BioLabs胶回收试剂盒说明书
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琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(离心柱型)QC标准操作流程1. 实验试剂和耗材1.2 实验试剂1.3 耗材2. 实验操作流程胶回收试剂盒的检测须进行两个实验验证,第一个实验为GelRed染色法,第二个实验为EB染色法。
2.1 GelRed染色法2.1.1 1.5%琼脂糖凝胶的制备(1)准确称取1.5g琼脂糖置于250ml三角锥形瓶中,添加125ml 1×TAE溶液。
(2)轻微混匀后将其置于微波炉中,高火加热6min至溶液沸腾,取出锥形瓶放置室温2min。
(3)添加1×TAE溶液至110ml,再次于微波炉中高火加热3min至溶液沸腾。
(4)室温放置10min后将溶液倒入插有梳子的胶槽内,待胶块凝固后使用。
2.1.2 胶回收实验(1)取6个2ml离心管,依次编号为1-6号,使用分析天平准确称取空离心管的重量。
(2)用干净锋利的手术刀片切下不含核酸染料的1.5%琼脂糖凝胶胶块,放入已称重的2ml离心管中,称取胶块与离心管总重,计算凝胶块的重量。
要求胶块重量不超过200mg 为宜。
(3)添加溶胶液Binding Solution B,要求1、2号管中每100mg琼脂糖凝胶加入200ul Binding Solution B,3、4号管中每100mg琼脂糖凝胶加入300ul Binding Solution B,5、6号管中每100mg琼脂糖凝胶加入400ul Binding Solution B.(4)每管中添加50ul DL2502,混匀后置于60℃水浴5min,期间间断混合,直至凝胶块完全融化。
【注意事项】观察各管内溶胶液溶解胶块的快慢程度。
(5)将上述混合液转移至套放于2ml收集管的GenClean柱中,室温放置2min,10000rpm 室温离心1min,取出GenClean 柱,并倒掉收集管中废液。
(6)将GenClean 柱重新放回收集管中,加入500ul Wash Solution,于12000rpm,室温离心1min,倒掉收集管中废液。
天根切胶回收说明书
天根切胶回收试剂盒说明书
一、产品简介
天根切胶回收试剂盒是一种高效的DNA片段回收试剂盒,能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段。
该试剂盒采用独特的吸附技术,能够有效地去除凝胶中的杂质,纯化DNA片段。
回收的DNA片段可用于后续的克隆、测序、PCR等实验。
二、产品特点
1. 高效回收:能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段,回收率高达90%以上。
2. 纯度高:能够有效去除凝胶中的杂质,纯化DNA片段,提高后续实验的准确性和可靠性。
3. 操作简便:采用独特的吸附技术,无需使用有机溶剂,简化了操作步骤。
4. 稳定性好:试剂盒中的成分稳定,便于长期保存和使用。
三、使用方法
1. 准备凝胶和电泳缓冲液:将凝胶和电泳缓冲液按照要求准备妥当。
2. 切胶:按照实验要求将凝胶切成适当大小的胶块。
3. 洗涤:将切好的胶块放入离心管中,加入适量的洗涤液,充分混匀,洗涤去除凝胶中的杂质。
4. 吸附:将洗涤后的胶块放入吸附柱中,按照说明书要求进行吸附操作。
5. 洗脱:将吸附后的DNA片段进行洗脱,收集洗脱液。
6. 检测:对回收的DNA片段进行检测,如琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测。
四、注意事项
1. 使用前请仔细阅读本说明书,确保按照说明书要求正确操作。
2. 本试剂盒仅供实验室使用,请勿用于食品、药品等领域。
3. 使用过程中请注意安全,避免直接接触眼睛、皮肤和衣物等。
如不慎接触到皮肤或眼睛,请立即用清水冲洗,并及时就医。
4. 本试剂盒中的试剂和耗材均为一次性使用,用后请及时处理废弃物。
PAGE胶蛋白微量回收试剂盒使用说明货号:G7200规格:20Assays保存:所有试剂常温下运输,收到后所有试剂2-8℃保存,溶液B避免火源,溶液A在低温下容易形成沉淀,请在使用前30℃加热,以促进溶解。
产品组成:产品名称规格Buffer A10mlBuffer B60ml干粉9.6gDTT40mg使用前将干粉和DTT完全溶解于溶液A中,配完后4℃保存,每次使用时30℃加热,以促进溶解,混合好的溶液A尽量在一个月内使用完毕。
产品说明:SDS-PAGE不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量,而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一,随着蛋白质技术的微量化,有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等,本产品就是专门为此用途开发的微量蛋白胶回收法,本产品适用于从考染,铜染或锌染中回收蛋白质,回收效率在50-80%,能够使用20次。
产品特点:1.简单,不需要复杂而昂贵的仪器(如电洗脱仪)。
2.适用于变性胶(SDS-PAGE)和非变性胶(Native-PAGE)。
3.回收率一般在50-80%之间(跟蛋白质大小,洗脱时间相关)。
4.跟后续的实验兼容,包括1-D、2-D电泳和质谱测序等。
操作步骤:1.用手术刀片将铜染或锌染的胶块中含有目的条带的部分胶切下,放入1.5mL的离心管中,用相应的消除液将胶中蛋白质条带脱色到胶体接近无色,室温12000rpm (12830g),离心5min,尽量去除上清,保留胶体。
对于考染或其他考染方法,直接将不需要脱色液脱色的或经过脱色液脱色的胶块中含有目的条带部分切下,放入1.5mL的离心管中,用双蒸水洗两次,每次5min,再进行步骤2。
2.用研磨杆将离心管中的胶体研磨成细小的碎片,加入400μL的溶液A,在室温条件下,脱色摇床上震荡过夜(16-18小时),期间取出,偶尔震荡几次。
3.室温12000rpm,离心15min,转移上清到另外一个2mL的离心管中,加入2mL的预冷的溶液B,混匀,4℃放置30min。
普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(离心柱型)试剂盒组成平衡液(BL)溶胶液(PN)漂洗液(PW)洗脱缓冲液(EB)储存条件15-25°干燥条件保存12个月2-8°可保存更长时间。
低温贮存时,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37°水浴中预热10分钟,以平衡溶液温度。
产品简介试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE 或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质,其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质,回收100bp-10KbDNA片段,回收率高达80%,每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10微克。
产品特点快速多样可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA高效80%注意事项:1.平衡液BL的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性,消除高温、潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
使用前先检查平衡液BL是否出现浑浊,如果有混浊现象,可在37°水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
2.电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果3.如下一步实验要求较高,则应尽量使用TAE电泳缓冲液4.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤5.如果回收率较低,可在胶充分溶解后检测PH值,如果pH大于7.5,可向含有DNA的胶溶液中加10-30微升3M醋酸钠(ph5.2)将ph值调到5-7之间。
6.回收<100bp及>10kb的DNA片段时,应加大溶胶液的体积,延长吸附和洗脱的时间。
7.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少,洗脱体积越少,回收率越低。
操作步骤:第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明现在15ml漂洗液PW中加入60ml 无水乙醇。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心1.柱平衡步骤:向吸附柱CA2中加入500微升平衡液BL,12000 1min2.将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量。
DNA纯化回收试剂盒一、试剂盒内容溶液PC 25ml 100ml平衡液BL 30ml 120ml漂洗液PW 15ml 50ml洗脱缓冲液EB 15ml 30ml吸附柱CB2 50个200个收集管(2ml)50个200个说明书1份1份二、操作步骤(一)、从琼脂糖凝胶中回收DNA片段1、柱平衡步骤:向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管)加入500ul 平衡液BL,12000rpm(~13400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
(请使用当天处理过的柱子)2、将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入赶紧的离心管中,称取重量。
3、向胶块中加入等倍体积溶液PC(如果凝胶重为0.1g,其体积可视为100ul,则加入100ulPC溶液),50℃水浴放置10分钟左右,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解。
(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块)4、将上一步所得溶液加入到一个吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB2放回收集管中。
5、向吸附柱CB2中加入600ul漂洗液PW,12000rpm(~13400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB2放回收集管中。
6、重复步骤5.7、将吸附柱放入收集管中,12000rpm(~13400×g)离心2分钟,尽量出去漂洗液。
将吸附柱置于室温放置数分钟,彻底晾干。
8、将吸附柱CB2放入一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟。
12000rpm(~13400×g)离心2分钟,收集DNA溶液。
(二)、从PCR反应液或酶切反应液中回收DNA1、柱平衡步骤:向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管)加入500ul 平衡液BL,12000rpm(~13400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
DNA 凝胶回收试剂盒产品编号 产品名称包装 D0056DNA 凝胶回收试剂盒50次产品简介:碧云天的DNA 凝胶回收试剂盒(DNA Gel Extraction Kit),是一种用于从DNA 琼脂糖凝胶中回收目的DNA 的试剂盒。
本试剂盒采用了融胶液,可以使琼脂糖凝胶完全融化。
同时采用了一种新型的离子交换柱,在特定条件下,使DNA 能在离心过柱的瞬间,结合到DNA 纯化柱上,在一定条件下又能将DNA 充分洗脱,从而实现DNA 的快速纯化。
无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,通常12个样品只需不足20分钟即可完成。
每个DNA 纯化柱可以结合的DNA 量的上限约为15微克。
适用于从DNA 琼脂糖凝胶(agarose gel)电泳后割取的含有目的DNA 的凝胶块中快速提取DNA 。
该目的DNA 通常为PCR 产物、质粒DNA 酶切出来的DNA 片段、超螺旋质粒DNA 单酶切后的线性化产物和DNA 连接产物等。
本试剂盒适用于纯化100bp-10kb DNA 。
长至30个碱基的引物均可被完全去除。
DNA 回收效率通常为60-90%。
接近100bp 或10kb 的DNA 片段回收效率要略低一些,大于10kb 的DNA 回收效率迅速下降。
另外如果样品中DNA 含量特别低也会导致回收效率下降。
本试剂盒纯化所得DNA 可直接用于酶切,连接,转化细菌,测序,PCR ,杂交等后续操作。
每个试剂盒足够用于50个平均重量不超过400微克的凝胶样品。
包装清单:产品编号 产品名称 包装 D0056-1 溶液I (融胶液) 20mlD0056-2 溶液II (洗涤液) 26ml (第一次使用前加入39ml 无水乙醇)D0056-3 溶液III (洗脱液)3mlD0056-4DNA 纯化柱及废液收集管50套 —说明书1份保存条件:室温保存,一年有效。
注意事项:第一次使用前在溶液II (洗涤液)中加入39ml 无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
产品简介产品简介::本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA 的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE 或TBE 琼脂糖凝胶上回收DNA 片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。
可回收100 bp–40 kb DNA 片段,回收率可达80%以上(<100 bp 或>10kb 的DNA 片段回收率为30-50%)。
使用本试剂盒回收的DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR 、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
产品特点产品特点::快速快速::整个操作过程快速方便,几十分钟即可完成回收工作。
多样多样::可以回收单链、双链DNA 片段以及环状质粒DNA 。
高效高效::独特的离心柱和精心配制的缓冲液,保证最大量回收到高纯度的目的DNA 。
注意事项注意事项::请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1. 平衡液BL 的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性,消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
使用前请先检查平衡液BL 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
2. 电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。
3. 如下一步实验要求较高,则应尽量使用TAE 电泳缓冲液。
4. 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA 造成损伤。
5. 如果回收率较低,可在胶充分溶解后检测pH 值,如pH 值大于7.5,可向含有DNA 的胶溶液中加10–30 µl 3 M 醋酸钠(pH5.2)将pH 值调到5–7之间。
6. 回收<100 bp 及>10 kb 的DNA 片段时,应加大溶胶液的体积,延长吸附和洗脱的时间。
7. 回收率与初始DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。
操作步骤操作步骤::第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在15 ml 漂洗液PW 中加入60 ml 无水乙醇! 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
胶回收试剂盒使用步骤:
1)在紫外灯下从电泳胶上切下所需回收的条带,注意刀片需消毒,胶块应尽量小,使之易融化完全;
2)事先将一个eppendorf管称重,然后将胶块放入后再次称重,获得胶块的重量;
3)以每100mg胶块加入300μl的量加入Binding Buffer,查看胶块是否浸在液体中;
4)56℃水浴10min以融化胶块释放DNA,期间每2-3min 需取出震荡;
5)待胶块完全融化后按照每100mg胶块150μl的量加入异丙醇,充分震荡混匀;
6)将High Pure Filter Tube 安装到Collection Tube上;
7)将所有eppendorf管中的液体转移到High Pure Filter Tube中去,注意不要超过700μl,若超过需分两次离心;
8)12000 rpm 离心1 min,倒掉收集管中的液体;
9)加入500μl Wash Buffer后再次离心1min;
10)倒掉收集管中的液体后再次加200μl的Wash Buffer,12000 rpm 离心1 min;11)小心将Filter Tube取下后装入一个新的Effendorf管上;
12)在滤芯的正中加上30μl的Elution Buffer,室温放置1min,12000 rpm 离心1 min。
PCR产物的胶回收分离纯化一、实验仪器1、琼脂糖凝胶电泳系统2、紫外观察分析仪3、离心机4、单面刀片5、恒温水浴锅二、试剂1、DNA回收试剂盒2、50×TAE3、ddH2O三、步骤1 在紫外灯下切分含DNA的琼脂糖块,尽可能除去多余的琼脂糖.放入1.5ml离心管中。
4. 称量胶块重量,计算胶块体积。
计算胶块体积时,以1 mg=1 μl 进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer,DR-I Buffer 的加量如下表:凝胶浓度DR-I Buffer 使用量1.0% 3 个凝胶体积量1.0%~1.5% 4 个凝胶体积量1.5%~2.0% 5 个凝胶体积量6. 均匀混合后75℃加热融化胶块(低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。
此时应间断振荡混合,使胶块充分融化(约6~10 分钟)。
注)胶块一定要充分融化,否则将会严重影响DNA 的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer,均匀混合。
当分离小于400 bp 的DNA 片段时,应在此溶液中再加入终浓度为20% 的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column 安置于Collection Tube 上。
9. 将上述操作7 的溶液转移至Spin Column 中,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃滤液。
注)如将滤液再加入Spin Column 中离心一次,可以提高DNA 的回收率。
10. 将500 μl的漂洗液Rinse A加入Spin Column中,12,000 rpm 离心30 秒钟,弃滤液。
11. 将700 μl的Rinse B加入Spin Column中,12,000 rpm 离心30 秒钟,弃滤液。
注)请确认Rinse B中已经加入了指定体积的100%乙醇。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column 安置于新的1.5 ml 的离心管上,在Spin Column 膜的中央处加入25 μl 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置 1 分钟。
凝胶DNA回收试剂盒使用说明一、试剂盒组成1.碱性ELUTION缓冲液:用于回收DNA片段。
2.DNA绑定胶柱:用于吸附DNA片段。
3.洗涤缓冲液:用于去除琼脂糖凝胶残渣和其他杂质。
4.电子式试剂盒设备:用于快速洗脱DNA片段。
二、凝胶DNA回收试剂盒使用步骤1.准备工作:a.将碱性ELUTION缓冲液加热至65℃,并保存在试剂盒中。
b.手套和面具是使用过程中必需的,以确保实验环境的干净。
c.严格遵守实验室的安全操作规程。
2.凝胶切割:a. 切割需回收的DNA片段:将琼脂糖凝胶切割为片段大小约为50-5000 bp的目标DNA。
b.将切割好的琼脂糖凝胶片段放入微量离心管中,注意不要弄混不同大小的DNA片段。
c.记录每个DNA片段的位置和大小。
3.DNA回收:a.将切割好的琼脂糖凝胶片段放入DNA绑定胶柱中。
b.将绑定胶柱放入收集管中,通过离心将DNA片段吸附到胶柱上。
c.倒掉废液,并使用洗涤缓冲液洗脱胶柱上的残驻琼脂糖凝胶和其他杂质。
重复此步骤1-2次以确保彻底洗脱。
4.DNA洗脱:a.将洗柱放回空的收集管中。
b.加入预热的碱性ELUTION缓冲液(65℃),封闭试管盖,并放入电子式试剂盒设备中。
c.按照设备操作说明进行启动,并设置相应的洗脱温度和时间。
d.在洗脱完成后,将洗脱液转移到新的离心管中。
可以使用适当的方法(如乙醇沉淀或其他纯化方法)进一步纯化DNA。
5.质量检测:a.使用电泳进行质量检测,以确认回收的DNA片段大小和纯度。
b.如果需要,可以定量将DNA溶液保存在冰箱中以备后续实验使用。
三、注意事项1.使用前确保熟悉试剂盒的组成和使用步骤。
2.使用过程中务必佩戴手套和面具,确保操作环境的洁净。
3.严格按照试剂盒的说明进行操作,并遵循实验室的安全操作规程。
4.需要注意的是,琼脂糖凝胶切割和回收过程极易受到外源DNA污染,因此要确保实验环境的洁净,并尽量避免不必要的接触。
5.回收的DNA片段应尽快进行下一步的实验处理,以避免DNA降解和污染。
产品简介:碧云天2005年底最新推出的DNA凝胶回收试剂盒(DNA Gel Extraction Kit),是世界上最先进的DNA凝胶回收试剂盒之一。
本产品采用了融胶液,可以使琼脂糖凝胶完全融化。
同时采用了一种新型的离子交换柱,在特定条件下,使DNA能在离心过柱的瞬间,结合到DNA纯化柱上,在一定条件下又能将DNA充分洗脱,从而实现DNA的快速纯化。
无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,通常12个样品只需不足20分钟即可完成。
DNA纯化柱的容量约为15微克。
适用于PCR反应后去除引物,酶,矿物油,甘油,盐等杂质;也同样适用于酶切,连接,磷酸化,补平或切平,随机引物等反应后的DNA纯化。
所得的DNA可直接用于酶切,连接,转化细菌,测序,PCR,杂交等后续操作。
本试剂盒适用于纯化100bp-10kb DNA。
长至30个碱基的引物均可被完全去除。
DNA回收效率通常为60-90%。
接近100bp或10kb的DNA片断回收效率要略低一些,大于10kb的DNA回收效率迅速下降。
另外如果样品中DNA含量特别低也会导致回收效率下降。
每个试剂盒足够用于50个平均重量不超过400微克的凝胶样品。
包装清单:保存条件:室温保存,一年有效。
注意事项:第一次使用前在溶液II (洗涤液)中加入39ml无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
溶液I对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护。
本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。
所有离心也均在室温进行。
废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:1. 切胶回收后,称重,将胶切碎或在离心管内用1ml枪头捣碎。
2. 加入等体积的溶液I(如胶为100mg,则加100微升溶液I),vortex或颠倒混匀。
3. 50-60℃水浴加热约10分钟至胶全融,期间,需vortex或颠倒混匀3-4次,以加速凝胶融解。
若果胶碎片较小,3-5分钟即可全融;凝胶碎片较大则需较长时间,胶全融后至少再在50-60℃水浴加热2分钟。
资料范本本资料为word版本,可以直接编辑和打印,感谢您的下载胶回收方法全攻略地点:__________________时间:__________________说明:本资料适用于约定双方经过谈判,协商而共同承认,共同遵守的责任与义务,仅供参考,文档可直接下载或修改,不需要的部分可直接删除,使用时请详细阅读内容胶回收方法全攻略说到电泳凝胶的片断回收,想来在实验室久已的“老手”们都会不屑一顾。
确实,一般在各个和分子生物学沾到一点边儿的实验室里,从琼脂糖凝胶中回收DNA,仅仅是一种简单不过的常规实验操作。
虽说早期的凝胶电泳片断回收没有1—2个小时是搞不定的,每个实验室也有自己的独门秘诀,可后来各大品牌纷纷推出了了多种不同用途,不同价钱的快速凝胶回收试剂盒,一下子将胶回收的时间缩短到10多分钟,操作也大大简化,胶回收就变成“小菜一碟”了。
然而,从bbs逛上一圈下来,发现实际上还是有不少人为胶回收这种看似简单的操作而烦恼。
到底是什么导致了实验新手,甚至是老手在这个已经发展近40年的常规性实验中卡壳?由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验——比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR 扩增、标记乃至显微注射等等,为大家搜罗各种产品和方法的优缺点,注意事项,做一个胶回收全攻略篇。
一、胶回收的关键参数胶回收的质量直接影响后继实验的成功与否。
要想做好胶回收,无论是自己亲力亲为还是借助目前五花八门的胶回收试剂,最基本的评定标准无外乎这么几个:质量( 回收产物的纯度和浓度),回收效率,操作方便(速度),柱子的载量等等。
回收产物质量:回收产物的质量主要指纯度。
常规电泳过程中,普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖,会连同DNA一起从凝胶中抽提出来,会强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。
从凝胶中回收DNA片断,产物的纯度自然是我们考虑的第一要务。
对于大片断DNA回收,质量还包括了产物的完整与否,如果机械剪切力使得回收产物大小不一致,后果决不是你希望碰见的。
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://AidQuick PCR Purification KitPCR产物纯化回收试剂盒目录号:DR02适用范围:适用于PCR反应产物、酶切产物DNA片段、探针标记纯化回收,DNA样品浓缩等。
试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次(DR0101)100次(DR0202)200次(DR0203)平衡液室温 5 ml 10 ml 20 ml 结合液BB 室温30 ml 60 ml 100ml漂洗液WB 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温10 ml 15 ml 20 ml吸附柱EC 室温50个100个200个收集管(2ml)室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。
使用前应该恢复到室温储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。
避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:在高离序盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 使用了优质结合液,不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3. 结合液加酚红调制成为了黄颜色,便于监测pH值变化从而达到最佳结合效果,大大提高回收效率。
4. 快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://多功能DNA纯化回收试剂盒目录号:DR03试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次(DR0301)100次(DR0302)200次(DR0303)平衡液室温5ml 10ml 20ml 溶胶/结合液DB 室温50ml 100ml 200ml漂洗液WB 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温10 ml 15 ml 20 ml吸附柱EC 室温50个100个200个收集管(2ml)室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
适用范围:适用于琼脂糖凝胶DNA回收、PCR反应产物纯化回收、酶切产物DNA片断纯化回收、探针标记后纯化回收、DNA样品浓缩等。
储存事项:1. 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。
使用前应该恢复到室温。
2. 储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。
3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:在高离序盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3. 独特的溶胶液/结合液配方,将溶胶和结合两种功能统一,因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况,节省了需购买多种试剂盒的费用。
硅胶膜型™PCR产物纯化及胶回收试剂盒操作方法一、从琼脂糖中纯化/回收DNA片段1. 切取含DNA片段的琼脂糖后捣碎,按重量/体积比1:3(琼脂糖重量:NE结合液的体积)加入NE结合液。
如200mg琼脂糖加600ml NE结合液。
将切取的琼脂糖捣碎有利于加速下一步凝胶的溶化2. 50~60℃水浴3~5分钟,胶完全融化即可,其间可上下颠倒2~3次。
3. 将溶液转入离心纯化柱中,静置5分钟使DNA充分与硅胶膜结合,13,000rpm离心10~20秒,倒掉收集管中的废液。
适当增加DNA与硅胶膜结合的时间,使DNA与硅胶膜充分结合,能在一定程度上提高回收率。
4. 加入500µl的80%异丙醇(或80%乙醇)于离心纯化柱中,13,000rpm离心10~20秒,倒掉收集管中的废液。
5. 重复步骤4。
6. 13,000rpm再次离心1分钟,尽量除去残余异丙醇或乙醇。
7. 将离心纯化柱置于新的离心管中,开盖放置2~3分钟,使乙醇挥发殆尽。
一定使乙醇挥发干净,否则影响其回收率及纯度。
8. 加入40~50µl无菌TE溶液或超纯水,静置3~5分钟,使洗脱液充分将硅胶膜浸透。
TE溶液或超纯水的用量视用户对DNA浓度的要求而定。
将TE或超纯水50℃预热对提高回收率有一定帮助。
9. 13,000rpm离心1分钟,管底溶液即为所需的DNA。
将DNA贮存于-20℃可长期保存。
离心柱放入离心管中,若盖不上盖子,亦没有关系,可开盖离心。
二、从溶液中回收DNA片段1.往无石蜡油的PCR反应液或其它酶反应液(50~100µl)中加入3倍体积的NE结合液,颠倒混匀。
然后将混和液转入离心纯化柱,静置至少5分钟,使DNA充分与硅胶膜结合。
13,000rpm离心10~20秒,倒掉收集管中的废液。
适当增加DNA与硅胶膜结合的时间,使DNA与硅胶膜充分结合,能在一定程度上提高回收率。
2.加入500µl的80%异丙醇(或80%乙醇)于离心纯化柱中,13,000rpm离心10~20秒,倒掉收集管中的废液。
BioLabs胶回收试剂盒说明书
胶回收试剂盒说明书(生工)
SanPrep柱式DNA胶回收试剂盒
产品编号:SK8131、SK8132
包装规格:50次、100次
试剂盒组成
组分SK8131,50次SK8132,100次
纯化套件(吸附柱+收集管)50套100套
Buffer B2 30 ml 60 ml
Wah Solution 12 ml 24 ml
Elution Buffer 5 ml 10 ml
操作手册1份1份
保存方法及注意事项
本试剂盒在室温(15,25°C)干燥保存,有效期见包装。
Buffer B2中含有刺激性的化合物,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻。
沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
产品介绍
本试剂盒适用于从TAE和TBE琼脂糖凝胶中回收100 bp,10 kb的DNA片段,回收效率可达80%。
该试剂盒采用特殊的吸附膜,能够有选择
性地吸附核酸分子,去除其他杂质,得到高质量的DNA回收产物。
本试剂盒采用的膜结合液中不含有干扰酶活性的碘化钠,所得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。
本试剂盒具有以下特点:
1、适用范围广,回收效率高,对于100 bp,10 kb之间的DNA片段回收效率在80%以上。
2、操作简单快速,整个回收过程仅须15分钟左右。
3、洗脱效率高,洗脱体积最小可低至15μl。
快速操作流程(胶回收)
1、准备工作。
a。
检查Wah Solution 中是否已经加入乙醇。
b。
检查Buffer B2是否出现沉淀。
c。
将水浴锅调至55°C 2、从琼脂糖凝胶中割下含目标片段的胶块,称重。
3、加入胶块重量3-6倍的Buffer B2,50°C 水浴5-10分钟溶胶。
4、(选做)对于 < 500 bp 的片段,加入1、3 Buffer B2体积的异丙醇。
5、将溶胶液移入吸附柱中,8,000 g 离心30秒。
倒掉
收集管中液体。
6。
加入500 μl Wah Solution ,9,000 g 离心30秒,倒掉收集管中液体。
7。
重复步骤6一次。
8。
空吸附柱于9,000 g 离心1分钟。
9。
将吸附柱放入一个干净的1、5 ml 离心管中,在吸附膜中央加入15-40 μl Elution Buffer ,室温静置1分钟后,离心1
分钟。
保存管中DNA 溶液。
溶胶
上柱
洗涤洗脱
试剂准备
1、自备材料:水浴锅、小型高速离心机(最大离心力≥ 12,000 g)、1、5 ml离心管、无水乙醇、异丙醇等。
温保存。
3、 Buffer B2在低温下可能产生沉淀,使用前请检查,如有沉淀,请于37°C溶解沉淀,待冷却至室温后使用。
4、提前将水浴锅调至55°C备用。
标准回收步骤
1、通过琼脂糖凝胶电泳尽可能将目的DNA片段与其它片段分开,用干净的手术刀片将含目的DNA片段的琼脂糖凝胶块切
下,放入1、5 ml离心管中,称重。
尽可能多地去掉不含目标DNA的琼脂糖。
每管琼脂糖凝胶块不要超过400 mg,否则导致溶胶不完全。
切胶过程尽可能快,减少DNA在紫外线中的暴露时间以降低对DNA的损伤。
2、根据胶块的重量和浓度,按每100 mg琼脂糖(如胶块不足100 mg则用水补充至100 mg)加300,600 μl的比例加入Buffer B2。
凝胶浓度≤ 1%,每100 mg凝胶加入300 μl Buffer B2;
凝胶浓度 >1%,≤1、5%,每100 mg凝胶加入400 μl Buffer B2;
凝胶浓度 >1、5%,≤2%,每100 mg凝胶加入500 μl Buffer B2;
凝胶浓度 >2% ,每100 mg凝胶加入600 μl Buffer B2。
3、将离心管置于50°C水浴5,10 min,间或混匀,直至胶块完全
溶化。
胶块完全溶化即可,过长时间的处理可能导致DNA损伤。
4、(可选步骤)当目的片段 < 500 bp时,加入所使用的Buffer
B2体积1、3的异丙醇,混匀。
当目的片段≥500 bp时,此
步骤可以省略,直接进行步骤5。
5、将溶化好的溶液全部移入吸附柱,8,000 g离心30 ec。
倒掉收
集管中的液体,将吸附柱放入同一个收集管中。
如果溶胶液总体积大于750μl,则每次使用750μl,多次上柱。
6。
向吸附柱中加入500 μl Wah Solution,9,000 g离心30 ec。
倒掉收集管中的液体,将吸附柱放入同一个收集管中。
Wah Solution首次使用前请检查是否已加入正确量的无水乙醇。
7。
重复步骤6一次。
8。
将空吸附柱和收集管放入离心机,9,000 g离心1 min。
此步绝不可省略,否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
9。
在吸附膜中央加入15,40 μl Elution Buffer,室温静置1,2 min,9,000 g离心1 min。
将所得到的DNA溶液置于-20°C
保存或用于后续试验。
Buffer为2、5 mM Tri-HCl,pH 8。
5,可以用TE或水(pH > 7。
0)代替。
Elution
将Elution Buffer预热至60°C可以进一步提高得率。
如果片段> 4 kb,在37,60°C温浴2分钟可以显著提高得率。
请勿使用小于15μl的洗脱液进行洗脱。
常见问题解答
1、DNA回收效率较低或者未回收到目的片段
a。
胶块溶解不完全。
可适当延长水浴的时间,并增加颠倒混匀的频
率辅助溶解。
b。
胶块体积太大,溶胶困难。
可先将胶块切碎,溶胶后分多次上柱
离心,回收DNA片段。
c。
漂洗液中未加入正确量的无水乙醇。
d。
Agaroe抑制DNA与吸附材料的结合。
应尽量切除不含目的DNA
片段的Agaroe胶。
e。
提高Buffer B2的相对浓度,增加 DNA与吸附膜的作用时间
(静置时间),在一定程度上可以提高回收率。
f。
如果纯化的片段长度大于4 kb或者目的片段含量较少,可以将
洗脱液再次加入至吸附柱中进行洗脱,以提高回收效率。
g。
洗脱液加入位置不正确。
洗脱液应加在硅胶膜的中心部位,以完全覆盖硅胶膜的表面,达到最大的洗脱效率。
h。
洗脱液不合适。
洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响,如果使用水进行洗脱,请确保其pH值>7。
0,pH值过低可能
导致低洗脱效率。
i。
洗脱时间过短。
洗脱时放置1分钟可达到较好的洗脱效果。
洗脱时将洗脱液预热至60°C后使用,有利于提高洗脱效率。
2、回收DNA进行后续酶切反应效率低
a。
洗脱产物中含有残留的乙醇。
可将离心后的吸附柱开盖室温干燥2-5分钟,有助于残留的酒精挥发完全。
b。
盐份的残留。
请确保使用Wah Solution洗涤两次,每次500
μl沿管壁加入,有助于彻底去除管壁上的盐份。
c。
琼脂糖质量差。
请选用高质量的琼脂糖。
3、琼脂糖凝胶胶块不溶
a。
琼脂糖质量差。
请选用高质量的琼脂糖。
b。
含目的片段的胶块在空气中放置时间过长,使胶块失水、干燥。
建议切胶后立即进行胶回收,或将胶块保存在4°C或-20°C 备用。
c。
配制琼脂糖凝胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
应重新配制缓冲液。
4、洗脱液的选择
洗脱液可以根据后续实验的需要来确定。
一般情况下,若需要进行测序反应,请用双蒸水洗。