淀粉酶测定方法的选定及注意事项

α–淀粉酶活力测定----目视碘比色法一实验目的1. 了解α–淀粉酶酶活力测定原理。

2．掌握α–淀粉酶酶活力测定的方法步骤。

二、实验原理比色法作为一种定量分析的方法，是以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。

常用的比色法有两种：目视比色法和光电比色法，两种方法都是以朗伯比尔定律 (A＝kLC)为基础。

酶活力的大小、即酶量的多少用酶活力单位（U）（active unit）表示。

1961年国际生物化学学会酶学委员会提出采用统一的“国际单位”（IU）来表示酶的活力，规定为：在最适条件（25℃）下，每分钟内催化1微摩尔（μmol）底物转化为产物所需的酶量定为一个活力单位，即1IU = 1μmol /min。

这样酶的含量就可用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶活力单位来表示（U/g或U/ml）。

淀粉（紫蓝色，30分子以上）红色糊精（红棕色，7-30分子）无色糊精（7分子以下）、麦芽糖不显色。

通过测定酶促反应分解一定量淀粉的时间，以标准糊精（红色糊精）和碘反应的颜色作为终点指示（所给定的淀粉都已转化为糊精的时间）。

碘比色法酶活力规定：在60℃条件下，1小时转化1g 淀粉变为糊精的酶量定义为1个酶活力单位。

三、实验操作1．取试管1支，加入1ml标准糊精和3ml 标准稀碘液。

2．取锥形瓶一个，加入2%淀粉20ml和Ph6.0的缓冲液5ml。

3．将锥形瓶置于60℃水浴中，保温5分钟。

4．在比色盘中加入比色碘液，每穴2滴。

5．在锥形瓶中加入淀粉酶溶液2 ml，摇匀，开始计时。

6．在反应的前4分钟，每隔1分钟从锥形瓶中取1滴液体，与比色稀碘液混合，而后，每隔30秒从锥形瓶中取1滴液体与稀碘液混合，直至呈色与终点色一致。

四、酶活性计算实验注意事项：（1）测定酶促反应在锥形瓶中进行，标准反应在试管中进行。

（2）比色盘第1号位加入标准糊精和2滴标准碘液。

（3）应时间大约在10-15分钟。

淀粉酶测定的方法
淀粉酶测定方法一般包括以下步骤：
1. 准备样品：样品可以是混合物、食物或者发酵物等。

如果是固体样品，需要用适量的缓冲液或水将其溶解。

2. 准备酶液：根据实验需要，选择适当的酶液。

淀粉酶通常可用来自来源的纯化酶液或商业酶液。

3. 混合样品和酶液：将准备好的样品和酶液混合，通常在一定的温度和pH条件下进行反应。

4. 反应时间：根据需要，确定反应的时间。

通常情况下，淀粉酶作用一段时间后会产生一个稳定的反应速率，可以在这个时候停止反应。

5. 停止反应：通过改变温度、pH或加入合适的试剂停止酶的作用，例如加入酸、碱或高温处理。

6. 测定产物：利用光度计测定样品中产生的产物。

淀粉酶通常作用于淀粉，产生可溶性糖或麦芽糖，可以通过吸光度测定测量其浓度。

7. 标准曲线：根据已知浓度的标准品制作标准曲线，用于计算未知样品中产物的浓度。

8. 计算结果：使用标准曲线对测得的数据进行计算，得出样品中淀粉酶的活性或者淀粉的含量。

需要注意的是，不同的淀粉酶测定方法会有一些差异，具体实验步骤可能会有所不同，可以根据具体实验方法进行操作。

淀粉酶活力的测定方法淀粉酶是一种能够降解淀粉的酶类。

测定淀粉酶活力的方法主要有光密度法、滴定法、浊度法、电极法等。

下面将详细介绍这几种方法。

一、光密度法光密度法是利用淀粉酶在一定温度和pH值条件下降解淀粉产生的葡萄糖，与p-二硫化苯胺生成的被称为多脱氧萘酚蓝的有色物质在特定波长下的吸光度变化来测定淀粉酶活力。

测定步骤：1. 准备试剂：液体缓冲液、淀粉溶液、pH 7.0缓冲液、2%～4%淀粉溶液、0.1% p-二硫化苯胺、1%酶液。

2. 在试管中加入2 mL pH 7.0缓冲液、2 mL 2%～4%淀粉溶液和1 mL 酶液，置于37恒温槽中培养10分钟。

3. 取出试管后，立即加入5 mL p-二硫化苯胺试剂和1 mL液体缓冲液，混匀后，放置15分钟使产生的多脱氧萘酚蓝发色充分。

4. 测定吸光度：使用特定波长的光源（通常为540 nm）对反应液进行吸光度测定。

5. 用纯水代替酶液重复上述步骤，结果作为对照组。

6. 计算淀粉酶活力：对照组的吸光度减去实验组的吸光度，乘以吸光度系数K （由标准淀粉酶活力校准得出），即可得出淀粉酶的活力。

二、滴定法滴定法是通过滴定试剂滴定淀粉酶产生的葡萄糖来测定淀粉酶活力的方法。

测定步骤：1. 准备试剂：碘滴定剂（0.02 mol/L碘酸钾，0.2 mol/L硫酸），0.1 mol/L氢氧化钠溶液，0.1%淀粉溶液。

2. 取一定量的淀粉酶加入试管中。

3. 预热培养：将试管放置于37水浴中预热，约5分钟。

4. 添加滴定剂：将试管中的淀粉加入10 mL淀粉溶液中，迅速搅拌。

5. 滴定：在反应时加入少量滴定剂，然后滴定到反应性红色消失的那一点为止。

6. 计算淀粉酶活力：滴定所使用的硫酸溶液的体积与滴定所使用的碘滴定剂的体积之间的比值即为滴定效价，根据滴定效价计算淀粉酶的活力。

三、浊度法浊度法是通过测定淀粉酶降解淀粉导致溶液浑浊度变化来测定淀粉酶活力的方法。

测定步骤：1. 准备试剂：0.1 mol/L淀粉溶液，0.1 mol/L缓冲液，1%淀粉酶溶液。

收稿日期:2000-3-2淀粉酶测定方法的选定及注意事项李　丽(安徽省立医院检验科,安徽合肥230001)〔文章编号〕1002-2376(2000)06-0023-01 〔中国分类号〕Q55 〔文献标识码〕B 淀粉酶测定一直受到临床关注,其测定方法有许多种。

但是,简便、准确地适合临床应用的方法却很少。

长期以来,临床根据血、尿淀粉酶增高作为急腹证的病人是否患急性胰腺炎的重要实验室依据〔1〕。

但是,实际工作中常遇到一些病例的临床症状与实验结果不相符。

所以在开展新的淀粉酶测定方法时要注意以下几点:一、11不同的测定方法有不同的参考限值,所以每开展一项新的测定方法或使用新仪器和试剂都要对其参考限值进行设置。

无论何种方法其限值要具备一定灵敏度,线性范围不能太窄,对急性胰腺炎诊断要有特异性。

二、门诊和病房的实验方法相同的重要性如果方法不同,其测定参考限值也不同。

这样就给临床医生在疾病的诊断、治疗,以及疗效观察中带来不便。

因此建议采用相同的测定方法。

但是,由于淀粉酶的特殊性,迄今为止,它的测定方法尚难以标准化。

所以,我们需根据各自医院的条件来选定一种最佳测定方法。

如果是条件所限,测定方法不能一致,一定要将其参考限值标明在化验单上,让临床医生了解并掌握参考限值范围,这样才能避免由于限值不同给工作带来的影响。

三、选择理想的淀粉酶测定方法IFCC(国际临床化学学会)提出理想的AM Y 测定方法要符合下述几个条件〔2〕:(1)符合零级反应动力学的连续监测法;(2)底物和反应物具有确定的结构,产物的组成因时间、条件的变化而变化;(3)反应产物之一应是具有恒定吸光系数的指示产物,测定条件的轻度偏离对吸光系数的影响不大;(4)酶的转换率高,即在该反应体系中,底物 产物有较高的速度,从而有一定的灵敏度;(5)延滞期小于3min;(6)不受内源性葡萄糖的干扰;(7)测定的线性应达到正常参考值上限的5倍;(8)是直接测定法,不需要用偶联工具参加反应。

血清淀粉酶（AMY）的检测及临床意义一、概述1、淀粉酶（AMY）是催化多糖化合物1，4-糖苷键水解的一组酶，可催化淀粉、糊精和糖原水解。

2、淀粉酶存在于体内的多个器官和组织中，主要由外分泌腺的胰腺和唾液腺产生。

3、淀粉酶相对分子量小，可以从肾小球滤过出现在尿液中，其中50%被肾小管重吸收，随尿液排出的淀粉酶，称尿淀粉酶，淀粉酶是唯一能在正常时出现于尿液中的血清酶。

二、检测方法血清淀粉酶测定曾出现众多方法，目前应用最多的以经修饰的麦芽七糖为底物的方法。

三、参考区间成人（20～79岁）血清淀粉酶：35～135U/L。

四、临床意义1、急性胰腺炎在急性胰腺炎中，淀粉酶、脂肪酶、弹性酶和胰蛋白酶同时被释放到血液中。

血清淀粉酶水平通常在6～12 h内升高，24～48 h达到峰值，在随后的3～7 d内降至正常或接近正常水平。

脂肪酶在4～8 h 内上升，24 h达到峰值，在接下来的8～14 d内下降到正常或接近正常水平。

血清脂肪酶被认为是比血清淀粉酶更可靠的急性胰腺炎诊断生物学标记物。

在急性胰腺炎中，约75%的患者在发病后24小时内淀粉酶升高超过正常值上限3倍。

在急性胰腺炎时尿淀粉酶升高较晚，发病后12～14小时开始升高，下降缓慢，可持续1～2周（尿淀粉酶值会受患者尿量的影响）。

因此在急性胰腺炎病程早期检测血清淀粉酶更加灵敏，而在病情后期血清淀粉酶降至正常时，还可通过检测尿淀粉酶辅助诊断。

2、淀粉酶活性高低与病情不呈相关性，血清淀粉酶是否降至正常不能作为判断病情程度或患者是否恢复饮食的依据。

3、急性阑尾炎、肠梗阻、胰腺癌、胆石症、溃疡病穿孔及吗啡注射后等均可引起血清淀粉酶增高，但一般低于500U/L。

4、正常人血清中淀粉酶主要由肝脏产生，因此血清与尿中淀粉酶同时减低主要见于肝炎、肝硬化、肝癌及急性和慢性胆囊炎等。

肾功能严重障碍时，血清淀粉酶升高，但尿淀粉酶降低。

五、注意事项1、血清淀粉酶比较稳定，室温下可保存4天，4℃下2周，-20℃以下可保存数年。

淀粉酶检测方法淀粉酶是一种在生物体内分解淀粉的酶类，在工业生产中也有广泛的应用。

淀粉酶检测方法的研究和开发对于生物学和工业生产都具有重要的意义。

本文将介绍10种常用的淀粉酶检测方法，并展开详细描述。

1. 检测淀粉酶酶活力的方法淀粉酶酶活力的检测是在一定的条件下测定淀粉酶对淀粉分子链断裂的程度。

其方法多种多样，如I2-KI法、Nelson-Somogyi法、DNS法、酚硫酸法等。

其中DNS法的操作简单、精密度高、结果准确，被广泛运用于淀粉酶酶活力的测定中。

DNS法的具体流程：取淀粉酶反应液1ml，加入60μl 1% 普鲁士蓝，阴离子化的淀粉酶会将淀粉水解成低聚糖，反应后加入7.5ml DNS液，于100℃水浴烘箱加热10min，将反应液冷却至室温后用1mol/L NaOH调至中性，以1cm光程在720nm波长处测定吸光度。

2. 紫外线比色法紫外线比色法是一种测定淀粉酶酶活力的快速、准确、灵敏的方法。

该法利用酶水解淀粉时所产生的差异色团在化学性质和吸收光谱方面的变化来测定淀粉酶酶活力。

紫外线比色法的具体流程：取一定量的淀粉酶及淀粉，在相应的pH值下孵育一定的时间后，停止反应，加入氢氧化钠，合并各样品，稀释，分别于270nm、309nm处记录吸光值，然后计算各组淀粉酶的缩合作用所产生的光吸收值，即可求出淀粉酶的酶活力。

3. pH滴定法pH滴定法是以酶水解完淀粉后所生成的氢离子释放量作为反应结束的依据。

该方法的特点是操作简单，易于掌握，准确度高。

pH滴定法的具体流程：取一定量的淀粉酶及淀粉，设置相应的pH值，在一定的温度下孵育一定时间，取出样品，加入酚酞pH指示剂，并滴加NaOH溶液，直到溶液从淡红色转为深红色，记录NaOH滴加量，计算其中的氢离子产生量即可求出淀粉酶的酶活力。

4. 薄层酶法薄层酶法是将淀粉酶和淀粉均匀混合后涂在薄层板上，然后观察酶诱导的淀粉分解反应的变化，以判断淀粉酶的活力。

薄层酶法的具体流程：将淀粉酶和淀粉均匀混合后涂在薄层板上，然后孵育一段时间，用紫碱蓝溶液滴在板上，若淀粉分解为葡萄糖，其降解产物将与紫碱蓝成蓝绿色，而未被淀粉酶降解的淀粉则呈紫色。

淀粉酶的测定方法
淀粉酶的测定方法主要有以下几种：
1. 碘遇法：将待测样品与含有淀粉的试液反应，然后加入碘溶液，观察颜色变化。

淀粉酶能催化淀粉水解产生葡萄糖，当样品中有淀粉酶存在时，反应液中淀粉的含量减少，碘反应呈现淡黄色。

通过比较反应前后颜色的变化程度，可以间接测定淀粉酶的活性。

2. 滴定法：采用淀粉为底物，测定反应液中葡萄糖的含量。

首先将待测样品加入含有淀粉的试液中，然后根据反应的程度，利用滴定法以还原糖作为指示剂测定反应液中葡萄糖的含量，从而计算淀粉酶的活性。

3. 导电度法：利用淀粉酶对淀粉的水解反应产生的葡萄糖使反应液的导电度发生变化来测定淀粉酶的活性。

测定时先将反应液的导电度测定为A，然后加入淀粉酶，反应一段时间后导电度测定为B，根据B-A的差值可以计算淀粉酶的活性。

4. 比色法：利用淀粉酶对淀粉的水解反应产生的葡萄糖与某种试剂发生比色反应，通过测定反应液的吸光度来间接测定淀粉酶的活性。

常用的比色试剂包括间苯三酚、邻苯二酚等。

需要注意的是，不同测定方法的适用范围和操作步骤可能会有所不同，具体选择
哪种方法取决于实验目的和样品特点。

淀粉酶测定的临床常用方法
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淀粉酶测定临床常用方法简要流程：
血清淀粉酶测定：①样本采集：抽取患者静脉血；②酶促反应：采用碘-淀粉比色法、对-硝基苯麦芽七糖苷法或2-氯-4-硝基苯麦芽三糖苷法等，使样本中淀粉酶与特定底物反应；③光谱测定：记录反应产物引起的吸光度变化，如405nm吸光度上升；④计算活性：根据吸光度变化率，计算淀粉酶活力单位；
⑤结果判断：对比参考范围，评估胰腺功能状态。

尿淀粉酶测定：①样本收集：留取24小时尿样；②处理尿样：保证尿液新鲜，防止细菌分解尿淀粉酶；③检测反应：选用适宜试剂进行比色或速率法测定；④读取数值：记录反应产物的吸光度或颜色强度变化；⑤分析结果：参照正常范围，辅助诊断胰腺疾病。

淀粉酶活性测定淀粉酶是一种非常重要的酶类，是一种负责水解淀粉质的消化酶。

淀粉酶活性测定可以用于评价淀粉酶的水解能力和功能，有助于监测动物体内的淀粉酶活性水平，以及在食品、农业、医学等方面的应用。

在此文中，我们将详细介绍淀粉酶活性测定的方法、原理、重要性等相关知识。

1、Iodine-starch法此方法是基于淀粉直接加热与淀粉酶水解后不同的化学反应。

淀粉水解后的葡萄糖分子，会使加入碘化钾后的淀粉溶液变成淡黄色或透明状态，因而用这种方法来测定淀粉酶活性。

操作步骤：（1）将淀粉溶液分配到不同的试管中，并分别加入一定量的淀粉酶和缓冲液；（2）将试管随之放入水浴器中，在一定的温度下反应一定时间后；（3）将反应好的样品加入适量的碘化钾溶液，混合均匀；（4）观察样品颜色的变化与对照样品进行比较。

淀粉酶活性越强，颜色变化越明显。

2、DNS法（3,5-dinitrosalicylic acid）此法是由3,5-二硝基水杨酸和淀粉水解后形成的糖类反应，也是一种将淀粉水解后产生的葡萄糖利用于测定淀粉酶活性的方法。

（3）在沸水中进行加热封闭处理，使淀粉酶反应后产生的糖分子与DNS反应生成产物，颜色变化呈红色。

淀粉直接加热会发生硫酸化反应，而加入淀粉酶水解后，形成的产物降解了银离子和碘化物的复合物，导致样品中碘的浓度下降，进而改变样品的颜色。

2、DNS法淀粉酶活性水平是衡量动物消化能力的重要指标之一，同时，则涉及到食品、中药、农业等领域相关工作的研究。

用于测定淀粉酶活性，在动物营养研究和饲料生产中具有广泛的应用。

在动物营养领域中，淀粉酶活性测定可以用来评价不同饲料淀粉的消化能力和饲料营养价值，甚至可以评价不同品种和不同饲料来源的淀粉酶活性差异。

在饲料生产方面，淀粉酶活性测定有助于优化饲料制造流程和配方，从而提高生产效率和经济效益。

此外，在工业领域，淀粉酶的活性测定也具有重要的应用价值。

例如，在酿酒过程中，淀粉酶活性的测定可以使发酵操作更加稳定和高效。