对菌株进行快速筛选、监控和评价,提高选育效率和可控性。
13. 发酵条件优化:通过改变发酵条件中的温度、pH值、气体供应等参数,优化菌株的生长和产物产量,提高其应用效果。
14. 组合选育:将具有不同优势特征的菌株进行组合,形成互补优势,从而提高整体产量和产品品质。
15. 代谢工程优化:通过调整和改变菌株的代谢途径和代谢产物分布,来增强产物的产量和纯度。
真菌菌株筛选及其特性分析在生物学中,真菌是一类单细胞或多细胞生物,广泛存在于自然界中的土壤、空气和水体中。
真菌菌株的筛选和特性分析对于研究真菌的生长机理、提取有用酶以及开发新药等方面具有重要意义。
本文将重点讨论真菌菌株筛选的方法以及特性分析的应用。
一、真菌菌株筛选方法1. 传统分离法:传统分离法是最常用的真菌菌株筛选方法之一。
它通过直接从环境样品中分离出真菌,并通过培养和观察菌株的生长形态、菌丝颜色和孢子等特征进行鉴定和筛选。
这种方法简单易行,但需要较长的时间。
2. 分光镜下的筛选:近年来,随着显微镜和分光镜技术的发展,通过观察菌株的细胞形态、亲胞、孢子和菌丝等细节信息,可以更准确地鉴定和筛选真菌菌株。
这种方法在筛选过程中需要高分辨率的镜头和经验丰富的操作人员。
3. 分子生物学方法:分子生物学方法是一种快速有效的真菌菌株筛选方法。
通过设计和合成特异的引物,可以扩增和检测真菌菌株的特定基因序列。
这种方法具有高灵敏度和高特异性,并且可以避免传统分离法中的时间和文化限制。
二、真菌菌株的特性分析1. 生长特性分析:真菌菌株生长特性分析是评估其生态适应性和生长速率的重要指标。
通过控制不同培养条件下的培养基成分和环境因素,观察真菌的生长曲线、菌丝伸长速率和菌落形态等,可以了解菌株的生长习性和响应能力。
2. 代谢产物分析:真菌菌株具有丰富的代谢产物,在食品工业、医药领域和环境治理中具有广泛应用。
特性分析可以通过液相色谱-质谱联用技术、红外光谱和气相色谱-质谱联用技术等手段,检测和分析真菌的次生代谢产物,如抗菌物质、天然色素和抗氧化物质等。
3. 特定基因检测和表达分析:真菌菌株的基因组和基因表达水平与其生长特性和代谢产物密切相关。
通过PCR扩增和测序技术,可以检测和验证真菌菌株中的特定基因,如生长调控基因和代谢途径基因等。
此外,利用实时荧光定量PCR和基因芯片技术,还可以分析真菌菌株在不同环境和培养条件下的基因表达模式。
筛选菌种的四个步骤筛选菌种是指通过一系列实验和评估来确定最适合特定应用的微生物菌株。
下面将介绍筛选菌种的四个步骤:1.初始筛选:2.生物活性筛选:在生物活性筛选阶段,我们通过对菌株的生物活性进行评估来确定其具有潜在用途的能力。
这通常包括筛选抗生素产生菌、产酶菌株等。
首先进行抗菌活性筛选,将菌株培养在富含病原菌的琼脂平板上,观察是否有抗菌圈产生。
然后,进行产酶筛选,比如进行淀粉酶、纤维素酶等酶的产生能力的评估。
此外,还可以通过对菌株的生态学行为、对有毒物质的降解能力等进行评估。
3.遗传特性筛选:在遗传特性筛选阶段,我们关注的是菌株的遗传特征。
这通常包括筛选具有高产能、稳定性和耐受性等特性的菌株。
这一步骤通常涉及菌株的基因分析,如PCR、序列测定等。
通过对菌株的基因组和基因表达数据进行分析,我们可以确定菌株的基因组组成、功能基因和代谢途径等。
此外,还可以使用基因工程技术来改良菌株的特性,例如通过基因突变或基因组互换等。
4.应用评估:应用评估是最后一步,用来评估菌株在特定应用中的实际效果。
这个步骤通常包括菌株的生物质量产量、产物纯度和质量等因素的评估。
此外,还可以考虑菌株的生长特性、代谢路径和产物稳定性等。
通过与已经商业化或研究中的菌株进行比较,可以确定最具潜力的菌株,并进一步开发应用。
总结起来,筛选菌种的四个步骤包括初始筛选、生物活性筛选、遗传特性筛选以及应用评估。
这四个步骤通过从原始样品中筛选出具有潜在应用的微生物菌株,并对其进行评估,以确定最适合特定应用的菌株。
这些步骤的目的是发现具有特殊功能的微生物菌株,并利用它们在农业、医药、环境等领域的广泛应用。
简述营养缺陷型菌株的筛选方法营养缺陷型菌株是指在一定条件下,无法自主合成某些生物活性物质而需要外源性提供的菌株。
这类菌株在微生物研究和应用中具有重要意义。
本文将介绍几种常用的营养缺陷型菌株的筛选方法。
1. 选择基质筛选法选择基质筛选法是一种简单直接的筛选方法。
首先,根据所需筛选菌株的营养缺陷特点,选择一种含有该营养物质的基质。
然后,将待筛选的菌株接种于这种基质上进行培养。
如果菌株能够生长、繁殖,说明其具有该营养物质的合成能力;如果菌株无法生长、繁殖,说明其存在该营养物质的缺陷。
通过这种方法可以初步筛选出营养缺陷型菌株。
2. 诱变筛选法诱变筛选法是通过诱变剂对菌株进行处理,使其发生突变,进而筛选出营养缺陷型菌株。
常用的诱变剂有化学物质和物理因素。
化学物质如亚硝酸钠、硝酸钠等,物理因素如紫外线、γ射线等,这些诱变剂能够引起菌株的DNA发生突变。
在诱变后,将菌株接种到无法自主合成某种生物活性物质的培养基上,观察其生长情况。
如果菌株能够生长、繁殖,说明其突变后具有该物质的合成能力丧失,从而可以筛选出营养缺陷型菌株。
3. 基因敲除筛选法基因敲除筛选法是通过遗传工程手段将特定基因从菌株中删除,以筛选出营养缺陷型菌株。
首先,通过PCR扩增的方法获得待敲除基因的DNA片段,并引入到质粒载体中。
然后,将质粒载体导入到目标菌株中,经过转化或转染等方式使其取得该质粒。
接下来,通过选择性培养基筛选,以抗生素等为筛选标记,筛选出已经发生基因敲除的菌株。
最后,通过基因测序等方法验证所得菌株中目标基因已经被成功敲除,从而得到营养缺陷型菌株。
4. 遗传重组筛选法遗传重组筛选法是通过基因重组技术将特定基因导入到菌株中,使其能够合成原本无法自主合成的物质。
首先,将目标基因与适当的表达载体连接,并经过酶切、连接等操作获得重组质粒。
然后,将重组质粒导入到宿主菌株中,使其取得重组质粒。
最后,通过选择性培养基等筛选方法,筛选出成功获得目标基因的菌株。
功能性菌株的筛选与应用随着科技的进步,人们对微生物的认识也越来越深入。
除了我们熟知的病原菌和益生菌外,还有一类被人们称之为“功能性菌株”的微生物。
这些微生物不具有致病性,却有一定的生物活性,可以为人类带来许多的好处。
本文将介绍功能性菌株的筛选和应用。
一、功能性菌株的筛选功能性菌株是指那些可以产生对人体有益生理效应的微生物。
这些菌株可以来自于不同的生物体,如人类肠道内的菌群、发酵食品中的菌群等。
筛选出优秀的功能性菌株是非常重要的,因为只有具有较高生物活性的菌株才能为人们的健康带来益处。
1.1 筛选方法目前,功能性菌株的筛选方法主要有以下几种:(1)体外筛选法体外筛选法是指利用体外实验对菌株进行生物活性测定,然后挑选出优秀的菌株。
这种方法常用的实验包括抗氧化能力、免疫调节能力和抗菌活性等。
在这些实验中,可以通过比较菌株之间的差异来确定具有优秀生物活性的菌株。
(2)体内筛选法体内筛选法是指将菌株直接应用于动物模型中,并检测生物活性。
这种方法具有更强的现实意义,因为在动物体内测试可以更好地模拟人体内环境。
但是,体内筛选法的缺点是成本较高,需要复杂的操作和严格的伦理审核。
(3)分子筛选法分子筛选法是指通过检测菌株的遗传信息来鉴定具有生物活性的菌株。
这种方法适用于那些已知的具有生物活性的基因型,可以在大量菌株中进行高效筛选。
1.2 筛选指标对于功能性菌株的筛选,也需要遵循一些指标。
这些指标的主要目的是评估菌株的生物效应。
常见的指标包括:(1)产生细菌素产细菌素是指菌株本身能够分泌出具有细菌抑制作用的物质。
这种细菌素可以抑制某些有害菌的生长,同时不会对有益菌造成影响。
因此,功能性菌株应具有一定的产细菌素能力。
(2)产生胆固醇酯酶胆固醇酯酶是一种可以加速胆固醇分解的酶。
因为胆固醇是导致动脉硬化和心血管疾病的主要因素之一,因此具有产生胆固醇酯酶能力的功能性菌株尤为重要。
(3)免疫调节作用免疫调节作用是指菌株可以调节人体免疫系统的功能。
菌种分离筛选的5个步骤一、样品采集与处理菌种分离筛选的第一个步骤是样品采集与处理。
在进行菌种分离之前,我们需要选择合适的样品进行采集。
样品可以来自不同的环境,如土壤、水体、动植物等。
采集样品时,我们需要注意卫生和安全,避免污染和交叉感染。
采集后,样品需要进行处理,包括样品的细碎、过滤、稀释等步骤,以便于后续的菌种分离工作。
二、菌种分离菌种分离是菌种分离筛选的核心步骤。
在这一步骤中,我们需要将样品中的微生物菌种分离出来,并培养成单菌种。
常用的分离方法有稀释平板法、涂布平板法、过滤法等。
分离时,需要选择适当的培养基和培养条件,以促进菌种的生长和繁殖。
分离出的单菌种需要进行纯化,以确保其纯度和纯种性。
三、菌种鉴定菌种鉴定是确定分离出的菌种种属和种类的步骤。
鉴定菌种的方法有形态学观察、生理生化特性测定、分子生物学方法等。
通过对菌种的形态、生长特征、代谢产物等进行观察和分析,可以初步确定其分类地位。
而通过分子生物学方法,如16S rRNA基因序列分析,可以更准确地确定菌种的种属和种类。
四、菌种筛选菌种筛选是根据特定需求从众多菌种中选择出具有特殊功能或性质的菌株的步骤。
筛选的目标可以是抗菌活性、产酶能力、产生生物活性物质等。
常用的筛选方法有抗菌活性筛选、产酶能力筛选、生物活性物质筛选等。
在进行筛选时,需要设置合适的筛选条件和指标,并利用适当的方法进行评价和选择。
五、菌种保存与应用菌种保存与应用是菌种分离筛选的最后步骤。
在菌种分离筛选过程中,我们通常会得到很多有潜力的菌株。
为了保证这些菌株的长期保存和应用,我们需要采取相应的保存措施,如冷冻保存、冻干保存、液氮保存等。
同时,我们还可以将这些菌株应用于不同的领域,如农业、医药、环境等。
通过进一步的研究和开发,这些菌株可以发挥出更大的应用价值。
通过以上五个步骤,我们可以从自然环境中分离出具有特殊功能或性质的菌株,并进行进一步的研究和应用。
菌种分离筛选是微生物学研究中的重要工作,对于发现新的生物资源和开发新的生物产业具有重要意义。
食用菌菌种的筛选和培育方法随着人类对健康饮食的需求不断增加,食用菌的种植和培育成为了热门的农业领域。
在筛选和培育食用菌菌种时,科学方法是至关重要的。
本文将介绍食用菌菌种的筛选和培育方法,以帮助农民和科研人员在食用菌生产中取得更好的成果。
1. 菌种筛选食用菌菌种的筛选是整个培育过程的基础,它决定了后续培育步骤的成功与否。
以下是几种常见的菌种筛选方法:1.1 天然菌种筛选天然菌种筛选是指从自然界中收集不同来源的菌丝体或菌盖,通过培养和筛选出符合要求的菌株。
这种筛选方法简单易行,适用于一些易于采集的食用菌。
然而,由于天然来源的菌种复杂多样,筛选过程中也存在一定的难度。
1.2 母体筛选母体筛选是指从已培育的菌种中选出具有优良性状的个体作为母体,用于后续繁育。
这个方法要求培育者对菌种的性状有一定的了解,能够辨别出符合要求的个体。
母体筛选的优点是可以保持优良性状的传承,但需要较长时间培养出符合要求的母体。
1.3 分离培养法分离培养法是指从已有的菌体中分离出单个的菌丝体,进一步培养和筛选。
这种方法需要较高的实验技术水平,但筛选出的菌种几乎是纯种,具有较高的培养效果。
2. 菌种培养筛选出合适的菌种后,接下来是进行菌种的培养。
正确的培养方法对于菌种的生长和发展至关重要。
以下是一些常见的菌种培养方法:2.1 传统培养法传统培养法是指通过人工制备培养基,将菌种置于培养基中进行培育。
这种方法较为简单,常见的培养基有玉米粉培养基、木屑培养基等。
在培养过程中需要控制好温度、湿度和光照等因素。
2.2 固体培养法固体培养法是将菌种培养于固体基质上,形成菌丝体和子实体。
常见的固体基质有稻麸、锯末等。
这种方法适用于一些喜爱在固体基质上生长的食用菌,培养过程中需要注意通风和湿度等因素。
2.3 液体培养法液体培养法是将菌种培养于液体培养基中,通过摇床或搅拌器使菌丝体均匀生长。
这种方法适用于菌丝体生长迅速的食用菌,如平菇、草菇等。
在液体培养过程中需要控制好温度和氧气供应。
菌种的筛选方法及步骤(二)引言:菌种的筛选是微生物学研究中的重要环节之一,它可以帮助科研人员确定具有理想特性和功能的微生物菌株。
本文将继续介绍关于菌种筛选的方法和步骤,以帮助读者更好地理解和应用。
概述:菌种筛选是通过一系列实验步骤来评估和选择微生物菌株的过程。
这些步骤包括初步的预筛选、进一步的生理特性和功能评估、细胞分析以及最终的筛选和鉴定。
正文内容:一、初步的预筛选1.核酸检测:使用PCR技术对菌株进行DNA提取和扩增,通过与目标靶标的比对来初步筛选具有相关基因组的菌株。
2.形态学和生理特性观察:通过显微镜观察菌株的形态特征,并进行一系列生理特性的初步评估,如生长速度、耐受性等。
二、进一步的生理特性和功能评估1.生长优势评估:在不同培养条件下比较菌株的生长速度和优势,以确定最适宜的培养条件。
2.代谢特性评估:通过测定菌株对特定有机物的降解能力和产生的代谢产物来评估其代谢特性。
3.生物活性评估:测定菌株对不同病原微生物的抑制活性,评估其潜在的生物控制能力。
4.耐受性评估:将菌株暴露在不同的胁迫条件下,如高温、低温、酸碱等,评估其对环境胁迫的耐受能力。
三、细胞分析1.细胞形态观察:通过扫描电镜和透射电镜观察菌株的细胞形态结构。
2.细胞代谢产物分析:使用色谱质谱等技术对菌株的代谢产物进行定性和定量分析,以了解其代谢能力。
四、最终的筛选和鉴定1.生物学特性分析:通过菌株的生长特性、生理学、遗传学等方面的综合分析,确定其是否具备所需的特性。
2.16SrRNA鉴定:通过比对菌株的16SrRNA序列和已知菌株的数据库,进行菌株的分类和鉴定。
总结:菌种的筛选是一个复杂的过程,需要利用多种方法和步骤来评估和选择最合适的菌株。
初步的预筛选可以帮助缩小范围,进一步的生理特性和功能评估可以深入了解菌株的能力。
细胞分析可以提供对菌株的细胞结构和代谢能力的了解,最终的筛选和鉴定可以确定菌株的分类和特性。
通过这些方法和步骤,科研人员可以获得高质量的菌株,为微生物学研究和应用提供坚实的基础。
酵母发酵加工中的菌株筛选及其应用酵母是一类重要的微生物,在发酵食品、工业酿酒等领域有着广泛的应用。
在酵母发酵加工中,菌株的筛选是十分关键的一步。
本文将探讨酵母发酵加工中的菌株筛选及其应用。
一、酵母发酵加工中的菌株筛选方法1. 直接法直接从自然环境中筛选出的酵母菌株称为野生菌株。
这种筛选方法比较简单,但菌株数量有限,且不易获得高产率的品种。
野生菌株中往往存在一些不良的特性,如发酵速度慢、成品质量差等。
因此,直接法筛选出的酵母菌株在应用上有一定的局限性。
2. 短时诱变法短时诱变法是指通过短时间的处理,使酵母发生一定的遗传变异,从中选出优良的变异菌株。
短时诱变法简单易行,且存在较大的变异可能性。
但也存在菌株失活或抗性提高等副作用。
3. 长时间诱变法长时间诱变法是指将酵母菌株在一定时间内持续暴露于某种特异的环境条件中(如放射线或化学药剂),从而引起基因突变,产生更多的变异菌株。
这种筛选方法具有较大的变异概率,可获得更多、更优的变异菌株。
但在实际应用中,长时间诱变法的成本和耗时较大,需要耐心和谨慎把握。
二、酵母发酵加工中的菌株应用1. 食品工业酵母在食品工业中有着广泛的应用,如面包、发酵乳、酱油、酱准、啤酒等。
在这些食品中,酵母可以发挥调味、发酵、膳食等功效,使成品质量更佳,更受消费者欢迎。
2. 生物材料工业酵母在生物材料工业中也有着重要的应用。
如酿酒产生的酵母菌体,可用于生产市场需求量大的酵母粉或酵母浸滤液。
此外,还可以用酵母发酵产生的多糖类物质具有良好的黏度和黏附性,可作为生物胶、食品添加剂等材料。
3. 药品工业鉴于酵母在发酵中的广泛应用,许多药物也使用酵母生产。
如原纤维蛋白溶液是大量生产生物结构材料的重要原料,经过酵母菌株的合成后,可得到较高性能的物质。
4. 废弃物资源化酵母的强大分子转化功能使其具有优异的废弃物资源化潜力。
将废微生物菌液或农副产品残渣等作为酵母的基质,可以通过发酵、脱色和纯化等方法,制成膳食纤维、单体蛋白质和多糖类等新型功能性食品原料。
微生物菌株的筛选与改良研究微生物是一类非常重要的生物,它们具有广泛的生态和产业价值。
微生物在农业、医学、环境、生物技术等领域都有广泛应用,是一大类对人类健康和发展具有重要影响的生物。
微生物的应用需要先从菌株的筛选和改良入手,下面我们将就微生物菌株的筛选和改良研究展开讨论。
一、微生物菌株的筛选方法微生物菌株的筛选方法多种多样,包括传统文化方法和现代生物技术方法。
在传统文化方法中,通过菌落形态、颜色、变色、透明度等特点,选择符合预期特点的单个菌落。
在微生物筛选的过程中,还需考虑菌株所需培养环境、生长因子、突变等因素。
而现代生物技术方法则包括PCR技术、DNA图谱、基因编辑等方法。
1.1 传统文化方法在传统文化方法中,最常见的方法是菌落计数法。
通过将微生物样品在琼脂板上均匀涂抹,培养后进行计数。
根据菌落数量及形态、颜色、透明度等特征,选择合适菌株进行鉴定及后续实验。
还有另一种方法是筛选双重抗性菌株,其特点为在含有双种抗生素的培养基中生长良好。
该方法主要应用于寻找用于生产抗生素等药物的菌株。
1.2 现代生物技术方法现代生物技术方法常常运用PCR技术分离具有特殊功能的微生物菌株。
该方法将菌株DNA通过限制性内切酶切割后扩增,通过PCR技术分离不同的DNA序列,从而筛选出具有特殊功能或性质菌株。
除此之外,在微生物菌株筛选中,还可以应用传统化学物质和高通量筛选平台等方法,进行筛选和快速定位。
二、微生物菌株的改良研究微生物菌株的改良研究主要是通过人为干预菌株的生长、代谢和遗传等过程来改变菌株的性状和产物表达。
具体包括生理性改良、基因工程技术、化学诱变技术、融合技术等。
2.1 生理性改良通过生理性改良主要是针对菌株的基本代谢途径、生长条件等进行人工改变,以提高菌株的生产性能。
比如,人们可以改变微生物菌株增长的基质类别,并优化培养基配方和培养条件,使该菌株代谢途径的优选和代谢产物表达的改良,从而提高抗生素、酶、代谢产物等产品的产量和质量。
第二章餐厨垃圾堆肥产酶菌株筛选2 材料与方法2.1 材料2.1.1 实验材料1)筛选材料:HM菌剂(河南恒隆态生物工程股份有限公司);EM菌剂(江西天意集团);金宝贝菌剂(北京华夏康源科技有限公司);群林发酵剂(广西北海群林生物工程有限公司)。
2)发酵材料:餐厨垃圾(购自贵州大学南校区学生食堂);稻草(购自铜仁市,晒干后粉碎至5mm左右)。
2.1.2 主要药品及试剂2.1.3 实验仪器电子分析天平(EL-2005)西特传感技术有限公司高速台式离心机(TGL-161)Thermo公司冷冻离心机(2-16k)德国eppendorf公司标准型净化工作台上海锦星科学仪器有限公司低温冰箱〔BCD-108E)风华电器厂超低温冰箱(Forma-6C ULT) Thermo公司调温调湿箱(WS/08-01)重庆试验设备厂干燥箱(101-2)上海实验仪器总厂自动三重水蒸馏器(SZ-97)上海亚荣生化仪器厂高压灭菌锅(GMSX-280)英国阿斯太欧(Astell)公司循环水浴锅(RET7)Thermo公司电热恒温培养箱(DH3600) 天津泰斯特仪器有限公司恒温摇床(SKY-2102C) 上海苏坤实业有限公司高速组织捣碎机(DS-1) 上海标本模型厂磁力双向搅拌器(90-1)上海亚荣生化仪器厂pH计ACS交直流两用电子计价秤昆明金瑞克电子衡器有限公司双金属温度计(WSS-411)天津市新华热工仪表有限公司河北铁狮磨浆机械有限公司秸秆揉丝饲料粉碎多用机(9R-30)紫外分光光度计2.1.6 培养基1)初筛培养基(1)细菌培养基(%):牛肉膏0.3;蛋白胨1.0;氯化钠0.5;琼脂粉2.0;pH7.2 (2)霉菌培养基(%):磷酸二氢钾0.1;七水硫酸镁0.05;蛋白胨0.5;葡萄糖1.0;琼脂粉2.0;孟加拉红0.03;pH自然;链霉素30μg/m L(3)乳酸菌培养基(%):蛋白胨1;牛肉膏1;酵母膏0.5;柠檬酸二铵0.2;葡萄糖2.0;吐温80 0.1;乙酸钠0.5;三水磷酸氢二钾0.2;七水硫酸镁0.058;七水硫酸锰0.025;琼脂粉2.0;pH6.2(4)放线菌培养基(%):可溶性淀粉2;氯化钠0.05;硝酸钾0.1;磷酸氢二钾0.05;七水硫酸镁0.05;七水硫酸亚铁0.001;重铬酸钾0.015;琼脂粉2.0;pH7.4;青霉素3μg/ml2)复筛培养基(1)产淀粉酶筛选培养基(%):可溶性淀粉0.2;蛋白胨1.0;酵母膏0.5;磷酸氢二钾0.3;七水硫酸亚铁微量;七水硫酸镁微量;琼脂粉2.0;pH7.0【陈秋红,孙梅,施大林,等.益生菌酪酸菌CB-7发酵培养基及培养条件的研究.科学试验与研究[J].2009,4:7-10,21】(2)产脂肪酶筛选培养基(%):硫酸铵0.1;磷酸氢二钾0.1;氯化钾0.05;七水硫酸镁0.01;橄榄油1.0;聚乙烯醇0.1;琼脂粉2.0;pH8.5【刘敏,曹志军,焦艳芬,等. UHT 乳中产耐高温脂肪酶嗜冷菌的研究[J]. 内蒙古农业大学学报.2008,29(1):230-233】(3)产纤维素酶筛选培养基(%):七水硫酸镁0.01;羧甲基纤维素钠1.5;氯化钙0.01;磷酸二氢钾0.05;硫酸铵0.2;磷酸氢二钾0.2;pH自然【刘胜贵,严明,邹娟,等.纤维素降解真菌的筛选及其产酶条件[J]. 中国农学通报,2011,27(7):102-106】3)产酶发酵液(1)产淀粉酶发酵液(%)[1]:可溶性淀粉0.5;蛋白胨0.5;酵母膏0.5;氯化钠0.1;七水硫酸亚铁微量;七水硫酸镁微量;pH7.0(48h培养)【陈秋红,孙梅,施大林,等.益生菌酪酸菌CB-7发酵培养基及培养条件的研究.科学试验与研究[J].2009,4:7-10,21】(2)产脂肪酶发酵液(%):蛋白胨2.0;葡萄糖0.58;橄榄油乳化液4;硫酸铵0.1;七水硫酸镁0.05;磷酸氢二钾0.1;pH自然(72h培养)【胡朝阳,韦晗宁,李春苑,等.产脂肪酶菌株的筛选及酶学特性研究[J]. 广西农业生物科学,2006,25(3):261-268】(3)产纤维素酶发酵液:A液:葡萄糖0.4g;七水硫酸镁0.25g;CMC-Na 0.5g;水89mL; B液:磷酸氢二钠6.0g;氯化钠0.5g;磷酸二氢钾3.0g;氯化铵1.0g;水100mL; C液:氯化钙0.11g;水100mL灭菌后10mLB液+1mLC液+89mLA液即为发酵液【雷正玉,何力,王朝元,等.草鱼体内产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件的研究[J]. 微生物学杂志,2007,27(4):54-57】4)基础培养基(%):蛋白胨1.0;酵母膏0.5;氯化钠1.0;琼脂粉2.0;pH7.02.1.7 溶液配制0.5%淀粉溶液配制:0.5g可溶性淀粉加入10mL水混合成糊状,加入95mL沸水,微沸几分钟。
静置、冷却,取上清即得。
0.1mol/L H2SO4溶液配制:取10.9mL浓硫酸定容至100mL,即为1mol/LH2SO4溶液。
取10mL,1mol/LH2SO4溶液定容至100mL,即为0.1mol/L的H2SO4溶液。
碘液的配制:称取2.0g碘化钾溶于10mL蒸馏水中,加入1.0g碘,迅速搅拌使其溶解后加水定容至300mL。
即0.1mol/L的卢卡氏碘液;取0.4mL 0.1mol/L碘液定容至100mL即得0.4mmol/L碘液。
4%聚乙烯醇溶液配制:称取40g聚乙烯醇(PV A)加蒸馏水约800mL,在沸水浴中不断搅拌使其完全溶解,冷却后定溶至1000mL,再经纱布过滤后备用。
橄榄油乳化液的配制:取4%聚乙烯醇溶液150mL,加50mL橄榄油,高速组织搅动机搅动6min(分2次搅动,每次3min,中间休息5min中),即制成乳白色的橄榄油乳化液。
磷酸盐缓冲液配制:0.025mol/L,pH值7.5。
甲液:称取17.01gKH2PO4,加水定容至500mL;乙液:称取44.77gNa2HPO4·12H2O,加水定容至500mL;吸取13mL甲液与100mL 乙液混匀即成0.25mol/L磷酸缓冲液,使用时用水稀释10倍,即成0.025mol/L 磷酸盐缓冲液。
0.05mol/L Na OH溶液配制:取4.58g固体Na OH溶于1L水中,用邻苯二甲酸氢钾标定,使用时稀释10倍。
酚酞溶液配制:取1g酚酞溶于100mL 95%的乙醇中即得10g/L的酚酞溶液;取0.5g酚酞溶于100mL 95%的乙醇中即得5g/L的酚酞溶液【GB/T 603-2002化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备】Na2CO3-NaHCO3缓冲液配制:0.1mol/L,pH10。
0.1mol/LNa2CO3溶液:称取28.62g Na2CO3·10H2O溶解、定容至1L,即为0.1mol/LNa2CO3溶液;0.1mol/LNaHCO3溶液:称取8.40gNaHCO3溶解、定容至1L,即为0.1mol/LNaHCO3溶液。
使用时将Na2CO3溶液与NaHCO3溶液1:1混合即得0.1mol/L,pH10的Na2CO3-NaHCO3缓冲液。
1%CMC-Na溶液配制:称取1gCMC-Na溶解定容至100mL即得。
DNS试剂配制:称取酒石酸钾钠182.0 g,于500 mL 蒸馏水中,加热搅拌,依次加入3,5-二硝基水杨酸6.3 g,Na OH 21.0 g,苯酚5.0 g,搅拌至完全溶解,冷却后用蒸馏水定容至1 000 mL,棕色瓶中室温暗处放置一周后使用。
【张龙翔,张庭芳,李令媛. 生化实验方法和技术[M]. 北京:人民教育出版社,1982:9-11】2.2 方法2.2.1 样品组成菌株的分离纯化1. 各称取商品菌剂(HM菌剂、金宝贝菌剂、群林菌剂、EM菌剂)10g(或10mL)置于盛有90mL无菌生理盐水,含玻璃珠的三角瓶中,37℃,180r/min震荡60min,将菌剂打碎。
取上清作为10-1,依次稀释至10-2,10-3,10-4,10-5。
2. 吸取100μL稀释好的菌液涂布初筛培养基平板,三组平行实验。
3. 将涂布好的平板及其平行组分别置于28℃,45℃,55℃的恒温培养箱中培养(细菌、乳酸菌培养2d;霉菌培养3-5d;放线菌培养7d)。
4. 用接种环挑取分离出的单菌落在相应的分离培养基平板上划线纯化,并置于分离温度下培养至长出单菌落。
5. 挑取4.中的单菌落在相应的分离培养基斜面上划线,分离温度下培养,4℃保存。
2.2.2 产淀粉酶菌株的筛选2.2.2.1 初筛水解圈的测定1. 将保种菌株平板划线活化后,挑取单菌落在产酶筛选培养基平板上点种,分离温度下培养1-2d。
2. 培养结束后在平板上滴加1-2mL 0.1mol/L的碘液,(尽量避免滴加到菌落上)显色后测量菌落直径(d)与水解圈直径(D),并计算D/d的比值以此判断待测菌株对淀粉的分解能力。
3. 选出D/d比值较高的菌株,重新编号。
2.2.2.2 复筛酶活的测定[叶应妩,2006]【叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M ] 第3 版. 南京市:东南大学出版社, 2006】1.用牙签挑取初筛菌株保种斜面上的菌落,置于分离培养基液体试管中,180r/min,分离温度下培养活化。
2. 吸取1mL OD620值在0.6左右的菌液,置于含100mL产酶培养液的三角瓶中,180r/min, 50℃震荡培养2d。
3. 培养后的产酶发酵液4℃,7000r/min,离心取上清作为酶液。
4. 取5mL ,0.5%的可溶性淀粉溶液加入到试管中,40℃水浴预热10min 。
5. 加入5ml 酶液,反应5min 后用5mL0.1mol/L H 2SO 4终止反应。
5. 取5mL 反应液与5mL0.4mmol/L I2-KI 溶液显色,620nm 测OD 值。
(以0.5ml 水代替0.5mL 反应液为空白,以同批配置的淀粉酶空白发酵液离心上清为对照)。
6. 将OD 620值代入以下公式计算酶活力:D R R R L U ⨯⨯-=50m /00)酶活力( R0:对照的碘液光吸收值;D :酶稀释倍数;R :反应液的光吸收值(调整D 使00R RR -在0.2-0.7之间,确定40℃,5min 内水解1mg 淀粉的酶量为一个活力单位)。
7. 依据水解圈比值D/d ,及体外酶活测定值,选出3株酶活较高且稳定性较好的菌株作为后期研究菌株。
2.2.3 产脂肪酶菌株的筛选2.2.3.1 初筛水解圈的测定1. 将保种菌株平板划线活化后,挑取单菌落在产酶筛选培养基平板上点种,分离温度下培养3d 。
2. 培养结束后直接测量菌落直径(d )与水解圈直径(D ),并计算D/d 的比值,以此判断待测菌株对淀粉的分解能力。