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车间微生物检验作业指导书一、目的本作业指导书旨在规范车间微生物检验工作流程，确保产品质量和生产安全。
二、适合范围本作业指导书适合于车间微生物检验工作，涵盖了微生物检验的各个环节和操作流程。
三、术语和缩略词1. 微生物检验：对车间生产环境及产品进行微生物学检验，包括菌落总数、大肠菌群、致病菌等。
2. 车间：指生产车偶尔工作区域。
3. SOP：标准操作规程。
四、工作流程1. 样品采集a. 样品来源：根据生产计划，确定需要进行微生物检验的样品来源，如空气、水、表面、产品等。
b. 样品采集器具：使用无菌器皿、无菌棉签等采集样品，并确保器皿、棉签等的无菌。
c. 采样点位：根据车间布局和生产流程，确定采样点位，并在采样前进行清洁和消毒。
d. 采样方法：根据样品特性和检验要求，选择合适的采样方法，如接触法、悬浮法等。
e. 采样数量：根据标准要求，确定采样数量，并保证样品的代表性。
2. 样品处理a. 样品处理前准备：准备无菌培养基、培养基平板、稀释液等所需试剂和器材，并进行无菌操作。
b. 样品处理方法：根据样品特性和检验要求，选择合适的处理方法，如稀释法、过滤法等。
c. 样品处理流程：按照标准操作规程进行样品处理，确保样品的处理过程无菌、准确。
3. 培养和孵育a. 培养基选择：根据检验要求，选择合适的培养基，如营养琼脂、大肠菌群选择琼脂等。
b. 培养基制备：按照标准操作规程制备培养基，确保培养基的质量和无菌。
c. 培养条件：根据微生物特性和检验要求，确定合适的培养条件，如温度、pH值等。
d. 培养方法：按照标准操作规程进行培养，包括涂布法、倾注法等。
e. 孵育时间：根据不同微生物的生长特性，确定合适的孵育时间，并进行观察和记录。
4. 结果判读a. 菌落计数：根据培养基上的菌落形态和数量，进行菌落计数，并记录结果。
b. 结果解读：根据标准要求，对菌落计数结果进行解读，判断是否符合要求。
c. 异常处理：如果发现异常结果，及时进行调查和处理，确保车间生产环境和产品的卫生安全。
车间微生物检验作业指导书一、引言车间微生物检验是保证产品质量和生产环境卫生的重要环节。
本作业指导书旨在提供车间微生物检验的操作规范和流程，确保检验结果准确可靠，保障产品质量与消费者的健康。
二、检验范围车间微生物检验涵盖以下方面：1. 产品微生物检验：对生产过程中的原料、半成品和成品进行微生物检验，确保产品符合卫生标准。
2. 环境微生物检验：对生产车间、设备、空气、水源等环境进行微生物检验，确保生产环境卫生合格。
三、检验设备和试剂1. 检验设备：包括培养箱、显微镜、离心机、自动分析仪等。
2. 试剂：包括琼脂、培养基、抗生素、染色剂等。
四、检验方法和步骤1. 采样：根据不同的检验对象，采用适当的采样方法，确保样品的代表性。
2. 样品处理：根据不同的样品类型，进行适当的处理，如稀释、过滤等。
3. 培养：将样品接种在适当的培养基上，进行培养，控制培养条件如温度、湿度、pH值等。
4. 鉴定：根据培养结果，进行微生物的鉴定和分类。
5. 计数：对培养结果进行计数，确定微生物的数量。
6. 数据分析：根据检验结果，进行数据分析，判断产品或环境是否符合卫生标准。
五、质量控制1. 试剂质量控制：定期检查试剂的有效期和质量，确保试剂的准确性和稳定性。
2. 培养基质量控制：定期进行培养基的质量检验，包括外观、pH值、无菌性等指标。
3. 检验设备校准：定期对检验设备进行校准，确保设备的准确性和可靠性。
4. 平行试验：定期进行平行试验，对同一样品进行多次检验，评估检验结果的可重复性和一致性。
5. 质量记录：对每次检验进行详细记录，包括样品信息、检验方法、结果等，确保数据可追溯和可靠。
六、安全与卫生1. 操作人员应穿戴符合要求的个人防护装备，包括实验服、手套、口罩等。
2. 检验设备和试剂应储存于指定的地方，避免受潮、受热和受污染。
3. 操作过程中应注意无菌操作，避免样品和试剂受到外界污染。
4. 废弃物应按照规定进行处理，避免对环境和人员造成污染和伤害。
车间微生物检验作业指导书一、引言车间微生物检验是确保产品质量和安全的重要环节之一。
本作业指导书旨在规范车间微生物检验的操作流程、方法和要求，以确保检验结果准确可靠。
本指导书适用于所有车间微生物检验人员，包括实验室技术人员和操作人员。
二、检验目的车间微生物检验的主要目的是检测产品中的微生物污染情况，包括细菌、真菌、酵母等。
通过检验，可以及时发现和控制微生物污染，确保产品的质量和安全。
三、检验流程1. 样品采集a. 根据产品特性和检验要求，选择适当的采样点和采样方法。
b. 使用无菌容器采集样品，确保采样过程无污染。
c. 根据产品特性和检验要求，确定采样量和采样次数。
2. 样品处理a. 将采集的样品送至微生物实验室。
b. 根据检验要求，对样品进行预处理，如稀释、过滤等。
3. 微生物培养a. 根据检验要求，选择适当的培养基和培养条件。
b. 在无菌条件下，将样品接种到培养基上。
c. 根据培养基的要求，进行培养时间和温度的控制。
4. 微生物计数a. 根据培养基的要求，选择适当的计数方法，如平板计数法、滤膜计数法等。
b. 在无菌条件下，对培养好的样品进行微生物计数。
c. 根据计数结果，计算微生物的浓度。
5. 微生物鉴定a. 根据检验要求，选择适当的鉴定方法，如形态学观察、生理生化试验等。
b. 根据鉴定结果，确定微生物的种类和数量。
6. 结果分析与报告a. 对微生物检验结果进行分析，判断产品是否符合规定的微生物限度。
b. 撰写检验报告，包括样品信息、检验方法、结果和结论等。
四、操作要求1. 操作人员应具备相关的微生物学知识和操作技能，熟悉检验方法和流程。
2. 操作人员应严格遵守无菌操作规范，确保样品和培养基无污染。
3. 操作人员应定期参加培训，了解最新的微生物检验技术和标准。
五、设备和试剂1. 微生物实验室应配备适当的设备和试剂，包括培养箱、平板计数器、显微镜等。
2. 试剂应符合相关标准，并在使用前进行验证和检验。
车间微生物检验作业指导书引言概述：车间微生物检验是工业生产中非常重要的环节，能够帮助企业及时发现和解决微生物污染问题，保障产品质量和生产安全。
本文将详细介绍车间微生物检验的作业指导书，帮助工作人员正确进行微生物检验工作。
一、准备工作1.1 准备检验设备和试剂：确保实验室内的显微镜、培养皿、培养基、试管等设备齐全，并且保持清洁。
1.2 检查试剂有效期：检查试剂的有效期，确保使用的试剂没有过期，以免影响检验结果。
1.3 检查实验室环境：确保实验室内的环境干净整洁，无污染源存在，保持空气流通。
二、取样和处理2.1 取样方法：根据检验要求选择合适的取样方法，避免外部污染。
2.2 取样器具消毒：使用取样器具前，必须进行消毒处理，避免外部微生物的干扰。
2.3 取样保存：取样后，必须妥善保存，避免样品变质或受到外部污染。
三、培养和观察3.1 培养基选择：根据待检微生物的特性选择适合的培养基，促进微生物生长。
3.2 培养条件控制：控制培养温度、湿度等条件，促进微生物的生长和观察。
3.3 观察方法：使用显微镜观察培养皿中的微生物形态和数量，根据特征判断微生物种类。
四、结果判读4.1 结果记录：将观察到的微生物形态和数量记录下来，便于后续分析和比对。
4.2 结果分析：根据观察结果和实验要求进行微生物种类的鉴定和分析。
4.3 结果判读：根据分析结果判断微生物检验是否合格，提出相应的处理建议。
五、清洁和消毒5.1 清洁工作：检验结束后，及时清洁实验室设备和工作台面，避免交叉污染。
5.2 消毒操作：对使用过的试剂瓶、培养皿等进行消毒处理，确保实验室环境的清洁卫生。
5.3 废弃物处理：将实验产生的废弃物分类处理，避免对环境造成污染。
结语：通过本文的介绍，希望能够帮助车间微生物检验工作人员正确进行检验作业，提高微生物检验的准确性和可靠性，保障产品质量和生产安全。
同时，建议定期对检验作业指导书进行更新和完善，以适应工作中的变化和需求。
微生物限度检测方法验证操作指导书1.0目的确认所采用的方法适合于该产品的微生物限度检测。
2.0适用范围适用于公司所有需进行微生物限度检测的产品。
3.0职责化验室负责人：对本规程的实施负责。
检验人员：严格按照本规程执行检验操作。
4.0参考文件4.1 验证小组负责检验方法验证/确认方案的起草、验证/确认方案的实施。
4.2 验证委员会负责验证/确认方案的审批，验证/确认结论的审核。
5.0程序5.1 由验证小组提出验证申请，验证方案编制完成后，填写《确认和验证方案审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证方案编制人对验证小组其余人员进行培训后，方可按验证方案试验。
5.2 试验完成后及时编制验证报告，并填写《验证报告审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证报告结论才可实施。
6.0内容6.1 概述通过验证以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定及控制菌的检查。
根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方案进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
若符合，按验证的方法和条件进行产品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
6.2 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法的验证6.2.1 验证用菌株铜绿假单胞菌[CMCC（B）10 104]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]黑曲霉[CMCC（F）98 003]白色念珠菌[CMCC（F）98 001]6.2.2 验证用菌液制备6.2.2.1接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养18～24小时。
取上述培养物各1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液，备用。
车间微生物检验作业指导书一、引言微生物检验是车间生产过程中的重要环节，通过对产品和生产环境中的微生物进行检测，可以有效控制产品质量，保障生产安全。
本作业指导书旨在规范车间微生物检验的操作流程，确保检验结果的准确性和可靠性。
二、检验设备和试剂准备1. 检验设备：- 生物安全柜：用于操作微生物样品，保护操作人员和环境的安全。
- 培养箱：用于培养微生物样品。
- 显微镜：用于观察和计数微生物样品。
- 移液器、培养皿、试管等常用实验器材。
2. 试剂准备：- 培养基：根据需要选择适当的培养基，如营养琼脂、大肠杆菌选择性培养基等。
- 消毒液：用于对实验器材和工作台进行消毒，确保无菌环境。
- 甲醇、乙醇等溶剂：用于制备样品的稀释液。
三、样品采集和处理1. 样品采集：- 产品样品：从车间生产线上随机采集一定数量的产品样品，确保样品的代表性。
- 环境样品：选择生产车间内的不同区域，如工作台、设备表面、空气等采集样品。
2. 样品处理：- 产品样品：根据产品特性和检测要求，选择合适的方法进行样品处理，如稀释、均匀悬浮等。
- 环境样品：使用无菌的拭子或棉签，在采样区域轻轻刮取，将样品转移到无菌培养皿或试管中。
四、微生物培养和计数1. 培养基制备：- 按照培养基说明书中的要求，准备适量的培养基。
- 使用无菌技术，将培养基倒入无菌培养皿或试管中，待其凝固。
2. 培养：- 将处理后的样品均匀涂布在培养基表面。
- 将培养皿或试管放入培养箱中，设定适当的温度和时间，进行培养。
3. 计数：- 培养结束后，使用显微镜观察培养皿或试管中的微生物。
- 在显微镜下进行计数，记录微生物的数量。
五、结果分析和报告1. 结果分析：- 根据微生物检验的标准，对检测结果进行分析。
- 比较检测结果与标准值的差异，确定产品或环境是否符合要求。
2. 报告编写：- 撰写微生物检验报告，包括样品信息、检测方法、结果分析等内容。
- 报告应清晰、准确地呈现检验结果和结论。
微生物测试作业指导书编制：岗位：理化工程师签字：日期：审核：岗位：理化主管签字：日期：批准：岗位：质量经理签字：日期：1.目的：为了对口罩产品和初包装材料的微生物限度和控制菌进行有效控制且满足相应销售区域的标准,特制定本测试作业指导书。
2.范围：适用于本公司口罩产品及初包装材料的微生物检测。
3.职责3.1 质量部负责按照本规程的要求对初包装材料的微生物限度以及口罩产品的细菌、真菌总数和控制菌（大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌）进行检验，并出具判定报告。
3.2质量部负责定期对检测结果进行汇总及趋势分析。
3.3质量部负责本文件的编制、审核、批准。
4.工作程序4.1 测试标准：●YY 0469-2011医用外科口罩●GB 19083-2010 医用防护口罩技术要求●GB 15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准●EN 14683:2019 Medical face masks-Requirements and test methods●《中国药典2015版四部》4.2样品的取样数量：对于符合GB 19083-2010、YY 0469-2011和YY /T 0969-2013的口罩产品，取同一生产批的4个样品用于检测。
对于符合EN 14683:2019的口罩产品，取同一生产批的5个样品用于检测。
4.3控制标准：4.3.1产品相关控制标准医用防护口罩（GB 19083-2010）：医用外科口罩（YY 0469-2011）和一次性使用医用口罩（YY /T 0969-2013）：医用口罩（EN 14683:2019）微生物限度标准：≤30cfu/g4.3.2初包装材料微生物控制标准5.检测方法5.1 检测前准备5.1.1培养基a)需从合格供应商处购置成品培养基，作为支持微生物生长繁殖或新陈代谢产物的营养基础。
b)配置前需检查培养基名称和批号，打开后观察有无大型结块和污染。
如果出现上述现象不得使用。
车间微生物检验作业指导书1. 引言车间微生物检验是保证产品质量和安全的重要环节。
本作业指导书旨在规范车间微生物检验的操作流程，确保检验结果的准确性和可靠性。
2. 适合范围本作业指导书适合于车间微生物检验的所有环节，包括样品采集、样品处理、菌落计数、菌种鉴定等。
3. 检验设备和试剂3.1 检验设备：- 微生物培养箱- 培养基灭菌器- 显微镜- 平板计数器- 灭菌器3.2 试剂：- 培养基- 琼脂- 细菌培养液- 生理盐水- 无菌纱布- 灭菌液4. 检验流程4.1 样品采集4.1.1 样品采集前，操作人员应穿戴好无菌手套和口罩，保持采样环境的洁净。
4.1.2 样品采集应遵循标准采样方法，使用无菌容器采集样品，并确保样品不受外界污染。
4.1.3 采集样品后，即将送至检验室进行处理。
4.2 样品处理4.2.1 样品处理前，操作人员应将工作台面、仪器设备等进行消毒处理，确保操作环境的无菌。
4.2.2 样品处理应根据不同的样品类型进行相应的处理方法，如稀释、过滤等。
4.2.3 处理后的样品应在无菌条件下进行保存，避免细菌污染。
4.3 菌落计数4.3.1 菌落计数前，操作人员应准备好所需的培养基、琼脂等试剂，并进行灭菌处理。
4.3.2 取适量的处理后样品，加入培养基中，均匀涂布在琼脂平板上。
4.3.3 将涂布好的琼脂平板放入微生物培养箱中，设定适当的温度和时间进行培养。
4.3.4 培养结束后，使用平板计数器进行菌落计数，记录结果。
4.4 菌种鉴定4.4.1 菌落计数后，根据需要选择部份菌落进行鉴定。
4.4.2 取菌落样品，进行细菌培养液的接种。
4.4.3 将培养液接种于琼脂平板上，进行纯培养。
4.4.4 观察培养结果，根据形态、生理特性等进行菌种鉴定。
5. 结果分析与记录5.1 对菌落计数结果进行统计和分析，计算菌落形成单位（CFU）。
5.2 对菌种鉴定结果进行记录，包括菌种名称、形态特征、生理特性等。
5.3 结果记录应详细、准确，并按照规定的格式进行整理和归档。
车间微生物检验作业指导书引言：车间微生物检验是一项重要的工作，它能够匡助企业确保产品的质量和安全性。
本指导书旨在提供准确的操作指导，匡助车间人员进行微生物检验工作，保证检验结果的准确性和可靠性。
一、样品采集与处理1.1 样品采集- 样品采集前，应对采样容器进行消毒处理，以避免外界微生物的污染。
- 采样时，应选择代表性样品，并避免交叉污染。
根据不同产品的特点，确定采样点位和采样时间。
- 采样时，应注意避免直接接触样品，使用无菌采样工具进行采集。
1.2 样品处理- 样品采集后，应及时进行处理，避免微生物的生长和繁殖。
- 样品处理前，应根据检验要求选择适当的处理方法，如稀释、搅拌等。
- 样品处理时，应注意避免样品的二次污染，使用无菌操作工具和环境。
1.3 样品储存与运输- 样品处理完成后，应根据检验要求选择适当的储存条件，如低温、避光等。
- 样品储存时，应密封好容器，避免外界微生物的污染。
- 样品运输时，应选择适当的运输方式，并确保样品的稳定性和完整性。
二、微生物检验方法2.1 培养基选择- 根据不同微生物的生长特性和检验要求，选择适当的培养基，如普通营养琼脂培养基、选择性培养基等。
- 培养基的配制应按照规定的配方和浓度进行，避免过度或者不足。
2.2 培养条件控制- 培养条件包括温度、湿度、pH值等，根据不同微生物的生长要求进行控制。
- 培养条件的控制应按照标准操作程序进行，确保结果的可靠性和可比性。
2.3 培养时间和观察- 培养时间根据不同微生物的生长速度和检验要求确定，普通为24-48小时。
- 培养过程中，应定时观察培养基上的菌落形态、颜色等特征，并记录观察结果。
三、结果判定与记录3.1 结果判定- 根据检验要求和标准，对培养基上的菌落进行鉴定和计数。
- 结果判定时，应注意避免主观因素的干扰，如颜色、形态等。
3.2 结果记录- 结果记录应详细、准确，包括样品信息、检验项目、结果等。
- 结果记录时，应使用规定的记录表格或者系统，确保结果的可追溯性和可比性。
目的: 建立微生物限度检查的标准操作规程, 为微生物检验人员提供正确的操作方法。
范围: 适用于辅料、内包材料和所有产品的微生物限度检查。
职责: 检验人员对本规程的实施负责。
参照标准: GB/T4789.3- ,GB/T4789.15- ,GB/T4789.2-
内容:
1概述
微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法, 包括染菌量及控制菌的检查。
供试品一般按批号随机抽样; 抽样量应为检验用量( 2个以上最小包装单位) 的3倍量( 以备复检) 。
检验的全过程, 均应严格遵守无菌操作, 严防再污染。
2仪器与用具
恒温恒湿培养箱、生化培养箱、恒温水浴、高压蒸汽消毒锅、电热恒温干燥箱; 试管、锥形瓶、量筒、培养皿( Φ90mm) 、刻度吸管、研钵; 托盘天平或电子天平、镊子、剪刀、酒精灯、打火机、编号笔、 75%酒精棉球; 拖鞋、无菌衣、裤、帽、口罩。
以上玻璃器皿、镊子、剪刀等洗净、晾干, 160～170℃干烤2h, 备用。
所有灭菌物品存放于第一缓冲间, 不应超过2周即用毕。
否则, 应重新灭菌。
3培养基、试液配制
营养琼脂培养基( 细菌用) 、孟加拉红培养基( 虎红琼脂培
养基, 霉菌用) , 胆盐乳糖培养基( 即BL, 用于大肠杆菌增菌培养) 、 4—甲基伞
形酮葡糖苷酸( MUG) 培养基( 用于大肠杆菌快速检查) 、麦康凯
琼脂培养基( 即MacC, 用于肠道菌分离培养) 、蛋白胨水培养基
( 供靛基质试验用) 、磷酸盐葡萄糖胨水培养基( 供甲基红及VP
试验用) 、枸橼酸盐培养基( 供枸橼酸盐利用试验用) ; 营养肉
汤培养基、四硫磺酸钠亮绿培养基( TTB, 沙门菌增菌用) 、胆
盐硫乳琼脂( DHL) 或沙门、志贺菌属琼脂( SS) 培养基( 用于沙
门菌分离培养) 、麦康凯琼脂或曙红亚甲蓝琼脂培养基( 大肠杆
菌及沙门菌分离培养用) 、三糖铁琼脂( TSI) 斜面培养基( 肠道
菌初步鉴别用) 的配制及灭菌方法参见中国药典一部附录ⅩⅢC。
0.1%2,3,5-氯化三苯基四氮唑( TTC) 溶液( 供制备培养基
用) 、氢氧化钾试液( 供作V–P反应试剂) 、α–萘酚乙醇溶
液( 供作V―P试剂) 、靛基质试液。
的配制及灭菌方法参见中国
药典一部附录ⅩⅢC。
稀释剂: 0.9%无菌氯化钠溶液、无菌磷酸盐缓冲液( PH7.2) 。
4操作过程
4.1试验前的准备
4.1.1将所有已灭菌的培养皿、锥形瓶、研钵、试管、吸管、量
筒、稀释剂及供试品等经过传递窗进入无菌室内, 每次试验
所用物品必须事先计划, 准备足够用量, 避免操作中出入。
将全部包装去掉, 编号。
4.1.2开启紫外灯30分钟( 或臭氧发生器1h) 和空气过滤装置30
分钟, 进行空间灭菌处理。
4.1.3操作人员用肥皂洗手, 关闭紫外线杀菌灯( 或臭氧发生器) ,
进入缓冲间, 换工作鞋。
再用0.1%苯扎溴铵( 新洁尔灭) 消
毒液洗手或乙醇棉球擦手, 穿戴无菌衣、帽、口罩、手套。
4.1.4操作前先用乙醇棉球擦手, 再用乙醇棉球( 或碘伏棉球) 擦
拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围, 待干后用灭菌的手
术剪刀将供试品瓶、盒、袋启封。
启封后先检查包装内侧
及周围有无生霉、长螨迹象, 若经证实为生霉、长螨即可
判为不合格, 无须继续检验。
4.1.5定期检查无菌环境的空气是否符合规定。
4.2操作
4.2.1 细菌、霉菌与酵母菌
4.2.1.1 以无菌操作, 称取检样25g(ml), 加入含225ml灭菌水
的具玻塞锥形瓶中, 振摇30min,即为1: 10稀释液。
4.2.1.2 用灭菌吸管吸取1: 10稀释液10ml, 注入灭菌试管中,
另用1ml灭菌吸管重复吹吸50次, 使霉菌孢子充分散开。
4.2.1.3 取1支1ml灭菌吸管吸取1: 10均匀供试液1ml, 沿管
壁加入装有9ml灭菌稀释剂的试管中, 混匀即1: 100供
试液。
以此类推, 根据供试品污染程度, 可稀释至1: 103
或1: 104, 细菌选择两至三个稀释度, 霉菌选择三个稀释
度。
4.2.1.4 在进行10倍递增稀释的同时, 以该稀释级吸管吸取每
级稀释液各1ml置每个灭菌平皿中, 每稀释级注2个平皿。
另取1支1ml吸管吸取稀释剂各1ml注入2个平皿中, 作
为阴性对照。
4.2.1.5 将融化并冷至约45℃的培养基注入上述各个平皿约15
ml, 以顺时针或反时针方向快速转动平皿( 勿使培养基溢
出) 使供试液与培养基混匀, 放置, 待凝。
4.2.1.6 将已凝固的平板倒置于适宜温度的培养箱中, 培养。
细
菌于36℃±1℃培养48±2小时, 霉菌、酵母菌于25～
28℃培养, 3天后开始观察, 共培养观察5天。
4.2.1.7 将平板置菌落计数器上或从平板的背面直接以肉眼用标
记笔点计, 以透视光衬以暗色背景, 仔细观察, 计数。
4.2.2 大肠杆菌
取胆盐乳糖培养基3份, 每份100ml, 2份分别加入规定量的供试液, 其中1份加入对照菌50～100个作阳性对照, 第3份加入与供试液等量的稀释液作阴性对照。
培养18～24小时( 必要可延至48小时) 。
阴性对照应无菌生长。
取上述3份的培养物各0.2ml, 分别接种至5ml MUG培养基管内培养, 分别于5小时与24小时时, 取未接种的MUG培养基管作本底对照, 将各管置365nm紫外光下观察。
阳性对照管呈现荧光, MUG阳性。
供试液的MUG管呈现荧光, MUG
阳性: 无荧光, MUG阴性。
然后加数滴靛基质试液于MUG管内, 液面呈玫瑰红色为阳性, 呈试剂本色为阴性。
当阴性对照呈阴性, 阳性对照正常生长, 供试液胆盐乳糖培养基培养液澄明, 并证明无菌生长, 判未检出大肠杆菌。
供试液MUG 阳性, 靛基质阳性, 判检出大肠杆菌; MUG阴性, 靛基质阴性, 判未检出大肠杆菌。
如MUG阳性、靛基质阴性, 或MUG阴性、靛基质阳性, 均应取供试液胆盐乳糖培养基培养物划线于曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板, 培养18~24小时, 如上述供试液培养物的分离平板无菌落生长, 判未检出大肠杆菌。
或有菌落生长, 应挑选2~3可疑菌落作靛基质试验( Ⅰ) 、甲基红试验( M) 、乙酰甲基甲醇生成试验( V-P) 、枸橼酸盐利用试验( C) 及革兰染色、镜检, 按下表判断结果。
注: ①②——如①出现++－－或②出现－+－－, 均应重新分离菌株, 再作MUG-I 和IMVic试验。
③革兰氏阴性杆菌。
4.2.3 沙门菌:
取营养肉汤培养基3份, 每份100ml, 2份分别加入规定量的
供试液, 其中1份加入对照菌液作阳性对照, 第3份加入与供试液等量的稀释液作阴性对照。
培养18～24小时, 阴性对照应无菌生长。
取其余2份培养物各1 ml, 分别接种于四硫磺酸钠亮绿培养基10 ml中, 培养18～24小时。
分别划线接种于胆盐硫乳琼脂( 或沙门、志贺菌属琼脂) 培养基和麦康凯琼脂( 或曙红亚甲蓝琼脂) 培养基的平板上, 培养18～24小时或延至40～48小时。
当阳性对照的平板呈现阳性菌落时, 供试品的平板无菌落生长, 或有菌落但不同于下表所列特征时, 可判为未检出沙门菌。
如供试品平板生长的菌落特征有与上表所列形态特征相符或疑似者, 均应挑选2～3个菌落分别接种于三糖铁琼脂培养基斜面上, 阳性对照同时接种该培养基, 培养18～24小时后, 阳性对照的斜面应为红色, 底层为黄色, 硫化氢阳性, 而供试品的疑似菌斜面未见红色、底层未见黄色, 可判为未检出沙门菌。
否则, 应继续做靛基质试验、脲酶试验、赖氨酸脱羧酶试验、动力检查、血清凝集试验。
5 注意事项
5.1供试品在检验之前, 应保存在阴凉干燥处, 勿冷藏或冷冻,
以防供试品内污染菌因保存条件不妥引起致死, 损伤或繁殖。
供试品在检验之前, 应保持原包装状态, 严禁开启。
包装已开启的样品不得作为供试品。
5.2除另有规定外, 供试品制备成供试液后, 应在均匀状态取样。
制成供试液后, 应在60分钟内注皿操作完毕。
5.3配制后的培养基应及时灭菌, 避免细菌繁殖。
培养基不应有沉
淀, 如发生沉淀, 应趁热过滤。
5.4制备妥的培养基应在冷暗处保存, 放置时间不能过长, 锥形
瓶的琼脂培养基保存时间最长不能超过一个月, 以免水分散失染菌。
5.5勿用电炉直接融化琼脂培养基, 以免营养成分过度受热而破
坏。
5.6注皿时培养基应在45±1℃, 高于45℃时易造成细菌受损或致
死, 低于45℃时易凝固, 因此使用前应水浴保温。
5.7细菌、霉菌与酵母菌及控制菌必须做阴性对照试验( 目的:
测试检验全过程无菌技术的可靠性) , 控制菌必须做阳性对照试验( 目的: 检查供试品是否对控制菌生长产生干扰作用, 同时检查培养条件是否适宜) 。
5.8阳性对照试验操作必须与供试品检验操作严格分开, 避免交
叉污染。
5.9做完试验后, 用消毒液清洁, 开紫外灯照射30分钟( 或臭氧
发生器1h) 。
