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塞来昔布关键中间体HPLC含量测定方法的建立
刘晓莲
【期刊名称】《煤炭与化工》
【年(卷),期】2024(47)3
【摘要】为建立合成塞来昔布关键中间体对肼基苯磺酰胺盐酸盐的质量标准,测定对肼基苯磺酰胺盐酸盐的含量。
采用高效液相色谱法,色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6×250mm,5μm);流动相:缓冲液(1.65 g庚烷磺酸钠置于1 000 m L 容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,用三氟乙酸调pH值至2.5)∶乙腈=88∶12;流速为1.0 m L/min;进样量为20μL;检测波长为233 nm;柱温为25℃。
结果显示:该中间体的峰面积与浓度呈良好的线性关系,加样平均回收率为99.77%,相对标准偏差RSD为0.40%。
结果表明,该方法方便、准确、可靠,可用于测定对肼基苯磺酰胺盐酸盐的含量。
【总页数】5页(P146-150)
【作者】刘晓莲
【作者单位】河北冀衡药业股份有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】TQ465
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通用性测定方法的建立4.炒椿皮配方颗粒HPLC特征图谱及含量测定方法的建立5.甘姜苓术汤HPLC指纹图谱及含量测定方法的建立
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高效液相色谱法测定塞来昔布胶囊中塞来昔布的含量
蔡素华
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2003(015)004
【摘要】目的建立测定塞来昔布胶囊中塞来昔布含量的反相高效液相色谱法.方法以美国Dikma公司DiamonsilTMC18反相柱(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-超纯水(85∶15,V/V),流速为0.8mL*min-1,检测波长254nm,柱温40℃,进样量为5μL.考察了流动相不同配比对塞来昔布色谱行为的影响.结果塞来昔布与胶囊剂辅料及其杂质可完全分离;分析方法的定量测定下限为25μg*mL-1,线性范围:25～1000μg*mL-1,回归方程为C=1.86×10-2F+1.84×10-
1,r=0.999(n=8),平均回收率为98.23%,RSD=0.47%.结论该方法灵敏、准确、简单、快速、可用于塞来昔布胶囊的含量测定.
【总页数】3页(P30-32)
【作者】蔡素华
【作者单位】广州市脑科医院药剂科,广州,510370
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
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有机药物中残留三氟醋酸测定方法的研究
张莉;晁若冰
【期刊名称】《华西药学杂志》
【年(卷),期】2001(16)6
【摘要】目的 :检查有机药物中残留的溶剂三氟醋酸。
方法 :将药物进行氧瓶燃烧破坏后 ,用茜素氟蓝比色法测定氟 ,再换算成三氟醋酸的量。
结果 :检测限为4.6 μg 的三氟醋酸 ,线性范围为 5～30 μg氟 (r=0 .9990 ) .结论 :该检查方法较简便 ,灵敏。
【总页数】2页(P427-428)
【关键词】残留有机溶剂;三氟醋酸;氧瓶燃烧法;苯素氟蓝比色法;限量检查;有机药物;测定
【作者】张莉;晁若冰
【作者单位】四川大学华西药学院
【正文语种】中文
【中图分类】R917
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合成多肽药物中三氟乙酸检测方法研发表时间：2018-11-23T11:56:21.727Z 来源：《药物与人》2018年8月作者：张莲莲杜开峰[导读] 三氟乙酸（TFA）是多肽药物的一项重要控制项目，目前报道较多的检测方法是离子色谱法（IC）与高效液相色谱法（HPLC）。
摘要：三氟乙酸（TFA）是多肽药物的一项重要控制项目，目前报道较多的检测方法是离子色谱法（IC）与高效液相色谱法（HPLC）。
本文分别对 IC 及 HPLC 法进行研究：结果表明 IC 法 TFA 定量限为 2.4ng，推算检出限为 0.8ng，且在 0.12088μg/mL～6.044μg/mL 范围内呈良好的线性关系（r = 0.9999）；HPLC 法定量限为 6ng，检出限为 1.5ng，且在 0.3023μg/mL～15.115μg/mL 范围内呈良好的线性关系（r = 0.9998），加标回收率为 99.3%～101.7%，精密度（n=6）为 0.192%～0.200%，RSD5=1.4%。
结论：IC 法与 HPLC 法相比，在灵敏度，线性及重复性等方面差异不大，均能满足准确检测相关多肽样品中 TFA 含量要求，但 HPLC 法适用范围更广，且能同时检测多肽药物中醋酸（HAC）及三氟醋酸（TFA）含量，达到简单易行、结果准确、灵敏度高、降低成本、提高效率的研究目的。
关键词：离子色谱法，高效液相色谱法，多肽，三氟乙酸，含量检测中图分类号：文献标识码：A Abstract：Trifluoroacetic acid (TFA) is an important control item of polypeptide drugs. Ion chromatography (IC) and high performance liquid chromatography (HPLC) are commonly used in the detection of TFA. In this paper, IC and HPLC methods are studied respectively.The results showed that the quantitative limit of TFA by IC method was 2.4 ng, the detection limit was 0.8 ng, and the linear relationship was good in the range of 0.12088 ug/mL to 6.044 ug/mL (r=0.9999);the quantitative limit of HPLC was 6 ng, the detection limit was 1.5 ng, and the linear relationship was good in the range of 0.3023 ug/mL to 15.115 ug/mL (r = 0.9998). The recovery was 99.3% ~ 101.7%, the precision (n = 6) was 0.192% ~ 0.200%, RSD5 = 1.4%.CONCLUSION: Compared with HPLC, IC method has little difference in sensitivity, linearity and repeatability, and can meet the requirement of accurate determination of TFA content in related polypeptide samples. However, HPLC method has a wider application range and can simultaneously detect the contents of HAC and TFA in polypeptide drugs.The HPLC method is simple, accurate, sensitive, low cost and efficient. Key words：Ion chromatography ;HPLC; Peptide ;Trifluoroacetic acid; Content determination 1 前言三氟乙酸（TFA）普遍用于合成多肽的工艺中作为切割剂及脱保护剂，临床使用存在毒性。
高效液相色谱法测定塞来昔布中三氟乙酸残留【摘要】目的建立高效液相色谱法测定塞来昔布中三氟乙酸的残留含量。
方法色谱柱：采用Hypersil ODS柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），检测波长210 nm，流动相：0.08%磷酸溶液（Ph 3.0）-甲醇（95：5），流速1.0 ml/min，柱温：35℃。
结果三氟乙酸浓度在 2.05～12.12 μg/ml范围内，线性关系良好，r=0.9998；检测限为1.0 ng；加样回收率平均为98.57%，RSD 为0. 99%。
结论此法可用于塞来昔布中三氟乙酸含量的测定，准确度高。
【关键词】塞来昔布；高效液相色谱法；三氟乙酸；含量测定塞来昔布（4-[5-（4-甲基苯基）-3-（三氟甲基）-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺）是第一个在骨关节炎和风湿病的治疗中起作用的COX-2抑制剂[1，2]。
这个药与传统的非类固醇性抗炎剂联用时无通常的副作用。
GD Searle研发出了塞来昔布，目前市场上商品名为西乐葆。
在塞来昔布的合成工艺中，一般以对甲基苯乙酮和三氟乙酸乙酯经Claisen 缩合反应制得中间体，然后与对苯磺酰胺基苯肼盐酸盐化合制得塞来昔布。
由于三氟乙酸乙酯会水解生产三氟乙酸，因此在塞来昔布原料药的质量标准中，对三氟乙酸限量有明确要求，进口注册标准中规定三氟乙酸不得超过0.04%。
本实验建立了高效液相色谱法（HPLC）测定塞来昔布中三氟乙酸残留的方法。
1 材料塞来昔布，江苏正大清江制药有限公司提供，批号：20121029、20121103、20121109、20121118；三氟乙酸对照品（色谱纯），美国天地试剂有限公司；甲醇（色谱纯），江苏汉邦科技有限公司；其余试剂均为市售分析纯。
美国Waters Alliance 2695 高效液相色谱仪，2487紫外可变波长检测器，Empower 2色谱工作站。
2 方法与结果2. 1 色谱条件色谱柱：Hypersil ODS 柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流动相：0.08% 磷酸溶液（pH3.0）- 甲醇（95：5）；流速：0.8 ml/min；检测波长：210 nm；柱温：35 ℃；进样量：20 μl。
离子色谱法测定硫酸头孢噻利中三氟乙酸残留陈芳;李润岩;吴春敏【摘要】建立了硫酸头孢噻利中三氟乙酸残留的离子色谱检验方法。
实验优化了前处理条件和离子色谱分离条件，结果表明：三氟乙酸在0．1～10．0μg／m L 范围内具有良好的线性关系（r＝0．9997），精密度（n＝6）为1．04％～1．51％，检出限为0．03μg／m L ，加标回收率为97．9％～98．9％。
该方法灵敏、快速，高通量，可以为监测该药物中三氟乙酸残留提供科学依据。
%A method was conducted for the detection of trifluoroacetic acid residues in cefoselis sulfate by ion chromatography .The operating conditions of pretreatment and the separation of ion chromatography were optimized .The line arrange of trifluoroacetic acid was 0 .1 ~10 .0μg/mL (r=0 .9997) ,T he precision for determining the trifluoroacetic acid pesticides by this method (n=6) varied from 1 .04% to 1 .51% and the limits of detection was 0 .03μg/mL .The spike recoveries ranged 97 .9%~98 .9% .Proved by this testing ,this method w as sensitive , fast and suitable for the analysis of trifluoroacetic acid residue in cefoselis sulfate .【期刊名称】《河北省科学院学报》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】4页(P66-69)【关键词】离子色谱;测定;硫酸头孢噻利;三氟乙酸【作者】陈芳;李润岩;吴春敏【作者单位】石药集团欧意药业有限责任公司，河北石家庄 050000;河北省食品检验研究院河北省食品安全重点实验室，河北石家庄 050091;河北省食品检验研究院河北省食品安全重点实验室，河北石家庄 050091【正文语种】中文【中图分类】O657硫酸头孢噻利化学名称为7β－［（z）－2－（2－氨基－4－噻唑基）－2－（2－甲氧亚氨基乙酰氨基）］－3－［3－氨基－2－（2－羟乙基）－1－吡唑鎓基］甲基－3－头孢烯－4－羧酸硫酸盐［1］，属于第四代注射用头孢菌素，是一种高效广谱抗菌药物。
(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.08.13C N 103983728A (21)申请号 201410249281.4(22)申请日 2014.06.06G01N 30/88(2006.01)G01N 30/06(2006.01)G01N 30/34(2006.01)(71)申请人江苏宝众宝达药业有限公司地址226532 江苏省南通市如皋市长江镇（如皋港区）粤江路10号(72)发明人王琳 丁海宏 黄俊(74)专利代理机构北京汇信合知识产权代理有限公司 11335代理人孙民兴(54)发明名称高效液相色谱法测定氟苯咪唑原料药中的残留乙酸(57)摘要本发明公开了一种高效液相色谱法测定氟苯咪唑原料药中的残留乙酸，具体为采用HPLC 法，采用ZORBAXSB—C 18的色谱柱，以磷酸溶液-甲醇=950:50为流动相A ，流动相B 为甲醇，梯度洗脱；检测波长为210nm ；流速为1.2mL·min -1。
乙酸在2.5～1014.9µg·mL -1的范围内具有良好的线性（r=0.99999，n=6），回收率为99.2%，精密度RSD=1.1%。
本发明的这种高效液相色谱法测定氟苯咪唑原料药中的残留乙酸，操作简单、快速，测定结果准确可靠，从而能有效地控制该药的质量；本发明在流动相的选择上采用了梯度洗脱，避免了样品出峰时间过长，造成拖尾或出现肩峰；本发明在主药的稀释溶剂选择上，考虑到氟苯咪唑原料药不易溶于水和常规有机溶剂，而在酸中溶解度较好，所以选择甲酸作为助溶剂，起到了良好的效果。
(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书4页 附图12页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书4页 附图12页(10)申请公布号CN 103983728 A1/1页1.高效液相色谱法测定氟苯咪唑原料药中的残留乙酸，其特征在于：包括样品配制、样品测定和含量计算步骤；所述样品配制步骤如下：（1）样品溶液配制：精确称取500mg 氟苯咪唑样品于100ml 具塞称量瓶中，精密移取1.5ml 甲酸，充分振摇使完全溶解；再精密移取50.0ml 水，慢慢加入，边加边振摇，加完后充分振摇5min ，用0.45μm 过滤头，过滤得样品溶液；（2）对照溶液配制：称取冰乙酸100mg ，加水配制成25µg �mL -1水溶液，用0.45μm 过滤头，过滤得对照溶液；（3）空白溶液配制：精密移取1.5ml 甲酸，再精密移取50.0ml 水，用0.45μm 过滤头，过滤得空白溶液配制；所述的样品测定步骤为选用型号为ZORBAX SB—C 18的色谱柱，采用双泵系统，所用流动相分别是磷酸缓冲液-甲醇=950:50作为流动相A ，甲醇作为流动相B ，流动相B 采用梯度洗脱，设定色谱检测波长为210nm ，流速为1.2 mL �min -1；灵敏度为1.0 AUFS ；柱温为25℃；进样量为20 µL ，分别将样品溶液、对照溶液和空白溶液进行样品测定；所述含量测定步骤为以外标法计算样品中乙酸的残留样量。
配制不同浓度的空白基质加标进量是消除基质效应影响的最好方法，
图1 甲酸对化合物离子化的影响
但是同位素内标比较昂贵，且很多化合物不存在同位素内标。
因此本文采用基质匹配曲线消除基质效应的影响，确保数据的真实准确。
4 结论
本文成功建立了葡萄酒中22种杀菌剂残留量的高效液相-串联质谱（LC-MS/MS）分析方法；同时研究了流动相中不同修饰剂对22种化合物质谱信号的影响，分析了葡萄酒中多种化合物的基质效应影响；并应用本方法完成了葡萄酒中甲氧基丙烯酰酯类和酰胺类杀菌剂残留测定，在实际样品杀菌剂检出率为94.12%，烯酰吗啉浓度偏高，最高浓度为40.40 μg/kg。
本方法经方法验证均得到了满意的结果，灵敏度较高、专属性较强，采用二级质谱扫描定量，降低了假阳性的误判概率。
参考文献
[1]刘长令.世界农药大全·杀菌剂卷[M].北京:化学工业出版,2006: 80-90.
[2]李海屏.20世纪80年代以来世界除草剂新品种开发进展及特点(一[J].农药科学与管理,2004(10):25-31.
[3]吴峤,焦姣,刘长令,等.杀菌剂开发的新进展[J].农药,2012
图2 葡萄酒中分析物基质效应的影响（添加分析物浓度为0.5 µg/kg)。
高效液相色谱法测定塞来昔布中三氟乙酸残留
【摘要】目的建立高效液相色谱法测定塞来昔布中三氟乙酸的残留含量。
方法色谱柱：采用Hypersil ODS柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），检测波长210 nm，流动相：0.08%磷酸溶液（Ph 3.0）-甲醇（95：5），流速1.0 ml/min，柱温：35℃。
结果三氟乙酸浓度在 2.05～12.12 μg/ml范围内，线性关系良好，r=0.9998；检测限为1.0 ng；加样回收率平均为98.57%，RSD 为0. 99%。
结论此法可用于塞来昔布中三氟乙酸含量的测定，准确度高。
【关键词】塞来昔布；高效液相色谱法；三氟乙酸；含量测定
塞来昔布（4-[5-（4-甲基苯基）-3-（三氟甲基）-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺）是第一个在骨关节炎和风湿病的治疗中起作用的COX-2抑制剂[1，2]。
这个药与传统的非类固醇性抗炎剂联用时无通常的副作用。
GD Searle研发出了塞来昔布，目前市场上商品名为西乐葆。
在塞来昔布的合成工艺中，一般以对甲基苯乙酮和三氟乙酸乙酯经Claisen 缩合反应制得中间体，然后与对苯磺酰胺基苯肼盐酸盐化合制得塞来昔布。
由于三氟乙酸乙酯会水解生产三氟乙酸，因此在塞来昔布原料药的质量标准中，对三氟乙酸限量有明确要求，进口注册标准中规定三氟乙酸不得超过0.04%。
本实验建立了高效液相色谱法（HPLC）测定塞来昔布中三氟乙酸残留的方法。
1 材料
塞来昔布，江苏正大清江制药有限公司提供，批号：20121029、20121103、20121109、20121118；三氟乙酸对照品（色谱纯），美国天地试剂有限公司；甲醇（色谱纯），江苏汉邦科技有限公司；其余试剂均为市售分析纯。
美国Waters Alliance 2695 高效液相色谱仪，2487紫外可变波长检测器，Empower 2色谱工作站。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件色谱柱：Hypersil ODS 柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流动相：0.08% 磷酸溶液（pH
3.0）- 甲醇（95：5）；流速：0.8 ml/min；检测波长：210 nm；柱温：35 ℃；进样量：20 μl。
2. 2 溶液配制
2. 2. 1 对照品溶液的配制取三氟乙酸对照品适量，精密称定，加流动相溶解并制成每 1 ml 中含三氟乙酸10.1 μg的溶液，作为对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的配制取塞来昔布适量，精密称定，加流动相溶解并制成每1 ml中含塞来昔布25 mg 的溶液，作为供试品溶液。
2. 3 测定方法精密量取对照品溶液和供试品溶液各20 μl，分别注入液相色谱仪。
记录色谱图（见图1），按外标法以峰面积计算供试品溶液中三氟乙酸的含量。
A.对照品溶液
B. 供试品溶液
图 1 塞来昔布中三氟乙酸测定的HPLC色谱图
2. 4 加样回收率测定用加样回收法，精密量取供试品溶液250 mg，置10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为回收试验用空白溶液（浓度为25 mg/ml），另精密量取塞来昔布样品250 mg分别用含三氟乙酸8.08、10.10、12.12 μg/ ml的对照溶液溶解并定容到10 mL 量瓶中，释至刻度，摇匀，作为回收率测定溶液，按2.3项方法分别测定，并计算回收率，测定结果见表1。
平均回收率为98. 57%，RSD（n= 9）为0.99%。
2. 5 线性范围取三氟乙酸对照品适量，精密称定，加流动相溶解并分别稀释制成、2.02、4.04、6.06、8.8、10.10、12.12 μg/ ml的溶液，依次进样20 μl，记录色谱图，以峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X，g/ml）为横坐标，进行线性回归。
回归方程：Y = 958.75X-90.07，r=0.9998，线性范围为2.05～12.12 μg/ml。
2. 6 精密度测定取塞来昔布（批号：20121029）适量，精密称定，加流动相溶解并制成每 1 ml 中含塞来昔布25 mg的溶液，作为供试品溶液，共配制6 份，按2.3项方法分别测定三氟乙酸的含量，均未检出。
2. 7 检测限取三氟乙酸对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成1.01 μg/ml 的溶液，进行测定，信噪比S/N=3，测得三氟乙酸的检测限为
1.0 ng。
2. 8 塞来昔布中三氟乙酸含量测定取塞来昔布4批（批号：20121029、20121103、20121109、20121118），按2.3 项方法测定三氟乙酸的含量，结果均未检出。
3 讨论
目前三氟乙酸含量测定的方法多采用气相色谱法[3]，由于三氟乙酸的极性大，酸性强，对气相色谱柱损伤大，分析成本较高，且效果不是很理想。
而用氧瓶燃烧法测定氟的含量[4，5]，操作繁琐且误差较大，且塞来昔布样品本身含有氟元素干扰样品检测。
另据报道[6]，也可考虑用强酸型阳离子交换色谱柱测定三氟乙酸的含量，本文采用C18色谱柱分离测定塞来昔布中三氟乙酸的含量，方法简便，准确度高。
在三氟乙酸对照品的配制过程中，因三氟乙酸极易挥发，故在称量过程中，量瓶内应先加入适量流动相，再加入三氟乙酸后需充分振摇，使三氟乙酸充分溶解于流动相中，减量法称样比较准确。
在整个试验过程中，塞来昔布主峰未能洗脱出来，多次进样尚未发现其对三氟乙酸测定有干扰，因此，应对色谱柱进行清洗后再保存。
参考文献
[1] Simon L S，Lanza F L，Lipsky P E，et al.Preliminary study of the safety and efficacy of SC-58635，a novel cyclooxygenase 2 inhibitor：efficacy and safety in two placebo-controlled trials in osteoarthritis and rheumatoid arthritis，and studies of gastrointestinal and platelet effects.Arthritis & Rheumatism，1998，41（9）：1591-1602.
[2] Goldstein J L，Silverstein F E，Agrawal N M，et al. Reduced risk of upper gastrointestinal ulcer complications with celecoxib，a novel COX-2 inhibitor. The American journal of gastroenterology，2000，95（7）：1681-1690.
[3] 孟静娟，单风平.气相色谱法测定液相合成蛋酸脑啡肽中杂质残留量.微生物学杂志，2008，28（3）：106 -108.
[4] 颜冬梅.人发中微量氟的测定.医疗保健器具，2008，15（9）：74-75.
[5] 张莉，晁若冰.有机药物中残留三氟醋酸测定方法的研究.华西药学杂志，2001，16（6）：427-428.
[6] 高春，高恒莹，姚瑛，等.高效液相色谱法测定醋酸奥曲肽中醋酸含量.中国生化药物杂志，2004，25（4）：237 -238.。
