沉降式制片技术与改良抗酸染色法应用于脑脊液找抗酸杆菌的分析

基层医学论坛2018年2月第22卷第4期【摘要】目的分析沉降式制片技术与改良抗酸染色法相结合用于脑脊液找结核杆菌的效果。方法取临床疑似结核性脑膜炎患者的脑脊液，分别采用沉降式制片技术结合改良抗酸染色法（试验组）和传统涂片染色法（对照组）进行检验。结果共收集36例临床疑似结核性脑膜炎患者的脑脊液，通过沉降式制片技术结合改良抗酸染色法检出抗酸杆菌者33例，阳性率为91.6%；而传统涂片法检出抗酸杆菌9例，阳性率为25%，两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论沉降式制片技术结合改良抗酸染色法可收集更多细胞成分，使制片固定更加完整，结核抗酸杆菌检出率明显高于传统涂片法。【关键词】脑脊液结核抗酸杆菌沉降式制片技术改良抗酸染色Sedimentationtypeproductiontechnologyandimprovementofacidfaststainmethodappliedtotheanalysis

ofcerebrospinalfluidforacidfastbacilliZengJiang，PengHaiying，ZhuJunfang，etal.TheFifthPeople'sHospitalofGanzhouCity，Ganzhou，Jiangxi341000【Abstract】Objectivethroughsedimentationtypeproductiontechnologywithmodifiedacidfaststainmethod，observethecerebrospinalfluidofmycobacteriumtuberculosisdetectionrateishigherthanthatofconventionalsmearmethod，soastofindoutawaytoimprovethedetectionrateofn/medtuberculosisbacili，inordertoimprovetheearlydiagnosticrateinpatientswithtuberculousmeningitis.Methodsclinicalsuspectedpatientswithtuberculousmeningitiscerebrospinalfluid，respectively，thesedimentationtypeproductiontechnologycombinedwithmodifiedacidfaststainmethod（experimentalgroup）andconventionalsmearstainingtest（controlgroup）.ResultsintheexperimentofthecommunistpartyofChinatocollectcerebrospinalfluidof36patientswithclinicallysuspectedtuberculousmeningitis，throughsedimentationtypeproductiontechnologycombinedwithmodifiedacidfaststainmethoddetectionacidbacillus33cases，positiveratewas91.6%，whiletraditionaldetection，9caseswhichacidfastbacillismearmethod，positiveratewas25%，thechi-square，chi-square=32.9，P=0.000.Conclusionsedimentationproductiontechnologycombinedwithmodifiedanti-acidstainingmethodcancollectmorecellcomponents，maketheproductionmorecomplete，andthedetectionrateofanti-acidbacilliishigherthanthatoftraditionalsmearmethod.【KeyWords】CerebrospinalfluidAcidbacillustuberculosisSedimentationtechniqueImprovedanti-acidstainingDOI：10.19435/j.1672-1721.2018.04.056

沉降式制片技术与改良抗酸染色法应用于脑脊液找抗酸杆菌的分析曾江彭海英朱俊芳刘明山杨建林（赣州市第五人民医院，江西赣州341000）

结核杆菌为分枝杆菌属，传统的查找抗酸杆菌方法有厚涂片、薄涂片、漂浮法集菌涂片和培养法等[1，2]。传统脑脊液找抗酸杆菌方法为涂片法，该方法因其快速、简便、费用低，已常规应用于实验室脑脊液找抗酸杆菌中[3]。有报道结核性脑膜炎脑脊液用改良抗酸染色阳性率高达88.57%[4]，用聚乙二醇辛基苯基醚对脑脊液细胞进行破膜处理后可使细胞内的抗酸杆菌检出[5]，利用沉降式制片技术可使制片更加完整且大小规范[6]，本文就沉降式制片技术与改良抗酸染色相结合在脑脊液找抗酸杆菌中的应用进行研究，汇报如下。1材料与方法1.1实验标本收集研究对象入选标准：①包含以下一个或多个脑膜炎症状：头痛、易激惹、发热、颈强直、意识状态改变或嗜睡；②患者资料齐全。自2016年6月—2017年5月共收集脑脊液标本36例，其中男22例，女14例，年龄6岁~70岁，平均年龄（29.5±8.56）岁，对每份标本同时做沉降式制片技术结合改良抗酸染色和传统涂片法进行抗酸杆菌检查。1.2仪器与试剂1.2.1主要仪器：LBP-2801沉降式制片染色机、OLYMPUSCX41；1.2.2试剂：Tris缓冲液，1，4-二硫代苏糖醇、Trion-x100、石碳酸复红溶液、盐酸乙醇溶液、吕氏美蓝溶液。1.3传统涂片方法染色1.3.1脑脊液离心沉渣涂片。1.3.2抗酸染色：初染石碳酸复红；盐酸乙醇脱色，冲洗；吕氏美蓝复染。1.4沉降式制片技术与改良抗酸染色1.4.1脑脊液离心处理：脑脊液标本2600转/min离心

基金项目：赣州市卫生和计划生育委员会科研计划项目（2016-2-34）作者简介：曾江，男，本科，主管技师。

医技与临床525基层医学论坛2018年2月第22卷第4期慢性鼻窦炎鼻窦CT的评估分类标准

张良春张虎吉李国祯（贵州省第二人民医院，贵州贵阳550001）

5min，去上清液。1.4.2沉降制片：将离心去上清液后的标本转移至LBP-2801沉降式制片染色机待检位上，将黏附载玻片放置于染色板上，扣上制片染色舱。1.4.3用自动样本转移机将去上清液的标本转移至染色舱内，沉淀40min，制成13mm的圆形玻片后进行破膜处理，手工滴加0.5%Trion-x100，加入量覆盖制片染色舱即可。1.4.4抗酸染色：按设定好的染色时间及顺序进行抗酸染色。1.5统计学方法应用SPSS21.0统计学软件进行数据分析，计数资料采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果制片及染色效果比较：沉降式制片与改良抗酸染色，细胞收集量较多，混杂的不同细胞成分均出现，染色深，制片大小、厚薄均匀一致。传统方法制片有形成分较少，有杂质的干扰，大小不一致且有分层。结果分析：本次实验所收集的36例脑脊液标本中，沉降式制片结合改良抗酸染色检出抗酸杆菌的阳性标本33例，阴性标本3例，阳性率为91.6%；传统涂片技术检出抗酸杆菌阳性标本9例，阴性标本27例，阳性率为25%，两者比较差异有统计学意义（字2=32.9，P=0.000）。表明沉降式制片技术与改良抗酸染色相结合脑脊液抗酸杆菌的检出率高于传统涂片技术的检出率。3讨论结核性脑膜炎是由结核分枝杆菌引起的脑膜和脊膜的非化脓性炎症性疾病，严重时可侵犯脑血管、脑实质和脊髓，有非常高的致残率和致死率。因此结核性脑膜炎的早期诊断对于患者来说极其重要，及时的抗结核治疗可以改善患者预后[7]。目前脑脊液抗酸染色阳性是结核性脑膜炎的确诊标准之一[8]，传统涂片制片技术受操作等多方面因素的影响，结果容易出现假阳性或假阴性[9]；沉降式制片技术与传统涂片相比，收集的细胞成分较多，杂质少，染色鲜艳，细胞分布均匀，制片大小一致、厚薄均匀，避免了人为的差异，易于在显微镜下找抗酸杆菌，容易标准化[1，10]。而改良抗酸染色与传统涂片染色相比，应用Trion-x100对细胞进行破膜处理，溶解结核杆菌细胞壁的脂质，增加染色剂对细胞壁的通透性，不仅对细胞外抗酸杆菌着色，对于细胞内的抗酸杆菌也可着色，并可以发现淋巴细胞吞噬现象，结核杆菌的检出率明显高于传统涂片染色[4，11，12]。在本次研究中，沉降式制片技术联合改良抗酸染色脑脊液抗酸杆菌的检出率为91.6%，明显高于传统涂片法的25%，差异具有统计学意义（P<0.05）。因此，将沉降式制片技术与改良抗酸染色相结合，可以提高脑脊液抗酸杆菌的检出率，对结核性脑膜炎的早期诊断起到关键作用，进而指导临床实施早期治疗。参考文献[1]曾江，罗一钧，彭海英.沉降式制片技术在痰找抗酸杆菌中的应用[J].实验与检验医学，2014，32（6）：746-747.[2]李宁，伍严安，胡辛兰，等.液基薄层细胞学涂片快速检测痰病原菌价值[J].实验与检验医学，2013，31（3）：214-216.[3]陈华根，陈宇宁，刘冰，等.抗酸染色技术在结核病诊断中的应用[J].

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