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陕西省部分地区猪伪狂犬病病毒分离鉴定及其gE基因遗传变异分析方琳;朱辉;李烨;张思远;彭特;叶贺佳【摘要】为了解2015年陕西省猪伪狂犬病(PR)流行情况和病毒遗传变异特点,采集不同地区28份疑似PR发病猪场的病料进行PCR检测,采用鸡胚绒毛尿囊膜接种和BHK-21细胞培养分离PRV,应用生物信息学方法分析主要毒力基因gE遗传变异特征.结果显示,从28份PRV疑似病料中检测出7份PRV阳性样品,分离出7株PRV地方株.陕西分离毒株与目前国内的流行毒株同源性较高,且在同一进化分支内,与欧美分离株同源性较低,亲缘关系相对较远.其中4个分离毒株具有变异株的典型分子特征,即773 bp～775 bp CGA的特征性插入,另3个分离毒株则与经典参考毒株Ea株和GDSH株位于1个相对独立的分支;SX01株和SX03株抗原表位发生改变,SX03株O-GalNAc糖基化位点缺失,SX04株在1个抗原表位增加了1个潜在的O-GalNAc糖基化位点.表明陕西省PRV gE基因在分子水平上发生了变异,核酸演化上发生了相对独立的进化,氨基酸序列的突变对其抗原表位和糖基化位点产生了影响.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2016(037)008【总页数】7页(P24-30)【关键词】猪伪狂犬病病毒;gE基因;遗传变异;生物信息学【作者】方琳;朱辉;李烨;张思远;彭特;叶贺佳【作者单位】广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300;广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300;广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300;广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300;广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300;广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300【正文语种】中文【中图分类】S852.659.1;S858.28猪伪狂犬病(Porcine pseudorabies，PR) 是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的传染病，临床症状以新生仔猪腹泻及神经症状,妊娠母猪流产、死胎等繁殖障碍,成年猪隐性感染，长期带毒排毒为特征[1]。
伪狂犬病毒上海株糖蛋白G (gG )基因的克隆及序列分析黄伟坚1,2,姜焱1,陈德胜1,芦银华1,张雪莲1,陈溥言13(11南京农业大学农业部动物疫病诊断和免疫重点开放实验室,江苏南京210095;21广西大学动物科学技术学院,广西南宁530005)摘要:应用PCR 方法从PRV SH (上海株)病毒培养物扩增了gG 基因,克隆入pcDNA3质粒,并进行了序列测定。
结果表明,扩增的gG 基因片段长1719bp ,包含一个1491bp 的开放阅读框(ORF ),在起始密码子上游有TA TAAAA 盒,在终止密码子下游有AA TAAA 的poly (A )尾,编码由496个氨基酸组成的蛋白质。
与Rice 株相应的gG 片段相比,核苷酸序列同源性达9711%。
但推导的氨基酸序列同源性仅有8716%,主要是在编码区内插入和缺失核苷酸,出现了突变和移码,导致氨基酸序列同源性降低。
gG 具有膜蛋白的结构特点。
关键词:伪狂犬病毒;gG 基因;PCR 扩增;核苷酸序列;氨基酸序列中图分类号:S852165+911 文献标识码:A 文章编号:10002030(2003)01010704Cloning ,sequence analysis of the gG geneof Pseudorabies virus SH strainHUAN G Wei 2jian 1,2,J IAN G Yan 1,CHEN De 2sheng 1,L U Y in 2hua 1,ZHAN G Xue 2lian 1,CHEN Pu 2yan 13(1.Key Laboratory of Animal Disease Diagnosis and Immunology ,Ministry of Agriculture ,Nanjing Agric Univ ,Nanjing 210095,China ; 2.College of Animal Scienceand Technology ,Guangxi Univ ,Nanning 530005,China )Abstract :The gG gene of PRV SH strain was am plified by PCR technique and cloned into pcDNA3,moreover ,it was sequenced by Sanger ′s sequencing technique 1The amplified DNA fragment was 1719bp included an ORF which encoded a protein of 496amino acids with a characteristics of TA TAAAA box in u pstream and AA TAAA poly (A )in downstream of codon 1Compared with gG gene of Rice strain ,the homology of nucleotides sequence was 9711%,however ,because of inserts or deletion in the nu 2cleotides sequence of ORF ,the homology of the deduced amino acids between PRV SH strain and Rice strain was onl y 8716%1The gG was one of membrane proteins 1K ey w ords :Pseudorabies virus ;gG gene ;PCR amplification ;nucleotide sequence ;amino acids sequence伪狂犬病毒(PRV )又称猪疱疹病毒Ⅰ型,引起多种家畜及野生动物的伪狂犬病,对猪的危害最为严重。
猪伪狂犬病病毒变异毒株HeNZK-2014的分离鉴定及gE基因序列分析马震原;曹伟伟;李宁;闫若潜;班付国;王淑娟;赵雪丽;谢彩华;王东方;王华俊【摘要】In order to learn the situation of pig pseudorabies virus (PRV) variant in this study, tissue samples such as lymph nodes which were collected from clinical pigs with suspected PRV infection were identified by PCR.PRV positive sample were inoculated on PK-15 cells after grinding and degerming, with further experiment including virus isolation, plague purification, PCR and IFA identification, TCID50 confirmed by Reed-Muench method, inoculation test and observation of clinical symptoms in mice.The gE gene of purified PRV and brain tissue samples of dead mice were identified by sequencing analysis.The results showed that the virus grown on PK-15 cells could produce typical cytopathic effect (CPE) after 24 h;After three rounds of plaque purification,the isolate was PRV positive identified by PCR and IFA, and nominated as HeNZK-2014;The TCID50 of the isolate was 10-9.77/0.1 mL;The virus in 1×108 TCID50 inoculation was able to cause itching, tearing, death in infected mice, and PRV could be detected in tissues of dead mice;The molecular genetic variation analysis of gE gene by PCR amplification and clone sequencing indicated that the gE gene from brain tissue of infected mice shared 100.0% homology with HeNZK-2014, and located in a relatively independent branch with newly pandemic isolates in recent years after 2011, but was far from the classical strains before 2011, and both had two insertion of aspartic acid (D) at sitesof 48 and 496 amino acids, which were considered to be the typical characteristics of PRV variants.This study successfully isolated a PRV variant, which laid a foundation for further research on vaccine development, prevention and control against PRV variants.%为了解猪伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株的特点,本研究采集临床疑似PRV感染发病猪的淋巴结等组织样品进行PCR 鉴定,选取仅PRV阳性的组织样品经研磨除菌后取上清接种于PK-15细胞进行病毒分离培养、蚀斑纯化、PCR和间接免疫荧光法(IFA)鉴定,采用Reed-Muench法测定PRV的TCID50,接种小鼠并观察临床症状,对纯化的PRV和死亡小鼠脑组织样品进行gE基因PCR扩增及测序分析.结果显示,PRV阳性病料接种于PK-15细胞24 h后出现典型细胞病变(CPE),经3轮蚀斑纯化后PCR和IFA鉴定结果均为阳性,分离株命名为HeNZK-2014,其TCID50为10-9.77/0.1 mL;以1×108个TCID50病毒悬液接种小鼠22 h后可引起小鼠出现奇痒、撕咬、死亡等典型猪伪狂犬病症状,死亡小鼠脑组织样品PRV PCR检测结果为阳性;纯化病毒和死亡小鼠脑组织样品gE基因核苷酸序列同源性为100.0%,与GenBank中2011年以前登录的经典毒株位于不同分支,与2011年之后中国流行毒株位于同一分支,在第48和496位各有1个天冬氨酸(D)的插入,具有变异毒株的典型特征.本研究成功分离了1株PRV变异毒株,为进一步开展针对PRV变异毒株的疫苗及其防控研究奠定了基础.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2017(044)007【总页数】10页(P2086-2095)【关键词】猪;伪狂犬病病毒;变异毒株;分离;鉴定;gE基因;遗传变异分析【作者】马震原;曹伟伟;李宁;闫若潜;班付国;王淑娟;赵雪丽;谢彩华;王东方;王华俊【作者单位】河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;广东永顺生物制药股份有限公司,广州 510000;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008【正文语种】中文【中图分类】S852.65伪狂犬病(pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(pseudorabies virus，PRV)感染引起的可致多种动物发病的疫病，其中仔猪受到的危害最为严重。
福建省猪伪狂犬病病毒新流行株gD、 gE基因遗传变异分析魏春华;戴爱玲;李晓华;刘建奎;陈泽铭;杨小燕【摘要】为了解福建地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行毒株的分子生物学特性与变异规律.本试验分离了2011-2013年福建省不同地区的11株PRV,并对其gD、gE 基因进行遗传变异分析.结果表明,福建地区被检测的规模化猪场均存在野毒感染,病料接种PK-15细胞均能出现典型的细胞病变,分离的毒株接种家兔能出现典型的伪狂犬病症状.PRVgD、gE基因序列分析表明,自2011年福建地区PRV同源性较高且处于一个独立的分支,表明福建地区流行的PRV可能存在一定的抗原变异.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2016(052)003【总页数】4页(P15-18)【关键词】伪狂犬病病毒;分离鉴定;gD基因;gE基因;变异【作者】魏春华;戴爱玲;李晓华;刘建奎;陈泽铭;杨小燕【作者单位】龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012【正文语种】中文【中图分类】S852.65+5伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的多种家畜和野生动物的一种高度接触性传染病，可导致怀孕母猪发生流产、死胎、木乃伊胎，哺乳仔猪出现神经系统症状，死亡率达90%以上，并有从单一感染向混合感染扩大的趋势，给全球养猪业造成了巨大的经济损失。
伪狂犬病病毒贵州分离株gE基因主要抗原表位区真核表达研究郝飞;汤德元;李春燕;曾智勇;罗险峰【摘要】收集贵州省思南县某猪场送检的哺乳仔猪病料,采用Vero细胞盲传、核酸鉴定及测序分离到1株伪狂犬病病毒贵州分离株.扩增其gE基因主要抗原表位区,构建pcDNA3.1(+)-gE重组真核表达质粒,将其转染Ve-ro细胞,采用间接免疫荧光(IFA)检测基因在Vero细胞中的表达,同时将重组质粒免疫BALB/c小鼠,进行免疫学评价.结果表明:gE基因主要抗原表位区在Vero获得瞬时表达,转染的Vero 细胞呈特异性绿色荧光;将构建的重组真核表达质粒免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明,重组质粒具有较好的免疫原性.【期刊名称】《山地农业生物学报》【年(卷),期】2013(032)006【总页数】5页(P484-488)【关键词】伪狂犬病病毒;贵州分离株;真核表达【作者】郝飞;汤德元;李春燕;曾智勇;罗险峰【作者单位】贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州省动物疫病预防控制中心,贵州贵阳550008【正文语种】中文【中图分类】S852.659.1猪伪狂犬病(PR)又称Aujeszky氏病，是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的多种家畜和野生动物以发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主要症状的一种急性传染病［1］。
该病属于典型且极难防疫的自然疫源性疾病之一，且易与其他疫病混合感染，给养猪业造成的损失仅次于猪瘟和口蹄疫［2－4］。
伪狂犬病病毒(猪疱疹病毒1型)属于疱疹病毒目疱疹病毒科α－疱疹病毒亚科水痘病毒属［5］双股线性DNA病毒，基因组大小约150 kb，具有疱疹病毒共有的一般形态特征，现已被广泛用于研究疱疹病毒侵袭机制和形态发生的模型［6］。
PRV含有11种糖蛋白，分别为gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM和gN蛋白，其中gE基因是PRV的一个重要的毒力决定基因，其编码的gE蛋白属于典型的Ι型跨膜蛋白［7］，是PRV的主要毒力因子和促进细胞融合的糖蛋白，在介导细胞的感染融合、病毒在细胞间的扩散、病毒粒子的释放及病毒的嗜神经性等方面发挥着重要作用［8－9］。
