抗原抗体杂交原理

抗体的制备方法与原理一、抗血清的制备有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。

（一）用于免疫的动物作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。

动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为///雄性，此外还需十分注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。

若用兔，最好用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。

（二）免疫途径免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。

途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注射。

（三）佐剂由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。

佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。

常用的佐剂是福氏佐剂（Freund adjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不完全福氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～20mg 卡介苗就成为完全佐剂。

配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。

免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。

高中生物单克隆抗体的制备过程高中生物课本中描述单克隆抗体的制备过程是怎么样的？下面是店铺为大家整理的高中生物单克隆抗体的相关知识点，希望对大家有所帮助!高中生物：杂交瘤技术制备单克隆抗体的具体过程1、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B 淋巴细胞的过程。

一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。

抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

2、细胞融合采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。

将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。

在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

3、选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。

在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA 而死亡。

未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。

只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。

4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。

通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。

采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。

经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

5、单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。

(1)体内诱生法取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石腊或降植烷进行预处理。

抗体的制备方法与原理一、抗血清的制备有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。

（一）用于免疫的动物作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。

动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为///雄性，此外还需十分注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。

若用兔，最好用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。

（二）免疫途径免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射左右。

途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注射。

（三）佐剂由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。

佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。

常用的佐剂是福氏佐剂（Freundadjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不完全福氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～20mg卡介苗就成为完全佐剂。

配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。

免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。

核酸分子杂交技术一、核酸分子杂交的基本原理与分类分子杂交技术与应用分子杂交技术与应用? 分子杂交技术的目的是什么?分子杂交的基本方法有哪些?Southern印迹法有哪些步骤,为了达到什么目的呢为什么叫印迹法呢?一、核酸分子杂交的基本原理与分类一、核酸分子杂交的基本原理与分类(一)核酸分子杂交的基本原理(一)核酸分子杂交的基本原理1、变性(denaturation)1、变性(denaturation)(1)定义:(1)定义: 在一定的条件下,双螺旋之间氢键断裂,双在一定的条件下,双螺旋之间氢键断裂,双螺旋解开,形成无规则线团,双链解链成为单链。

螺旋解开,形成无规则线团,双链解链成为单链。

(2).引起核酸变性的因素(2).引起核酸变性的因素变性剂变性剂酸(尿素)(尿素)碱碱有机溶剂热有机溶剂热(乙醇)(乙醇)(3)、变性后核酸的特点:(3)、变性后核酸的特点:粘度下降粘度下降密度增加密度增加紫外吸收增加紫外吸收增加 2、融解温度(Tm):2、融解温度(Tm):定义:在DNA热变性时,其A 的升高达最定义:在DNA热变性时,其A 的升高达最260260 大值一半时的温度。

大值一半时的温度。

3、复性(退火)3、复性(退火) 变性DNA经过一定处理重新形成双螺旋的过程。

变性DNA 经过一定处理重新形成双螺旋的过程。

影响复性速度的因素: 影响复性速度的因素:DNA浓度 DNA浓度 DNA片段的大小 DNA片段的大小 DNA片段复杂性 DNA片段复杂性合适的复性温度合适的复性温度适当的离子强度适当的离子强度4、杂交4、杂交定义两条来源不同,但具有互补序列的核酸,按两条来源不同,但具有互补序列的核酸,按碱基配对原则复性形成一个杂交体,这个过程即碱基配对原则复性形成一个杂交体,这个过程即分子杂交。

分子杂交。

DNA/DNA的杂交作用:DNA/DNA的杂交作用: 检测特定生物有机体之间的亲源关系检测特定生物有机体之间的亲源关系DND/DNA或RNA/DNA:DND/DNA或RNA/DNA: 揭示核酸片断中某种特定基因的位置。

高中生物单克隆抗体的原理
单克隆抗体的原理是利用体外克隆技术生产出一类能够特异性结合特定抗原的抗体分子。

具体步骤如下：
1. 免疫动物注射抗原：首先，将目标抗原注射到小鼠或兔子等动物体内，激发其免疫系统产生特异性抗体。

2. 细胞融合：从免疫动物体内提取免疫细胞，如B淋巴细胞，与癌细胞（如骨髓瘤细胞）进行体外融合。

这样的细胞融合可以获得与抗原结合能力高，并具有无限增殖潜能的细胞，称为杂交瘤细胞。

3. 杂交瘤细胞筛选：将融合细胞培养于含有选择性培养基的培养皿中，只有杂交细胞能够在该培养基生存下来并继续增殖。

通过限制性稀释法，将细胞稀释至单个细胞，使每个细胞在培养皿上分离，形成单个克隆，也就是单克隆细胞。

4. 鉴定和筛选：对每个克隆细胞进行鉴定和筛选，以确定其产生的细胞株能够特异性结合目标抗原。

常用的方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组化等技术，筛选出特异性和高亲和力的单克隆抗体。

5. 扩增和纯化：选定特异性的单克隆抗体细胞株，进行大规模培养，通过培养
液中的抗体进行纯化，得到可供生物医药应用的单克隆抗体产品。

总结：单克隆抗体的原理是通过将免疫细胞与癌细胞进行融合，形成能够无限增殖并产生抗体的杂交瘤细胞，然后通过鉴定和筛选，选择出特异性和高亲和力的单克隆抗体细胞株，并进行扩增和纯化，最终得到可供应用的单克隆抗体。

制备单克隆抗体的原理单克隆抗体是一种高度特异性的抗体，它可以识别并结合到特定的抗原上。

制备单克隆抗体的原理是通过克隆单个B细胞，使其产生同一种特异性的抗体。

这种方法可以获得高度特异性和高亲和力的抗体，因此在医学、生物学和生物技术领域得到了广泛的应用。

制备单克隆抗体的过程可以分为四个步骤：免疫、细胞融合、筛选和扩增。

第一步是免疫。

在这一步中，动物（通常是小鼠）被注射一种特定的抗原，以刺激其免疫系统产生抗体。

这些抗体会被B细胞产生并分泌到血液中。

第二步是细胞融合。

在这一步中，从免疫小鼠的脾脏中收集B细胞，并与一种特殊的癌细胞（称为骨髓瘤细胞）融合。

这种融合产生的细胞称为杂交瘤细胞，它们具有两种细胞的特性：B细胞的抗体产生能力和骨髓瘤细胞的无限增殖能力。

第三步是筛选。

在这一步中，杂交瘤细胞被分配到96孔板中，每个孔中只有一个细胞。

然后，每个孔中的细胞被检测其是否产生特定的抗体。

这种检测通常使用酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫荧光染色法。

只有产生特定抗体的细胞才会被保留下来。

第四步是扩增。

在这一步中，产生特定抗体的杂交瘤细胞被扩增，以获得足够的单克隆抗体。

这些抗体可以通过培养杂交瘤细胞或通过收集细胞培养液来获得。

制备单克隆抗体的原理是利用B细胞的特异性和骨髓瘤细胞的无限增殖能力，通过细胞融合和筛选，获得同一种特异性的抗体。

这种方法可以获得高度特异性和高亲和力的抗体，因此在医学、生物学和生物技术领域得到了广泛的应用。

单克隆抗体的应用非常广泛。

它们可以用于诊断、治疗和研究。

例如，单克隆抗体可以用于检测病原体、肿瘤标志物和药物残留物。

它们还可以用于治疗癌症、自身免疫性疾病和传染病。

此外，单克隆抗体还可以用于研究蛋白质结构和功能，以及开发新的生物技术产品。

制备单克隆抗体的原理是通过克隆单个B细胞，使其产生同一种特异性的抗体。

这种方法可以获得高度特异性和高亲和力的抗体，因此在医学、生物学和生物技术领域得到了广泛的应用。

第34讲基因工程1．(2020·江苏徐州考前模拟)下列有关基因工程技术的叙述，正确的是( )A．不同的限制酶切割形成的黏性末端一定不同B．PCR中周期性的温度设置是特定的，与扩增的目的基因和引物无关C．在构建基因表达载体时通常需要大量的目的基因和载体D．质粒上的目的基因都必须整合到受体细胞的DNA上并表达解析：选C。

不同的限制酶切割形成的黏性末端可能相同，也可能不同，A错误；PCR 中周期性的温度可在一定范围内设置，不是特定的，B错误；在构建基因表达载体时通常需要大量的目的基因和载体，这样获得基因表达载体的概率更高，C正确；质粒本身也是DNA，也能自我复制，所以进入受体细胞以后，既可以自己进行表达，也可以整合到体细胞的DNA 上并表达，D错误。

2．实验室常用PCR技术对DNA进行体外扩增，下列相关叙述正确的是( )A．95 ℃时DNA的磷酸二酯键断开B．引物与模板结合后向5′方向延伸C．反应过程包括变性→复性→延伸D．需要解旋酶和耐高温的DNA聚合酶解析：选C。

95 ℃时DNA的氢键断开，A错误；引物与模板结合后向3′方向延伸，B 错误；反应过程包括变性→复性→延伸，C正确；PCR技术通过高温解旋，不需要解旋酶，D 错误。

3．在应用农杆菌侵染植物叶片获得转基因植株的常规实验步骤中，不需要的是( ) A．用携带目的基因的农杆菌侵染植物细胞B．用选择培养基筛法导入目的基因的细胞C．用聚乙二醇诱导转基因细胞的原生质体融合D．用适当比例的生长素和细胞分裂素诱导愈伤组织生芽解析：选C。

农杆菌侵染细菌是基因工程中常常用到的把目的基因导入植物细胞的方法，A正确；目的基因是否导入了细胞，需要在选择培养基上进行筛选，B正确；在植物细胞组织培养的过程中，需要调整培养基中生长素和细胞分裂素的比例，来达到对其脱分化和再分化的控制，D正确；在农杆菌侵染植物细胞的过程中并没有涉及原生质体的融合，C错误。

4．下列关于核酸分子杂交和抗原—抗体杂交的叙述，正确的是( )A．核酸分子杂交是指两条脱氧核苷酸链的杂交B．抗原—抗体杂交的原理为碱基互补配对原则C．核酸分子杂交可检测目的基因的存在和转录D．抗原—抗体杂交常以目的基因产物作为抗体解析：选C。

单克隆抗体的应用及原理单克隆抗体是一种由相同母细胞分裂而来的具有相同特异性、亲和力和效能的抗体。

它是通过体外诱导和细胞融合技术获得的，可以专门针对特定抗原进行应用和治疗。

单克隆抗体在医学、科研和生物技术等领域具有广泛的应用前景。

单克隆抗体的应用主要分为治疗应用、诊断应用和研究应用三个方面。

治疗应用方面，单克隆抗体被用于免疫治疗和抗肿瘤药物的研发。

例如，单克隆抗体可以与肿瘤细胞表面的抗原结合，通过直接杀伤肿瘤细胞或激活免疫细胞来抑制肿瘤的生长和扩散。

目前已经有多种单克隆抗体药物被批准用于临床治疗，如赫赛汀、特鲁替珠单抗等。

此外，单克隆抗体还可以用于传统药物的改进，增强药效、减少毒副作用。

单克隆抗体的应用在抗癌药物研发中具有巨大的潜力。

在诊断应用方面，单克隆抗体被用于制备特异性的抗原检测试剂盒。

通过与特定抗原的结合，单克隆抗体可以在临床实验室中用于疾病的早期检测、诊断和预后。

例如，单克隆抗体可以用于肿瘤标志物的检测，如CA125、PSA等。

此外，单克隆抗体还可以用于免疫组化、免疫印迹、流式细胞术等实验方法中，对细胞表面分子、蛋白质的检测和鉴定起关键作用。

在研究应用方面，单克隆抗体被用于分子生物学、细胞生物学和生物工程等领域的研究。

例如，单克隆抗体可以用于从复杂的混合物中纯化特定的蛋白质或细胞。

此外，单克隆抗体还可以用于研究蛋白质的结构与功能、信号转导途径等。

由于单克隆抗体拥有高度特异性和亲和力，它在研究领域具有重要的价值。

单克隆抗体的制备原理主要包括免疫克隆、细胞融合和筛选等步骤。

首先，制备单克隆抗体需要从动物体内或体外免疫获得特定的抗原刺激。

接下来，从免疫动物（如小鼠）体内采集抗体产生的淋巴细胞。

这些淋巴细胞与肿瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。

这些细胞具有强大的免疫力，并能长时间产生单克隆抗体。

然后，必须对杂交瘤细胞进行筛选和鉴定。

首先，通过双荧光筛选法、酶联免疫吸附实验等技术，选择具有特异性抗原结合能力的杂交瘤细胞。

杂交瘤技术的原理和应用1. 原理杂交瘤技术（Hybridoma Technology）是一种利用小鼠骨髓细胞与肿瘤细胞融合的方法，成功制备出可以长时间稳定产生单克隆抗体的细胞系。

其原理主要包括以下几个步骤：1.免疫反应：首先，将目标抗原注射到小鼠体内，刺激小鼠产生特定抗体。

2.提取骨髓细胞：将小鼠的骨髓细胞提取出来，骨髓细胞中含有大量产生抗体的浆细胞。

3.融合：将提取的骨髓细胞与骨髓瘤细胞（如懒汉肉瘤细胞）进行融合，得到杂交细胞。

4.筛选：将杂交细胞进行筛选，通过培养基和细胞培养条件的优化，筛选出可以长期产生抗体的稳定细胞系。

2. 应用杂交瘤技术在生物医药领域具有广泛的应用价值，主要集中在以下几个方面：2.1 产生单克隆抗体杂交瘤技术可以制备出可以长期稳定产生单克隆抗体的细胞系，这对于研究和应用单克隆抗体具有重要意义。

单克隆抗体在临床诊断、治疗和疾病标记等方面有着广泛的应用，例如，可用于检测特定疾病标志物、治疗癌症等。

2.2 研究蛋白质结构与功能由杂交瘤技术获得的单克隆抗体可以应用于免疫印迹、免疫组化等实验方法，用于研究蛋白质的表达、定位、结构和功能。

通过分析抗体与靶蛋白的相互作用，可以揭示蛋白质在生物体内的生理功能和生物学机制。

2.3 生物学药物和诊断试剂的生产杂交瘤技术可以用于生物学药物的生产，例如单克隆抗体药物、重组蛋白药物等。

杂交瘤技术还可以制备用于临床诊断和检测的试剂盒，用于检测特定疾病的标志物、病原体等。

2.4 分子免疫学研究杂交瘤技术在分子免疫学研究中具有重要地位。

通过制备获得的单克隆抗体，可以对特定的抗原进行精确定位，研究免疫应答的机制、免疫调控等。

杂交瘤技术也被广泛应用于抗体工程、抗体片段构建等技术的开发与应用。

2.5 其他应用领域此外，杂交瘤技术还在农业、环境保护、食品安全等领域有所应用。

例如，可以应用于农业植物抗性基因的研究与育种、环境中有毒物质的检测与分析等。

结论杂交瘤技术作为一种重要的细胞融合技术，在生物医药领域具有广泛的应用前景。

3.2 基因工程的基本操作程序 教学目标教学重点1.基因工程基本操作程序的四个步骤。

2.DNA 片段的扩增及电泳鉴定。

教学难点1. 利用PCR 获取和扩增目的基因。

2. DNA 片段的扩增及电泳鉴定。

知识点01 第一步：目的基因的筛选与获取1.目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。

也指能够编码特定蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用课程标准目标解读 基因工程是一种重组DNA 技术。

1. 阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测鉴定等步骤。

1. 阐明基因工程的原理和基本操作程序。

2. 针对人类生产或生活中的某一需求，选取适当的基因工程的技术和方法，尝试设计获得某一转基因产品的方案。

3. 尝试进行PCR 的基本操作并用电泳鉴定PCR 的产物。

知识精讲目标导航的因子。

2.筛选目的基因：从相关的已知结构和功能清晰的基因中筛选，是较为有效的方法之一3.获取目的基因：（1）人工合成（2）基因文库中获取目的基因（3）利用PCR获取和扩增①PCR：PCR全称为聚合酶链式反应，又叫做体外DNA扩增技术。

根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。

通过这项技术可在短时间内大量扩增目的基因。

②PCR利用的原理：DNA半保留复制③DNA复制的基本条件：④PCR的前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。

⑤PCR的条件：DNA模板（需含有目的基因）。

分别与模板DNA相结合的2种引物。

四种脱氧核苷酸（或四种dNTP：dATP、dTTP、dGTP、dCTP）。

耐高温的DNA聚合酶(Taq酶）。

稳定的缓冲溶液（一般添加Mg2+）。

能严格控制温度的温控设备。

⑥PCR的过程：⑦PCR的结果：以指数方式扩增，即2n（n为扩增循环的次数）⑧鉴定PCR的产物：常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定产物知识点02 第二步：基因表达载体的构建基因表达载体的组成：目的基因、标记基因、启动子、终止子基因表达载体构建过程：一般用同一种限制酶分别切割载体和含有目的基因的DNA片段，再用DNA连接酶将两者连接。

单克隆抗体筛选原理单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性和一致性的抗体。

在生物学研究和医学诊断中，单克隆抗体因其特异性和灵敏度被广泛应用。

本文将介绍单克隆抗体的筛选原理，包括抗原-抗体反应、筛选阳性克隆、克隆扩增、抗体纯化和抗体鉴定等方面。

一、抗原-抗体反应抗原-抗体反应是单克隆抗体筛选的基础。

抗原是指能够与抗体结合的物质，具有特异的抗原表位。

抗体是由B细胞产生的免疫球蛋白，能够识别并结合抗原表位。

抗原-抗体反应具有高度特异性和可逆性，是免疫学检测中最常用的反应之一。

二、筛选阳性克隆在单克隆抗体的制备过程中，首先需要筛选出能够产生所需抗体的阳性克隆。

通常采用有限稀释法将B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，获得大量的杂交瘤细胞。

通过筛选，选出能够产生所需抗体的阳性克隆。

三、克隆扩增筛选出的阳性克隆需要进行克隆扩增，以获得足够数量的细胞产生抗体。

通常采用有限稀释法或连续传代法进行克隆扩增，使杂交瘤细胞在培养基中增殖，产生大量的单克隆抗体。

四、抗体纯化获得的单克隆抗体往往含有杂质，如蛋白质、DNA等，需要进行纯化。

常用的纯化方法包括蛋白质A柱层析法、凝胶过滤法和离子交换层析法等。

这些方法能够将抗体与杂质分离，获得高纯度的单克隆抗体。

五、抗体鉴定纯化后的单克隆抗体需要进行鉴定，以确保其特异性和活性。

鉴定方法包括抗原结合试验、免疫荧光法、ELISA等。

通过这些方法可以检测单克隆抗体的特异性、亲和力和生物学活性，确保其适用于生物学研究和医学诊断。

总之，单克隆抗体的筛选原理主要包括抗原-抗体反应、筛选阳性克隆、克隆扩增、抗体纯化和抗体鉴定等方面。

通过对这些过程的了解和掌握，可以制备出高质量的单克隆抗体，为生物学研究和医学诊断提供有力的工具。

高中生物单克隆抗体知识点单克隆抗体是高中生物选修教材中动物细胞工程教学内容的重点和难点，有哪些知识点要记住?下面店铺给大家带来高中生物单克隆抗体知识点，希望对你有帮助。

高中生物单克隆抗体基础知识点一、区别单克隆抗体和多克隆抗体多克隆抗体：抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。

当病原体入侵人体，能够刺激机体免疫系统产生大量的多种抗体，那么这一堆抗体就是多克隆的。

单克隆抗体(MAb)：是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术，起源于1975年，由G.KÖhler和Milstein创立。

主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。

此类抗体是专一的，或者说是同一种蛋白质，因此是单克隆的。

二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤(1)抗原制备;(2)免疫动物;(3)免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备;(4)细胞融合;(5)杂交瘤细胞的选择培养;(6)杂交瘤细胞的筛选;(7)杂交瘤细胞的克隆化;(8)单克隆抗体的检定;(9)分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立;(10)单克隆抗体的大量制备。

三、杂交瘤技术制备单克隆抗体的具体过程1、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。

一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。

抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

2、细胞融合采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。

将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。

在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

3、选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。

杂交瘤细胞的检测原理
杂交瘤细胞是一种特殊的细胞，它具有高度的增殖能力和稳定的基因表达。

杂交瘤细胞的产生是通过将体外培养的B细胞与肿瘤细胞融合而得到的。

这种融合细胞不仅能够保持B细胞的抗体合成能力，还能够具有肿瘤细胞的无限增殖能力，因此被广泛应用于抗体和蛋白质表达的研究中。

杂交瘤细胞的检测原理通常是通过对其产生的抗体进行检测。

因为杂交瘤细胞能够合成特定的抗体，所以通过检测抗体的存在来确定杂交瘤细胞是否存在。

检测抗体的方法包括ELISA、Western blot、免疫荧光等。

其中，ELISA是最常用的方法之一，其原理是将待测样品加入到预先包被抗原的孔中，如果有抗体存在，则抗体会与抗原结合，利用酶标记的二抗或蛋白A/G进行检测，从而确定抗体的存在。

除了检测抗体外，还可以通过检测杂交瘤细胞中的特定基因来确定其存在。

这种方法需要对特定基因进行PCR扩增，并对扩增产物进行分析，如果扩增出目标基因，则可以确定杂交瘤细胞的存在。

但是这种方法需要事先了解目标基因的序列，并且需要对扩增产物进行测序，因此在实践中应用较少。

总之，杂交瘤细胞的检测原理主要是通过检测其产生的特异性抗体来确定其存在。

通过合理选择检测方法，可以快速、准确地进行杂交瘤细胞的检测。

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核酸杂交的基本原理⏹原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下根据碱基互补的原则可以形成双链。

基因组探针CDNA探针RNA探针的特点⏹基因组DNA探针：为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。

⏹制备：基因克隆；PCR扩增基因组特定片段⏹优点：多克隆在载体中的DNA片段，可以无限繁殖，量大；PCR制备探针更加简便省时。

⏹cDNA探针：指互补于mRNA的DNA分子。

⏹制备：以mRNA为模板，按照碱基互补的原则，经逆转录酶催化合成的。

⏹优点：不存在内含子和高度重复序列，是一种较为理想的核酸探针。

⏹RNA探针：以DNA两条链中的任意一条为模板转录生成RNA。

⏹优点：稳定性高，杂交效率高，⏹缺点：易于降解和标记方法复杂。

探针标记的方法理想的探针标记物应具备以下特性：⏹敏感性高；⏹标记物与探针结合后，不影响杂交反应，尤其是杂交特异性、稳定性和Tm值；⏹检测方法要高灵敏性、高特异性、稳定、简便、假阳性率低；⏹标记对环境污染小，对人体无损伤，价格低；⏹标记物对检测方法无干扰。

放射性同位素标记⏹放射性同位素标记法缺口平移法随机引物法DNA探针的末端标记5’端标记法3’端标记法PCR标记DNA探针非放射性标记酶促反应标记法化学修饰标记法各种固相杂交方法的适用范围1、Southern印迹杂交⏹Southern印迹杂交：膜上检测DNA的杂交技术，1975年由Edwin Southern建立。

⏹广泛应用于基因克隆的筛选、特定DNA的定性定量检测、基因突变分析、疾病的临床诊断等方面Southern印迹杂交基本方法：⏹酶切已纯化的待测DNA⏹凝胶电泳分离各酶切片段，然后使DNA原位变性⏹将DNA片段转移到固体支持物⏹预杂交封闭滤膜上非特异性位点⏹探针与同源DNA片段杂交，然后漂洗除去非特异性结合的探针⏹检测及结果分析A. DNA的变性：DNA变性解链是杂交成功的重要环节。

⏹Southern印迹杂交时DNA在凝胶中变性，通常采用碱变性方法，即将凝胶浸在数倍体积的1.5mol/L NaCl和0. 5mol/L NaOH中1小时左右。