南五味子中粗多糖提取与总糖含量测定(精)

茯苓多糖的提取及含量测定目的:建立茯苓多糖的含量测定方法。

方法:用水提醇沉法提取茯苓多糖,酚-硫酸法紫外分光光度法测定茯苓多糖的含量。

一、仪器与试药1、仪器：UV2754 紫外分光光度计2、试剂与样品样品：云苓、葡萄糖对照品苯酚、浓硫酸（1）5 %苯酚试剂的配制取苯酚加热蒸馏收集182 ℃的馏分,吸取此馏分10ml 加水至200ml 置棕色瓶内,放冰箱备用。

（2）对照品溶液的配制精密称取105 ℃干燥恒重的葡萄糖50mg 加水溶解并定容至1000ml 量瓶中,即得。

（3）供试品溶液的配制精密称取茯苓提取物50mg ,加水溶解并定容至500ml 量瓶中,过滤,滤液备用,即得。

二、提取准确称取茯苓500g ,切成碎片,加入4～6 倍量的水,回流提取 3 次,时间分别是3 ,2 和1h。

合并 3 次提取液滤过,除去不溶性杂质,得2000ml 滤液。

取600ml减压蒸馏浓缩成76ml ,在搅拌下加入乙醇,使含醇量达到80 % ,静置12h ,离心,收集沉淀,加蒸馏水60ml 溶解煮沸,趁热滤除不溶物,滤液在搅拌下再加入乙醇,使含醇量达到80 % ,放置,析出褐色沉淀后,低温干燥,即得茯苓多糖粗品。

3、吸收波长的选择精密吸取对照品溶液1. 0ml ,和供试品溶液1. 0ml ,分别置于20ml 的试管中,各精密加入5 %的苯酚液1. 0ml ,然后缓慢精密加入 5. 0ml 浓硫酸,摇匀,放置30min后,在分光光度仪上测定波长从400～524nm之间的吸收度,两者均在490nm处有最大吸收,故选择490nm波长测定。

4、重现性实验分别吸取对照品溶液0. 5ml 5 份置试管中,同前操作,吸光度为:0. 614 ,0. 612 ,0. 614 ,0. 613 和0. 615 ,结果RSD = 0. 199 %( n = 5) 。

5 、样品含量测得吸取供试品溶液 1. 0ml 3 份,分别置于20ml 试管中,加入5 %苯酚溶液2. 0ml ,混合后加入浓硫酸6. 0ml ,放置30min ,在490nm处分别测得其吸收度 A 值:A1 =0. 871 ,A2 = 0. 872 ,A3 = 0. 876 ,根据回归方程求出百分含量为74. 16 % , 74.27 %和74. 62 % , 平均含量74. 35 %。

中华芦荟多糖提取和粗多糖中总糖的含量测定
毕肖林;郭胜伟;狄留庆
【期刊名称】《南京中医药大学学报》
【年(卷),期】2005(21)4
【摘要】贝克曼高速冷却离心机，752型可见分光光度计，旋转蒸发仪和榨汁机。

【总页数】1页(P269-269)
【作者】毕肖林;郭胜伟;狄留庆
【作者单位】南京中医药大学新药及海洋药物研究中心,江苏,南京,210029;南京中
医药大学研究生部,江苏,南京,210029;南京中医药大学新药及海洋药物研究中心,江苏,南京,210029
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
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5.白鲜皮粗多糖提取与总糖含量测定 [J], 李淑惠;纪耀华;崔玉辉;靳丹虹
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粗多糖的检验方法（卫生部内统法）1.方法原理食品中高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中水溶性粗多糖含量。

2.检测设备和材料本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。

2.1.乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80ml，混匀。

2.2.氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L,加入固体硫酸钠至饱和，备用。

2.3.铜储备液：称取3.0gCuSO4 5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解稀释至1L，混匀，备用。

2.4.铜试剂溶液：取铜储备液50ml，加水50ml，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。

临用新配。

2.5.洗涤剂：取水50ml，加入10ml铜试剂溶液：10ml氢氧化钠溶液，混匀。

临用新配。

2.6.硫酸溶液（10%）：取100ml浓硫酸加入到800ml左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。

2.7.苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。

溶液置冰箱中可保存一月。

2.8.葡聚糖标准储备溶液：精密称取相对分子质量5X10²干燥至恒重的葡聚糖标准0.5000g，加水溶解，并定容至50ml，混匀，置冰箱中保存。

此溶液每1ml含10.0mg葡聚糖。

2.9.葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。

此溶液每1ml含葡聚糖0.10mg。

2.10.分光光度计2.11.离心机（3000r/min)2.12.旋转混匀器3.样品收集和准备3.1.试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g,置于100ml容量瓶中,加水80ml左右,于沸水浴上加热2h,冷却至室温后补加水至刻度,混匀后,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供沉淀多糖。

粗多糖含量测量：1、称量0.2克的短序落葵薯的根粉末，加水4ml，100摄氏度水浴4小时。

2、4000转每分离心10min，将上清液全部转入另一个新管中（约3ml），加入7ml无水乙醇进行醇降，5000转每分离心10min，倒掉上清液，向每管中加入5ml无水乙醇，震荡起沉淀，然后5000转每分离心10min，倒掉上清，放入烘箱烘干。

3、向每个试管中加入6ml的蒸馏水，放入水浴锅中溶解，用sevag法除蛋白，加入氯仿和正丁醇混合液2ml（氯仿：正丁醇=4:1），5000转每分离心10min，通过几次预试实验后，确定所用多糖溶液的量为10ul，进行测量，具体方法如下：硫酸酚法：1）葡萄糖标准液的配制2）准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，用蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。

3）2）苯酚液的配制4）准确移取苯酚6 mL，蒸馏水定容至100 mL，即得6％苯酚液，棕色瓶中避光保存。

表1 标准曲线的制作步骤取8支干净的具塞试管按表2方法操作,摇匀后放置5 min,置沸水浴中加热15min,取出迅速冷却至室温,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处测定吸光度。

以葡萄糖浓度Y 为纵坐标（ug/mL），吸光度X为横坐标，从而来绘制标准曲线。

用exceL软件求得回归方程。

计算百分含量：百分含量=L*600*10^（-6）/0.2蒽酮法：1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为纵坐标，光密度值为横坐标，作出标准曲线。

样品含量测定：百分含量= L*600*10^（-6）/0.2。

苯酚-硫酸显色光度法测定五味子多糖徐小娜;蒋军辉;黄海龙【摘要】测定了五味子多糖的含量,探讨了不同品种的五味子在总多糖含量上的差异.采用单因素实验对五味子多糖进行超声辅助提取,采用苯酚-硫酸显色光度法测定多糖的含量.结果显示:辽宁五味子多糖的含量为32.10 mg/g,湖北五味子多糖的含量为19.27 mg/g.其余5个不明产地的药材,其多糖的含量处于9.43～ 23.13mg/g之间.辽宁五味子中多糖的含量比湖北五味子的高,差异达到显著水平,其余不明产地的5个五味子样品,其多糖含量都比辽宁五味子的低,且仅有一个样品的多糖含量比湖北五味子的高.所得结果可为五味子多糖的深入研究提供参考.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2014(042)009【总页数】3页(P111-112,122)【关键词】五味子;多糖;苯酚-硫酸【作者】徐小娜;蒋军辉;黄海龙【作者单位】南华大学公共卫生学院,湖南衡阳421001;南华大学化学化工学院,湖南衡阳421001;南华大学公共卫生学院,湖南衡阳421001【正文语种】中文【中图分类】R282.5五味子(schisandra chinesis(Turcz)．Bail1)为木兰科植物五味子的干燥成熟果实，味酸、性甘温，归肺、心、肾经，具有收敛固涩、生津止渴、宁心安神、兴奋呼吸、调节血压、增强视力及改善智力活动等多种功效。

临床上常用于久咳虚喘、遗尿尿频、久泻不止、自汗盗汗、津伤口渴、内热消渴、心悸失眠等症［1］。

产于我国东北地区如辽宁、吉林，习称北五味子;产于华中地区如湖北、江西，习称南五味子［2］。

挥发油、木脂素和多糖为其主要活性成分［3］。

有研究报道，五味子多糖具有调节免疫、抗肿瘤、抗氧化、调血脂、降血糖、抗衰老等多种药理作用［4-6］。

本实验利用超声波辅助提取技术，提取不同来源的五味子总多糖，采用苯酚-硫酸显色光度法测定，为研究五味子多糖的深入研究提供实验依据。

粗多糖含量测定方法学研究资料一、仪器与试药 (1)二、方法的研究 (2)1.检测波长的测定 (2)2.样品及对照制备方法 (2)三、方法学验证 (3)1.线性 (3)2.精密度实验 (4)3.稳定性实验 (4)4.重复性试验 (5)5.中间精密度实验 (5)6.准确度试验 (6)芪参颗粒粗多糖含量测定方法起草说明标志性成分粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，该方法的原理是：多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基呋喃糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其显色强度与溶液中糖的浓度成正比，在625nm波长下比色测定。

主要研究资料如下：一、仪器与试药1、仪器(1) 离心机（湘南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号TD25-WS）；(2) 离心管：50ml；(3) 水浴锅（上海精宏实验设备有限公司，型号 DK-S26）；(4) 旋涡混合器（DioCote，SA8）；(5) SHIMADZU UV-1800 紫外可见光分光光度计；(6) JB760-68 石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器有限公司）；(7) TU-1901 双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；2、试药(1) 葡萄糖：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；(2) 无水乙醇：西陇化学股份有限公司，分析纯，批号为160802 1；(3) 蒽酮：国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号为；(4) 硫酸：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；(5) 葡萄糖标准液：标准称取干燥恒重的分析纯级葡萄糖，加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（ml）。

(6) %蒽酮硫酸溶液（W/V）：准确称取蒽酮置于烧杯中，缓缓加入100ml 80%硫酸溶解，溶解后呈黄色透明溶液。

现用现配。

3、试样v1.0 可编辑可修改(1) 样品颗粒：XXXXX 有限公司提供。

附录C（规范性附录）：多糖含量测定方法
C.1 粗多糖的提取
称取生命PACK产品中棕色胶囊内容物和白色胶囊内容物5g精密至0.0001g，置圆底烧瓶内，加入100毫升的水，回流提取4小时，乘热过滤，再重复上述实验1次，合并滤液，加热浓缩，用80%乙醇醇沉过夜，离心干燥，称重，即得粗多糖样品。

C.2 标准曲线的制备
称取105˚C干燥至恒重的无水葡萄糖60mg，精密至0.0001g，至100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度（每1ml中含无水葡萄糖0.6mg）。

精密吸取该溶液0.1,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0ml，分别置50ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。

精密吸取上述各浓度的标准溶液2ml，于具塞的试管中，加入4%苯酚 1.0ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0ml，摇匀，于40˚C水浴中保温30分钟后，移至冰水浴中，放置30分钟，取出后于490nm处，测定吸光度A（以第一份为空白）。

以吸光度为纵坐标，标准品浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。

C.3 样品多糖浓度的测定
取D.1中制得的样品5mg于5ml容量瓶中，加水并定容，取1ml样品加1ml水于具塞的试管中，以后操作同标准曲线方法，测得的吸收度，由回归曲线（A=0.0444+0.0121C）计算出相当于葡萄糖的浓度。

C.4 样品多糖浓度的计算
F×f×c
多糖含量（%）= ×100
G
F为稀释倍数f为换算因子（f=1）C为样品多糖相当于葡萄糖的含量（μg/ml）G为样品溶液对应的原料的质量。

主要参考标准及文献：
《中华人民共和国药典》2000版
丰朝霞等，分光光度法测定茯苓中多糖总糖含量。

2.粗多糖的测定2.1 原理：样品中多糖经沸草酸水溶液提取，乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及其杂质，在硫酸沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基糖醛），再与蒽酮缩合生成蓝色化合物，以比色法求其含量。

2.2 试剂除特殊注明外，本方法所用试剂均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。

2.2.1无水葡萄糖2.2.2 乙醇2.2.3 蒽酮2.2.4 浓硫酸2.2.5 葡萄糖标准液：精密称取经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖1.0000g，加水溶解后定容至1000ml，此溶液葡萄糖含量为1mg/ml。

用前稀释10倍（0.1mg/ml），现用现配。

2.2.6 0.2%硫酸蒽酮溶液：取蒽酮0.2g，加浓硫酸100ml使溶解即得，贮于棕色瓶中。

临用新配。

2.3 仪器2.3.1 分光光度计2.3.2 离心机：4000r/min.2.3.3 水浴锅2.4 标准曲线的绘制：精密量取葡萄糖标准液（0.1mg/ml）0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0ml于具塞比色管中，加水至1ml，加入蒽酮试液5.0ml，摇匀，置沸水浴中加热10min，取出，自来水冷却至室温，静置30min，在620nm 波长处测定吸光度值，绘制标准曲线。

2.5供试样品溶液制备：准确称取均匀研碎的样品粉末2.5g，置于100ml的离心瓶中，加15ml热水，在沸水浴中加热30min后过滤，定容。

取此溶液15ml，加75ml无水乙醇搅拌均匀。

在离心机中以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液，再加15ml热水（温度＞90℃）冲洗离心瓶中沉淀物，或用1.5ml热水冲洗离心管中沉淀物，重复一次后再以4000r/min离心10min，小心地用吸管将上层液体吸去。

用玻璃棒将沉淀物取出并转移至500ml酸水解瓶底部，取50ml热水（温度＞90℃），其中部分用来冲洗离心瓶中剩余的沉淀物，将沉淀物一并转移至500ml酸水解瓶中，加入15ml浓盐酸于酸水解瓶中，开启冷凝水，在沸水浴中加热2h，然后转移至100ml容量瓶中，加水定容。

佛手粗多糖的提取及总糖的含量测定【摘要】本文采用水提醇沉法从佛手中提取粗多糖，硫酸-苯酚法测定佛手粗多糖中总糖的含量，结果表明佛手中粗多糖回收率为28．33%，总糖的含量为95．21%，平均回收率为100%，RSD=1．30。

【Abstract】The content of total polysaccharide in the coarse polysaccharide extraction from foshou was determined with phenol-sulfuric acid method.The results showed that the coarse polysaccharide extraction was 28．33%and the content of total polysaccharide was 95．21%.The average recovery was 100．11%.RSD=1．30.【Key words】Foshou;Polysaccharide;Phenol-sulfuric acid method;Content determination佛手为芸香科植物佛手的干燥果实，具有舒肝理气、和胃止痛的功效[1]。

其中含有多种化学成分，近年来的药理实验研究表明，佛手糖能提高机体免疫力[2]，但佛手粗多糖中总多糖的含量尚未见报道，本文仅对水提醇沉法所得佛手粗多糖中总糖进行含量测定。

1 仪器与药品1．1 仪器TU1901双光束紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器责任有限公司)。

1．2 材料佛手购自长春市药材公司。

1．3 试剂葡萄糖标准品(上海试剂三厂)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果2．1 佛手粗多糖的提取取佛手药材用90%乙醇浸泡后渗漉，然后将剩余药渣用水煎煮3次，过滤，合并3次滤液，浓缩至浸膏状，加乙醇放置过夜，抽滤，将沉淀分别用95%乙醇、丙酮和乙醚洗涤，即得佛手粗多糖，产出率约为28．33%。