wb转膜条件公式

western 转膜条件蛋白来源：RAW264.7 总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：40~70 KDWB用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400 mA 转膜时间：60~90 minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15 min 就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。

蛋白来源：内皮细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin & AKT 蛋白分子量：65 KD & 56 KDWB用膜类型、孔径：0.45 PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100 V转膜时间：60~70 min设备名字是“ Bio-Rad mini ”。

蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：65 KD & 55 KDWB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒压12 V 转膜时间：30-40 min 设备：“ Bio-Rad mini ” 建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。

蛋白来源：293T 细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：95 KD & 35 KDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压90 V-110 V ，控制电流不要超过300 mA。

转膜时间：70 min蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称（可保密）：转录因子蛋白分子量：33 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。

[1]各位朋友：请教关于SDS—PAGE的问题。

我的配胶体系如下:15%分离胶4%浓缩胶水2.3ml2.7ml30％丙烯酰胺5。

0ml 0。

67mlTris—HCL PH8。

8 2。

5ml PH6.8 0.5ml10％SDS 0.1ml 0。

04ml10％APS 0。

1ml 0.04ml TEMED 0。

004ml 0.004ml 我的蛋白分子量是11kd,浓缩胶60V,40min，分离胶90V，70min.跑胶时总是跑不直，呈抛物线型，请问是什么原因?我的试剂都是新配置的。

谢谢！！！答：【1】胶的配制方法；配制不同体积15%胶SDS—PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升) 15％胶（毫升）： 5 －－10 －－15－－20－－30－－50 蒸馏水: 0。

5 －－ 1.0－－ 1.5 －－ 2.0 －－3。

0 －－5.0 30％Acr-Bis(29:1）: 2。

5 －－5。

0 －－7.5 －－10。

0 －－15。

0－－25.0 1M Tris, pH8。

8: 1.9－－3。

8 －－5.7－－7.6－－11。

4 －－19。

0 10%SDS ：0。

05－－0.1－－0。

15 －－0.2－－0。

3－－0.5 10％过硫酸铵：0.05 －－0.1 －－0.15－－0。

2 －－0.3 －－0.5 TEMED：0。

002－－0.004 －－0。

006 －－0。

008 －－0.012 －－0.02 配制不同体积4%胶SDS—PAGE浓缩胶所需各成分的体积（毫升) 4%浓缩胶（两块胶，5ml）超纯水： 3.16ml40％Acr/Bic（37。

5：1）: 0。

5ml0。

5 mol/L Tris•HCl（pH6.8）：1.26ml10％SDS ：50 微升μ微升μ10％AP(过硫酸胺）：25 TEMED ：5 微升μ加TEMED后，立即混匀即可灌胶.【2】注意玻璃板一定要洗干净，这一点比较重要.如果玻璃板洗不干净,很容易造成楼主所说的现象。

老司机教你七步学会WesternBlotStep by step!这就是最立竿见影的WB操作流程！Western blot素来就是个老生常谈的实验，饶是如此，新手们仍是深觉此坑易入不易出，但老司机却已经达到坐看云起时的淡然境界，原因无他，多番的千锤百炼早已练就了金刚不坏之身，深谙WB实验的他们对其流程中的任一细节都了如指掌。

现如今就将这素不外传的操作秘籍分享给大家，让大家可愉快与WB实验玩耍。

一、样品制备：（以动物组织为例）1.取少量的动物组织（如小鼠脾脏取1/2）于2 ml的离心管中，加入1 mlPBS后放入组织研磨仪中研磨1min，离心，去除PBS。

再用1mlPBS洗涤一次，离心（12000 r，10 min）弃去PBS（冰上操作）。

2.配制1mL RIPA裂解液（0.99RIPA 0.01PMSF），加入0.5-1ml 的预冷的RIPA裂解液（0.1 g组织以1:10加入含PMSF/RIPA），再放入组织研磨仪中研磨3-5次，使细胞完全破碎，然后将离心管冰浴15min，每隔5min涡旋混合仪振荡30s，保证细胞完全裂解。

3.充分裂解后，12000g，4℃离心10min，将上清液转移到新的1.5ml的离心管中，即得组织总蛋白产物。

4.产物中可加入20%的甘油，保存于-20℃~-80℃。

注意事项：· 再转移上清液时不要吸入底部的沉淀并尽可能取完全上清液。

· 如裂解液未加入蛋白酶抑制剂，需自行加入蛋白酶抑制剂PMSF （苯甲基磺酰氟，剧毒），取适量的裂解液，再使用前数分钟加入PMSF，使其浓度为1Mm/L=0.17419g/L。

· 裂解蛋白的所有步骤均需要再冰上操作或4℃进行。

· 也可购买相关蛋白提取试剂盒按照说明书进行蛋白提取，提取变性蛋白使用国产品牌即可，如果要保持天然蛋白活性的提取，建议还是购买进口品牌。

二、蛋白浓度测定：（BCA法）1.购买BCA蛋白浓度测定试剂盒测定样品总蛋白，目的是为了保证上样量蛋白在20-100μg之间和尽可能使上样蛋白总量接近。

wb转膜条件公式一、引言WB转膜是生物实验中常用的技术，它将蛋白质从凝胶转移到膜上，以便进行后续的免疫反应。

为了获得良好的转膜效果，了解转膜条件公式及其实际操作步骤至关重要。

本文将详细介绍WB转膜条件的公式、实际操作步骤以及转膜条件对实验结果的影响。

二、WB转膜条件的公式介绍1.转膜公式WB转膜条件的公式可以表示为：转膜速率= （转膜电压× 转膜时间）/ 转膜距离其中，转膜电压（V）、转膜时间（s）和转膜距离（cm）是影响转膜速率的关键因素。

2.转膜条件的确定在实验过程中，需根据目的蛋白的大小、实验要求以及设备性能来确定合适的转膜条件。

通常情况下，较高的转膜电压和较长的转膜时间有利于大分子蛋白质的转膜。

3.转膜条件的应用根据实验需求，可以灵活调整转膜条件以达到最佳转膜效果。

例如，在研究低丰度蛋白质时，可以降低转膜电压和缩短转膜时间，以提高转膜效率。

三、WB转膜条件的实际操作步骤1.准备试剂和器材：磷酸缓冲液、转膜缓冲液、滤纸、膜、转移装置、电泳仪等。

2.蛋白质电泳：将待检测蛋白质样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。

3.转膜：将电泳后的凝胶与转膜膜贴合，放入转移装置，按照预先设定的转膜条件进行转膜。

4.封闭：将转膜后的膜用封闭液封闭，以减少非特异性结合。

5.抗体孵育：将封闭后的膜放入特异性抗体溶液中，进行孵育，以检测目标蛋白质。

6.显色：加入显色剂，观察膜上目标蛋白质的显色情况。

四、转膜条件对实验结果的影响1.转膜效果的评判转膜效果可以通过目的蛋白的清晰度、信号强度和背景噪声等指标来评判。

合适的转膜条件可以提高蛋白质的转膜效率，减少非特异性结合，获得清晰的免疫印迹。

2.转膜条件与实验结果的关系转膜条件直接影响蛋白质的转膜效果，从而影响实验结果的准确性。

因此，在实验过程中，需要根据目的蛋白的特性和实验要求来调整转膜条件，以获得理想的实验结果。

五、总结与展望WB转膜条件公式为实验人员提供了理论依据，有助于优化转膜条件，提高转膜效果。

操作篇：westernblot之转膜转膜篇1. 转一张膜需准备 6 张 7.0～8.3 cm 的滤纸和 1 张 7.3～8.6 cm 的硝酸纤维素膜。

切滤纸和膜时一定要戴手套，因为手上的蛋白会污染膜。

将切好的硝酸纤维素膜置于水上浸 2 h 才可使用。

要领：（1）用镊子捏住膜的一边轻轻置于有超纯水的平皿里，要使膜浮于水上，只有下层才与水接触。

这样由于毛细管作用可使整个膜浸湿。

若膜沉入水里，膜与水之间形成一层空气膜，这样会阻止膜吸水；（2）个人感觉其实转膜之前浸湿一下就ok 了，没有多大问题，可能按照上述操作结果会更好。

2. 在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和浸过的膜。

3. 将夹子打开使黑的一面保持水平。

在上面垫一张海绵垫，用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。

在垫子上垫三层滤纸，一手固定滤纸一手用玻棒擀去其中的气泡。

要领：（1）「用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡」，要领：一手擀另一手要压住垫子使其不能随便移动。

（2）「在上面垫一张海绵垫」要领：可三张纸先叠在一起在垫于垫子上。

个人感觉就垫 1 张滤纸也没问题。

4. 要先将玻璃板撬掉才可剥胶，撬的时候动作要轻，要在两个边上轻轻的反复撬。

撬一会儿玻璃板便开始松动，直到撬去玻板。

除去小玻璃板后，将浓缩胶轻轻刮去（浓缩胶影响操作），要避免把分离胶刮破。

小心剥下分离胶盖于滤纸上，用手调整使其与滤纸对齐，轻轻用玻棒擀去气泡。

将膜盖于胶上，要盖满整个胶（膜盖下后不可再移动）并除气泡。

在膜上盖3 张滤纸并除去气泡。

最后盖上另一个海绵垫，擀几下就可合起夹子。

整个操作在转移液中进行，要不断的擀去气泡。

膜两边的滤纸不能相互接触，接触后会发生短路。

要领：（1）「要在两个边上轻轻的反复撬」要领：应该边撬边用流水缓缓冲洗（2）「直到撬去玻板」要领：撬时一定要小心，胶很易裂，要用巧劲（3）转移液含甲醇，操作时要戴手套，实验室要开门以使空气流通。

（4）最后做成的「三明治」千万不能形成短路，不然有可能会短路烧坏转膜装置（价格不菲，尤其是进口的），第一次做的应请老手指教。

转膜(Trarsmembran)1 转膜的定义将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法.常用的电泳转移方法有湿转和半干转。

两者的原理完全相同,只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同.前者操作容易，转移效率高;而后者适用于大胶的蛋白转移，所用缓冲液少.2 转移膜的选择杂交膜的选择是决定Western blot成败的重要环节。

应根据杂交方案、被转移蛋白的特性以及分子大小等因素，选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。

用于Western blot的膜主要有两种:硝酸纤维素膜（NC) 和PVDF膜。

NC膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物，在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起，但在非离子型的去污剂作用下，结合的蛋白还可以被洗脱下来。

根据被转移的蛋白分子量大小，选择不同孔径的NC膜。

因为随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。

通常用0.45 μm和0。

2 μm两种规格的NC膜。

大于20 kD的蛋白可用0.45 μm的膜，小于20 kD的蛋白就要用0。

2 μm的膜了,如用0.45 μm的膜就会发生“Blowthrough”的现象。

PVDF膜灵敏度、分辨率和蛋白亲和力比常规的膜要高，非常适合于低分子量蛋白的检测。

但PVDF膜在使用之前必需用纯甲醇浸泡饱和1-5秒钟。

最常用于Western Blot的转移膜主要是硝酸纤维素(Nitrocellulose, NC）膜和聚偏二氟乙烯(Polyvinylidene Fluoride, PVDF)膜，此外也有用尼龙膜、DEAE纤维素膜做蛋白印迹。

尼龙膜和NC膜的特点相似，主要用于核酸杂交。

硝酸纤维素(nitrocellulose, NC）膜:NC与蛋白质靠疏水作用结合，无需预先活化,对蛋白质的活性影响小;非特异性本底显色浅；价格低廉，使用方便.但结合在NC上的小分子蛋白质在洗涤时易丢失； NC韧性较差，易损坏。

wb转膜条件公式
【实用版】
目录
1.概述
2.转膜条件公式的含义
3.转膜条件公式的推导
4.转膜条件公式的应用
5.总结
正文
1.概述
在工程领域，尤其是在膜技术领域，膜的转膜过程是一个非常重要的环节。

转膜是指在膜的两侧施加一定的压力差，使得溶液中的溶质通过膜的微孔结构从一侧转移到另一侧的过程。

转膜条件公式，顾名思义，就是描述这个转膜过程中关键条件的公式。

2.转膜条件公式的含义
转膜条件公式是用来描述在转膜过程中，压力差、膜的特性和溶液的特性等因素之间的关系的公式。

这个公式可以帮助工程师们预测和控制转膜过程的效果，以达到最佳的转膜效果。

3.转膜条件公式的推导
转膜条件公式的推导涉及到一些复杂的物理和化学原理，包括膜的微孔结构、溶质的传输机制、溶液的物理性质等。

在推导过程中，通常会采用一些假设和简化，以方便实际应用。

4.转膜条件公式的应用
转膜条件公式在实际应用中具有重要的意义。

通过使用这个公式，工
程师们可以预测和控制转膜过程的压力差、膜的通量和分离效果等关键参数，从而实现最佳的转膜效果。

此外，转膜条件公式还可以用于评估和选择膜的性能，为膜的设计和优化提供理论依据。

5.总结
转膜条件公式是描述膜转膜过程中关键条件的公式，它涉及到膜的微孔结构、溶质的传输机制、溶液的物理性质等多个因素。

wb转膜条件公式（原创实用版）目录1.WB 转膜的定义和目的2.WB 转膜的常用方法3.WB 转膜的条件公式4.WB 转膜的注意事项5.总结正文一、WB 转膜的定义和目的WB（Western Blot）转膜，又称为免疫印迹转膜，是一种将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）转移到固相支持物上的技术。

其主要目的是为了将电泳分离得到的蛋白质样品，转移到固相载体上，以便于进行后续的免疫学检测和分析。

二、WB 转膜的常用方法WB 转膜常用的方法有以下几种：1.湿式转膜：湿式转膜是最常用的 WB 转膜方法，其主要原理是利用电场和分子渗透作用，将蛋白质从凝胶中转移到固相载体上。

2.干式转膜：干式转膜则是通过暴露于干燥的气氛中，使得凝胶中的蛋白质与固相载体上的抗体结合，然后再进行洗涤和检测。

3.半干式转膜：半干式转膜则是湿式转膜和干式转膜的结合，一部分采用湿式转膜，一部分采用干式转膜。

三、WB 转膜的条件公式在进行 WB 转膜时，需要控制的条件包括：1.转膜缓冲液：转膜缓冲液的 pH 值、离子强度和蛋白酶抑制剂的浓度等，都会影响到蛋白质的转膜效果。

2.转膜时间：转膜时间过长或过短，都会影响到蛋白质的转膜效果。

3.转膜温度：转膜温度一般控制在 12-18℃，温度过高或过低都会影响到蛋白质的转膜效果。

4.固相载体：固相载体的选择和处理，也会影响到蛋白质的转膜效果。

四、WB 转膜的注意事项在进行 WB 转膜时，需要注意以下几点：1.保持实验操作的无菌性，以防止细菌污染。

2.选择合适的转膜时间和温度，避免过度转膜或转膜不足。

3.选择合适的固相载体，并正确处理和封闭。

4.使用高质量的转膜缓冲液，避免缓冲液中蛋白酶的干扰。

五、总结WB 转膜是蛋白质研究中常用的技术，其操作需要注意控制转膜缓冲液、转膜时间、转膜温度和固相载体等条件。

wb转膜条件公式
【最新版】
目录
1.WB 转膜的概述
2.WB 转膜的公式
3.WB 转膜的步骤
4.WB 转膜的注意事项
正文
一、WB 转膜的概述
WB（Western Blot）转膜是一种将电泳分离后的蛋白质转移至膜上的技术，以便进行进一步的检测和分析。

WB 转膜是蛋白质研究中常用的技术手段，可以帮助研究者了解蛋白质的表达情况、翻译后修饰等信息。

二、WB 转膜的公式
WB 转膜的公式通常表示为：
转膜效率 = (膜上蛋白质量 / 电泳分离蛋白质量) × 100%
三、WB 转膜的步骤
1.制备电泳分离样品：首先需要制备蛋白质样品，并通过电泳技术将蛋白质分离。

2.准备转膜膜：选择合适的转膜膜，并裁剪成适当大小。

3.转膜：将电泳分离后的蛋白质样品与转膜膜一起放入转膜液中，进行转膜处理。

4.固定：转膜完成后，将膜放入固定液中，进行固定处理。

5.检测：固定完成后，选择合适的检测方法进行检测，如酶联免疫吸
附试验（ELISA）等。

四、WB 转膜的注意事项
1.转膜过程中要保持恒温，避免温度对转膜效率产生影响。

2.选择合适的转膜液，根据实验目的和样品特点进行调整。

3.固定处理要充分，以保证后续检测的准确性。

4.检测方法要根据实验目的和样品特点进行选择，确保检测结果的准确性。

WB的转膜和染色凝胶中蛋白的可视化在现阶段染胶可用于确定蛋白的迁移是否均匀一致。

如果您计划将蛋白转印到膜上，则使用铜染色法，因为考马斯染色不可逆。

考马斯染色仅适用于以下情形：在转膜后染胶检查转膜效率；不需要转膜，只需观察SDS-PAGE 结果。

考马斯染色切断电源后，分离的蛋白条带就会开始扩散（溶于水溶液）。

为了防止蛋白的扩散，用40% 蒸馏水、10% 醋酸、50% 甲醇的溶液处理凝胶，就会使大多蛋白沉淀（变得不可溶）。

为了让固定的蛋白可视化，在相同比例的水/醋酸/甲醇混合物中加入质量比0.25% 的考马斯亮蓝R-250，然后将凝胶放置溶液中，在振荡器上室温孵育 4 小时至过夜。

接下来将凝胶（保存染料；可重复多次使用）转移到67.5% 蒸馏水、7.5% 醋酸、25% 甲醇的混合溶液中，放置在振荡器上，洗去多余的染料。

染料不会结合丙烯酰胺，因此会被洗脱（留下干净的凝胶）。

但是，染料会与凝胶中的蛋白紧密结合，显示为深蓝色。

铜染色法用蒸馏水简单冲洗经新鲜凝胶（最多30 分钟），然后转移至0.3 M CuCl2溶液染色5–15 分钟。

接下来用去离子水简单清洗凝胶，在暗视野背景下观察。

蛋白在半透明蓝色背景下形成清晰条带。

凝胶可以用0.1–0.25 M Tris/0.25 M EDTA pH 8.0 重复冲洗至完全脱色。

根据转膜仪器制造商的说明，进行转膜。

转膜转膜流程的详细说明可在转膜仪器制造商的网站上找到，根据系统的不同而有所区别。

但是，每种方法的原理都一样。

带电荷的蛋白（SDS 提供）在电场中可以在凝胶中移动，从凝胶转移到膜上，显示蛋白的“印迹”。

早期的方法依赖于扩散；现在在电场中进行印迹是标准方法了。

转膜可以湿转或半干转。

湿转由于膜的干燥而更不容易失败，尤其推荐用于大蛋白转膜。

在两种转膜方法中，膜都放置在凝胶旁边，两者夹在滤纸中间，整个三明治结构夹在固体载体之间，保持凝胶与膜之间的紧密接触。

在湿转中，凝胶和膜紧紧地夹在海绵和滤纸之间（海绵> 滤纸> 凝胶> 膜> 滤纸> 海绵），确保凝胶与膜之间不形成气泡。