山茶花粉生活力及贮藏条件初探

实验三花粉的贮藏和生活力测定一、目的和要求在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。

花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。

从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。

因此不适宜做授粉品种。

本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。

二、花粉及用具材料：桃或苹果树的花粉。

用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。

三、方法（一）花粉贮藏从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。

再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。

（二）花粉生活力试验1、花粉发芽法人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。

（1）培养基的制作与接种一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。

加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。

轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于20℃的恒温箱中培养。

（2）观察记数在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发芽百分率。

花粉生活力测定方法研究进展摘要:总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。

关键词:花粉花粉活力测定方法花粉是高等植物的雄性配子体,在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。

花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象,也是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理实验的重要材料。

花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能力。

在农业生产及农业常规杂交育种的中,研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础性工作。

农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难,为解决这一难题,保存花粉的活力成为重要手段,而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。

不同种类植物花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。

因此,掌握花粉活力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。

综合前人的研究结果,花粉生活力的检测方法可以分为四大类:①染色法;②萌发测定法;③田间授粉检测法;④形态测定法、无机酸检测法。

1染色法1.1TTC 染色法TTC 即 2,3,5-氯代三苯基四氮唑,它是一种氧化还原染料,水溶液无色。

基本原理是 [1]:当 TTC 渗入细胞后, 遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子,由无色的氧化型变成红色还原型不溶于水的化合物,由此来判断花粉的生活力。

具体操作步骤:①配制 PH 为 7.17的磷酸缓冲液。

称取 0.832克磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾溶于 100ml 的蒸馏水中,调整 pH 为 7.17。

② TTC 溶液配制。

依据不同植物称取 0.02~1.0g 的 TTC 溶于 100ml 的磷酸缓冲液中, 于棕色瓶中黑暗处保存。

③染色。

取少量花粉置于载玻片上,加上一滴 TTC 溶液,用镊子搅拌均匀,盖上盖玻片,然后放置于 35℃的恒温箱中染色 15~20min 。

④镜检。

于 10×10倍镜下观察,凡具有活力的花粉被染成红色,部分丧失活力的呈现粉红色,无色的是的或不育的花粉粒。

3种油茶植物花粉贮藏及生活力的研究黄永芳;吴雪辉;何美儿;丁健;安星【期刊名称】《福建林学院学报》【年(卷),期】2011(031)001【摘要】对普通油茶、越南油茶和广宁红花油茶3种油茶植物花粉的贮藏条件、萌发培养基、培养温度以及不同贮藏条件和不同贮藏时间对花粉生活力的影响进行研究.结果表明,不同油茶植物在不同贮藏条件下,花粉生活力差异较大,随贮藏时间的延长,花粉生活力呈明显的下降趋势.在低温和冷冻干燥条件下贮藏的花粉生活力下降缓慢,其中以冷冻干燥贮藏的下降速度最慢;在室内自然温度下贮藏的花粉生活力下降很快,大部分花粉生活力在贮藏10 d后基本丧失.不同油茶植物的花粉适宜培养温度为20 ℃,萌发的适宜培养基为0.01%硼酸+0.03%硝酸钙+0.02%硫酸镁+0.01%硝酸钾+15%蔗糖+1%琼脂.%Three oil-tea species including: Camellia oleifera, C. vietnamenisis, C. semiserrata were selected for the studies on the best conditions of pollen storage, suitable culture medium, culture temperature for pollen germination, and the effects of different conditions and different time for pollen storage on pollen viability. The results were summarized as follows: the difference in oil-tea pollen viability under different storage conditions was significant, the longer the storage time, the lower the pollen viability. The pollen viability changed with the storage conditions and time in a different way. The pollen viability in the frozen ( - 20 ℃ ) conditions decreased slowest, which kept a high level of viability after three month. The pollen viability under natural conditions decreasedrapidly fast, which reached 0 after 10 days. The most suitable germination temperature for pollen was 20 ℃, and the most suitable culture medium was 0.01％ HBO3 +0.03％Ca( NO3 ) 2 · 4H2O +0.02％MgSO4 · 7H2O+0.01％ KNO3 + 15％ sucrose + 1％ agar.【总页数】4页(P56-59)【作者】黄永芳;吴雪辉;何美儿;丁健;安星【作者单位】华南农业大学林学院,广东,广州,510642;华南农业大学食品学院,广东,广州,510642;华南农业大学林学院,广东,广州,510642;华南农业大学林学院,广东,广州,510642;华南农业大学林学院,广东,广州,510642【正文语种】中文【中图分类】S727.32【相关文献】1.不同培养基及贮藏条件对山梅花属植物花粉生活力的影响 [J], 刘赢男;周丹;刘玮;李长海;宋莹莹2.三种忍冬属(Lonicera)植物花粉贮藏及生活力的测定 [J], 王丽瑛;王雪莲;张洮;彭俊3.两种鸢尾植物花粉生活力和贮藏相关性研究 [J], 陈炜;李海燕;覃燕4.油茶花粉特性及其不同贮藏条件下生活力的研究 [J], 袁德义;谭晓风;胡青素;邹峰5.茶组植物花粉生活力测定及种间杂交研究 [J], 杨盛美;宋维希;唐一春;马玲;汪云刚;成浩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

实验四花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。

为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。

因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术。

（为什么贮藏花粉？）一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。

二、实验材料油松、辣椒、一串红、矮牵牛、油茶、油菜等植物的花粉。

三、仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、毛笔、干燥器、小指形管、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、滴管、玻璃棒、量筒、电炉、石棉网、冰箱；凡士林、无水氯化钙、蔗糖、琼脂、蒸馏水、硼酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、碘、碘化钾、氯化二苯基四氮唑（TTC ）。

四、实验原理花粉在低温（0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。

花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低（呼吸）、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。

鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。

此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。

也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。

2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。

此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。

3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（0.3g 碘＋1.3g 碘化钾溶于100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力（不太准，比如刚死的花粉）。