淋巴细胞功能检测

淋巴细胞亚群检测意义
淋巴细胞亚群检测的临床意义是了解恶性肿瘤、免疫缺陷病、血液病等。

淋巴细胞亚群检测是检测机体细胞免疫功能的重要指标，它能反映机体当前的免疫状态、功能和平衡情况，可以辅助诊断多种疾病，如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病等，同时可分析其发病机制，对于观察临床治疗效果和预后具有重要的意义，淋巴细胞亚群检测时CD4⁺淋巴细胞减少CD4绝对值的变化可用于艾滋病的免疫状态分析、疗效观察及预后判断。

可见于恶性肿瘤、免疫缺陷病比如艾滋病、血液病比如再生障碍性贫血等。

在检查前一天，患者饮食以清淡，以消化为主，同时要忌烟酒，晚上10点以后进食，可适当饮用温开水，次日早上空腹检查，如果检查后患有疾病要积极配合医生进行治疗，防止病情加重。

淋巴细胞标志和功能的检测人体内的淋巴细胞分为T细胞、B细胞和包括NK细胞为代表的第三群细胞，下分若干亚群，各有其特异的表面标志和功能，据此建立许多相应的检测方法。

临床上各种类型的免疫缺陷症、自身免疫病以及肿瘤等均可出现不同群淋巴细胞数量和功能的变化。

因此计数外周血和组织内淋巴细胞及其亚群的数目或比例，以及它们所显示的功能强弱，可藉此判断机体的细胞免疫水平，对临床认识疾病，探讨其发病机制、观察病情、判断预后、考核疗效以及防治疾病等方面可提供极为有用的信息。

第一节T细胞表面标志的检测一、特异性抗原的检测检测人T细胞的特异性抗原，曾采用抗人脑、抗人胸腺细胞和抗人T细胞等抗血清，通过细胞毒试验或免疫荧光染色加以鉴定。

自抗白细胞分化抗原的单克隆抗体问世以来，上述诸多方法均被新方法取而代之。

常用以鉴定和检测计数T细胞的表面分化抗原如表21-1所示。

表21-1 T胞表面主要CD抗原及其特异性用单克隆抗体检测T细胞表面抗原的方法有两大类，一类是用标记抗体着染，如免疫荧光法、酶免疫法、生物素－亲和素（或链霉亲和素）系统的ABC法以及免疫金银染色法；另一类是用抗体致敏的红细胞作花环试验。

两类方法各有优缺点。

以下叙述有代表性的方法。

（一）间接免疫荧光法本法是将分离获得的外周血单个核细胞分别与抗相应CD的单克隆抗体（如CD2、CD4、CD8）结合后，洗去游离的抗体，继加荧光素标记的抗小鼠IgG抗血清，经温育结合后，洗去多余的标记抗体，取样制片，用荧光显微镜观察并计数约200个单个核细胞，以荧光阳性细胞与计数细胞总数之比，求得相应CD抗原阳性的T百分率。

如有条件，细胞经荧光标记抗体着染后，用流式细胞仪计数，快速而准确，但需要较多的投资，难以普及应用。

（二）免疫细胞化学法通常用酶免疫检测法，如APAAP酶免疫桥联法。

为减少非特异性着染，可选用生物素－链霉亲和素系统试剂作ABC法染色。

该类方法可用普通显微镜观察，凡呈棕黄色的细胞为相应CD抗原阳性细胞，计其占总淋巴细胞的百分率。

项目十七T淋巴细胞表面标志和功能检测一、E花环形成试验(Erythrocyte rosette formation assay)【实验原理】人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，可与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。

此试验用于计数T细胞数量，进而可判断机体细胞免疫状况。

由于T 细胞的异质性，其中在4℃放置1h以上，所形成的花环数代表T细胞总数，称为总花环(Et 花环)，而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用，立即反应形成的花环称为活性花环(Ea花环)。

【试剂和器材】1．肝素抗凝剂用Hanks液将肝素配成500U/ml，分装，每管0.1ml，置4℃备用。

2．淋巴细胞分离液(密度为1.077±0.001)。

3．小牛血清56℃加热灭活30min，按2:1比例与沉积SRBC混合，置37℃30min，离心，收集血清备用。

4．0.5％SRBC悬液取脱纤维或Alsever液保存的羊血，用5～10倍量生理盐水洗3 次。

第3次2500r/min离心10min，弃上清液，用生理盐水配成0.5％的SRBC悬液(约108个细胞/ml)。

5．0.8％戊二醛取30.25ml 4.5 g/L NaCl 盐水，加入1ml 25％戊二醛即可。

6．姬姆萨-瑞氏染液取磷酸缓冲液(PB：1/15 mol/L, pH7.0～7.4)10ml，加入姬姆萨染液6滴及瑞氏染液1滴。

7．Alsever液、Hanks液(无Ca2+和Mg2+, pH7.2～7.4)、PB(1/15 mol/L, pH7.0～7.4)、生理盐水。

8．离心机、水浴箱、电冰箱、显微镜、离心管、载玻片、盖玻片、吸管、吸球、注射器。

【步骤和方法】1．淋巴细胞悬液的制备取2ml肝素抗凝血，加入2ml Hanks液，叠加于2ml 淋巴细胞分离液上，水平离心2000 r/min 20 min。

取出单个核细胞层，用4~5倍Hanks液洗2次，每次离心1000r/min 10min。

淋巴细胞亚群检测意义淋巴细胞是人体免疫系统中的重要组成部分，分为T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等多个亚群。

对于淋巴细胞亚群进行检测有助于了解个体的免疫状态和疾病风险，对于指导临床诊断和治疗具有重要意义。

1. 淋巴细胞亚群的分类及功能1.1 T细胞T细胞是淋巴细胞家族中的一类重要细胞，主要包括CD4+T细胞和CD8+T细胞。

CD4+T细胞在机体中发挥着调节免疫应答、促进B细胞产生抗体和激活细胞毒性T细胞的作用；CD8+T细胞则具有直接杀伤感染细胞的能力。

1.2 B细胞B细胞是一类产生抗体的淋巴细胞，主要作用是识别和清除体内的病原体，参与体液免疫应答。

1.3 自然杀伤细胞自然杀伤细胞是一种非特异性杀伤肿瘤细胞和感染细胞的淋巴细胞亚群，对于清除体内异常细胞起着重要作用。

2. 淋巴细胞亚群检测方法淋巴细胞亚群检测可以通过流式细胞术、免疫组化、PCR等多种方法进行。

其中，流式细胞术是一种常用的检测方法，可定量分析不同亚群的细胞数量和比例。

3. 淋巴细胞亚群检测在临床中的意义3.1 评估免疫功能通过淋巴细胞亚群检测，可以评估个体的免疫功能状态，及时发现免疫功能异常，指导个性化治疗方案。

3.2 预测疾病进展某些疾病如艾滋病、自身免疫性疾病等会导致淋巴细胞亚群发生异常，检测这些变化可以帮助预测疾病的进展和预后。

3.3 指导药物治疗淋巴细胞亚群检测结果可为临床合理选药提供参考，比如在白细胞减少的患者中，可基于检测结果调整药物用量。

4. 结语淋巴细胞亚群检测在评估免疫功能、预测疾病进展和指导药物治疗等方面具有重要意义。

进一步深入研究淋巴细胞亚群的检测方法和临床应用，有助于提高疾病诊断与治疗水平。

免疫学技术原理与应用PAIT-12淋巴细胞功能测定孙汭中国科技大学生命科学学院免疫学研究所PMIT-12淋巴细胞功能测定一、常用的淋巴细胞功能测定二、T淋巴细胞功能测定三、B淋巴细胞功能测定四、NK细胞细胞毒试验一、常用的淋巴细胞功能测定1、淋巴细胞增殖试验① 3H-TdR掺入法原理：淋巴细胞在丝裂原或特异性抗原刺激下转化为淋巴母细胞，发生转化过程中，细胞DNA合成大量增多。

此时在细胞培养液中加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-Thymidine riboside, 3H-TdR), 使3H-TdR掺入新合成的DNA中，经β-液体闪烁仪检测淋巴细胞DNA 的3H-TdR掺入量，根据掺入细胞内的核素的量可判断淋巴细胞增殖的程度。

② MTT比色法原理：MTT（（3-4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑）是一种黄色可溶性噻唑盐，掺入细胞后，在细胞活化增殖时通过线粒体能量代谢过程，MTT代谢形成蓝色的甲攒（Formazan)沉积于细胞内或细胞周围，形成甲攒的量与细胞增殖程度成正相关。

甲攒经异丙醇溶解后呈紫蓝色，借助酶标仪测定OD值，可反映细胞增殖水平。

2、细胞毒试验①51Cr释放法原理：用放射性核素51Cr（Na251-CrO4，鉻酸钠）标记靶细胞，51Cr即可进入靶细胞，与胞浆蛋白结合。

然后将51Cr标记的靶细胞与待检细胞（效应细胞）共同孵育一定时间后，若待检细胞能够杀伤靶细胞，则51Cr从靶细胞释放出来。

51Cr的释放量与效应细胞的活性成正相关。

即靶细胞被杀伤的越多，释放到上清中的游离51Cr越多，用γ计数仪测定上清中51Cr的放射活性（cpm）值，以计算待检细胞的细胞毒活性。

（一）、用51Cr铬酸钠标记靶细胞1．用RPMI-1640培养液洗涤107靶细胞，去上清液。

用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。

加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。

免疫T淋巴细胞检测——帮助了解你的免疫力免疫力是人体抵御疾病的重要依靠，而T淋巴细胞是免疫系统的重要组成部分。

T淋巴细胞检测是一种现代化的检测方法，可以帮助人们了解自己的免疫状态，有助于保持免疫系统的健康。

本文将向大家介绍免疫T淋巴细胞检测的相关知识，帮助大家正确认识自己的免疫力。

T淋巴细胞是什么？T淋巴细胞是一种白细胞，是免疫系统中的核心细胞之一，主要负责识别和攻击病原体、癌细胞等异物。

T淋巴细胞在人体免疫系统中起着重要作用。

它们通过产生特异性抗体、杀伤病原体和调节免疫反应等方式来保护身体免受疾病侵害。

T淋巴细胞的种类和数量各不相同，包括CD4+ T淋巴细胞、CD8+ T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞等。

它们各自承担着不同的免疫功能。

例如，CD4+ T淋巴细胞主要负责指挥和调节免疫反应，激活其他免疫细胞，如B淋巴细胞和巨噬细胞等；CD8+ T淋巴细胞则是通过直接杀死病原体和癌细胞来保护身体免受侵害，T淋巴细胞数量过低可能意味着免疫系统出现了问题，进而导致身体容易感染疾病。

T淋巴细胞检测的作用是什么？1. 了解免疫系统的状况：T淋巴细胞检测可以帮助确定免疫系统的状况，包括T淋巴细胞的数量和比例。

通过了解自己的T淋巴细胞状态，可以判断免疫系统是否正常工作，是否存在免疫功能异常或免疫系统亢进的情况。

2. 预防和诊断疾病：T淋巴细胞检测可以帮助医生预防和诊断一些疾病。

例如，艾滋病、白血病等。

某些疾病会导致T淋巴细胞数量异常，通过检测T淋巴细胞的数量和比例，可以及早发现这些疾病的存在。

3. 判断免疫功能：T淋巴细胞检测可以帮助判断免疫功能的强弱。

免疫功能强的人，T淋巴细胞数量和比例通常在正常范围内。

而免疫功能较弱的人，会存在T淋巴细胞数量不足或功能异常的情况，容易导致感染和疾病的发生。

如何进行T淋巴细胞检测？1. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过样本细胞的荧光染色，使不同的T淋巴细胞呈现不同的颜色，然后采用流式细胞仪器进行检测的方法。

评价t淋巴细胞功能的试验
T淋巴细胞是人体免疫系统中的重要组成部分，它们能够识别和攻击入侵体内的病原体，保护人体免受感染。

因此，评价T淋巴细胞功能的试验对于了解人体免疫系统的健康状况具有重要意义。

一种常用的评价T淋巴细胞功能的试验是淋巴细胞转化试验（LTT）。

该试验通过观察T淋巴细胞对特定抗原的反应来评估其功能。

在LTT中，从被测者的血液中分离出淋巴细胞，然后将它们与特定抗原刺激，观察细胞是否会转化为活跃状态并产生细胞因子。

如果T淋巴细胞对抗原的反应较弱或缺乏反应，则说明其功能存在问题。

另一种评价T淋巴细胞功能的试验是细胞因子分泌试验（CST）。

该试验通过检测T淋巴细胞产生的细胞因子来评估其功能。

在CST 中，从被测者的血液中分离出淋巴细胞，然后将它们与特定抗原刺激，观察细胞是否会产生细胞因子。

如果T淋巴细胞产生的细胞因子较少或缺乏，则说明其功能存在问题。

除了LTT和CST外，还有其他一些评价T淋巴细胞功能的试验，如细胞毒性试验、细胞增殖试验等。

这些试验都能够从不同角度评估T淋巴细胞的功能，为临床医生提供重要的诊断和治疗参考。

评价T淋巴细胞功能的试验对于了解人体免疫系统的健康状况具有重要意义。

通过这些试验，我们可以及时发现T淋巴细胞功能异常
的情况，并采取相应的治疗措施，保护人体免受感染。