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单细胞藻类的培养方法周德山1 胡希亮1 李茂才2(1.连云港市海洋环境检测中心,江苏连云港 222042;2.连云港市海洋与渔业局,江苏连云港 222100)单细胞藻类与我们的水产养殖息息相关,不同的单细胞藻类品种及组成使养殖水体表现出不同的颜色。
单细胞藻类是鱼、虾、蟹、贝类等的直接或间接饵料;水体中单细胞藻类的优劣决定了鱼、虾、蟹、贝类等生态环境的好坏。
在水体中培养单细胞藻类有多种方法,笔者将其总结如下:1 培养单细胞藻采用不同的接种方式1.1 在自然水域中直接培养单细胞藻 在目前的大部分池塘养成及部分鱼、虾、蟹、贝类等育苗过程中,直接利用自然淡水或海水培养单细胞藻。
经过滤的海水或淡水里有硅藻、绿藻等各种单细胞藻;有轮虫、桡足类、枝角类等各种浮游动物;有多种小型底栖动物等,利用繁殖自然水体里本身就有的单细胞藻,促进浮游动物、底栖动物等基础饵料生物的生长繁殖,是目前水产养殖过程中,较为常见的基础饵料生物的培养方法。
自然繁殖单细胞藻的时间要根据生产需要而定,其标准为鱼、虾、蟹、贝类等动物育苗开始后,或者其苗种投放池塘后,育苗幼体或投放的苗种要有适宜的生长发育环境,要有充足的生物饵料吃。
虾、蟹、鱼、贝类等的池塘养成,一般在放养苗种半个月前,开始施肥繁殖单细胞藻,根据水色、透明度调节施肥量及施肥次数,一般将水色调节为黄色或黄褐色,透明度为30~50c m。
水色及透明度不同,单细胞藻的品种组成及密度不同,不同的养殖品种及同一品种的不同发育阶段,对水色及透明度的要求不一样。
在虾、蟹、鱼、贝类等的养殖过程中,要始终保持水质的肥、活、嫩、爽,使虾、蟹、鱼、贝类等水产养殖动物,生活在一个良好的生态环境中。
1.2 使用封闭或半封闭方式定向培养单细胞藻 在大部分的海产动物育苗及一些生态高效养成过程中,使用封闭或半封闭的纯种单细胞藻的三级培养。
如近几年,河蟹土池育苗已兴起热潮,海水的鱼类、贝类、虾类等各种土池育苗也已开始,土池育苗的关键,就是在池塘里繁殖优质的充足的单细胞藻,促使以单细胞藻作为饵料的各种浮游动物、底栖动物等基础饵料生物的大量生长繁殖。
第1篇实验报告名称：单胞藻培养实验一、实验目的1. 了解单胞藻的基本特性及培养方法。
2. 掌握单胞藻的培养技术，包括培养条件、培养基配制、接种与培养过程等。
3. 学习使用显微镜观察单胞藻的生长状态，分析影响单胞藻生长的因素。
二、实验原理单胞藻是一种广泛存在于自然界中的单细胞藻类，具有繁殖速度快、生长周期短、营养价值高等特点。
本实验通过培养单胞藻，了解其生长规律，为实际应用提供理论依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：牟氏角毛藻、新月菱形藻、三角褐指藻、金藻3011等单胞藻。
2. 仪器：培养皿、移液器、显微镜、天平、温度计、pH计、高压灭菌锅等。
四、实验方法1. 培养基配制：根据不同藻种，配制相应的培养基。
牟氏角毛藻培养基：海水1000ml，硅藻粉5g，葡萄糖2g，碳酸氢钠2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g；新月菱形藻培养基：海水1000ml，硅藻粉5g，葡萄糖2g，碳酸氢钠2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g；三角褐指藻培养基：海水1000ml，硅藻粉5g，葡萄糖2g，碳酸氢钠2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g；金藻3011培养基：海水1000ml，硅藻粉5g，葡萄糖2g，碳酸氢钠2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g。
2. 接种与培养：将单胞藻接种于培养基中，置于恒温培养箱中培养。
牟氏角毛藻、新月菱形藻、三角褐指藻培养温度为28～30℃，金藻3011培养温度为28～30℃。
每天观察单胞藻的生长状态，并记录数据。
3. 观察与测量：使用显微镜观察单胞藻的生长状态，测量单胞藻的密度、体积、细胞形态等指标。
五、实验步骤1. 准备实验材料与仪器。
2. 配制培养基，并进行高压灭菌。
3. 将单胞藻接种于培养基中，置于恒温培养箱中培养。
4. 每天观察单胞藻的生长状态，并记录数据。
5. 使用显微镜观察单胞藻的生长状态，测量单胞藻的密度、体积、细胞形态等指标。
6. 分析实验数据，得出结论。
六、实验数据与分析1. 牟氏角毛藻培养数据：- 培养天数：5天- 密度：1.2×10^6/ml- 体积：2.5μm^3- 细胞形态：短柱形2. 新月菱形藻培养数据：- 培养天数：5天- 密度：1.0×10^6/ml- 体积：2.0μm^3- 细胞形态：新月形3. 三角褐指藻培养数据：- 培养天数：5天- 密度：1.5×10^6/ml- 体积：2.8μm^3- 细胞形态：三角形4. 金藻3011培养数据：- 培养天数：5天- 密度：1.3×10^6/ml- 体积：2.3μm^3- 细胞形态：棒状根据实验数据，分析不同藻种的生长特点及影响因素，得出以下结论：1. 牟氏角毛藻、新月菱形藻、三角褐指藻和金藻3011均能在适宜的培养条件下生长。
单细胞藻种质分离、培养和应用的技术操作规范单细胞藻种质分离、培养和应用的技术操作规范第一章常见单细胞藻的生物学简介第一节绿藻一、扁藻扁藻属绿藻门，绿藻纲，团藻目，衣藻科，扁藻属。
常用种类有青岛大扁藻和亚心形扁藻。
形态特征：亚心形扁藻的藻体一般扁压，细胞前面观广卵形，前端较宽阔，顶端前部凹陷。
鞭毛4条由凹陷处生出。
细胞内有一个大型、杯状、绿色的色素体，后端有一个呈内上开口的杯状蛋白核，有一个到数个红色眼点比较稳定地位于蛋白核附近、细胞中间略前。
原生质体里有一个细胞核。
细胞外有一层薄薄的纤维质细胞壁。
细胞长11~16微米，宽7~9微米，厚3.5~5微米。
能快速活泼游动。
繁殖方式：无性繁殖，细胞纵分裂形成2个（少数情况下4个）子细胞，环境不良时形成休眠孢子。
生态条件：1、盐度亚心形扁藻为广盐性，在8‰~80‰盐度的水中均能生长繁殖。
最适盐度在30‰~40‰之间。
2、温度亚心形扁藻为广温性，在7~30℃的范围内均能生长繁殖，最适范围在20~28℃之间。
3、光照亚心形扁藻在光照强度为1000~20000勒克斯范围内都能生长繁殖，最适光照强度约在5000~10000勒克斯之间。
4、酸碱度一般在pH6~9的范围内均能生长繁殖，最适范围约在pH7.5~8.5之间。
绿藻门的藻类在含有机质丰富的水中生长良好。
二、盐藻盐藻属绿藻门，绿藻纲，团藻目，盐藻科，盐藻属。
主要培养种类是盐藻，又称杜氏藻。
形态特征：盐藻没有细胞壁，细胞外只有一层弹性膜，所以体形变化很大，有梨形、椭圆形、长颈形和纺锤形等。
细胞内有一个杯状的色素体，色素体内的色素主要是叶绿素，生活条件不良时产生血红素，藻体呈红色。
在色素体内靠近基部有一个大的蛋白核，有一个红色眼点位于细胞上部。
原生质体中央有一个细胞核。
前端生出两条等长的鞭毛，鞭毛比细胞长约1/3。
细胞长16~24微米，宽10~13微米。
繁殖方式：无性繁殖，细胞纵分裂形成2个子细胞，环境不良时行有性生殖。
单细胞藻类培养注意事项
单细胞藻类是一类微型植物，常用于水质监测、生物学研究等领域。
在进行单细胞藻类培养时，需要注意以下事项。
1. 选择合适的培养基。
单细胞藻类的不同种类需要不同的培养基，选择适合的培养基可以提高培养效果。
2. 培养环境应保持稳定。
单细胞藻类对温度、光照、pH值等环境因素较为敏感，因此培养环境应保持相对稳定。
3. 注意培养器具的消毒。
在进行单细胞藻类培养前，应对培养器具进行消毒，避免细菌、病毒等的污染影响培养效果。
4. 控制培养密度。
单细胞藻类培养密度过高易导致养分不足、光照不足等问题，因此需要控制培养密度，避免过量培养。
5. 定期更换培养基。
单细胞藻类在培养基中生长繁殖，会消耗其中的养分，因此需要定期更换培养基，保证培养条件的稳定。
在进行单细胞藻类培养的过程中，需要注意以上事项，才能获得高效、稳定的培养效果。
同时，也需要不断探索和研究，完善单细胞藻类的培养技术，为其应用和推广提供更好的支持。
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养殖与饲料2017年第5期摘要单细胞藻类作为鱼虾贝的开口饵料，对育苗成功与否起着决定性作用。
每年7-8月气温较高，原生动物繁殖快，外加雨季阴雨天多，单胞藻生长缓慢，对其大量繁殖造成一定难度，对此总结了高温季节单细胞藻类培养方法。
关键词高温季节；单细胞藻类；培养方法高温季节单细胞藻类培养技术要点邵跃辽宁省锦州市海洋与渔业科学研究所，辽宁锦州121007收稿日期：2016-11-17邵跃，女，1984年生，工程师。
单细胞藻类是海洋生物中最简单，但在海洋生态系统中具有重要意义的一群生物。
在海水育苗中同样具有重要意义。
尤其是作为鱼虾贝的开口饵料，对育苗成功与否起着决定性作用。
近几年锦州市海洋与渔业科学研究所在夏季高温期进行贝类育苗，同时需要大量单细胞藻类作为饵料，高温季节培养单细胞藻类有一定的难度，比如高温季节原生动物繁殖快、雨季阴雨天多，单胞藻生长慢、易污染等原因，对大量繁殖单细胞藻类造成一定影响，结合这几年的工作现将培养方法总结如下。
1高温季节培养种类适合高温季节培养且常用的种类有金藻、角毛藻、扁藻、小球藻、盐藻。
这些种类常用且耐高温，特别是金藻是大多数贝类的开口饵料。
金藻有等鞭金藻和叉鞭金藻。
角毛藻细胞小，扁藻细胞稍大，适合不同时期，小球藻抗污染、好培养，其他饵料不足时可起替代作用。
2培养方法及准备工作1）培养方法。
主要有一级培养、二级培养、三级培养。
其中二级培养在环境条件好时可以省略，由一级培养样直接到三级培养，在高温季节饵料容易污染，不能省略二级培养。
一级培养和大多数培养方法一样，主要以5000mL 三角烧瓶为培养容器进行培养；二级培养主要以白色大桶为容器，桶盖用透明塑料密封充氧培养，可以用100～500L 容量不等的白色大桶，根据具体情况定；三级培养即在水泥池大量培养，最后提供给育苗水体。
2）饵料培养的准备工作。
首先在确定育苗水体的同时确定饵料水体，一般情况下饵料水体与育苗水体的比例为1∶2，条件好的为1∶1。
补充鞭毛有2根的，也有l、3、4、6、8以至组成环状多数的。
鞭毛2根有等长、近于等长、不等长或长短悬殊的。
鞭毛有比体长短的、有等于体长的或为体长2、3、5、6倍以上的。
鞭毛有着生细胞顶部两侧或细胞前端口沟或凹穴处，或着生于侧面的凹穴处等等。
鞭毛伸展方向，有向前方的，有一条向前另一条横向伸展的；有一条居于腰部的沟内，另一条向后方伸展的等。
眼点桔红色，球形、椭球形，多位于细胞前端侧面，具有感光作用。
藻类的生活史营养生殖型：生活史仅有营养生殖，只能以细胞分裂的方式来进行生殖。
蓝藻和裸藻等一些单细胞藻类属此。
无性生殖型：是生殖细胞（孢子）不经结合，直接产生子代的生殖方式。
无性生殖型是指生活史中没有有性生殖，没有减数分裂。
如小球藻、栅藻等。
无世代交替的无性和有性生殖混合型是指生活史中既行无性生殖，又行有性生殖的藻类。
有世代交替的无性和有性生殖混合型从孢子开始一直到产生配子，这一阶段都是单倍体时期，总称为有性世代；由合子萌发为孢子体，一直到孢子体行减数分裂产生孢子之前，这一阶段是双倍体时期，称为无性世代。
这种生活史中有无性世代和有性世代相互交替的现象叫做世代交替。
按培育密闭程度分开放式培养：是指藻类培养在敞开的广口玻璃瓶、水族箱、玻璃钢水槽、水泥池等设备中。
这种方式设备比较简单，为目前培养单胞藻的主要形式。
开放式培养由于光照充足和通风，藻细胞繁殖迅速，但因藻液与空气接触面大，容易受敌害生物的污染。
封闭式培养：封闭式培养是把藻类培养在封闭的小口玻璃瓶、透明圆柱形管、透明塑料薄膜袋中，容器除充气管、培养液加入管和藻液抽出管外，其余不与外界接触，因而减少了敌害生物污染的机会，培养成功率高。
近年我国应用塑料薄膜袋进行封闭式培养效果较好。
这种方法简单、成本低、培养的藻细胞密度大、不易污染、生产周期短等优点。
按采收方式分连续培养一般为室内有人工光源、充气式培养另充气培养使用充气设备为藻液补充空气或二氧化碳混合空气进行培养。
海水PH和浮游植物数量的关系[摘要]：赤潮发生主要是浮游植物的大量繁殖。
本实验于2004年3月～5月,以硅藻、金藻、绿藻为材料,对三种藻类进行40天的培养,每天记录一次PH值和藻类数量.实验结果表明,当PH值小于8.2时,海水PH值和浮游植物数量呈散点分布.当藻类大量繁殖PH值大于8.2时,海水PH值与浮游植物数量呈线形关系.通过回归分析可以作出三种藻类回归后的关系曲线:硅藻: y(数量)=5.8×105PH-4.77×106,金藻:y(数量)=5.9×105PH-4.89×106,绿藻: y(数量)=6.5×105PH-5.33×106.此外作出它们的生长曲线:硅藻: y(数量)=e0.34x(天数),金藻: y(数量)=e0.33x(天数),绿藻: y(数量)=e0.31x(天数).[关键词]：赤潮; PH ; 浮游植物数量THE RELATIONSHIP BETWEEN PH ANDNUMBERS OF PHYTOPLANKTON IN THESEAWATERKang Liang( Marine Science and Technology College of Zhejiang Ocean University,Zhoushan 316004)Abstract: Red Tide primarily arises from large quantities reproduction of phytoplankton.The experiments were made during March and May in 2004, regard diatoms, chrysophyta, chlorophyta as the material, proceed to three kinds of algae 40 days educates, recording the value of PH and numbers of phytoplankton once everyday. The result of experiment expresses,when the value of PH smaller than 8.2 ,the relationship between PH and numbers of phytoplankton report to spread to order todistribute.When algae large quantity breeds the value of PH larger than 8.2, the relationship between PH and numbers of phytoplankton exsit certain line form relation.The application covariance general outline learns the returning of inside returns the analysis can make the relation curve of three kinds of algae after returning: diatoms: Quantity=5.8×105×PH-4.77×106, chrysophyta: Quantity =5.9×105×PH-4.89×106, chlorophyta: Quantity=6.5×105×PH-5.33×106.Make their growth curve in addition: diatoms: Quantity = e0.34days, chrysophyta: Quantity = e0.33 days,chlorophyta: Quantity =e0.31 days.Key words: red tide; PH; numbers of phytoplankton1前言:赤潮的定义:赤潮就是在一定的环境条件下，海水中某些浮游植物、原生动物或细菌在短时间内突发性增殖或高度聚集而引起的一种生态异常，并造成危害的现象。
单细胞藻类培养液的成分单细胞藻类培养液的成分有下列七类。
(一)大量元素1 •氮(N)单胞藻培养液常用的氮源有硝酸钾(KN03)、硝酸钠(NaNO3)、尿素(NH2CONH2)、硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钙［Ca(NO)3)2］、氯化铵(NH4C1)、硫酸铵［(NH4)2SO4］、发酵人尿……等。
其中以硝酸钠和硝酸钾最常用。
但不同的藻类对硝酸态氮和铵态氮的吸收利用情况是不同的，必须根据不同的藻类选择合适的氮源。
2 •磷(P)单胞藻培养液常用的磷源有磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二氢钠、(NaH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)4种。
海水单胞藻培养液应用磷酸二氢钾，如用磷酸氢二钾所配培养液会产生大量沉淀。
3 •铁(Fe)单胞藻培养液常用的铁源有三氯化铁(FeCI3)、硫酸铁(FeSO4)、硫酸高铁［Fe2(SO4)3］、氧化铁(FeO)、柠檬酸铁(FeC6H5O7)、柠檬酸铁铵［Fe(NH4)3(C6H5O7)］等。
其中最常用的是三氯化铁和柠檬酸铁。
无机铁在水中容易形成一种胶体复合物，无可逆反应，不能为生物利用。
铁也容易产生沉淀。
所以尽管铁在数量上所需很少，但要满足藻类需要却很困难。
要保持溶液中可利用态铁的数量，通常采用3种方法，这些方法都取得一定的成功，但都不够十分完善。
在培养液内加入土壤抽出液：由于自然有机质(一般称为腐殖酸)的作用阻止了铁的沉淀和溶胶化(Pringsheim , 1963)。
在培养液内加入某种有机酸或其盐类以形成可溶性铁化合物：已证明较有效的有柠檬酸盐和酒石酸盐：迈尔(Myers ,1947)证实应用硫酸铁和柠檬酸钠能使小球藻生长十分良好。
应用络合剂：最常用的为乙二胺四乙酸(EDTA)，络合剂能防止铁和微量营养元素沉淀，并按照质量作用定律释放出足够数量的离子供藻细胞利用。
由于无机铁容易形成胶体复合物和沉淀，而有机铁，如柠檬酸铁、酒石酸铁等则是可溶性的，易为藻类细胞利用，在培养液配方中可使用有机态铁代替无机态铁。
