c18色谱柱冲洗方法

waters液相色谱柱的活化
Waters液相色谱柱的活化方法如下：
1. 使用新的C18柱时，先用甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡10-30柱体积。

2. 若流动相含有缓冲盐，用跟流动相中盐相等比例的超纯水和有机相冲洗过渡，用量为20倍柱体积，再用含缓冲盐的流动相平衡色谱柱，用量为20倍柱体积或以上。

3. 当用HILIC模式时，新柱用50倍柱体积50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流动相平衡20个柱体积。

另外，当出现拖尾或者柱压升高时，可以考虑将正向进口端拆开，并将筛板超声清洗干净，有时候效果很好。

若使用正相色谱柱时，用异丙醇或乙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积。

以上信息仅供参考，具体操作建议咨询专业人士。

C18色谱柱保存、清洗、再生方法
一、色谱柱的保存方法
1. 纯乙腈或甲醇保存色谱柱（当使用流动相中含有盐时，注意首先用20倍柱体积的
5 %-10%的乙腈-水或5 %-10%甲醇-水流动相过渡）。

二、色谱柱的清洗方法
1. 以乙腈:水（1 : 9,v/v）→乙腈→乙腈:水（1 : 9,v/v）依次冲洗，然后进行使用。

2.多次使用后某些样品可能会吸附到入口筛板或填料上，引起柱压升高伴随峰形展宽的现
象。

此时，可将色谱柱与检测器断开，将色谱柱反接后进行冲洗。

三、色谱柱的再生方法：
1. 一般污染再生：乙腈:水（1 : 9,v/v）→ 乙腈→ 氯仿（或异丙醇）→ 乙腈→乙腈:水（1 : 9,v/v）→流动相，分别冲洗10～20倍柱体积。

2. 蛋白污染再生：0. 1%的三氟乙酸水溶液:异丙醇（4 : 1,v/v）→乙腈：异丙醇（1 : 2,v/v,
内含0. 1% 三氟乙酸）→水：异丙醇( 1 : 4, V/V) ，分别冲洗10～20倍柱体积。

（注意每项过渡时，压力的控制，压力最好控制在1500 psi以下，根据柱子的具体情况请自己优化流速）。

C18色谱柱的冲洗方法1.初次使用前的冲洗：在初次使用C18色谱柱之前，需要对其进行特定的冲洗步骤。

首先，将纯水通过柱底部注入柱中，使得柱内充满水。

然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

接下来，使用有机溶剂（如甲醇或乙腈）进行冲洗。

首先，缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

然后，重复此步骤两次以确保彻底冲洗。

2.样品前的冲洗：在每次分析之前，都需要对C18色谱柱进行样品前的冲洗。

首先，使用纯水进行冲洗。

将纯水通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱。

然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

接下来，使用有机溶剂进行冲洗。

缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

最后，使用移液枪或注射器将样品注入柱中进行分析。

3.淋洗液的冲洗：在一些情况下，可能需要对C18色谱柱进行淋洗液的冲洗。

淋洗液是指用于去除吸附在色谱柱上的杂质或其他有机溶剂的溶液。

常用的淋洗液包括醋酸、甲醇、乙腈等。

将淋洗液通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱，然后缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

根据需要，可以进行多次淋洗液冲洗，以确保柱的性能。

4.结束使用后的冲洗：在每次使用C18色谱柱之后，都需要进行结束使用后的冲洗。

首先，使用纯水进行冲洗。

将纯水通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱。

然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

接下来，使用有机溶剂进行冲洗。

缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

最后，将柱封口或存放在适当的溶剂中，以保护柱的性能。

总之，C18色谱柱的冲洗方法包括初次使用前的冲洗、样品前的冲洗、淋洗液的冲洗以及结束使用后的冲洗。

通过正确的冲洗方法，可以保证C18色谱柱的性能，提高分析的准确性和可靠性。

C18液相色谱柱基础维护常识液相色谱柱中使用较多的就是C18色谱柱了，下面整理的有关C18液相色谱柱的基本维护，希望能给大家一些帮助。

1、色谱柱的流向不能改变在我们常规思维中，色谱柱上标示的流向是不可改变的，每次使用都要遵循。

可是，大家有没有想过这个方向的作用是什么呢?为什么要标示一个使用方向呢?其实色谱柱前后端的填料及填装工艺都是一样的，标示方向的目的就是让我们在使用中记住流动相从哪个方向流入色谱柱，那么这个流入段就是最先污染端。

这样就为我们日后维护或再生色谱柱做了准备，而我们需要遵循这个规定应该在色谱柱开始做样后。

我曾将已经污染过的色谱柱反方向来使用，如果保留时间不是很长，而色谱柱足够长，还是能使用一段时间的。

2、看清色谱柱说明书后再上机使用色谱柱内部保存着什么溶剂一定要看清楚，因此色谱柱的说明书一定要看清楚，当然也包括说明书上建议的维护保养规定，对我们都非常的有用。

对于反相柱来说，溶剂基本就是乙腈或甲醇。

但正相柱就不同了，因为正相柱除了可以适用正相系统，也可以适用反相系统，因此一定要看清楚，对于你的方法来说是否需要置换色谱柱内部保存溶剂。

3、用纯水冲洗色谱柱才能把缓冲液冲洗干净使用强溶剂冲洗色谱柱对内部填料的损伤是最大的，尤其是纯水，除非你的色谱柱是耐水的。

冲洗色谱柱可以的方法是用流动相比例的水系和有机系来冲洗。

如果你认为流动相比例无法把色谱柱冲洗干净或者此比例中有机系占有比例过大，你可以使用内含10%左右的纯水来冲洗。

4、保存在乙腈或甲醇中的新色谱柱可以直接使用理论上液相色谱柱不同于气相色谱柱需要活化，但是由于液相色谱柱内部保存的有机系具有挥发性，因此在使用前还是应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。

可以是0.5ml/min，120min，但可以咨询厂家，根据色谱柱参数设定。

5、色谱柱应该保存在纯乙腈或甲醇中根据第4条，色谱柱内部保存液具有挥发性，因此为了减少其挥发速度，可以添加5%-10%的水，这样的话可以在一定程度上减少一些有机系的挥发。

【讨论】高效液相色谱柱的保护各位，为保证我们的分析效果，延长色谱柱的使用寿命，大家一起来贡献一下自己在色谱柱使用过程中的护柱秘诀吧。

我先来聊聊，算是抛砖引玉了1、最好用预柱。

（但要注意，若有时出峰异常，要先看看是不是它有问题了）2、每次做完分析，都要进行冲洗，分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质，建议用90％甲醇冲洗30～60min；若分析用流动相中含以上物质，要先用10％甲醇（或用与分析用流动相同比例，把含酸、碱、盐溶液换成水）冲洗1小时左右，再梯度走到90％甲醇冲洗30～60min（若用多元泵）。

有必要时再循环几次，可以适当缩短时间。

若长时间不用该色谱柱，要冲洗好后，用纯甲醇或乙腈封存。

3、若流动相中用到离子对试剂，更应该好好冲洗，且该色谱柱最好作为专用，不能再做其它物质分析用。

因色谱柱填料性质已与原来所不同，在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现。

4、尽量避免反冲，除非该色谱柱厂家明确说明允许。

5、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。

6、定期测柱效，有下降，可以用10％异丙醇甲醇冲洗色谱柱。

若柱效还没有改善，可以再生，甲醇－二氯甲烷－甲醇。

呵呵，还有的一时想不起来了，各位有经验的战友请发表高见！1．样品要采用0.22或0.45μm滤膜过滤，流动相采用0.45μm滤膜过滤并脱气。

2．大多数反相色谱柱的pH稳定围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH围3．避免流动相组成及极性的剧烈变化。

4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。

5．每次测试完毕，要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱（分析色谱柱250×4.6mm柱体积3.2ml）。

如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净，并保存于乙腈中。

6．压力升高是需要更换预柱的信号。

1：溶剂中的不溶物—应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过0.45μm）2：样品中的不溶物—应对样品进行膜过滤（孔径不超过0.45μm）3：泵，进样器等中的不溶物—在泵和进样器之间安装置过滤器，在进样器和柱之间安装预过滤器4：柱不溶物的形成：由于溶剂的不互溶而产生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱；在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀—检查样品液和流动相是否互溶；由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀—将色谱柱密封紧，并保持室温恒定！还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生：1 平衡色谱柱：反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。

色谱柱冲洗方法（最新版4篇）篇1 目录1.色谱柱冲洗的必要性2.色谱柱冲洗的方法2.1 水冲洗法2.2 有机溶剂冲洗法2.3 缓冲盐冲洗法2.4 反冲法3.色谱柱冲洗的注意事项篇1正文色谱柱是液相色谱系统中的核心部件，它在样品分离过程中起着至关重要的作用。

然而，在色谱柱使用过程中，柱内可能会积累一些脏物或盐析物，影响色谱柱的分离效果。

因此，对色谱柱进行定期冲洗是非常必要的。

下面我们将介绍几种常见的色谱柱冲洗方法。

首先，水冲洗法是最常用的色谱柱冲洗方法。

此方法操作简便，只需将色谱柱连接到水流系统上，使用纯水进行冲洗。

篇2 目录一、色谱柱冲洗的必要性二、色谱柱冲洗的方法1.水冲洗法2.纯有机相冲洗法3.缓冲盐冲洗法4.反冲法5.专用清洗剂冲洗法三、不同类型色谱柱的冲洗方法1.反相色谱柱2.正相色谱柱3.离子交换色谱柱4.凝胶渗透色谱柱四、色谱柱冲洗的注意事项篇2正文色谱柱是高效液相色谱系统中的核心部件，其在样品分离过程中起到关键作用。

然而，在长时间的使用过程中，色谱柱内部可能会积累一些脏物，影响色谱柱的分离效果。

因此，对色谱柱进行定期冲洗是非常必要的。

色谱柱冲洗的方法有很多种，下面我们分别进行介绍：1.水冲洗法：这是一种最常用的色谱柱冲洗方法。

使用纯水或含有少量缓冲盐的水进行冲洗，可以有效去除色谱柱内部的脏物。

对于反相色谱柱，可以使用纯水或甲醇/水混合溶液进行冲洗。

2.纯有机相冲洗法：在冲洗色谱柱时，可以使用纯有机溶剂（如乙腈、甲醇等）来代替水相。

这种方法适用于具有疏水性的色谱柱，如 C18、C8 等。

3.缓冲盐冲洗法：在冲洗过程中，可以加入一定浓度的缓冲盐，以保持色谱柱内部的离子强度。

这种方法适用于离子交换色谱柱和凝胶渗透色谱柱。

4.反冲法：这是一种比较彻底的冲洗方法，可以有效去除色谱柱内部的沉淀物。

在反冲过程中，需要将色谱柱的流动相改为反向，并提高流速。

然而，反冲过程可能会对色谱柱造成一定程度的损伤，因此需要谨慎操作。

正相、反相和极性胶联柱使用手册注意此色谱柱填充的是改性硅胶材料。

向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。

在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。

未正确地使用不能享受保修待遇。

1．简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。

硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。

反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。

极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。

建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。

也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。

2．色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。

一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。

A．在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。

在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。

因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。

如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。

缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。

B．在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。

柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。

使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。

干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。

C．对于极性键合柱的特殊说明由于这些柱子可以用于反相或者正相条件，在进行老化以前，一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。

如果这些溶剂不能混溶，必须先使用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗。

3．洗脱液注意第节和第2节。

液相c18色谱柱反冲的方法
液相C18色谱柱反冲的方法如下：
1. 准备反冲溶液：可以选择使用乙醇、乙腈或水与有机溶剂的混合物作为反冲溶液。

通常的反冲条件是使用60%的有机溶剂浓度。

2. 将反冲溶液连接到色谱柱上，通过空气压力或泵送的方式将溶液从色谱柱的入口注入。

3. 防止液相柱干燥：在反冲溶液注入结束后，尽量避免让液相柱干燥，可以通过将柱顶盖上或用保湿剂保护。

4. 保持一段时间：一般需要保持30分钟到2小时的时间，以充分洗脱色谱柱中已吸附的物质。

5. 调整色谱条件：在反冲结束后，可以进行色谱条件的调整，如改变流动相组成、流速等参数。

6. 干燥液相柱：在重新开始使用液相柱之前，需要将色谱柱中的溶剂干燥，可以使用惰性气体（如氮气）进行干燥。

注意事项：
- 反冲过程中需注意避免色谱柱干燥，避免反冲溶液中有颗粒或杂质进入色谱柱。

- 反冲溶液浓度和反冲时间的选择需根据具体实验需求和柱子的状态进行调整。

- 反冲时要保证液相柱的端口封闭，以免溶剂流失或受到外界污染。

c18液相色谱柱的活化步骤
C18液相色谱柱的活化步骤如下：
1.在开始使用柱子之前，要用适当比例的有机溶剂（如甲醇或乙腈）洗涤
柱子。

例如，用3～5倍柱子体积的甲醇洗涤柱子。

2.将纯水通过柱子流通20～30min。

这一步可以去除残留的有机化合物和
杂质。

注意保持柱子湿润。

3.通过柱子流通一定比例的有机溶剂与水混合物。

例如，用70%乙腈+30%
水的混合物通过柱子。

这样可以逐渐增加有机相的浓度，有助于保护柱
子不被溶剂冲击。

4.接着，可以使用一定比例的有机溶剂溶解样品，并以柱洗涤液的方式通
过柱子。

可以考虑用一些柱洗涤液去除样品残留。

5.最后，洗涤柱子以消除任何残留的溶液，或将柱子存放在一定的缓冲液/
有机溶剂中，直到再次使用。

以上步骤仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。

C18柱日常所需注意问题总结如下，如有遗漏之处或对某项内容有不同看法来电讨论。

1、新柱在使用前需用纯有机试剂（如甲醇、乙腈）低流速冲洗，冲洗体积以20倍柱体积为宜，以便固定相能充分润湿、碳链舒展彻底，使色谱柱的性能达到巅峰状态；
2、使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱，尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积；
3、长期保存前要将色谱柱彻底冲洗，建议冲洗3-4小时以上，最后保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液（如90%甲醇水）中；
4、日常保存溶剂（即第二天需继续使用）尽量与3中相同；
5、由于C18柱（极性改性处理的除外）的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用高水相条件，若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的负面影响，Diamonsil（2）由于碳载量高，表现尤为明显，建议使用过程中水相比例不超过90%；
6、色谱柱压力升高、柱性能下降：通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效；
7、色谱柱压力骤升：通常由盐析出或筛板堵塞引起，若是盐析出，用10%甲醇水低流速冲洗至压力恢复即可；若判断并非盐析出，以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱（将色谱柱反接，不接检测器），若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效，需寻找其他原因。

色谱柱再生程序：
按照下列次序冲洗色谱柱，冲洗体积均为20倍柱体积：
10%甲醇水→甲醇→异丙醇（或氯仿）→甲醇→10%甲醇水
（步骤3选用异丙醇时，由于异丙醇粘度较大，需适当降低流速，建议流速设为0.2-0.3ml/min）。