紫参片的质量标准研究

紫参片的质量标准研究

何悦;肖会敏;党珍;王四旺

【摘 要】目的：研究紫参片的质量标准控制方法。方法①采用T LC法对制剂中当归、灵芝、丹参药材及丹参酮ⅡA进行鉴别；②采用 HPLC法，以乙腈‐3．0 mg・mL －1磷酸溶液为流动相，运用梯度洗脱法分别测定制剂中甘草苷、丹酚酸B、甘草酸、丹参酮ⅡA的含量，使用Inter sustain C18色谱柱（250 mm ×4．6

mm ，5．0μm），检测波长为260 nm。结果①制剂中当归、灵芝、丹参药材及丹参酮ⅡA的薄层鉴别具有较好的专属性；②甘草苷、丹酚酸B、甘草酸、丹参酮ⅡA的线性范围分别为0．0064～0．2560，0.0420～1．6800，0．0065～0．2600和0．0023～0．0920mg・mL －1；相关系数（r）分别为0．9996，0．9991，0．9993和0．9994；③甘草苷、丹酚酸B、甘草酸、丹参酮ⅡA平均加样回收率分别为98．9％，99．0％，99．3％和99．9％；RSD分别为0．64％，0.46％， 0．29％和0．78％；④10批制剂中甘草苷、丹酚酸B、甘草酸与丹参酮ⅡA的平均含量分别为0．83，10．55，1．43和0．20 mg・g

－1， RSD分别为1．22％，1．13％，0．98％和1．19％。结论所建立的标准科学合理，可用于该制剂的质量控制。%Objective To establish the quality

standard for Zishen Tablets .Methods ① Angelica root ,Ganoderma

lucidum and Salviamiltiorrhiza in the preparation were identified by

TLC .②HPLC with a gradient elution using acetonitrile‐3 .0 mg・mL -1

phosphoric acid as mobile phase was adopted to determine the contents

of liquiritin ,salvianolic acid B ,glycyrrhizic acid and tan‐shinoneⅡA in the

preparation .The analytical column was Inter sustain C18 column(250 mm

× 4 .6 mm ,5 .0μm) .And the UV de‐tection wavelength was set at 260 nm .Results ①TLCs of Angelica root ,Ganoderma lucidum and Salvia

miltiorrhiza showed good specificity .② For liquiritin ,salvianolic acid

B ,glycyrrhizic acid and tanshinoneⅡA ,concentration range of regression

equa‐tions were 0 .006 4‐0 .256 1 ,0 .042 0‐1 .680 0 ,0 .006 5‐0 .260 0 and

0 .002 3‐0 .092 0 mg・mL-1 ,respectively .And r were 0 .999 6 , 0 .999

1 ,0 .999 3 and 0 .999 4 ,respectively .③ The average recoveries of

liquiritin ,salvianolic acid B ,glycyrrhizic acid and tan‐shinoneⅡA were

98 .9% ,99 .0% ,99 .3% and 99 .9% ,respectively .And their RSDs were

0 .64% ,0.46% ,0 .29% and 0 .78% , respectively .④ In 10

batches′preparation ,the average contents of liquiritin ,salvianolic acid

B ,glycyrrhizic acid and tanshinoneⅡA were 0 .83 ,10 .55 ,1 .43 and 0 .20

mg per tablet ,respectively .And their RSDs were 1 .22% ,1.13% ,0 .98% and

1 .19% ,respec‐tively .Conclusion The standard can be used for the

preparation quality control .

【期刊名称】《西北药学杂志》

【年(卷),期】2015(000)002

【总页数】5页(P117-121)

【关键词】紫参片;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法

【作 者】何悦;肖会敏;党珍;王四旺

【作者单位】第四军医大学药学院新药研究中心，西安 710032;第四军医大学药学院新药研究中心，西安 710032;第四军医大学药学院新药研究中心，西安

710032;第四军医大学药学院新药研究中心，西安 710032 【正文语种】中 文

【中图分类】R282

紫参片主要由紫河车、丹参、当归、灵芝、甘草等中药组成，主要用于放疗与化疗的防治。紫河车成分复杂，其主要含有氨基酸、激素、细胞因子等成分，具有双重滋补作用，既能壮阳，又能滋阴，为滋补珍品［12］。丹参主要活性成分有丹参酮类、丹酚酸类等，具有活血化瘀等功能［3－5］。当归主要活性成分有多糖类、黄酮类、挥发油等，具有补血活血、调经止痛等功能［68］。灵芝中含有有机锗、灵芝多糖、三萜类等，具有提高免疫力、降血脂、降血糖等作用［9］。甘草主要活性成分有三萜皂苷和黄酮类等，具有补脾益气、清热解毒、调和诸药等功效［10］。紫参片采用水提与醇提取［11］，经喷雾干燥［12］、压片、包衣制成。为了保证制剂的疗效，对该制剂进行了质量标准研究。

1.1 仪器 岛津高效液相色谱仪（型号2010CHT，Lab Solusion色谱工作站，日本岛津公司）；万分之一电子分析天平（型号ME235S，德国赛多利斯公司）；SK250－LHC超声波发生器（上海科导超声仪器有限公司）。

1.2 试药 丹参、当归及灵芝对照药材与甘草苷、丹酚酸B、甘草酸、丹参酮ⅡA对照品等，均购自中国食品药品检定研究院；紫参片（批号20130501，20130502，20130503，20130504，20130605，20130506，20130607，20130608，20130609，20130610），第四军医大学药物研究所研制；乙腈、甲醇（色谱级，美国Honeywell公司）；水为自制超纯水（由Millipore纯水仪制备，北京同泰联科技发展公司）；其余为分析纯。

2.1 丹参药材及丹参酮ⅡA TLC鉴别 取本品5片，除去薄膜衣，研细，加石油醚（30～60℃）5mL，振摇，放置2h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材1g，同法制成对照药材溶液与阴性样品（按处方比例根据本品制备工艺制成缺丹参的片剂）溶液。再取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照文献方法［13］实验，吸取供试品溶液10μL及对照药材溶液和对照品溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯－乙酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。结果在供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.2 当归药材TLC鉴别 取本品5片，除去薄膜衣，研细，加石油醚（30～60℃）20mL，超声提取25min，滤过，滤液挥至1mL，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液与阴性样品（按处方比例根据本品制备工艺制成缺当归的片剂）溶液。按照文献［13］实验，吸取供试品溶液10μL及对照药材溶液4μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）－乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯（365nm）下检测。结果在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.3 灵芝药材TLC鉴别 取本品5片，除去薄膜衣，研成细粉，加氯仿10mL，超声处理30min，滤过，滤液挥至1mL，作为供试品溶液。另取灵芝对照药材2g，加氯仿15mL，同法制成对照药材溶液与阴性样品（按处方比例根据本品制备工艺制成缺灵芝的片剂）溶液。按照文献方法［13］实验，吸取供试品液10μL及对照药材溶液8μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯－乙酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯（365nm）下检视。结果在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.4 含量测定

2.4.1 色谱条件 色谱柱：Inter sustain C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈（A）－3.0 g·L－1磷酸溶液（B）梯度洗脱，0～45min：B 10%～64%；45～60min：B 64%～99%：60～70min：B 99%。体积流量：1.0mL·min－1；柱温：25℃；检测波长：260nm；进样量：20μL［14］。

2.4.2 对照品溶液的配制 分别精密称取甘草苷12.80mg、甘草酸13.00mg、丹参酮ⅡA4.60mg，置于5mL量瓶中，加体积分数70%甲醇至刻度，摇匀，即得3个对照品的混合溶液（A溶液）；另精密称取丹酚酸B 16.80mg，置于10mL量瓶中，加入精密量取的A溶液1.0mL，再加体积分数70%甲醇至刻度，摇匀，即得4个对照品的混合溶液，作为储备液。

2.4.3 供试品溶液的制备 取10片本品，去除薄膜衣，研成细粉，称取1.0g，精密称定，置于25mL量瓶中，加体积分数70%甲醇适量，超声30min，放凉，加体积分数70%甲醇至刻度，滤过（0.45μm滤膜），滤液作为供试品溶液。

2.4.4 线性关系 精密量取储备液0.025，0.125，0.250和0.500mL，分别置于1mL的量瓶中，分别加体积分数70%甲醇至刻度，摇匀，即得；储备液作为线性关系最高质量浓度溶液。上述溶液分别滤过（0.22μm滤膜），取20μL，分别注入液相色谱仪，考察对照品质量浓度与峰面积的线性关系及相关系数r，结果见图1和表1，表明其在相应质量浓度范围内具有良好的线性关系。

2.4.5 精密度实验 取线性考察样品溶液（0.25 mL储备液加体积分数70%甲醇定容至1mL）连续进样6次，测定甘草苷、丹酚酸B、甘草酸与丹参酮ⅡA峰面积的RSD分别为0.68%，0.75%，0.88%和0.92%，说明仪器精密度良好。

2.4.6 稳定性实验 取线性考察样品溶液（同2.4.5项），按上述色谱条件测定，分别在第0，1，2，4，8，12和24h进样1次。结果甘草苷、丹酚酸B、甘草酸与丹参酮ⅡA峰面积RSD分别为0.70%，0.86%，0.86%和0.98%，说明在24h内稳定。

2.4.7 重复性实验 分别称取紫参片（批号20130501）6份样品，精密称定，按供