病原性球菌
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病原性球菌的检验一、葡萄球菌属Staphylococcus⏹广泛存在于自然界,多数是不致病的腐物寄生菌。
⏹致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。
分类与分型1)金黄色葡萄球菌(S. aureus):多数致病。
(2)表皮葡萄球菌(S. epidermidis):偶可致病。
(3)腐生葡萄球菌(S. saprophyticus):不致病。
(4)致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。
(5)多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解,表皮葡萄球菌不敏感。
金黄色葡萄球菌的致病性⏹用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。
⏹肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起,Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。
⏹造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。
⏹引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。
金黄色葡萄球菌的流行病学⏹作为人和动物的常见病原菌,其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上,50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。
因而,食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌及其检验⏹革兰氏阳性球状,排列呈葡萄串状。
无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜,个别形成荚膜。
致病性葡萄球菌(金黄色葡萄球菌)菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。
培养及生化特性1.在普通培养基上生长良好(需氧或兼性厌氧,最适生长温度37℃、pH7.4 ,对营养要求不高,加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。
),在麦康凯琼脂平板不生长。
2. 血平板上生长更佳,致病菌株β溶血3. 产生金黄色色素4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。
5. 分解葡、乳、麦、蔗糖,产酸不产气,触酶阳性,致病菌株能分解甘露醇。
6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶(致病因素P149)1)溶血毒素2)杀白细胞素3)血浆凝固酶:区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。
4)脱氧核糖核酸酶:5)肠毒素6)溶纤维蛋白酶7)透明质酸酶抗原性1. 多糖抗原:具有群特异性,存在于细胞壁,借此可分群。
病原性球菌及检验球菌种类很多,根据革兰氏染色的不同,分为G-、 G+两类球菌。
G+有:葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌。
G-有:脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等。
对人体致病的球菌称病原性球菌,因能引起机体化脓性炎症,故又称为化脓性球菌。
常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌。
一、葡萄球菌属(一)形态与染色葡萄球菌呈不规则堆集排列,形似葡萄串状,也可见单个、成对或短链排列。
为G+性球菌,直径0.5-1.5um,(致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小)无芽胞,无鞭毛、无荚膜;无动力。
(二)分类 1965年按血浆凝固酶分为:血浆凝固酶阴性葡萄球菌,血浆凝固酶阳性葡萄球菌。
1.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括:表皮、腐生葡萄球菌。
2.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括:金黄色、中间型、家畜葡萄球菌。
(三)抗原本菌水解后,用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原。
1.蛋白抗原:是一种表面抗原,为完全抗原;有种特异性,无型特异性。
存在葡萄球菌细胞壁的表面,结合在细胞壁的粘肽部分,具有抗吞噬作用,称葡萄球菌A蛋白。
2.多糖抗原:是半抗原,存在于细胞壁上,是金黄色葡萄球菌的重要抗原。
有型特异性,分A、B、C三型。
(四)标本接种1.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物,通常直接接种在血琼脂上,经37℃24-48h培养,可见直径2-3mm,产生不同色素的菌落。
2.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上,经37℃24-48h培养可形成细小菌落,48h后形成典型菌落。
3.疑为败血症者,抽取静脉血5ml,注入50ml葡萄糖肉汤培养基中。
(五)培养特性需氧或兼性厌氧,对营养要求不高。
在20%CO2环境中,有利于毒力产生。
最适温度37℃,最适PH7.4。
DNA中G+C含量:30-39%。
1.在普通琼脂平板上,经37℃、24-48h培养,可形成圆形,凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、脂溶性色素的菌落,直径一般为1-2mm,但大者也有4-5 mm的菌落。
一、实训目的1. 掌握病原性球菌的基本概念和分类。
2. 熟悉病原性球菌的形态学观察方法。
3. 理解病原性球菌的培养特性及生化反应。
4. 提高实验室操作技能,为临床诊断提供依据。
二、实训时间2023年10月15日三、实训地点微生物实验室四、实训器材与试剂1. 器材:显微镜、接种环、玻片、酒精灯、无菌生理盐水、肉浸液琼脂平板、血琼脂平板、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、明胶、石炭酸复红染液、结晶紫、碘液、95%乙醇等。
2. 试剂:金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等。
五、实训内容1. 病原性球菌的形态学观察(1)革兰染色:取适量金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等,分别进行革兰染色,观察其染色特性。
(2)镜检:将染色后的玻片置于显微镜下观察,记录细菌的形态、排列方式、细胞壁结构等特征。
2. 病原性球菌的培养特性观察(1)肉浸液琼脂平板培养:将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于肉浸液琼脂平板,37℃培养24小时,观察菌落特征。
(2)血琼脂平板培养:将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于血琼脂平板,37℃培养24小时,观察菌落特征及溶血现象。
3. 病原性球菌的生化反应观察(1)糖发酵试验:将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇等培养基,37℃培养24小时,观察是否产生气泡。
(2)明胶液化试验:将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于明胶培养基,37℃培养24小时,观察明胶是否液化。
4. 病原性球菌的免疫学检验(1)SPA协同凝集试验:将金黄色葡萄球菌与SPA抗体混合,观察是否出现凝集现象。
(2)血浆凝固酶试验:将金黄色葡萄球菌接种于血浆培养基,37℃培养24小时,观察血浆是否凝固。
六、实训结果与分析1. 革兰染色观察:金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌均为革兰氏阳性球菌,呈葡萄串样排列;溶血性链球菌为革兰氏阴性球菌,呈链状排列。