唾液淀粉酶最适pH的测定论文—
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陆绍龙广西医科大学七年制临床医学10级4班摘要:目的:1)掌握测定唾液淀粉酶最适pH值的测定方法以及原理;2)熟悉不同pH值缓冲溶液的配制和分光光度计的使用;方法:通过唾液淀粉酶在不同pH环境中水解淀粉,测出未被水解的淀粉与碘液结合成的蓝色复合物的分光光度值,根据实验数据判断酶的最适pH;结果:当pH=时,唾液淀粉酶的活性最高。
关键词:唾液淀粉酶 pH 分光光度计前言:酶学与医学的关系密切。
人体的许多疾病和酶都密切相关。
酶分子中的许多极性基团,在不同的pH条件下解离状态不同,其所带电荷的种类和数量也各不相同,酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才容易同底物结合或具有最大的催化活性。
此外,pH的改变还可以引起酶活性中心的构象改变,因此pH的改变对酶的催化作用影响很大。
人的唾液中99%是水,有机物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等,无机物有钠、钾、钙、氯和硫氰离子等。
唾液中含有的一种有催化活性的蛋白质,可以催化淀粉水分解为麦芽糖。
唾液淀粉酶发挥作用的最适pH值在中性范围内,唾液中的氯和硫氰酸盐对此酶有激活作用。
食物进入胃后,唾液淀粉酶还可继续使用一段时间,直至胃内容物变为pH值约为~的酸性反应为止。
正文:1.材料与方法:仪器:吸量管(5mL,1mL),试管若干,试管架,小烧杯,洗耳球,721G-722G 分光光度计,恒温箱(含温度计),一次性纸杯,pH试纸。
试剂:L淀粉,L Na2HPO4溶液,L NaH2PO4 溶液,蒸馏水,唾液,碘液。
2.操作步骤1)1. 不同pH缓冲液配制按下表加样,最后加蒸馏水稀释至10ml。
pHL Na2HPO4溶液(mL)L NaH2PO4 溶液(mL)注:应用pH值试纸来确定所配溶液pH。
2)唾液的获取先漱口1~2次,然后含一大口水约1min,期间做咀嚼运动,然后收集至杯子中。
3)淀粉用量的确定123空白缓冲液L淀粉——唾液(稀释10倍)混匀,37℃水浴,然后向每管加2滴碘液O6H2混匀,观察现象,并选择适中一支,记录其用量4)酶稀释液的倍数确定稀释倍数51015202530酶液(mL)1O(mL)4H2稀释倍数51015202530空白缓冲液(mL)L淀粉由第3步操作确定唾液——混匀,37℃水浴,然后向每管加2滴碘液HO6666666 2混匀,观察现象,并选择适中一支,记录其稀释倍数5)最适pH值的确定pHpH缓冲液某倍数唾液(由由第3步操作确定第四步确定)混匀,37℃水浴,然后向每管加2滴碘液O6666666H2混匀,37℃水浴,然后向每管加2滴碘液A660以蒸馏水调零,用分光光度计测出各试管中溶液的A值,记录好数据。
唾液淀粉酶最适pH值的测定论文2篇第一篇:唾液淀粉酶最适pH值的测定论文唾液淀粉酶是一种在人类口腔中广泛存在的酶类物质,它在消化过程中起着关键的作用。
研究唾液淀粉酶的最适pH值对于了解其功能和活性具有重要意义。
本篇论文将对唾液淀粉酶最适pH值的测定进行探讨。
首先,我们需要了解唾液淀粉酶的基本特性。
唾液淀粉酶是一种淀粉酶,其主要功能是将淀粉分解为较小的多糖分子。
在人类口腔中,唾液淀粉酶主要通过咀嚼和混合食物时分泌出来,进而开始淀粉的消化过程。
因此,了解唾液淀粉酶最适pH值可以帮助我们更好地理解人类消化过程的机制。
为了测定唾液淀粉酶的最适pH值,我们可以采取一系列的实验方法。
首先,我们可以选择一种合适的唾液样本,同时收集多个样本以增加结果的可靠性和重复性。
其次,我们可以制备一组pH值不同的缓冲液,并将其与唾液样本混合后进行反应。
在反应过程中,我们可以通过测定反应物消耗量的变化来观察唾液淀粉酶的活性。
最后,我们可以根据实验结果绘制图表并进行数据分析,以确定唾液淀粉酶的最适pH值。
根据已有的研究,唾液淀粉酶最适pH值通常在中性到弱酸性的范围内。
一项研究表明,唾液淀粉酶的最佳活性在pH 6-7之间。
另一项研究也得出了类似的结论,指出在酸性环境下,唾液淀粉酶的活性会明显降低。
这些结果表明,中性到弱酸性的环境更有利于唾液淀粉酶的活性。
然而,需要指出的是,唾液淀粉酶的最适pH值可能存在个体差异和环境因素的影响。
个体差异主要是由于人们的遗传背景和生理状态的不同,而环境因素则包括食物酸碱度和其他物质的存在。
因此,在进行唾液淀粉酶最适pH值的测定时,应考虑到这些因素的影响,增加实验的可靠性和准确性。
综上所述,了解唾液淀粉酶最适pH值对于研究人类消化过程具有重要的意义。
通过一系列的实验方法,我们可以确定唾液淀粉酶的最适pH值,并进一步了解其功能和活性。
但需要注意的是,唾液淀粉酶的最适pH值可能存在个体差异和环境因素的影响,需要在实验设计和数据分析过程中进行考虑。
[最新]测定唾液淀粉酶的最适ph值测定唾液淀粉酶的最适PH值制作人:叶小晴学号:201140095 班组:15-4 学院:护理学院摘要:酶催化活性最大时相应的环境PH称为酶促反应的最适PH值。
虽然不同酶的最适PH值各不相同,但大多数酶的最适PH值接近中性,本论文主要在一定浓度、温度等条件下研究唾液淀粉酶的最适PH值,从而知道唾液淀粉酶的最适PH 值,进而了解影响酶的活性的因素。
关键词:唾液淀粉酶、最适PH值、活性前言:生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质或核酸,酶是机体内最重要的生物催化剂。
在不同PH条件下,酶分子的许多极性基团的解离状态不同,受到PH变化的影响,从而影响酶对它们的亲和力。
PH还会影响酶的活性中心的空间构象,从而影响酶的活性,因而PH的改变对酶的催化作用影响很大。
材料与方法:1、材料:唾液、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钠溶液、碘液、蒸馏水、温水、试管、试管架、洗耳球、烧杯、胶头滴管、水浴箱、分光光度计、吸量管、坐标纸2、方法:(1)缓冲溶液的配置:根据各个PH值的缓冲溶液(用量:ml)表1:PH5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0值磷酸0.40 0.62 0.93 1.33 1.88 2.45 3.05 3.60 4.05 4.35 4.58 4.74 氢二钠磷酸4.60 4.39 4.08 3.68 3.13 2.55 1.95 1.40 0.95 0.65 0.43 0.27 二氢钠蒸馏5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 水(2)唾液的获取:温的水漱口,将蒸馏水含于口中2min后吐于烧杯中,取5ml唾液20ml水配成1/5的唾液,从中取5ml的1/5的唾液再加入10ml水配成1/10的唾液。
(3)测量PH:取12支管,分别标上1~12,按下表操作:管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 121/50.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2唾液淀粉0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4溶液0.5ml5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0缓冲溶液PH蒸馏3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0水表2:管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1/100.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 唾液淀粉0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 溶液0.5ml5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 缓冲溶液PH蒸馏3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 水3、分别加入两滴碘液4、水浴加热5、测量吸光度6、作标准曲线图本实验中,当唾液淀粉酶的活性最大时,淀粉被分解得最大,剩余的底物最少.A 值最小,过酸或过碱均会抑制酶的活性,使之分解的底物减少,A值增大。
唾液淀粉酶最适pH的测定广西医科大学11级17班1组黄爱春黄燚燚程邦李定使摘要:本实验的目的是掌握测量pH对酶活力影响的基本原理和方法,了解pH 对酶活力的影响。
影响酶反应活力的因素很多,影响胞外酶的因素主要包括PH 值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子,以及酶浓度等因素。
在温度、酶浓度相同的条件下,酶的活力在最适pH处达到最大,远离则变小。
在底物过量的条件下,相同时间内,在温度、酶浓度相同的条件下,接近最适pH的反应体系中消耗淀粉的量最大,剩余淀粉与过量碘液生成的颜色越浅,吸光度越小,利用分光光度计测出各管的吸光度后,取处于升高与降低趋势之间的较小吸光度范围对应的pH值即为唾液淀粉酶的最适pH。
关键词:淀粉酶、活性、温度、吸光度前言:生物体内一切化学反应,几乎都是在酶催化下进行的,只要有生命的地方,就有酶在起作用,生命不能离开酶而存在。
酶量与酶活性的改变都会引起代谢的异常乃至生命活动的停止。
由于酶的独特的催化功能,使它在工、农业和医疗卫生等领域具有重大实用意义。
酶的高效性和专一性,及其不需要在高温、强酸、强碱条件下作用的特点是普遍化学催化反应所无法比拟的。
其研究成果给催化理论、催化剂的设计、药物的设计和作用原理的了解、疾病的诊断和治疗以及遗传和变异等方面提供了理论的依据和新的概念。
正文:一、材料与方法仪器:吸量管(5mL,1mL),试管,试管架,小烧杯,722型分光光度计,恒温箱,吸耳球试剂:0.01mol/L碘液,0.2mol/L磷酸氢二钠,0.2mol/L磷酸二氢钠,淀粉溶液,唾液,蒸馏水方法:相同时间内,在温度、酶浓度相同、pH不同的条件下,酶的活度不同,水解的淀粉量不同,剩余的淀粉与过量碘液生成的颜色不同,通过测量吸光度,得出酶的最适pH范围。
实验步骤:1、缓冲液的配制:2、唾液淀粉酶的获取:先喝口蒸馏水,将口中食物残渣漱净,然后口中含一口水,做咀嚼运动2分钟即可.3、淀粉用量确定:4、唾液淀粉酶稀释倍数确定:5、最适pH确定以A660为纵坐标,pH为横坐标作图二、结果与讨论用量(ml)讨论:本实验中,当唾液淀粉酶的活性最大时,淀粉被分解的最多,剩余的底物的量最少,A值最小,过酸或者过碱均会影响酶的活性,使之分解的底物减少,A值增大。
唾液淀粉酶最适pH的测定【摘要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质,底物浓度相同时,酶的催化活性主要受温度、pH值等因素影响。
温度一定时,酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。
在不同pH值下,通过测定淀粉酶水解底物的程度,测定唾液淀粉酶的最适pH值。
在不同pH条件下,淀粉被唾液淀粉酶水解,与碘液反应呈现颜色反应,通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小,可知底物的反应程度,从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。
Enzymes are highly efficient catalytic ability of biological macromolecular material, phase at the same time, initial concentration of enzyme catalytic activity was mainly affected by factors such as temperature, pH value. At a certain temperature, the highest enzyme activity of enzyme in the pH value of the temperature of the optimum pH.Under different pH, by measuring the degree of hydrolysis enzyme substrates, determination of salivary amylase optimum pH value. Under the condition of different pH, starch is saliva amylase hydrolysis, and iodine liquid reaction to colors, through the observation of the color and the size of the spectrophotometer absorbance value measurement products, shows the reaction degree of substrates, which can determine the optimal pH of salivary amylase.【关键词】唾液淀粉酶、最适pH、碘-淀粉比色法【引言】新陈代谢是生命活动的基础。
山东大学实验报告2011年4月6日姓名张行润系年级2009级生科4班学号200900140177 同组者于潜科目生物化学实验题目唾液淀粉酶的最适PH测定仪器编号105一.实验目的1、了解pH对酶活力的影响2、了解什么叫最适pH,掌握测量pH对酶活力影响的基本原理和方法二.实验原理影响酶反应活力的因素很多,影响胞外酶的因素主要包括PH值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子,以及酶浓度等因素。
PH值对酶反应活力的影响:1、酸或碱可以使酶的空间结构破坏,引起酶的活力丧失,这种丧失活力可以是可逆的或者是不可逆的,对可逆的来说,改变PH值后可使活力恢复。
2、酸或碱影响酶的活性部位催化基团的离解状态,使得底物不能分解成产物。
3、酸或碱影响酶的活性部位结合基团的离解状态,使得底物不能和它结合。
4、酸或碱影响底物的离解状态,或使底物不能和酶结合。
由于上述种种原因,各种酶的作用都有一个最适合的PH值范围。
最适pH 酶的催化活性与pH环境有密切关系,通常各种酶只在一定pH范围内才具有活性,酶活力最高时的pH,称为酶的最适pH。
高于或低于此pH时酶的活性逐渐降低。
用酶活力对PH值作图,往往是钟罩形曲线。
最适合的PH值还随着底物浓度、温度和其他条件的变化而变化,因此确定最适合的PH值应在所实验的条件下测得。
需要注意的是:1.酶的最适pH不是一个特征性常数。
不同种类的酶其最适合的PH值范围不同;2.同一种酶,来源不同,其最适合的PH值也有差异;3.同一种酶由于作用底物不同,酶最适合的PH值也不同;4.同一种酶作用于同一底物,随着温度等条件变化,最适合的PH值也有变化。
如唾液淀粉酶最适pH为6.8,但在磷酸缓冲溶液中,其最适pH为6.4—6.6,而在乙酸缓冲溶液中则为5.6。
总之,不同的酶在不同的PH值范围不仅稳定性不同,而且活力也不同,在最适合的PH值内活力最强,这是酶的一个重要特征,要仔细控制。
三.实验器材电热恒温水浴锅,旋涡混合仪,电炉,电子秤,试管10支,试管架,100mL容量瓶,小烧杯,移液管(1mL,2mL,5mL,10mL),三角瓶7个,胶头滴管,玻璃棒,白瓷板,洗耳球四.实验材料1.0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液100ml(新鲜配制):称取0.30gNaCl溶于80mL水中,电炉加热煮沸,加入0.50g淀粉溶解至澄清透明,冷却,定容至100mL2.0.2mol/L Na2HPO4溶液 200ml3.0.1mol/L柠檬酸溶液 100ml4.不同浓度的唾液淀粉酶(1:100,1:200,1:400···)5.碘液五.实验步骤1、不同PH缓冲液的配制:试剂PH值5.46.0 6.4 6.87.27.68.00.2mol/L Na2HPO4溶液/mL 11.15 12.63 13.85 30.90 17.39 18.73 19.450.1mol/L柠檬酸溶液/mL 8.5 7.37 6.15 9.10 2.61 1.27 0.55总体积/mL 20.0 20.0 20.0 40.0 20.0 20.0 20.02、唾液的获取:蒸馏水漱口后在口中含蒸馏水,适宜时间后将蒸馏水连同唾液一同放置于事先准备好的容器中即可,在实验过程中应注意酶的失活,为了防止此现象发生应将此液体置于冰水中冷却;3、确定最佳保温时间:取3支洁净试管,分别加入0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液2 mL,然后加入PH6.8的 Na2HPO4—柠檬酸缓冲溶液3 mL,分别加入稀释不同倍数的唾液淀粉酶各2 mL,充分摇匀后,放入37℃水浴中保温并计时,每隔1min用滴管取1滴混合液于点滴板上,加1滴碘液,检验淀粉水解程度,为橙黄色时,为水解完全,为进一步确定保温时间,应加1滴碘液至试管中,若为橙黄色时表示反应完全,记录所需保温时间。
唾液淀粉酶最适pH的测定【摘要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质,底物浓度相同时,酶的催化活性主要受温度、pH值等因素影响。
温度一定时,酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。
在不同pH值下,通过测定淀粉酶水解底物的程度,测定唾液淀粉酶的最适pH值。
在不同pH条件下,淀粉被唾液淀粉酶水解,与碘液反应呈现颜色反应,通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小,可知底物的反应程度,从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。
Enzymes are highly efficient catalytic ability of biological macromolecular material, phase at the same time, initial concentration of enzyme catalytic activity was mainly affected by factors such as temperature, pH value. At a certain temperature, the highest enzyme activity of enzyme in the pH value of the temperature of the optimum pH.Under different pH, by measuring the degree of hydrolysis enzyme substrates, determination of salivary amylase optimum pH value. Under the condition of different pH, starch is saliva amylase hydrolysis, and iodine liquid reaction to colors, through the observation of the color and the size of the spectrophotometer absorbance value measurement products, shows the reaction degree of substrates, which can determine the optimal pH of salivary amylase.【关键词】唾液淀粉酶、最适pH、碘-淀粉比色法【引言】新陈代谢是生命活动的基础。
唾液淀粉酶最适pH的测定广西医科大学42班2组刘家林摘要:酶是具有高效催化能力的生物大分子物质,底物浓度相同时,酶的催化活性主要受温度、p H值等因素影响。
温度一定时,酶活力最高时的p H值为该酶在该温度的最适p H。
在不同p H值下,通过测定淀粉酶水解底物的程度,测定唾液淀粉酶的最适p H值。
在不同p H条件下,淀粉被唾液淀粉酶水解,与碘液反应呈现颜色反应,通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小,可知底物的反应程度,从而可以判断出唾液淀粉酶的最适p H。
关键词:唾液淀粉酶;最适pH;吸光值;前言:酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂,细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。
酶催化化学反应的能力称为酶活性。
酶的化学本质是蛋白质,它具有两性电解质的性质,在一定溶液中可以发生解离作用。
酶无论在生活中还是在医学领域都具研究意义,酶的各种特性被广泛应用于各个领域。
影响酶反应活力的因素很多,主要包括pH、温度、酶浓度、金属离子浓度、抑制剂等。
酶在水溶液环境中的解离状态和行为,都受到H+的影响,酶活性中心功能基团解离状态将直接影响到酶的活化以及酶与底物的亲和力,其会随着溶液pH的改变而改变。
所以,溶液pH对酶催化反应的速度有明显的影响。
在某一pH值时,酶活性达到最大,这一数值称为酶的最适pH。
不同的酶的最适pH不相同。
淀粉经唾液中的淀粉酶水解,生成糊精和麦芽糖,在底物过量的条件下,反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合生成蓝色复合物,其颜色的深浅与空白管颜色的差值和淀粉酶的活力成正比。
用单位时间剩余淀粉量与碘反应产生的蓝色在660 nm处的吸光度值来表示淀粉酶的活性。
在温度、酶浓度相同的情况下,酶活力在最适pH的情况下达到最大。
正文:一、实验过程(一)不同pH缓冲液的配制按下表配置不同pH的缓冲液。
先漱口1~2次,然后含一大口水约1 min,期间做咀嚼运动,然后收集至杯子中。
(三)淀粉用量的确定实验组和空白对照组设置表混匀,37℃水浴7.5 min,然后向每管加2滴碘液。
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇An experimental report on salivary amylase activity唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇小泰温馨提示:实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来,经过整理,写成的书面汇报。
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本文简要目录如下:【下载该文档后使用Word打开,按住键盘Ctrl键且鼠标单击目录内容即可跳转到对应篇章】1、篇章1:唾液淀粉酶活性观察实验报告文档2、篇章2:唾液淀粉酶活性的测定文档3、篇章3:淀粉酶活性测定实验报告文档篇章1:唾液淀粉酶活性观察实验报告文档2 唾液淀粉酶活性观察实验报告一、实验目的1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性;2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。
二、基本原理1.酶是生物催化剂,具有极高的催化效率,其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2,铁粉地H2O2分解也有催化作用,但其效率远低于酶。
2.酶的活性受温度的影响。
在一定的温度范围内,温度升高,酶的活性也会增大。
当到了最大值后,此时温度为酶的最适温度,由于温度过高,酶开始失活,导致酶的效率降低,最后完全失活。
3.酶的活性受PH值的影响。
酶在一定范围的PH值下才有活性,高于或低于最适PH,都会使酶的活性降低。
4.酶活性常受到某些物质的影响。
有些物质能使酶的活性增加,称为激活剂,有些物质能使酶的活性降低,称为抵制剂。
5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化:淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后:蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色三、试剂与器材篇章2:唾液淀粉酶活性的测定文档【按住Ctrl键点此返回目录】影响唾液淀粉酶活性的研究摘要:讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异,实验结果表明,影响唾液淀粉酶活性的因素很多,必须在适宜的条件下,才能发挥最佳催化作用;淀粉酶具有高度专一性,其活性受温度、pH值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多种因素的影响;每个人产生唾液淀粉酶的量不同,活性强弱也有差异。
关于唾液淀粉酶的最适PH 姓名邱远学号201150716摘要:为了探究唾液淀粉酶的最适宜PH值,通过配置不同PH值的基质液作为酶与底物反应的环境,再加碘液与未反应的底物作用成色,用分光仪测定溶液吸光度来比较底物的剩余量,以此推断出唾液淀粉酶的最适宜PH的范围。
关键词:唾液淀粉酶最适PH值前言:作为一名医学生,未来的医生,通过实验来学习获得科研的基础知识,熟悉一些基本原则和操作,更是为了完成老师布置的作业。
此次实验具有重要意义。
实验原理:淀粉经样品中淀粉酶的水解,生成糊精和麦芽糖。
在底物过量的条件下,反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物。
其颜色的深浅与空白管颜色的差值和淀粉酶的活力成正比。
即颜色越浅,吸光度越低,淀粉酶的活力越高。
操作步骤:一:基质液的配置:1:取十一支规格相同的干净试管,分别编号1到10.置于试管架的第一排。
2:按下表加入试剂。
二:酶液的配置:1:实验者用蒸馏水漱口,洗去残留食物,然后含一口蒸馏水在口中三分钟,时间到后将唾液吐在一个干净的纸杯。
2:取两个干净烧杯,分别标注为1:5和1:10.三:反应进行。
1:去20支规格相同的试管,平均分成两组,分别编号1到20 其中1到10号试管加入1:5号烧杯的酶液置于试管架第三排11到20号试管加入1:10号烧杯的酶液置于试管架第二排。
2.按下表在各试管中加入试剂。
3:因为用肉眼感觉各试管区别不是很明显,故在每一只试管中注入2ml的蒸馏水。
4:混匀后用分光度法在660nm波长下用蒸馏水调零,测量各管的A660。
测得的读数已并入上表。
绘制成图:四讨论:1:总体来看,唾液淀粉酶在偏酸性的环境中活性较高。
2:从1到10号试管的吸光度都接近或低于相对应的同样PH值下的11到20号试管的吸光度。
说明其他条件相同时,酶的浓度越高,对底物的消耗越多。
3:从1:5组的数据来看,4号试管的吸光度值最小,4号试管对应的PH值是6.6,推出唾液淀粉酶的最适ph值在6.5——6.7之间。
一、前言
生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核酸,前者是机体内催化各种代谢反应最重要的催化剂。
酶分子中的许多极性基团。
在不同的PH条件下解离状态不同,其所带电荷的种类和数量也各不相同,酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才最容易同底物结合或具有最大的催化活性。
许多具有可解离基团的底物和辅酶的荷电状态也受PH改变的影响,从而影响酶对它们的亲和力。
此外,PH还可以影响酶活性中心的空间构象,从而影响酶的活性。
因此,PH的改变对酶的催化作用影响很大。
酶催化活性最高时反应体系的PH称为酶促反应的最适PH。
测定酶的最适PH值,是进一步了解酶生物学活性的基础。
本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受PH影响的情况。
唾液中含有唾液淀粉酶。
淀粉在该酶的催化作用下会随着时间的延长而出现不同程度的水解,从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。
碘液与淀粉及其不同程度的水解产物反应呈现不同颜色,即:淀粉(蓝色)、紫色糊精(紫色)、红色糊精(红色)、麦芽糖及少量葡萄糖(黄色)。
用分光光度计测量出各溶液在660nm处的吸光度A,从而间接测出唾液淀粉酶的最适pH值。
结果测得A在pH值6.0~8.0范围内变化并且随着pH的增大先减小后增大,pH=6.8左右,吸光度值最低,所以唾液淀粉酶最适pH值约为6.8。
二、材料与方法
1、材料与试剂
1) 人唾液中的唾液淀粉酶
2) 白瓷板、中试管、试管架、毛刷、吸耳球、玻璃笔、小烧杯、坐标纸、漱口水
3) 37℃恒温水浴箱、分光光度计、沸水浴
4) 1.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管、胶头滴管
5) 0.025%淀粉溶液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、碘液、蒸馏水2、方法
1 ) 缓冲液的配置:根据下表,配置各个pH值的缓冲溶液各10ml
PH值 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0
0.2mol/L
(ml) 0.615 0.925 1.33 1.88 2.45 3.05 3.6 4.05 4.35 4.58 4.74
0.2mol/L
(ml) 4.39 4.08 3.68 3.13 2.55 1.95 1.40 0.950 0.650 0.425 0.265
2)唾液的获取:
蒸馏水漱口,然后用舌尖抵住上额或下额齿根后,微低头.轻启双唇,将下嘴唇搁在烧杯边缘,让唾液自然流入试管中.
3)唾液的稀释:取10支试管,分别编上号0~9
管号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
唾液(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
蒸馏水(ml) 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0
4)唾液稀释倍数的选取:
另取10支试管,分别编上0~9号,各取上述稀释的唾液各1ml,分别加入相应编号的试管里,然后向10支试管内同时加入1ml的0.025%的淀粉溶液,振荡混匀后放入37℃恒温水浴箱中,5分钟后取出,滴加2~3碘液,振荡混匀,观察颜色,选取颜色变化适中的一支,记录稀释倍数。
5)测量pH:取12支试管,分别标上号1~12,按下表操作
管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
0.02%淀
粉溶液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2ml缓冲
溶液pH 6.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0
37℃水浴10分钟
稀释唾
液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
充分混匀后继续水浴加热,从1号试管中每隔1min取一滴液体,滴入白瓷板中,再滴一滴碘液与之反应,观察颜色变化,当颜色变黄时,取出2~12号试管,然后沸水浴 15min ,使酶失活,酶促反应停止。
然后后取出各试管,冷却至室温,往各支试管滴加1~2滴碘液。
6)测量吸光度并记录数据
用分光光度计测出2~12号试管中溶液的吸光度A值,做好记录
7)作图
在坐标纸上作出平滑曲线,取曲线最低点对应的pH值,即为唾液淀粉酶的最适pH值
三、结果
图表
四、讨论
本实验中,当唾液淀粉酶的活性最大时,淀粉被分解得最多,剩余底物的量最少,A值最小,过酸或过碱均会抑制酶的活性,使之分解的底物减少,A值增大。
由所作曲线可知唾液淀粉酶的最适pH值在6.8左右。
在PH<6.8时唾液淀粉酶的活性随PH 的升高而增大,在PH=6.8达到最大值,在PH》6.8时唾液淀粉酶的活性随PH的升高而降低,因此唾液淀粉酶的最适pH值为6.8,如果过酸或过碱均会降低酶的催化活性。
最适PH不是酶的特征性常数,它受底物浓度、缓冲液种类与浓度以及酶纯度等因素的影响。
溶液PH高于或低于最适PH时,酶活性降低,远离最适PH时还会导致酶变性。
在测定酶活性时,应选用适宜的缓冲液以保持酶活性的相对恒定。
五、参考文献
[1] 许冰, 原媛, 赵文献. pH值对酶活性影响的实验观察[J] . 临床合理用药杂志,2010 , 3 (10):35-35 .
[2] 查锡良,周春燕. 生物化学[ M ] . 第七版. 北京:人民卫生出版社,2010 .<BR。