微生物工程--7种子扩大培养

微生物工业菌种的扩大培养微生物工业菌种的扩大培养来源：青岛海博菌种的扩大培养就是把保藏的菌种，即砂土管，冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化，再经过扁瓶或药瓶和种子罐，逐级扩大培养后达到一定的数量和质量的纯种培养过程。

这些纯种的培养物称为种子。

作为生产用的种子，必须具备如下的条件：①菌种细胞的生长活力强，接种后在发酵罐中能迅速生长；②生理性状稳定；③菌体总量和浓度能满足大容量发酵罐的要求；④无杂菌污染（不带杂菌）；⑤生产能力稳定。

一、种子的制备过程种子制备的过程大致可分为实验室种子制备阶段和生产车间种子制备阶段。

实验室种子制备阶段是指琼脂斜面至固体培养基扩大培养（如茄子瓶斜面培养）或液体摇瓶培养；生产车间种子制备阶段是种子罐扩大培养。

（一）、实验室种子的制备实验室种子的制备一般采用两种方式：固体孢子培养法和液体种子培养法。

对于产孢子能力强的及孢子发芽、生长繁殖快的菌种可以采用固体培养基培养孢子，孢子可直接作为种子罐的种子，这样操作简便，不易污染杂菌；对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，可以用液体培养法。

１、孢子的制备（1）细菌的制备细菌的斜面培养基多采用碳源限量而氮源丰富的配方，培养温度一般为37?C。

细菌菌体培养时间一般为1~2天，产芽孢的细菌培养则需要5~10天。

（2）霉菌孢子的制备霉菌孢子的培养一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基，培养的温度一般为25~28?C，培养时间一般为4~14天。

（3）放线菌孢子的制备放线菌的孢子培养一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等，培养温度一般为28?C，培养时间为5~14天。

２、液体种子制备（1）好氧培养：对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，可以用摇瓶液体培养法。

将孢子接入含液体培养基的摇瓶中，于摇瓶机上恒温振荡培养，获得菌丝体，作为种子。

试管→三角瓶→摇床→种子罐。

实验七食用菌母种的扩大培养一、实验目的深入理解食用菌母种的含义、重要性和生产上的作用。

学会常用母种培养基的配制方法，掌握母种转管继代培养技术，了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技能。

二、实验原理食用菌母种是指从大自然首次分离得到的纯菌丝体，多通过孢子分离法、组织分离法和菇木分离法获得纯菌丝体。

因其在试管里培养而成，并且是菌种生产的第一步骤，因此又被称为试管种或一级种。

纯菌丝体在试管斜面上再次扩大繁殖后，则形成再生母种。

它既可以繁殖原种，又适于菌种保藏。

母种的扩大培养是从一支母种转接、培养、扩繁成若干支母种的过程，整个过程期间，须在无菌环境条件下，进行母种菌的转接、培养与扩繁。

三、实验所需1. 菌种：平菇、杏鲍菇、金针菇、灰树花等。

2. 材料试剂：马铃薯、葡萄糖、琼脂、酵母膏、75%酒精等。

3. 仪器用具：天平、电炉、熬制锅、刀砧、小刀、玻棒、纱布、漏斗架、漏斗（套接橡胶管和）、止水夹、试管（18×180mm左右）、棉花、橡皮筋、牛皮纸（报纸）、棉线、铁筐、高压灭菌锅、超净工作台、酒精棉瓶、长柄镊子、接种具（钩、锄等）、酒精灯、火柴、垫架、标签、笔等。

四、实验内容（一）母种培养基配制（1）培养基配方常用培养基PDA：马铃薯（去皮去芽眼）200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml、酵母膏2.5g。

（2）培养基配制将马铃薯去皮洗净、挖去芽眼，称取200g，用刀砧切碎，放入熬制锅（内壁有容积刻度）中，加入清水，电炉加热煮沸后调小火力，维持约20min，煮至软而不烂为止。

用双层湿沙布过滤，得过滤薯液，再向过滤液中加入琼脂20g继续加热，待琼脂溶化后，添加葡萄糖20g及酵母膏2.5g，补足水分至1000ml，搅拌均匀煮沸溶化后准备装管。

（3）分装试管培养基配制后应趁热分装。

装入培养基占试管的1/4~2/5处，装管时控制好止水夹头，对培养基流向、流速、流量进行控制，勿使管内外壁沾上培养液，以免浸湿棉塞，易受杂菌污染。

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发酵工程中对菌种扩大培养的方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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