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鸡新城疫的预防和控制摘要：鸡新城疫（ND）又称为亚洲鸡瘟，是OIE认定的A类动物疫病，我国将其列为一类动物疫病，2022年6月改为二类动物疫病。
鸡群感染鸡新城疫后，会出现精神紊乱、呼吸困难、粘膜和浆膜出血、下痢等症状，对养鸡业危害严重。
新城疫病毒不同毒株间的致病力差异极大，造成感染鸡群的发病率、死亡率、临床症状、病理变化千差万别。
但免疫力低下的鸡群感染，发病率及死亡率可高达90%以上。
我国对鸡新城疫的综合防控主要通过建立和健全生物安全体系、采取科学合理的免疫程序、加强免疫监测以及注重药物的治疗等方面，提高鸡群的抵抗力，但是免疫后仍在部分地区会流行或散发。
关键词：鸡新城疫；防控；治疗引言新城疫（ND）属于高度接触性传染性疾病，是由副黏病毒感染引发，又被称为亚洲鸡瘟。
鸡群如果受到新城疫病毒（NDV）侵染，会很快出现急性败血症症状，并且出现神经紊乱、呼吸困难等现象。
ND的主要特点是传播速度快，所以此疫病一旦发生，会对养殖业产生巨大冲击，给养殖户造成巨大的经济损失。
除此之外，NDV也容易产生变异毒株，即使在抗体水平较高的鸡群中仍可发病。
我国将ND列为一类动物疫病，了解和掌握ND的临床症状、预防和控制措施具有巨大的实际意义。
1临床症状染病的鸡会有不同的感染症状，根据临床症状与病程长度，可将鸡新城疫病分为三类，分别是最急性型、急性型与慢性型三种。
鸡新城疫病的最急性型的症状突然，感染病毒的鸡往往在没有任何症状时突然发病死亡，其中以雏鸡病例最多，成年后的病鸡往往不会感染最急性型鸡新城疫病。
感染了急性型新城疫病的鸡会明显表现出呼吸道症状，病鸡会出现流眼泪、流鼻涕、呼吸困难等症状，由于病鸡呼吸困难，因此会采用张嘴呼吸的方式，呼吸的同时发出喘鸣声，鸡喙边会分泌大量黏液，嗉囊中产生大量液体，患病的鸡会频繁甩头，口腔与鼻腔的分泌物会由于惯性被甩出，将病鸡倒提时会从口中流出大量酸臭味液体。
病鸡体温会升高到43℃左右，伴随易口渴、食欲降低、羽毛凌乱无光泽的特征，常常昏睡，病鸡的排泄物呈现黄白色或黄绿色。
动物保健中心的主要工作动物保健中心的工作宗旨是对养殖场及其客户的养殖事业保驾护航，适时对所饲养动物的健康状况进行检测，密切监控疫情的发生，及时正确诊断所发生的疾病并制定科学、有效的防制措施，对可以治疗的疾病提供科学的治疗方案，以此向广大养殖场客户提供高质量的技术服务，促进养殖事业的快速、健康发展。
具体工作是：一、对养殖场的畜禽定期进行抗体的检测抗体检测包括母源抗体检测、免疫前后的抗体检测、主要疫病抗体水平的定期监测以及未免疫接种疫病抗体水平的定期监测等。
1、母源抗体的检测通过检测母源抗体，根据母源抗体的半衰期，可决定首免时间，当母源抗体较高而疫苗又必须进行时应该选择能够突破母源抗体的疫苗种类。
2、某些病原免疫前后抗体水平的动态检测这种检测有利于合理安排免疫的最佳时机。
另外，利用血清中抗体水平的动态结果可合理选择疫苗，并可对多种疫苗进行合理程序化安排，不仅避免了不同种疫苗作用的相互干扰，又可达到全面免疫。
3、疫苗效果的评价由血清抗体及其水平高低可检测疫苗免疫，尤其是疫苗质量的好坏，对生产具有直接的指导意义。
如血凝抑制试验-HI抗体效价出现较早，5－8d即可检出，而沉淀抗体则要10-21d，但一般不会超过21d。
阳性抗体结果及应达到的水平的出现证实疫苗的效果。
一旦在应出现抗体而未检出抗体则应全面进行分析，如免疫方法、动物机体状态等，但更应考虑疫苗的有效性。
疫苗效果评价的结果可以反映免疫程序的科学与否，一个科学的免疫程序的制定取决于多个条件，每一个条件的弃取都离不开免疫检测手段。
而免疫的成败亦受疫苗种类、质量、用量、保存、运输、稀释液的酸碱度、饲养管理及动物的机体状态等诸多因素的影响。
因此在免疫时不能只看是否免疫、何时免疫、免疫次数、间隔时间、疫苗种类，而要看实际效果，即不但也看注射密度，而且要看免疫密度，即免疫抗体达标水平。
4、当前动物保健中心主要检测的抗体新城疫、禽流感、禽传染性支气管炎、猪呼吸-繁殖综合征、猪瘟和伪狂犬病的抗体水平，也可以根据客户的要求检测其它疫苗注射后的抗体水平，以此为客户提供打不打某种疫苗，何时打某种疫苗的科学依据。
兽医微生物学习题库+参考答案一、单选题（共57题，每题1分，共57分）1.杀菌能力最强的紫外线波长为（）A、320～400nmB、280～320nmC、265～266nmD、200～280nm正确答案：C2.维持细菌固有形态的结构是()A、细胞质B、细胞膜C、荚膜D、芽胞E、细胞壁正确答案：E3.细菌缺乏下列哪种结构在一定条件下仍可存活（）A、细胞壁B、细胞膜C、细胞质D、核质E、以上均可正确答案：A4.朊病毒(或称朊毒体)的化学本质是（）A、蛋白质B、核酸;C、核酸、蛋白质和多糖D、核酸和蛋白质正确答案：A5.关于“传染性胃肠炎病毒”说法错误的是（）A、不能够感染猪B、属于冠状病毒科成员C、可以在PK-15细胞增殖D、是RNA病毒正确答案：A6.用鸡胚培养IBV的接种方式是（）A、绒毛尿囊膜B、尿囊腔C、羊膜腔D、卵黄囊正确答案：B7.引起猪格氏病（多发性、纤维素性浆膜炎和关节炎）的病原是A、里氏杆菌B、副猪嗜血杆菌C、多杀性巴氏杆菌D、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌正确答案：B8.关于链球菌的培养，叙述不正确的是（）。
A、普通培养基中生长不良,需添加血液、血清、葡萄糖等B、对营养要求较高C、普通培养基即可生长D、分离培养常用血琼脂平板正确答案：C9.关于沙门菌的描述错误的是（）。
A、G-菌B、能形成芽孢C、大多数有鞭毛D、呈杆状正确答案：B10.利用绒毛尿囊膜上接种病毒需要的鸡胚日龄是（）A、5～8日龄B、7～15日龄C、10～13日龄D、9～10日龄E、10～11日龄正确答案：C11.用鸡胚增殖禽流感病毒的最适接种部位是（）A、羊膜腔B、胚脑C、绒毛尿囊膜D、卵黄囊E、尿囊腔正确答案：A12.2018年8月我国确诊首例猪的疫情是（）。
A、非洲猪瘟疫情B、塞内卡疫情C、猪瘟疫情D、新冠疫情正确答案：A13.下列哪种细菌在血琼脂平板上能形成α或β溶血环（）。
A、非致病性大肠杆菌B、鸡白痢沙门菌C、猪链球菌D、ETEC正确答案：C14.引起母猪流产、仔猪呼吸困难、青年猪表现出咳嗽及双耳背面、边缘、腹部及尾部皮肤出现深紫色，该病毒可能是（）A、PRRSVB、PRVC、ASFVD、PCV正确答案：A15.细小病毒结构描述正确的是（）A、有囊膜B、囊膜不对称C、囊膜均匀对称D、无囊膜正确答案：D16.下列哪种方法不能用于传染性法氏囊病病毒的诊断（）。
兽医微生物学练习题+答案1、猪细小病毒HA_HI试验的红细胞（）A、鸡红细胞B、猪红细胞C、豚鼠红细胞D、人O型血红细胞答案：C2、诱导细菌突变的物理因素不包括（）A、X射线B、农药C、γ射线D、紫外线答案：B3、下列病原微生物中，在血液琼脂平板上，可能表现出溶血现象的有。
A、牛分支杆菌B、炭疽芽胞杆菌C、产单核细胞李氏杆菌D、禽多杀性巴氏杆菌答案：C4、牛出败(出血性败血症)的病原是A、大肠杆菌B、化脓性链球菌C、多杀性巴氏杆菌D、金黄色葡萄球菌答案：C5、细菌素的特点正确的是（）A、是某些细菌产生的一类蛋白质B、具有抗菌作用，可抑制菌体蛋白的合成C、可用于细菌分型D、以上均是答案：D6、有关病毒的传播方式中，下列不属于水平传播途径的是（）A、呼吸道途径B、消化道途径C、受精卵D、皮肤途径答案：C7、羊感染初期兴奋性增高，进而头、颈震颤，有的体躯发痒，其病原为（）A、腺病毒B、逆转录病毒C、疱疹病毒D、朊病毒答案：D8、细菌染色体以外的遗传物质指的是（）A、mRNAB、性菌毛C、质粒D、核糖体E、中心粒答案：C9、关于“猪流行性腹泻病毒”说法错误的是（）A、是DNA病毒B、能够感染Vero细胞C、能够引起仔猪腹泻D、属于冠状病毒科成员答案：A10、关于“猪繁殖与呼吸综合症病毒”说法错误的是（）A、是RNA病毒B、在细胞核复制C、可以感染猪D、有囊膜答案：B11、半固体培养基常用于检测细菌的结构是（）A、菌毛B、鞭毛C、芽孢D、细胞壁E、荚膜答案：B12、下列细菌中，革兰染色阳性的是（ D ）A、巴氏杆菌B、沙门氏菌C、大肠杆菌D、李氏杆菌答案：D13、关于“传染性胃肠炎病毒”说法错误的是（）A、不能够感染猪B、属于冠状病毒科成员C、可以在PK-15细胞增殖D、是RNA病毒答案：A14、关于“口蹄疫病毒”说法错误的是（）A、是RNA病毒B、在细胞质复制C、可以感染猪D、有囊膜答案：D15、嗜血杆菌在下列哪种培养基上生长良好？A、ss琼脂平板B、巧克力平板C、普通营养琼脂D、营养肉汤答案：B16、下列关于菌丝说法错误的是（）A、气生菌丝就是有隔菌丝B、无隔菌丝无隔膜，一个菌丝就是一个单细胞C、有隔菌丝有隔膜，菌丝体由很多个细胞组成D、无隔菌丝的细胞为多核巨细胞答案：A17、以下细菌必须在无氧环境下才能生长繁殖的是（）A、破伤风梭菌B、结核分枝杆菌C、大肠杆菌D、链球菌答案：A18、轮状病毒的基因组是（）。
兽医微生物学习题（附参考答案）一、单选题（共57题，每题1分，共57分）1.有关荚膜描述错误的是（）A、具有免疫原性,可用于鉴别细菌B、具有抗吞噬作用C、一般在机体内形成D、化学成分为多糖或多肽等E、可增强细菌对热的抵抗力正确答案：A2.对病毒特征的叙述错误的是（）A、测量单位是μmB、以复制方式增殖C、是专性细胞内寄生物D、只含一种核酸E、对抗生素不敏感;正确答案：A3.关于病毒的概念,错误的是（）A、病毒在宿主细胞外不能合成蛋白质B、病毒在宿主细胞外不能产生能量C、病毒不能自身复制D、囊膜病毒需用宿主的细胞膜作为囊膜成分E、病毒必须借助光学显微镜才能观察到正确答案：C4.外毒素经0.4%甲醛溶液处理后，毒力减弱，但仍保持其抗原性称为（）A、抗毒素B、内毒素D、肠毒素正确答案：C5.用于分离培养病毒的标本，不能及时送检，短期保存的温度是（）A、4℃B、25℃C、-70℃D、37℃E、-20℃正确答案：E6.关于“逆转录病毒”说法正确的是（）A、基因组为单倍体B、基因组为单股正链DNAC、所有成员均具有编码反转录酶的基因D、无囊膜正确答案：C7.动物病毒培养较为敏感细胞一般是（）A、动物传代细胞B、本动物原代细胞C、多倍体细胞D、单倍体细胞正确答案：B8.质粒是一种编码特定性状的（）A、DNAB、蛋白质C、RNAD、糖类正确答案：A9.对人有致病性的链球菌多为（）。
A、A群B、B群和C群C、D群D、G群正确答案：A10.关于“死于炭疽的病畜尸体”说法错误的是（）A、切开肋间采取脾脏B、可无菌操作从心脏采血C、可自耳根部采血D、严禁剖检正确答案：B11.细菌的运动器官是（）A、荚膜B、细胞壁C、菌毛D、鞭毛E、芽胞正确答案：D12.人畜共患的螺旋体病是（）A、钩端螺旋体病B、雅司病C、梅毒D、回归热正确答案：A13.关于“肠道采集”说法错误的是（）A、粪便应采取新鲜的B、仔猪腹泻病例可采集大肠C、只需选择病变最明显的部分D、可将胃肠两端扎紧剪下保存送检正确答案：B14.链球菌兰氏分群的依据是（）。
以前做过的实验：病毒学实验：抗体检测：血凝抑制ELISA抗原检测：血凝PCR胶体金检测试纸卡测抗原细菌学实验：药敏试验水质监测测大肠杆菌其他：PH计测畜禽饮用水PH值显微镜法测虫卵（饱和盐水法）建议：可以采用的其他的检测试纸卡扩大抗原检测的种类和缩短检测时间。
各实验具体步骤：病毒学实验1.抗体检测：有血凝素（HA）的病毒能凝集人或动物红细胞，称为血凝现象，血凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验，原理是相应抗体与病毒结合后，阻止病毒表面HA与红细胞结合，常用于正粘病毒、副粘病毒及黄病毒等的辅助诊断、流行病调查，也可用于鉴定病毒型与亚型。
疫血凝（HA）及血凝抑制(H1)试验目的意义：1.掌握血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HAI）的基本方法；2.了解HA与HI在新城疫病毒及其它病毒诊断和鉴定中的应用。
基本原理：许多病毒表面具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。
血凝现象可以被特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血清学试验，称为血凝抑制试验。
器材及试剂:待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液；待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清；生理盐水、1%鸡红细胞、96孔V形微量血凝板、加样器等。
实验步骤(一)血凝试验（HA）取96孔板，按以下步骤操作：1、第一排1-12孔各加生理盐水25ul，第二排1-12孔加生理盐水25ul为红细胞对照；2、吸25ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取25ul至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去25ul，3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞25ul。
4、室温静置10-30分，观察结果5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效价（二）血凝抑制试验（HI）取一96孔板，按以下步骤操作：1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。
牛副流感病毒3型实验室检测方法研究进展庄金秋;梅建国;张颖;莫玲;刘吉山【摘要】牛呼吸道疾病综合征是引起世界范围内饲养牛发病和死亡的主要原因,严重危害着世界养牛业的发展.牛副流感病毒3型是引起牛呼吸道疾病综合征的主要病原之一,主要引起成年牛和犊牛的肺炎、支气管肺炎等.文章综述了近年来牛副流感病毒3型的最新实验室检测方法研究进展,以期为预防和控制疾病提供参考.%Bovine respiratory disease complex is the main cause of the morbidity and mortality of feeding cattle in the world, which seriously endangers the development of the world's cattle industry. Bovine parainfluenza virus type 3 is one of the major causes of bovine respiratory disease complex, which mainly causes pneumonia and bronchopneumonia in adult cattle and calves. This paper reviewed the latest laboratory detection methods of bovine parainfluenza virus type 3 in recent years, so as to provide reference for prevention and control of disease.【期刊名称】《中国草食动物科学》【年(卷),期】2017(037)004【总页数】4页(P46-49)【关键词】牛副流感病毒3型;牛呼吸道疾病综合征;检测;研究进展【作者】庄金秋;梅建国;张颖;莫玲;刘吉山【作者单位】山东省滨州畜牧兽医研究院,滨州 256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,滨州 256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,滨州 256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,滨州 256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,滨州 256600【正文语种】中文【中图分类】S858.23牛呼吸道疾病综合征（bovine respiratory disease complex，BRDC）是引起世界范围内饲养牛发病和死亡的主要原因，严重危害着世界养牛业的发展。
红细胞凝集试验及红细胞凝集抑制试验1．红细胞凝集试验 采用50孔板或试管法按表1，若采用96孔微量板法按表2进行，用生理盐水将待检抗原按术式稀释成不同倍数，加入1%鸡红细胞悬液。
将50孔板或试管前后左右摇匀；将96孔微量板在振荡器上摇匀，置于20～30℃，20～40分钟后（微量板法时间短, 15～30分钟）判定结果，使50%红细胞凝集的最高稀释度，作为判定终点。
表1 50孔板或试管法测定凝集价 单位：ml孔或管号对照1 2 3 4 5 6 7 8…… 血凝素稀释倍数 10 20 40 80 160 320 640 1280…… 0.5生理盐水0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5…… } } } } } } } } 弃0.5待检抗原 0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1%鸡红细胞悬液0.50.50.50.50.50.50.50.50.5表2 96孔微量板法测定凝集价 单位：μl孔号对照1 2 3 4 5 6 7 8...... 稀释倍数 2 4 8 16 32 64 128 256 (25)生理盐水25 25 25 25 25 25 25 25…… } } } } } } } } 弃25 待检抗原 25 25 25 25 25 25 25 25 1%鸡红细胞悬液2525252525252525252．红细胞凝集抑制试验2.1血凝素凝集价测定 50孔板或试管法按表3，若采用96孔微量板法按表4进行。
表3 50孔板或试管法测定凝集价 单位：ml孔或管号对照123 4 5 6 78……血凝素稀释倍数 5 10 20 40 80 160 320 640……0.25生理盐水 0.4 0.250.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25……} } } } } } } } 弃0.25 血凝素 0.1 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 1%鸡红细胞悬液 0.25 0.250.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 孔号对照1 2 3 4 5 6 7 8...... 稀释倍数 2 4 8 16 32 64 128 256 (25)生理盐水25 25 25 25 25 25 25 25…… } } } } } } } } 弃25 血凝素 25 25 25 25 25 25 25 25 1%鸡红细252525252525252525生理盐水25 25 25 25 25 25 25 25 252.2 4单位抗原工作液配制及检验2.2.1 4单位抗原工作液配制 选用上述2.1项抗原进行。
L1.配制准备溶液（2015/6/1）一、实验仪器托盘天平，药匙，100ml烧杯，电磁炉，pH试纸，牛皮纸，橡皮圈，高压灭菌锅，冰箱，移液器，移液枪，低速离心机，1000ml烧杯3个，50ml量筒1个，1000ml量筒一个二、实验材料葡萄糖5g 柠檬酸钠2g 柠檬酸1g 氯化钠1g 蒸馏水3L 稀盐酸100ml SPF鸡血 10ml Na2HPO4·12H2O 5g KCl 1gNaH2PO4·2H2O 2g NaOH 1000ml三、实验步骤a)鸡红细胞保存液（阿氏Alsevers液）配制葡萄糖 2.05g柠檬酸钠0.8g柠檬酸0.055g氯化钠0.42g加蒸馏水至100毫升，加热溶解后将pH值调到6.1，经过69千帕，15分钟的高压灭菌，放置在4℃的环境内，保存备用。
阿氏液主要用于保存红细胞，在4℃的环境下，红细胞可以保存2周而不改变活性和特性。
因此阿氏液用于采血、保存和运送红细胞进行化验。
b)1%鸡红细胞悬液制备采血用注射器吸取阿氏液1ml，取至少3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液3-4ml，与等量的阿氏液混匀，装入离心管中备用。
洗涤红细胞将离心管中的血液经过1500-1800r\min离心8分钟，弃去上清液，在沉淀物中加入本实验要求的PBS液，轻轻混匀，以均匀沉淀的红细胞，在经过1500-1800r\min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀的红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后， 4℃保存备用。
1%鸡红细胞悬液制备用微量移液器取洗涤后的红细胞沉淀泥0.1ml，加入到9.9ml本实验要求的PBS液，轻轻混匀，制成1%鸡红细胞悬液，备用。
c)pH7.2、0.01mol/L PBS的配制i.配制25×PB：称量2.74g磷酸氢二钠（Na2HPO4 12H2O）和0.79g磷酸二氢钠（NaH2PO4 2H2O）加蒸馏水至100mL。
ii.配制1×PBS：量取40ml25×PB，加入8.5g氯化钠，加蒸馏水至1000mLiii.用氢氧化钠或盐酸调pH至7.2。
iv.灭菌或过滤。
v. PBS一经使用，于4℃保存不超过3周。
vi.PBS对其它酸碱物质具有一定的缓冲能力，维持反应所需的pH，因而比使用生理盐水的效果好。
L2.实验仪器消毒一、实验材料ddH2O二、实验仪器150*15试管24个（3*7后续使用，3垫脱脂棉装针头），300ml三角瓶3个，镊子3个，眼科剪3个，纱布，报纸，牛皮纸，30ml注射器3个，蓝枪头3盒，黄枪头3盒，白枪头1盒，EP管半盒，盖玻片半盒，烧杯1个（盛EP管），小烧杯一个（盛盖玻片）三、实验步骤a)ddH2O清洗玻璃仪器b)包装实验仪器c)高温蒸汽灭菌（121°C，30min）L3.鸡胚发育鸡胚的发育：要采用鸡胚进行细胞培养时，应对鸡胚的发育有一个初步了解。
鸡胚的发育是由受精卵开始的，它在通过输卵管时，已开始分裂，当产卵时已在卵黄上部形成一层细胞，名为胚盘，在适宜的条件下胚盘继续分裂生长。
在发育过程中由卵黄和卵白中获取养料和水分，由于胚体与卵黄分开的缘故，胚胎只通过卵黄带与卵黄相连。
发育的早期形成三个胚层，即外胚层、中胚层和内胚层，由此形成胚胎的各个器官和组织。
一般孵育至第3d出现尿囊，为直肠腹侧部分的膨出物，尿囊膜是由内胚层和中胚层构成的。
至第4~5d胚体为羊膜、尿囊膜及绒毛膜层包被。
羊膜系由外胚层和中胚层组成，开始时紧贴于胚体上，后来腔内逐渐充满羊水。
尿膜在生长发育的过程中，与绒毛膜相连而成绒毛尿囊膜，此膜为三层细胞组成。
外层为外胚层，内层为内胚层，中间为中胚层细胞，其中血管甚多有两条主动脉自卵黄囊延伸到此膜中，与此并行有两条主静脉，汇流成一较大的尿囊静脉。
绒毛尿囊膜系鸡胚的呼吸器官，位于壳膜之内。
此膜生长发育很快，第10d己包围了整个鸡胚，此时鸡胚己出现羽毛，呼吸道的发育在第12~15d之间出现。
'胚胎体积逐渐增大时，胚胎腔外体液亦日趋减少，孵出小鸡时已无胚胎腔外体液。
在发育早期，尿囊液及羊水的成分与生理盐水溶液相差无几，12d后羊水的蛋白含量及黏稠度增加，尿囊腔积累了肾脏的排泄物，因此，在12d或13d后，尿囊液由于尿酸盐的存在，使原来透明的液体呈现混浊。
尿囊液的酸碱度在7~12d期间呈弱碱性，在孵育的末期为pH6.0。
6-13d鸡胚羊水的平均量为5~10mL，至13d有时可达10mL。
卵白的水分在发育的最初7d中转移到卵黄囊内，在第16d卵臼转入羊水腔为胚胎所吞食。
卵黄在发育时逐渐为一层细胞所包围，自12d以后卵黄逐渐干燥，在孵出之后24-48h，整个卵黄囊被吸入小鸡腹腔内，供雏鸡出生后最初几天的营养。
L4.鸡胚尿囊腔接种一、实验材料气管和殖泄道棉拭子，PBS液，链霉素/青霉素，石蜡油，70%酒精，3%碘酊二、实验仪器试管，100ml量筒，100ml烧杯，注射器，脱脂棉三、实验步骤a)病毒采样1.按链霉素（100μg/ml）/青霉素(100U/ml)配制约100ml1XPBS2.将棉拭子放入试管内，加入适量含双抗的PBS（2/3试管或没过棉拭子）3.放入冰箱4°C过夜4.将棉拭子中液体尽量挤出，将液体倒入离心管中，2000r/min离心30min，取上清，准备接种b)接种1.选用10-11日龄的鸡胚，画出气室和胚位2.在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒3.用钢锥穿一小孔4.将注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入0.1-0.2ml接种物5.用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并检卵一次，24h内死亡者废弃，约3d-7d后收获c)收获1.收获前鸡胚须置4℃冰箱6h或过夜，但不能放置时间过长(过长会引起散黄)。
如急于收获亦可置-20℃冰箱lh左右。
2.在气室处用碘酊和酒精进行消毒3.打开气室顶部蛋壳和壳膜，4.镊子撕开绒毛尿囊膜5.用无菌吸管或注射器吸取清亮的尿囊液6.无菌检验，保存尿囊液7.消毒鸡胚，弃掉注：1.预冷的目的是，将鸡胚冻死，使血液凝固，避免收获时流出红细胞，并同尿囊液的病毒发生凝集，造成病毒滴度下降。
2.病毒通过胚胎机体后被排泄入尿囊腔，因此当羊水过少时，可用同胚少量尿囊液冲洗羊膜腔并吸取该洗液，-80°C保存L4. 鸡胚成纤维细胞的培养一、实验材料9日龄SPF鸡胚，MEM培养液，胎牛血清，0.25%胰酶，PBS，70%酒精，3%碘酊二、实验仪器超净工作台、6孔细胞培养板、CO2培养箱，低速离心机，倒置显微镜、移液枪、枪头、离心管（15ml）、眼科剪，镊子，脱脂棉三、实验步骤a)鸡胚发育i.观察方法：将9~11日龄的鸡胚取出，放人平皿中进行观察。
b)鸡胚成纤维细胞制备i.超净工作台紫外线消毒30min，手术器械高压灭菌烘干,胰酶、PBS、细胞培养基等液体水浴锅温度平衡。
ii.消毒：9~11日龄的鸡胚2~3个人超净工作台中，大头(气室)朝上放置，先碘酊棉，后酒精棉，消毒气室部位，消毒方式为由内而外，一圈即可，勿反复擦拭。
iii.取鸡胚：用镊子剥去气室部蛋壳，使用弯头眼科镊撕开气室部位壳膜，弯头朝上，轻轻夹住鸡胚颈部，夹出放入无菌平皿中，无菌操作去头，四肢及内脏，用PBS洗2~3次，洗去红细胞，吸去液体。
iv.剪碎鸡胚及清洗：用弯头眼科剪将鸡胚反复剪碎成泥状，加PBS，吸入细胞培养瓶，稍静置，让组织下沉，吸去液体。
用PBS洗2~3次，吸去液体，以去掉红细胞等。
v.加胰酶：根据组织的多少加入0.25%胰酶，胰酶的量以将组织块浸泡在胰酶中为度，一个鸡胚加0.25%的胰酶2~3ml。
vi.消化：37℃水浴消化0.5h，间隔5~10分钟轻摇混匀。
vii.洗去胰酶：消化完毕，吸出胰酶，用PBS洗3次以洗去胰酶，吸去洗液。
洗时注意轻摇，如猛烈摇动，会将组织块摇散，吸去洗液时，容易将细胞吸去。
也可在最后一次，加入小试管1000r/min离心5min，去上清液，。
viii.计数培养：加入适量的完全培养液(10~20mL)，用吸管反复吹打成细胞浓度细胞悬液，用细胞计数法，计算每毫升营养液中的细胞数，根据细胞密度分至培养皿中，培养液的量以覆盖皿底为度。
ix.放入37℃、5% CO2温箱培养。
培养长成单层细胞，即可应用，这就是鸡胚原代细胞。
d)HAa)抗原效价的测定1.在微量反应板的1孔~12孔均加入25ulPBS液，换滴头。
2.吸取稀释禽流感病毒H5亚型试验抗原25ul加入第1孔，吹吸取10~15次混匀。
3.从第1孔吸取25ul病毒抗原液加入到第2孔，吹吸同样次数混匀后吸取25ul加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取25ul弃之，换滴头。
4.每孔再加入25ulPBS。
5.每孔均加入25ul1%RBC液。
6.振荡混匀，在室温（20℃~25℃）静置40min后观察结果。
7.结果判定：将板倾斜，观察红细胞有无呈泪珠状流淌。
完全血凝（不流淌）的抗原最高稀释倍数代表一个血凝单位。
结果判定：1、红细胞100%凝集的抗原最高稀释度为血凝价。
2、“++++”为100%凝集，“++”为不完全凝集，“—”为不凝集3、上表例抗原血凝为2564、对照孔的红细胞将成明显的纽扣状沉到孔底•抗原回归实验8.4×单位抗原配制血凝价数除以4256÷4=64，即 1毫升（抗原）+63毫升（PBS）即成。
9.4×单位抗原验证配制好后和每天应用前都必须对 4×单位抗原进行测试验证，操作按表二进行。
10.作两排孔第1-5孔加PBS液25ul11.第1孔加4×单位抗原液25ul，吹吸10-15次混匀吸取，第2孔用同样次数吹吸混匀吸取25ul加入到第3孔，如此进行到第5孔弃去25ul，换滴头。
12.每孔再加入25ulPBS。
13.每孔均加入25ul1%RBC液。
14.振荡混匀，在室温（20℃~25℃）静置40min后观察结果。
结果判定：●1×单位抗原孔的红血球必须达到100%凝集，●同时0.5×孔红血球达到50%凝集，50%下沉孔底才符合要求，否则重新调配。
e)HIa)加PBS液在微量反应板上的1孔~11孔加入25ulPBS，第12孔加入50 ulPBS。
b)加被检血清吸取25ul被检血清加入第1孔吹吸吹吸取10~15次混匀。
从第1孔吸取25ul血清稀释液加入到第2孔，吹吸同样次数混匀后吸取25ul加入第3孔，如此进行对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取25ul弃之，换滴头。
c)1~11孔均加入含4×单位抗原液25ul，室温下静置30min。
d)每孔均加入25ul1%RBC液。
e)振荡混匀，在室温（20℃~25℃）静置40min后观察结果，对照孔红细胞将呈纽扣状沉于孔底。
