下载文档原格式
生物资源2020,42(6 ):660〜669Biotic ResourcesDOI ： 10. 14188/j. ajsh. 2020. 06. 007中国7所高校校园大型真菌多样性研究进展张健T，艾小迪T，陈美倩，再雪芳，杨云礼(贵州大学生命科学学院，贵州贵阳550025)摘要：大型真菌是校园生态环境中t要的生物组分，优美的校园生态环境通常孕育着较高的生物多样性对我国7所髙 校校园大型真菌资源多样性研究进行了综述，校订了已报道文献中校闶大型真菌的物种名录，对校园大型真菌资源的研究、保 育、利用与科普等方面提出了展望，以期为校园大型真菌的生态管理提供科学依据关键词：大型真菌；多样性；校园环境中图分类号：Q958. 116 文献标识码：A 文章编号：2096-3491(2020)06-0660-10Research advance of m acrofungal diversity in seven university campus of ChinaZHANG Jian , AI Xiaodi" , CHEN Meiqian, RAN Xuefang, YANG Yunli(C'ollege of Life Sciences, Guizhou University, (iuiyang 550025, (iuizhou, China)Abstract ：M acro fungi are important biological components in campus ecological environm ent. In this paper, studies on macrofungal resource diversity in C'hina's university campus are reviewed. T he calalogues of macrofungi in the cam pus have been revised. T he research, conservation, utilization and popular science on macrofungi in the campus have been prospected to provide scientific basis for macrofungal ecological management in the campus.K eyw ords: m acrofungus；diversity；campus environment〇引言真菌是生物界中物种数量第二位的生物类群，它的细胞壁含几丁质，细胞不含叶绿体，是以孢子进行繁殖的真核生物1大型真菌泛指蘑菇或蕈菌，-般指有“肉眼可见，徒手可摘”的子实体、子座、菌 核或菌体的一类高等真菌，主要分为寄生、腐生或共生三类营养方式21:大型真菌在生态系统中物质与能M循环、生物多样性、维持和恢复生态环境等方面意义重大，在食用、药用等方面开发利用的潜力巨大^。
真菌多样性与组成的分析方法研究随着人们对于微生物的认识逐渐深入，真菌作为一种重要的微生物，在生态系统中的地位也越来越重要。
真菌是一类可以在各种生境中生长繁殖的生物，它们可以以植物、动物、泥土、水体等为生存的依托，扮演着重要的角色。
在自然界中，真菌对于生态系统的维持和稳定性发挥着不可替代的作用。
同时，真菌的多样性也是人类认识和探究自然界的珍贵资源。
因此，对于真菌多样性与组成的研究事关人类未来的可持续发展。
一、真菌多样性的意义真菌是一类进化历史悠久、数目庞大、种类繁多的微生物，它们在生态系统中扮演着重要的角色。
首先，真菌是生物圈中最早形成的微生物之一，可以将死亡的有机物质分解，将碳、氮、磷等元素重新释放到生态系统中，维持着生态系统的稳定性。
其次，真菌还可以与植物形成共生，促进植物生长发育，扩大了植物的分布范围。
再次，真菌也能够直接或间接地为人类提供食物、药物等资源。
比如，人类的面包、啤酒、奶酪等都是由酵母等真菌发酵制成的。
此外，真菌还是许多药物的来源之一，比如青霉素等抗生素就是由红曲霉等真菌分泌而成。
由此可见，真菌多样性的研究是十分必要的。
二、真菌分析方法的种类及原理1. 基于形态的分析基于形态的分析是指通过观察真菌的形态、色泽、大小、结构等特征来进行的真菌分类研究方法。
这种方法适用于分离出的真菌数量较少且具有明显的形态特征的情况。
不过，这种方法的局限性在于可能会出现形态相似的不同种真菌的情况，从而误导分析结果。
2. 基于分子生物学的分析基于分子生物学的分析是通过真菌的基因序列信息来进行分类研究的方法。
这种方法可以通过分离真菌的DNA或RNA并进行测序，从而获得真菌的基因组信息。
基于这种方法，研究人员可以准确地分辨出不同物种之间的区别，还可以探究真菌的进化历程和群体遗传学等方面的问题。
这种方法优点是高效、准确、可重复性强。
3. 基于生态位的分析基于生态位的分析是通过对真菌所处生态位的描述、分析和比较来进行分类研究的方法。
药用植物内生真菌研究现状和发展趋势一、本文概述药用植物内生真菌是一类在植物组织内部定居，而不引起明显病害的真菌。
这些真菌与宿主植物之间形成了复杂而微妙的共生关系，对药用植物的生长发育和次生代谢产物的产生具有重要影响。
近年来，随着生物技术的发展和人们对药用植物资源的深入开发利用，药用植物内生真菌的研究逐渐成为一个热点领域。
本文旨在综述药用植物内生真菌的研究现状，包括内生真菌的多样性、生物活性物质的发现与应用、以及内生真菌与宿主植物的相互作用机制等方面，并探讨其未来的发展趋势。
通过对药用植物内生真菌的深入研究，我们可以更好地理解和利用这一自然资源，为新药创制和农业可持续发展提供新的思路和方法。
二、药用植物内生真菌的多样性药用植物内生真菌的多样性表现在多个层面，包括种类多样性、生态多样性和功能多样性。
在种类多样性方面，药用植物的内生真菌涵盖了多个属和种，这些真菌与宿主植物之间形成了复杂而稳定的共生关系。
例如，某些药用植物中的内生真菌可能属于子囊菌门、担子菌门或半知菌门等多个门类。
这些真菌种类的多样性不仅反映了植物与微生物之间的相互作用，也为开发新型药物和生物活性物质提供了丰富的资源库。
在生态多样性方面，药用植物内生真菌在植物的不同组织、器官和生长阶段中分布广泛，它们可能存在于叶片、茎干、根部甚至花器中。
这些内生真菌对宿主植物的生长和发育具有重要的促进作用，如提高植物对逆境的抵抗力、促进植物生长等。
不同地理分布的药用植物中的内生真菌也具有显著的生态差异，这种生态多样性为研究和利用内生真菌提供了丰富的选择。
功能多样性是药用植物内生真菌多样性的另一个重要方面。
许多研究表明，药用植物内生真菌具有产生多种生物活性物质的能力，如次生代谢产物、酶和抗生素等。
这些物质在植物防御机制、抗病虫害以及药用价值等方面发挥着重要作用。
一些内生真菌还具有合成特殊代谢产物的潜力，这些代谢产物在医药、农业和生物技术等领域具有广阔的应用前景。
微生物物种多样性研究进展微生物是分布最为广泛的生命形式，几乎分布到地球上的所有生境，可利用各种有机化合物、无机盐等作为能源，在有氧或无氧条件下，在寒冷的极地、高达100℃的热泉或高盐碱度等极端环境中生活。
微生物具有丰富的物种和遗传多样性，并以高度的变异性适应不同的生境。
作为生态系统中的重要组分，微生物在自然界的物质与能量循环、生态系统的演替以及生物多样性的维持中发挥重要的生态功能。
微生物与人类的生活休戚相关，在直接或间接地为人类提供了极其丰富的物质资源的同时，也为人类带来了巨大危害。
Woese和Fox(1977)以核糖体RNA(rRNA)的小亚基(原核生物的16S、真核生物的18S基因)序列为依据，提出了独立于真细菌(Eubacteria)和真核生物 (Urkaryotes) 之外的第三种生命形式——古菌 (Archaea)，认为它和真核生物以及真细菌是从一个具有原始遗传机制的共同祖先分别进化而来。
随后 Woese等(1990)提出了三域(Domain)分类系统，将地球上的生物分别归为细菌域(Domain Bacteria)、古菌域 (Domain Archaea)和真核生物域(Domain Eukarya)，其中古菌在进化谱系上更接近真核生物，但在细胞构造上与细菌较为接近，同属原核生物而真菌与动物、植物等生物属于真核生物域。
我国地域辽阔，跨越热带至寒温带，气候条件多样，地理环境与生态系统类型复杂，是世界上生物多样性最丰富的国家之一。
而多样的生境蕴藏着丰富的微生物多样性。
特别是近年来微生物多样性的研究由传统的培养方法，逐渐转向以免培养的分子生物学技术为主，如DNA的指纹图谱、分子杂交、克隆文库测序、高通量测序(pyroseqencing)、稳定性同位素探测(stable isotope probing，SIP)、基因芯片(gene chip)以及转录组学等技术。
我国学者利用先进的分子生物学技术，极大地提高了我国微生物多样性的研究水平。
真菌学的最新研究进展真菌学作为生物科学的一个分支，研究着真菌的分类、生态、生理、遗传以及与其他生物的相互作用等方面。
最近几年，随着科技的进步和研究手段的不断完善，真菌学领域也出现了一系列令人振奋的研究进展。
一、基因组学的应用随着高通量测序技术的广泛应用，真菌学中的基因组学开始取得突破性进展。
研究人员已经成功测序了多个重要真菌的基因组，如酵母菌、黑曲霉等。
这些基因组数据为真菌学研究提供了重要的依据，帮助科学家们更好地理解真菌的基因组结构、功能和演化。
此外，基因组学的应用还扩大了真菌资源的搜集范围，为生物多样性研究提供了更全面的数据支持。
二、真菌与人类健康的关系研究近年来，真菌对人类健康的影响成为了研究的热点之一。
研究人员发现，真菌在人体内的寄生和感染往往与免疫系统的功能紊乱密切相关，如白色念珠菌感染常见于免疫系统受损的患者。
同时，真菌也被发现与一些慢性疾病的发生发展密切相关，如哮喘、炎症性肠病等。
针对这些关系，目前正在开展相关研究，以期深入理解真菌与人类健康之间的相互作用，为疾病的预防和治疗提供新的思路和策略。
三、真菌与环境的相互作用研究真菌在地球生态系统中扮演着重要的角色，参与着多种生态过程。
近年来，研究人员对真菌与环境之间的相互作用进行了广泛的探索。
例如，真菌可以降解植物残体和有机废弃物，参与腐殖质的形成和循环；真菌还与植物根系形成共生关系，促进植物的生长和营养吸收；此外，真菌还可以抵御一些环境胁迫，如干旱、盐碱等。
这些研究为我们更好地理解地球生态系统的运行机制提供了重要线索。
四、真菌生物技术的应用真菌生物技术是将真菌及其代谢产物应用于农业、制药等领域的研究方向。
近年来，真菌生物技术的应用取得了一系列突破性进展。
例如，通过研究真菌的代谢途径和代谢产物，人们发现了多种有效的生物农药和抗肿瘤药物。
同时，利用真菌进行环境修复、食品加工等方面的研究也取得了显著进展。
这些应用研究不仅提高了农业和制药等领域的生产效率，还为可持续发展提供了新的解决方案。
真菌生理生态学的研究进展真菌是一类非常特殊的生物，在生态系统中有着不可替代的作用。
它们不仅可以分解有机物质，还可以促进植物生长、维持物种多样性等多种生态功能。
因此，对于真菌生理生态学的研究一直以来都是生态学、农学、林学等领域的研究热点之一。
随着科技的不断发展，真菌生理生态学的研究也在不断向前推进。
目前，已有不少相关研究获得了重要突破和进展。
一、真菌的多样性真菌是一类非常广泛的生物，其多样性十分丰富。
据统计，全球大约有120000多种真菌，其中绝大部分还未被发现。
因此，对于真菌生态学的研究，首先需要对真菌的多样性进行深入的了解。
近年来，随着各种技术手段的发展和应用，科学家们对真菌的分类系统进行了大量的修订和更新。
例如，利用DNA测序技术发现了很多新的真菌物种，同时，对传统分类方法进行了升级和改进，以更准确地反映真菌的多样性。
二、真菌的生理特性真菌的生态功能与其生理特性密切相关。
了解真菌的生理特性，可以更好地理解真菌在生态系统中的作用和功能。
近年来，一些前沿技术的应用，不仅对真菌的生理特性进行了深入的研究，还探索了真菌与其它生物之间的相互作用。
例如，研究人员发现，真菌可以通过挖掘细菌基因组的能力，将其自身代谢产物的生产效率提高数倍以上。
这一发现不仅证明了真菌的多样性和适应性，在工业生产上也具有巨大的应用前景。
三、真菌的生态功能真菌是生态系统中不可或缺的一环，它们能够分解死亡生物体的有机质，从而促进有机质循环，为后续生物生长提供营养物质。
同时，真菌还能够合成、分解和转化重要的化学物质，对生态系统的稳定和健康发挥着重要的作用。
因此，深入了解真菌的生态功能，对于维持健康的生态系统和发展可持续农业具有十分重要的意义。
随着科学技术和研究方法的不断更新和发展，真菌生态学的研究也在不断向前推进。
相信在不久的将来，我们可以更好的了解和利用真菌的特性，为生态系统和农业发展做出更大的贡献。
的研究》2023-10-29CATALOGUE 目录•研究背景和意义•研究目的和方法•实验结果和分析•结论和讨论•参考文献01研究背景和意义银杏是一种具有重要经济价值和生态价值的植物，其叶片在医药、保健和观赏等领域都有广泛应用。
近年来，随着生物技术的不断发展，对银杏内生真菌的研究逐渐成为热点。
内生真菌是指生活在植物体内，但不引起植物明显病害的真菌。
这些真菌在植物体内可以产生多种代谢产物，如抗生素、激素和酶等，对植物生长和发育具有重要影响。
因此，对银杏叶部内生真菌多样性的研究具有重要的理论和实践意义。
研究背景研究意义通过对银杏叶部内生真菌多样性的研究，可以深入了解内生真菌与银杏之间的关系，探索内生真菌对银杏生长和发育的影响。
内生真菌的代谢产物具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗菌、抗炎等，对其进行深入研究有助于发现新的药物先导化合物和生物农药。
对银杏叶部内生真菌多样性的研究还有助于了解内生真菌在不同环境下的适应机制和进化历程，为植物内生真菌资源的开发和利用提供理论依据。
02研究目的和方法探索银杏叶部内生真菌的种类和多样性了解内生真菌与银杏生长和健康的关系为开发利用内生真菌资源提供科学依据研究目的数据分析利用生物统计学方法对数据分析，比较不同采样点、不同生长条件下内生真菌多样性的差异及其与银杏生长和健康的相关性。
研究方法采样与处理选择健康的银杏树，采集叶片并记录相关信息。
将叶片样本进行处理，分离内生真菌。
菌种分离与鉴定采用培养法和形态学特征观察法对分离得到的内生真菌进行鉴定，并记录每种真菌的形态、生长特性等。
多样性分析对分离得到的内生真菌进行多样性分析，包括物种丰富度、种群结构、物种分布等。
03实验结果和分析实验结果菌落特征各异这50份菌株在PDA培养基上呈现出不同的菌落形态和颜色，有的呈白色、有的呈灰色、有的呈黑色等。
发现3种新菌种通过形态学和分子生物学鉴定，发现其中有3种新的菌种，它们在已知的真菌数据库中没有记录。
真菌的遗传多样性及其在医学中的应用研究真菌是一类生长在土壤、水和空气中的微生物，它们是地球上最古老的生物之一。
在真菌门下，有约100多个属，包括酵母菌、霉菌、伞菌等。
真菌的遗传多样性非常丰富，这种多样性不仅影响着真菌的形态、生理特性和生态位，还对真菌在医学中的应用研究产生了重要影响。
真菌的遗传多样性真菌的遗传多样性表现在两个方面：首先，不同的真菌种类之间存在巨大的遗传差异；其次，同一种真菌的不同株之间也有很大的遗传差异。
这种遗传差异很大程度上决定了真菌的生态适应能力和药物抗性。
在真菌门下，酵母菌是一个相对简单的线粒体真核生物。
酵母菌亚门包括葡萄球菌属、酿酒酵母菌属、酸酒酵母菌属等，它们广泛存在于自然环境中，在生物技术领域、食品加工领域和医学领域都有广泛应用。
哈氏酵母菌是酵母菌亚门中一种重要的医学菌株，在临床用药和科研研究中具有重要作用。
研究表明，哈氏酵母菌株间遗传多样性非常突出，这种多样性决定了它们对药物的耐受性差异。
在霉菌门下，放线菌属是一种具有广泛生物学特性的真菌，它们在土壤和水中广泛分布。
放线菌的遗传多样性差异巨大，导致一些放线菌株对药物的耐受性特别强。
比如，放线菌属中有些产生青霉素的菌株可以对多种药物产生抗性，这也就决定了青霉素药品在治疗疾病时会出现耐药性问题。
真菌在医学中的应用研究真菌在医学中的应用研究非常广泛，从开发新药到生产生物制品，都离不开真菌的应用。
下面就来看看真菌在医学中的几个典型应用领域：1. 抗真菌药物的研发真菌感染是导致全球许多死亡和健康问题的原因之一。
抗真菌药物的研发对我们控制和治疗真菌病非常重要。
硫酸咪康唑、伊曲康唑、氟康唑等抗真菌药物已经被广泛使用。
但由于真菌的遗传多样性很强，致使一些药物的效果不佳或者出现耐药性问题。
因此，需要不断开发新的抗真菌药物。
研究表明，真菌中的天然产物具有很大的潜力，可以作为新药开发的原材料。
2. 酿酒酵母菌的工业利用酿酒酵母菌广泛应用于酒类、发酵面包和乳制品等食品加工过程中。
我国植物内生菌研究进展一、概述植物内生菌，指的是在其生活史的某一阶段或全部阶段生活在健康植物组织内部的微生物。
这些微生物与宿主植物建立了复杂而微妙的共生关系，对植物的生长、发育和抗逆性等方面产生深远影响。
近年来，随着生物技术的快速发展和人们对植物微生物互作认识的加深，植物内生菌的研究已成为国内外生物学、农业科学和生态学等领域的热点之一。
我国作为世界上生物多样性最为丰富的国家之一，拥有大量的植物种类和丰富的植物内生菌资源。
在过去的几十年里，我国科研人员在植物内生菌的分离鉴定、功能挖掘和应用开发等方面取得了显著进展。
这些研究不仅增进了我们对植物内生菌多样性和生态功能的理解，也为农业可持续发展、生态环境保护和人类健康提供了新的思路和策略。
本文旨在综述我国植物内生菌研究的最新进展，包括植物内生菌的分离鉴定技术、种类多样性、功能特性、生态分布以及应用前景等方面。
通过系统总结和分析近年来的研究成果，旨在为植物内生菌的深入研究提供理论支撑和实践指导，同时也为我国农业生物技术的创新发展和生态环境保护贡献力量。
1. 内生菌定义与分类内生菌（Endophytes）是一类在植物组织内部生活而不引起明显病害症状的微生物，它们存在于植物的健康组织中，与宿主植物建立了密切的共生关系。
这些微生物可以是细菌、真菌或放线菌，它们的生活史大部分时间都在植物组织内部度过，从中获取营养并进行繁殖。
根据分类学上的特点，内生菌可分为多种类型。
内生真菌是最常见的一类，它们广泛存在于各种植物组织中，包括种子、叶片、茎干和根部等。
这些真菌与植物之间建立了复杂的相互作用关系，对植物的生长发育和抗逆性产生重要影响。
内生细菌也是一类重要的内生微生物。
它们存在于植物的组织和细胞间隙中，与植物建立共生关系，对植物的生长和健康状况具有重要影响。
与内生真菌相比，内生细菌在植物体内的数量和种类相对较少，但它们对植物的生长和抗逆性也具有重要作用。
除了内生真菌和内生细菌外，还有一些其他类型的内生微生物，如放线菌等。
真菌学研究的进展及应用真菌学是研究真菌的分类、生物学、遗传学和分子生物学等方面的学科。
在过去的几十年里，真菌学在人类生活、医学、农业、食品、环境和产业等领域都起到了重要的作用。
本文将从真菌的生物学特性、分类、生态学、代谢产物和应用等方面来谈论真菌学研究的进展和应用。
1.生物学特性真菌是由由一根或多根由菌丝组成的菌株培育而成的单细胞真菌生物。
它们可以独立生长或形成菌群以适应特定的生存环境。
真菌生物具有很强的营养来源多样性，它们能够在土壤、水体和空气中吸取和利用各种形式的碳源、氮源和磷源等营养物质。
真菌也可以生长在其他生物或物体上进行共生、寄生或腐生等。
有的真菌生物可以合成或产生一些生物活性物质，如抗生素、药物、酶类和食品添加剂等。
此外，真菌还具有能够影响环境和气候的能力，例如霉菌和蘑菇可以产生大量的二氧化碳和甲烷等。
2.分类真菌生物在地球生物界中有着重要的地位，在生物分类学上占有独特的位置。
经过长期的研究，目前已知共有5个门31个纲180多个属，近10万个品种，远远超过了所有动物类分的层级。
真菌的分类依据主要是形态特征、营养特点和生态环境等因素，通过对其菌丝分支、孢子形态颜色、菌丝生长类型和其在宿主体内的表现等细节来确认真菌生物的种类和归属。
此外，通过对真菌的DNA序列分析，也可以对真菌的分类进行深入的研究和分析。
3.生态学真菌可以生长在各种不同的生态环境中，包括空气、土壤、水体、生物表面和内部等。
它们可以进行共生、寄生、腐生和生长等各种活动，对生态系统的平衡也有着重要的作用。
例如，真菌能够分解有机物或重金属污染物，加速土壤肥料循环，提高土壤养分，促进农业生产；真菌还可以参与生物固氮，减少氮肥使用；同时，真菌也能清除一些有害物质，如甲醛、苯等。
因此，真菌在保护环境和保持生态平衡方面具有重要的作用。
4.代谢产物真菌可以合成多种代谢产物，如酶、酸、抗生素、酵母、多糖等，这些代谢产物在医学、食品、工业和环保等领域都有非常广泛的应用。
·综述·真菌多样性研究方法进展石莉娜1刘晓峰2(1．云南昆明长水国际机场医疗急救中心，昆明650500;2．昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明650500)【摘要】真菌广泛存在于自然界，在生态系统中发挥着重要的作用。
随着分子生物学技术在微生物多样性研究中的广泛应用以及宏基因组学技术的出现，打破了传统微生物培养法的局限性，人们对于真菌多样性的认识日渐提高。
该文主要综述了研究真菌多样性方法的主要发展历程，介绍几种有关真菌多样性研究常用的分子生物学方法，包括基于PCＲ的克隆文库方法、变性梯度凝胶电泳、末端限制性长度多态性、实时荧光定量PCＲ、荧光原位杂交、序列标签标记的高通量测序以及宏基因组技术，并且阐述宏基因组学技术在此领域蕴含的巨大发展潜力。
【关键词】真菌；多样性；研究方法【中图分类号】Ｒ379【文献标识码】A【文章编号】1673-3827（2014）09-0060-05Advances in the method of fungi diversitySHI Li-na1，LIU Xiao-feng2（1．Medical Emergency Department，Changshui international airport，Kunming650500；2．College of Life Science and Technology，Kunming University of Science and Technology，Kunming650500，China）【Abstract】Fungi widely exists in nature，playing an important role in the ecosystem．The pervasive application of molecular biol-ogy technology in microbial diversity and the emergence of metagenomic breaked the limitations of traditional microbial culture meth-od，so that improve the human＇s recognition of fungal diversity．This paper reviewed the main development course of studying fungal diversity approaches，introduced several commonly used methods of molecular biology on fungal diversity research，mainly including clone library PCＲbased，Denaturing gradient gel electrophoresis，Terminal restriction fragment length polymorphism，Ｒeal-time flu-orescent quantitative PCＲ，Fluorescence in situ hybridization and barcoded pyrosequencing，and expounded the huge potential of metagenomics in this field．【Key word】fungi；diversity；method［Chin J Mycol，2014，9（1）：60-64］自然界中的微生物分布广、种类多、资源极其丰富，主要包括细菌、病毒、真菌等。
迄今人们已发现的微生物物种仅为自然界中微生物总数的1% 10%［1］。
微生物群落多样性是环境微生物多样性研究的核心内容。
目前微生物多样性研究多局限于细菌，而对真菌的研究相对较少。
研究真菌群落多样性可以了解真菌群落结构、真菌的种类和数量分布特点，并且可以进一步为控制和优化真菌群落结构提供参考，同时也是研究微生物群落多样性的重要内容。
真菌遍布于自然界，据估计约有数百万种，已发现的仅9万余种，已发现的导致人类疾病的仅约400种［2］。
人类也生活在真菌包围的环境中，日常工作、生活中所接触到的真菌种类远超目前的认知。
因此，不论是自然环境还是人体都具有较高的真菌多样性。
真菌多样性的研究方法很多，从国内外目前采用的方法来看，大致上可分为：传统的微生物培养法、分子生物学方法以及宏基因组学技术。
随着现代科学技术的发展，越来越多的新技术、新方法用于真菌多样性领域的研究，使人们对真菌多样性的认识更加全面深入。
1传统微生物培养法从传统上讲，真菌多样性的研究主要利用分离培养及形态学检测的方法，该技术在实验室被广泛使用。
尽管各种新的培养技术不断出现，但此方法费时费力，敏感度和特异性也较低，也不能反应全部的真菌群落信息［3-4］。
Amann等［5］曾根据微生物原位的、不依赖于培养的微生物系统发育学研究结果认为：在自然界中，通过实验室人工培养方法已经被分离和描述的微生物物种数量仅占估计数量的1% 5%，而其余大多数微生物种群还仍然未被分离和认识，因此，人们不能利用传统的微生物培养技术获得真菌多样性的全部信息，极大的限制了研究的广泛性。
在临床致病菌的鉴定方面，培养的方法更为常用。
Ｒasi等［6］利用培养法对从伊朗花斑糠疹患者皮肤上分离得到的马拉色酵母菌进行鉴定过程中，发现球形马拉色菌是最常分离到的菌种，大约占31．3%，其次是糠秕马拉色菌（20．5%）等。
Findley等［7］通过微生物培养法从10个健康成人的14个部位的皮肤分离真菌，经鉴定11个刚体部位和胳膊表面的优势真菌是马拉色菌属，通过比较，脚底、脚趾甲和趾间具有较高的真菌多样性。
2分子生物学方法鉴于分离培养技术的局限性，近年来，利用不依赖培养的方法分析和鉴定微生物群落多样性的实验越来越普遍。
自从Pace［8］提出将分子生物学方法用于微生物多样性研究，微生物分子生态学得到了长足的发展。
分子生物学技术应用于微生物群落结构分析使得对环境样品中占大部分的不可培养微生物的研究成为了可能。
目前，大多数用于分析微生物群落结构的方法是基于PCＲ扩增的。
在分析微生物群落结构多样性时，rＲNA是目前应用最广泛的分子标记，它具有在功能上高度保守，其序列上的不同位置具有不同的变异速率，存在于所有的有机体（病毒除外）内等优点。
对于细菌而言，16S rＲNA分析在实际应用中最为广泛，与细菌相比，使用真菌18S rDNA只能鉴定到属或科的水平。
真菌的非编码rＲNA区域，如ITS区域（Inter-nal transcribed spacer），进化快速，序列上的变化更加广泛，因此提供了更多的分类信息，弥补了18S rＲNA的局限性。
虽然如此，在实际研究内容中仍然要根据对分类等级的不同要求来选择合适的分子标记。
分子生物学方法的应用使在遗传水平上研究微生物多样性成为了可能，该方法可归纳为三方面：①基于PCＲ技术的研究方法，这些方法是对样品直接提取DNA或者ＲNA，然后对特定基因设计引物进行PCＲ扩增，再利用不同的方法进行分析，如变性梯度凝胶电泳（Denaturing gradient gel elec-trophoresis，DGGE）、构建克隆文库、末端限制性长度多态性（Terminal restriction fragment length poly-morphism，T-ＲFLP）等。
②基于分子杂交技术的分子标记法，如荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH），可以对微生物在特定环境中的存在与否、分布模式及丰度等情况进行研究，具有较高的灵敏性和特异性。
③基于DNA序列测定的研究方法，分析具体碱基序列的分布情况，通过与生物信息学结合，进行数据比较分析，如元基因组（Metagenome）测序技术，成为研究难培养微生物或不可培养微生物多样性的重要方法［9］。
2．1基于PCＲ的克隆文库方法基于PCＲ的克隆文库方法使对不可培养微生物的分析成为可能，Pace［10］提出将PCＲ产物进行克隆后测序，大大提高了对微生物群落结构的认识，是使用较为广泛的一种方法。
目前已有研究采用针对18S rDNA及ITS的克隆文库构建技术对肠道内真菌群落的多样性进行分析，研究结果表明人肠道真菌多样性比较低，主要以不同亚型的芽囊原虫属为主［11］。
2．2变性梯度凝胶电泳（DGGE）DGGE最初是lerman等［12-13］发明的，起初主要用来检测DNA片段中的点突变。
1993年，Muyzer 等［14］首次将其用于微生物群落多样性的研究。
DGGE普遍用于分析环境中细菌、真菌、病毒群落的生物多样性。
Kim等［15］利用PCＲ-DGGE技术分析了日本和中国发酵豆瓣酱中的细菌和真菌群落多样性，确定了米曲霉和鲁氏酵母的存在。
We-erasekera等［16］通过PCＲ-DGGE方法研究人唾液中的酵母菌，在其中六个样品中鉴定出两种酵母菌，分别是白色念珠菌和杜氏假丝酵母，有力的证明利用DGGE技术研究口腔中的酵母菌是一种相对快速便捷的方法。
2．3末端限制性长度多态性（T-ＲFLP）T-ＲFLP技术是在末端限制性片段长度多态性（Ｒestriction fragment length polymorphism，ＲFLP）技术基础上发展起来的，依据rDNA序列的保守性和特异性，选择具有系统进化标记特征的序列作为目的序列。
T-ＲFLP技术灵敏度高，对于评估复杂环境样品的多样性和快速的比较不同生态系统的微生物群落结构和多样性是一种有力的工具。
Curlevski等［17］使用T-ＲFLP方法研究了澳大利亚商业化混交林和单一种植南洋杉林场土壤真菌群落的不同，通过对真菌的ITS区域进行分析表明子囊菌门的丰度最高，其次是担子菌门和接合菌门，但在不同类型的林场中它们的相对丰度存在差异。
2．4实时荧光定量PCＲ（qPCＲ）qPCＲ技术于1996年由美国Applied Biosys-tems公司推出，是将荧光能量传递技术（Fluores-cence resonance energy transfer，FＲET）应用于PCＲ，实现了PCＲ从定性到定量的飞跃。
qPCＲ技术目前已得到广泛应用。
李晓然等［18-19］在对汾酒发酵过程和汾酒酒曲制作过程中细菌和真菌多样性的研究中，利用qPCＲ技术对整个过程中的细菌和真菌进行了定量，发现在汾酒发酵过程中真菌的数量保持相对稳定，在酒曲制作过程中真菌的数量整体上呈下降趋势。
Li等［20］通过qPCＲ方法研究了老年人舌背的真菌多样性，表明老年人口腔中的真菌多样性极高，并不仅限于念珠菌属，其多样性与老年人的健康状态也具有密切的关系。
