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红细胞嵌合体定量检测及在异基因造血干细胞移植中的应用翟菊萍;顾国浩;王雪明;蒋敏;周毓菁;彭群新;虞秀兰【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2011(29)3【摘要】目的建立流式细胞术(FCM)定量检测不同ABO抗原红细胞嵌合体方法,探讨其在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)中的应用.方法选取标准 A、B和O 型RBC在体外按不同的比例两两混合(嵌合体),采用FCM对5例allo-HSCT患者于术前及术后7、15、30、45、60和90 d体内RBC的嵌合体进行相对计数,计算其供体细胞的嵌合率.结果体外混合的RBC嵌合体FCM测定值与理论值无显著性差异(P>0.05).5例患者移植后7 d均能检测到供体细胞,其中3例患者移植后90 d达到完全嵌合状态(FDC),1例患者移植后30 d,供体细胞的嵌合率为8.9%,移植后40 d疾病复发而死亡,另1例患者供体细胞的嵌合率由移植后60 d的86.5%下降至90 d的23.7%,死于严重感染.结果 FCM能定量检测不同ABO抗原的RBC嵌合体,可应用于临床allo-HSCT后RBC嵌合体的动态监测.【总页数】3页(P188-190)【作者】翟菊萍;顾国浩;王雪明;蒋敏;周毓菁;彭群新;虞秀兰【作者单位】苏州大学附属第一医院检验科,江苏苏州,215006;苏州大学附属第一医院检验科,江苏苏州,215006;苏州大学附属第一医院检验科,江苏苏州,215006;苏州大学附属第一医院检验科,江苏苏州,215006;苏州大学附属第一医院检验科,江苏苏州,215006;苏州大学附属第一医院检验科,江苏苏州,215006;苏州大学附属第一医院检验科,江苏苏州,215006【正文语种】中文【中图分类】R457.7【相关文献】1.嵌合体监测在非清髓异基因造血干细胞移植后干预治疗中的应用 [J], 熊辉霞;陈宝安;丁家华2.异基因造血干细胞移植中嵌合体的STR-PCR定量检测 [J], 喻凤宽;符粤文;周健;李玉富;张龑莉;房佰俊;谢宁;魏旭东;宋永平3.STR-PCR半定量检测嵌合体方法在非清髓异基因造血干细胞移植中的应用 [J], 熊辉霞;陈宝安4.流式细胞术检测红细胞嵌合体在异基因造血干细胞移植中的研究 [J], 汪艳丽5.STR-PCR半定量检测嵌合体方法在异基因造血干细胞移植中的应用 [J], 刘靓;丁家华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
STR-PCR半定量检测嵌合体方法在异基因造血干细胞移植中的应用[摘要] 目的:应用短串联重复序列-聚合酶链反应(STR-PCR)半定量方法检测异基因造血干细胞移植后供者细胞比例并探讨其临床意义。
方法：给30例接受移植的患者行移植后嵌合体检测,采集外周血提取DNA,对9个STR位点行聚合酶链反应扩增,扩增完成后行聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色显影,再计算嵌合率。
结果：30例患者均检测到供者细胞,24例达到完全嵌合(CC),6例形成混合造血(MC)。
在移植后14 d,稳定植入的患者多数表现为CC。
CC组的aGVHD发生率高于MC组,7例患者在复发前检测到嵌合率(donor cell,DC)下降,经相应免疫治疗后有3例达到CC。
结论：监测异基因造血干细胞移植后嵌合率的动态变化过程,PCR-STR是一种简单经济的方法,可根据嵌合状态指导个体化免疫治疗,对患者的长期存活有重要意义。
［关键词］短串联重复序列-聚合酶链反应；异基因造血干细胞移植；嵌合体分析［Key words］short tandem repeat-polymerase chain reaction; allogeneic hematopoietic stem cell transplantation; analysis of chimerism异基因造血干细胞移植现今已经成为临床上各种恶性及非恶性血液病治疗的一项重要措施,供者细胞植入受者体内后供者细胞及受者细胞含量情况是动态变化的,需要进行动态的检测。
检测结果有助于判断移植是否成功,及预测移植物抗宿主病的发生与疾病的复发,并指导下一步免疫干预治疗的应用［1］。
短串联重复序列(STR)是由2～6个碱基对组成的一种遗传标记,已在移植后嵌合体检测中广泛使用。
传统的STR-PCR检测方法敏感性多大于5%,但当供受者性别相同时,无法计算供者细胞的嵌合率。
我们对30例接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的患者进行了动态嵌合体的监测,根据嵌合结果,为患者的临床治疗和预后提供依据。
STR－PCR分析嵌合体在同种异基因造血干细胞移植中的应用【摘要】利用荧光标记的多重PCR 扩增短串联重复序列结合毛细管电泳检测供者细胞嵌合率(DC),以探讨该方法的连续检测对异基因造血干细胞移植后转归的预警作用，采集27例清髓性外周血干细胞移植患者移植前、移植后不同时段的外周血或骨髓，DNA样本用Profiler Plus和Cofiler Plus商品化试剂盒扩增后,用ABI310遗传分析仪进行毛细管电泳,确定基因位点及峰面积,根据基因型的差异选择嵌合率计算公式。
结果表明：两种试剂盒测得的DC嵌合率一致;在27对中能区别出供受差别的STR位点，Profiler Plus为(4-9)个, Cofiler Plus为(2-6)个。
26例患者均在移植后28天出现供者细胞，1例患者未出现供者细胞。
14例患者DC 100%,均获得持久植入,至今仍无白血病生存；另有9例患者出现不稳定混合嵌合(MC)状态(DC为0%-%),其中5例为血液学复发。
27例病人中有6例死亡。
上述5例复发患者均在出现临床症状前发生DC量下降;供者细胞完全嵌合组移植物抗宿主病(GVHD)的发生率高于MC组。
结论：动态检测DC可用于移植动力学研究,对移植物早期植入或被排斥、疾病复发以及GVHD的发生均有预警作用,对早期实施临床干预治疗有重要的指导意义。
【关键词】同种异基因造血干细胞移植；毛细管电泳; 嵌合体Application of Chimerism Analysis to Allogeneic Hematopoietic Stem CellAbstract The aim of this study was to analyze chimerism, evaluate the status of engraftment and predict the outcome of allogeneic hematopoietic stem cellshort tandem repeat (STR) amplification using fluorescence labeling polymerase chain reaction (PCR) combined with capillary electrophoresis. Peripheral blood and bone marrow in 27 patients whoreceived myeloablative allogenetic cell transplantation were collected before and after transplantation in different times. 10 and 7 different STR markersby using a commercial AmpF/STR Profiler Plus/Cofiler plus PCR amplification kits. Separation of the PCR products and fluorescence detection were performed by ABI prism 310 Genetic Analyzer with capillary electrophoresis. The Genescan and Genotype soft ware were used for size calling and quantification of peak areas. The formula to calculate donordifferent allelic distribution type between donor and recipient. The results showed that donor chimerism was similar by the two methods. The median number of informative alleles was (4-9) by Profiler Plus and (2-6) by Cofiler Plus. The donor alleles appeared in 26patients on day 28 post transplantation. One patient was not observed to appear donor alleles. 14 patients with 100% donor chimerism (DC) had stable engraftment and they still survive in free leukemia. 9 patients had unstable mixed chimerism (DC: 0%-%), and 5 of them reldied. Decrease of donor chimerism appeared prior to graft rejection and disease relapse. The incidence of GVHD was higher in group of full donor chimerism. It is concluded that dynamicelectrophoresis is a valuable tool for predicting graft rejection, disease relapse and occurrence of GVHD, and provides a basis for early clinical intervention in the patients receivedKey words allogeneic hematopoieticcapillary electrophoresis; chimerism J Exp Hematol 2007; 15(2):337-341同种异基因造血干细胞移植是治疗恶性血液病和免疫缺陷性疾病的有效手段之一,移植成功与否与供者细胞在受者体内的植入情况,即嵌合体的形成有关。
1例错误否定父权的嵌合体STR分析
唐泽英;王璐鑫;陆惠玲;欧奕君;邓小娟
【期刊名称】《刑事技术》
【年(卷),期】2024(49)2
【摘要】随着科学技术的不断发展,亲子鉴定中的嵌合体案例逐渐被发现。
亲子鉴定目前通常是在现场采取血样,也有少数机构采取口腔拭子进行STR分型检测。
在排除医源性人造异源嵌合体和检材被污染风险因素后,当不同基因座出现多个等位基因异常情况时,往往会考虑被检者为先天嵌合体。
但是,如果嵌合体的血液中只存在一种细胞群的时候,血样常染色体STR分型不会出现异常,很容易得出错误的鉴定结论,直接排除亲缘关系。
本文所分析案例,就属此类非常罕见的情况。
【总页数】5页(P216-220)
【作者】唐泽英;王璐鑫;陆惠玲;欧奕君;邓小娟
【作者单位】西南政法大学刑事侦查学院;西南政法大学司法鉴定中心;中山大学中山医学院法医系;广东通济司法鉴定中心;海南华海法医物证司法鉴定所
【正文语种】中文
【中图分类】DF795.2
【相关文献】
1.2例亲权鉴定案中的嵌合体STR谱分析
2.应用多种STR技术对基因嵌合体进行亲权鉴定分析
3.STR分型技术在一宗寻亲案中嵌合体法医学分析中的应用
4.STR-PCR分析嵌合体在同种异基因造血干细胞移植中的应用
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检测异基因造血干细胞移植后嵌合体的新方法探究摘要】目的应用短串联重复序列．聚合酶链反应（ＳＴＲ．ＰＣＲ）半定量方法检测异基因造血干细胞移植后嵌合体。
方法给１０例接受移植的患者行移植后嵌合体检测，采集外周血提取ＤＮＡ，对９个ＳＴＲ位点行聚合酶链反应扩增，扩增完成后行聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色显影，再计算嵌合率。
结果１０例患者均检测到供者细胞，８例达到完全嵌合（ＣＣ），２例形成混合造血（ＭＣ）。
结论ＳＴＲ．ＰＣＲ结合凝胶电泳成像分析技术是一种敏感、准确、可靠、经济的嵌合体半定量检测方法。
２０世纪９０年代以来，造血干细胞移植（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ＨＳＣＴ）技术取得飞速发展，现已成为治疗恶性血液病、遗传性疾病等的主要手段之一。
随着ＨＳＣＴ应用范围的扩大，移植效果日益得到重视，移植后的检测也将成为ＨＳＣＴ研究中不可缺少的一部分［１］。
短串联重复序列（ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ，ＳＴＲ）是近年来发现的，广泛存在于基因组中的ＤＮＡ长度多态性片段，它由２～６个碱基构成一个在长度上呈串联重复排列的核心序列。
有学者将ＳＴＲ应用于ＨＳＣＴ后植入证据的检测，结果显示ＳＴＲ基因位点检测可用于判断移植效果、预防复发、实行临床早期干预治疗等。
本文我们运用的ＳＴＲ．ＰＣＲ结合聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色以及凝胶成像分析技术可以计算出嵌合率。
我们对１０例接受ＨＳＣＴ的患者进行了动态嵌合体的监测，根据嵌合结果，为患者的临床治疗，预后提供依据。
１资料与方法１．１病例资料：对象为２０１１．２０１３年在东南大学附属中大医院血液科接受ａｌｌｏ．ＨＳＣＴ的患者１０例（男８，女２），年龄８～５３岁（中位年龄２５岁）。
１．２预处理方案及ＧＶＨＤ的防治：预处理用改良的Ｂｕ／ＣＹ预处理方案，即阿糖胞苷，白消安，环磷酰胺，司莫司汀，抗胸腺细胞球蛋白。
ＧＶＨＤ预防采用环孢霉素Ａ、麦考酚酸酯和短程甲氨蝶呤方案。
同种异体移植的临床应用随着医学技术的不断进步，同种异体移植（Allogeneic transplantation）已成为治疗多种血液和免疫系统疾病的重要手段之一。
同种异体移植是一种通过用来自另一个人的干细胞替换受损或有缺陷的干细胞，从而治疗疾病的方法。
其原理是将来自一个人的细胞移植到另一个人体内，并在那里定植生长，为患者提供治疗。
这种方法的关键在于与受体患者免疫系统的兼容性，使得移植细胞可以被接受并在正常细胞一样地工作。
同种异体移植可以分为造血干细胞移植（HSCT）和器官移植两种。
HSCT是其中更为常见的一种。
在HSCT中，移植的细胞可以来自多个来源，包括骨髓、外周血干细胞和胎盘。
目前，同种异体骨髓移植是最常用的移植方法之一，常用于治疗患有白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等血液系统疾病患者。
HSCT也用于治疗肝、心、肺、肾等器官移植的并发症。
同种异体移植的优点是，它可以提供来自健康捐者的健康细胞，代替受体患者原有的病态细胞，从而有效治疗疾病。
HSCT可以重置患者的免疫系统，使其能够重新攻击病变细胞，提高治疗效果。
由于捐献者数量的增加，同种异体移植已经成为一种成本有效的治疗方式。
同种异体移植也存在一些风险。
面临着机体的排异反应风险。
移植物会被受体患者的免疫系统认定为外来物质，从而引发排异反应。
还存在移植后的感染和其他并发症的风险。
术后需要长时间的抗排异反应治疗，可能会影响患者的生活质量。
在进行同种异体移植前，需要仔细评估患者的病情和相关风险，并选择适当的干细胞来源和受体患者。
还需要引进新技术，以提高移植的成功率和降低副作用风险。
从适当的干细胞来源中选择最佳的干细胞，并将其与药物和造血因子等加以组合使用，以促进移植过程的成功。
同种异体移植在治疗一系列血液和免疫系统疾病方面表现出了良好的效果，并在治疗方案中得到了广泛的应用。
在未来，随着技术的推进和应用的不断扩大，同种异体移植将有望成为更加成熟和广泛的治疗手段。
文章编号(Article ID ):1009-2137(2005)01-0009-07・论著・异基因造血干细胞移植植活状态的变性高效液相色谱检测研究的首次报告王昱,潘凯枫,陆道培北京大学血液病研究所北京大学人民医院,北京100044摘要 异基因造血干细胞移植后动态检测供者嵌合状态对判断移植效果和实施临床早期干预治疗具有重要意义。
在临床上已有多种方法用于植活检测,本研究用变性高效液相色谱(DHPLC )技术结合聚合酶链反应扩增短串联重复序列(STR 2PCR )检测造血干细胞移植植活状态的特点及可靠性。
用非亲缘个体的系列DNA 混合体在体外检测此测定方法的可行性和半定量结果的准确性。
结果表明,体外模拟混合嵌合体检测实验,显示扩增前供者DNA 嵌合百分率与扩增后供受者DHPLC 色谱峰峰面积比值呈直线相关,最小检出DNA 百分比为5%。
用该方法分析51例移植对的结果显示:45例均至少有2个可以区分彼此的有信息位点(另外5例无移植前受者标本,1例为同卵双生双胞胎);39例与荧光标记多重PCR 扩增STR 结合毛细管电泳方法进行对照,准确性为100%;29例与性染色体FISH 分析,27例与特殊基因标记的分析结果一致;所有病例均检测到完全供者细胞嵌合状态(FDC );对3例患者观察到临床复发的同时,检测到供者嵌合体的比例明显下降,其中2例为混合嵌合体,1例转变为受者自身型。
在此基础上,我们将该方法首次用于对8例人类白细胞抗原(HLA )配型不同2单倍型亲缘供者干细胞及无血缘关系脐带血混合移植患者植活情况的动态检测。
结果显示,8例混合移植患者STR 2PCR 检测结果均为FDC ,来源均为亲缘供者。
结论:用DHPLC 技术结合短串联重复序列具有快速、经济、无污染和自动化高等特点,用于检测异基因造血干细胞移植物植活状态是可靠的。
关键词 异基因造血干细胞移植;短串联重复序列;变性高效液相色谱;嵌合体中图分类号 R457.7;R730.4文献标识码 AFirst R eport on Assessment of the Status of Engraftment After Allogeneic H ematopoietic Stem Cell T ransplantation by Using Denaturing High 2performance Liquid ChromatographyW A N G Y u ,PA N Kai 2Feng ,L U Dao 2PeiInstit ute of hematology ,The People Hospital of Peki ng U niversity ,Beiji ng 100044,Chi naAbstract Monitoring engraftment of donor cells after allogeneic hematopoietic stem cell trans plantation (allo 2HSCT )is supposed to be important for the early diagnosis of graft failure or relapse of malignancy.Several techniques have been re 2ported for this purpose.PCR 2based assays analyzing polymorphic short tandem repeats (STR )as markers are attractive because they are sensitive and can be performed rapidly.The intent of this study was to test a novel approach for assess 2ment of donor engraftment using denaturing high 2performance liquid chromatography (DHPLC )combined with STR 2PCR.The feasibility of this assay and the accuracy of semi 2quantitative results were tested in 2vit ro by using serial DNA mixtures from unrelated individuals.The results showed that dilution ex periments of the mock chimerism sam ple revealed a clear correlation between the percentage of donor or recipient DNA and the proportion of allele peak areas ,with the limit of detection for a minor DNA percentage being 5%.Discrimination between donor and reci pient was possible in all pa 2tients analyzed (n =51)except for 5patients whose pre 2transplant samples were not available and identical twins in one case.STR results were the same as values obtained b y capillary electrophoresis combined with fluorescence labeling multi 2ply PCR.Results were also com pared with data obtained with FISH analysis in a subgroup of patients receiving grafts from sex 2mismatched donors or with PCR 2detectable disease 2specific gene products analysis.The results of the microsatel 2lite analysis correlated well with the corres ponding clinical findings.Full donor chimerism (FDC )were detected in all pa 2tients ;decreasing values of donor chimerism were detected concomitantly with the appearance of relapse of disease in 3pa 2tients.Samples from eight patients receiving HLA mismatched 2haploidentical trans plants from related donors together with cord blood trans plants from unrelated donors were analyzed by this method.The results showed all 8patients achie 2ved FDC derived from related donors.It is concluded that this novel a pproach allows a rapid ,sensitive ,economical ,auto 2通讯作者:王昱,住院医师.电话:(010)68792788.E 2mail :ywyw3172@ 2004-03-03收稿;2004-10-26接受・9・中国实验血液学杂志 Journal of Ex perimental Hem atology 2005;13(1):9-15mated and non2isotopic STR2PCR testing,thus provides a reliable alternative for assessment of the status of en graftment after allo2HSCT.K ey w ords allogeneic stem cell trans plantation;short tandem repeats;denaturing high2performance liquid chromato2 graphy;chimerismJ Ex p Hem atol2005;13(1):9-15目前,临床上用于判断异基因造血干细胞移植(allo2 HSCT)植活状态的常规方法包括:观察外周血像恢复情况,分析红细胞血型转换,HLA分型,细胞遗传学改变,异常基因标记及微卫星DNA序列分析。
中国异基因造血干细胞移植治疗血液系统疾病专家共识(H)——移植后白血病复发(完整版)白血病复发是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)失败的主要原因之一。
国际骨髓移植登记组(CIBMTR)的资料显示，复发在非血缘和同胞相合移植后的死因中分别占33％和47%[1]。
北京大学血液病研究所的资料显示，单倍型和同胞相合移植后的复发相关死亡率在总体人群中分别为15.6％和16.7%[2]，在死因中分别占32％和42%。
移植后一旦复发预后很差，目前治疗选择仍然有限；各移植中心在处理移植后复发方面各自进行了探索。
本共识综合各移植中心的经验和临床研究，并参考国外文献，进行归纳总结，旨在对移植后白血病复发的诊断和处理原则进行推荐。
一、定义和分类根据复发时肿瘤负荷分为血液学复发、细胞遗传学和(或)分子生物学复发；根据肿瘤细胞来源可分为供者型复发和受者型复发；从复发部位上可分为髓内复发、髓外复发和髓内伴髓外复发。
指移植后完全缓解的患者外周血中又出现白血病细胞或骨髓中原始细胞＞5%或出现新的病态造血或髓外白血病细胞浸润。
2•细胞遗传学复发：指移植后已达细胞遗传学完全缓解的患者又出现原有细胞遗传学异常，或性别染色体由完全供者型出现受者一定比例的嵌合(比例界值尚无统一标准，且不等同于白血病细胞的增加)，尚未达到血液学复发的标准。
3•分子生物学复发：是近年硏究的热点指应用流式细胞术(FCM)和(或)聚合酶链反应(PCR)等分子生物学方法检测到特异或非特异分子生物学标志异常或超过一定界值、尚未达到血液学复发的标准。
参见以下微小残留病(MRD)判定标准。
二MRD检测(一)常用MRD检测方法1•染色体：G显带、R显带和(或)荧光原位杂交(FISH)分析证明有白血病细胞或肿瘤细胞特异的染色体易位和融合基因存在是检测MRD的标志技术。
FISH检测MRD的敏感度为10-2〜10-3，佥测结果阳性即表明患者体内有残留白血病细胞。
2・FCM:FCM检测的MRD为白血病相关免疫表型(LAIP)感度达10-4左右。
STR-PCR定量检测供受者嵌合体方法的建立及临床应用孙琪云;艾辉胜;姚波;余长林;郭梅;吕星;路萍【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2001(026)001【摘要】To establish a method for quantitative assessment of mixed hematopoietic chimerism by competitive polymerase chain reaction after nonmyeloablative allogeneic stem cell transplantation (NAST) using highly polymorphic short tandem repeats (STRs). The feasibility of this assay and the accuracy of quantitative results were tested using serial DNA mixtures of unrelated individuals. 2 patients receiving NAST were analyzed by this method. Chromosome was analyzed simultaneously. The results showed a linear correlation between the DNA added and the proportion found. Comparison of values obtained with chromosome analysis showed an excellent correlation with the STR-PCR results. Taken together, this novel approach allows a rapid, sensitive, versatile, less blood , even with minuscule numbers of cells,and also sex unlimited.%利用STRs的高度多态性等特性，用竞争性聚合酶链反应（PCR）结合聚丙烯凝胶电泳、染色和凝胶成像分析等技术，建立定量检测异基因造血干细胞移植后供受者嵌合体的方法，用无关个体的DNA混合实验进行可行性和准确性研究，并同时做染色体分带进行对照。
