一代测序技术
发展历程
第二代测序使用最为广泛。以 Roche公司的454技术, Illumina公司的Solexa, HiSeq技术为代表
一代测序技术
01 基本介绍
02 一代测序技术的方法
01 基本介绍
基本介绍——第一代测序的发明人
Fred Sanger及其同事
在1997年发明了利用DNA聚合酶和 双脱氧链终止测定DNA核苷酸序列的方法。
第一代DNA测序技术的核心技术是什么?
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实验步骤
取待测DNA片段
将标记完的样品,分成四份
1.G反应,"硫酸二甲酯"
2.G+A反应 "甲酸"
3.T+C反应 "肼"
4.C反应 在NaCl存在时,只有C与肼反应,得到一 系列C末端的片段
一代测序技术的方法
形成大小不一的DNA链 电泳分离DNA链 根据同位素标记自显影后读出序列
Maxam-Gilbert化学降解测序法的弊端
基本介绍——第一代测序的发明人
第一代测序技术
概念:传统的链终止法,化学降解法,以及 在它们的基础上的各种DNA测序技术。
02 一代测序技术的方法
一代测序技术的方法
Maxam-Gilbert 化学降解测序法
01 对DNA片段5’或3’末端进行放射性标记。 02 采用特异性化学试剂修饰和裂解特定的碱基位点。
一代测序技术的方法
Sanger双脱氧链终止测序法原理
原理:是以待测单链DNA为模板,以dNTP为底物,在寡 核苷酸引物的引导下依据碱基互补配对原则。 在此对引物进行了事先标记,可以实现4个测序 反应在同一反应管中进行。可以利用自显影技术。